Chương II: ĐỐI TƯỢNG, THỜI GIAN VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIấN CỨU
2.2.5 Phương phỏp xỏc định số lượng vi khuẩn Bacillus subtilis.
2.2.5.1 Phương phỏp CFU (Colony forming unit): [6] [21]
- Lấy 0,1ml dịch huyền phự vi khuẩn ở mỗi độ pha loóng thập phõn bằng Pipet riờng biệt (đó vụ trựng) lờn đĩa Petri chứa mụi trường MPA và dựng que trang riờng biệt (đó vụ trựng) trang đều trờn bề mặt đĩa. Sau đú đưa vào tủ ấm ở 30oC cho đến khi xuất hiện khuẩn lạc. Mỗi độ pha loóng lặp lại 3 lần.
-Dựng mỏy đếm để đếm khuẩn lạc sau 3 ngày nuụi cấy ở cỏc độ pha loóng thập phõn khỏc nhau. Chọn cỏc đĩa cú số khuẩn lạc từ 30-50 để tớnh kết quả (theo quy định của FDA-Food and Drug Administration).
-Mật độ tổng số vi khuẩn Bacillus subtilis trong 1g hay 1ml mẫu diện tớch được tớnh như sau:
( ) (n v f ni v fi) N ml CFU A . . .... . . / 1 1 + + = Trong đú:
A: Số tế bào (CFU) vi sinh vật trong 1g hay 1ml mẫu. N: Tổng số khuẩn lạc đếm dược trờn cỏc đĩa đó chọn. ni : Số lượng đĩa cấy tại độ pha loóng thứ i.
V: Thể tớch vật mẫu (ml) cấy vào trong mỗi đĩa. fi : Độ pha loóng tương ứng.
2.2.5.2 Phương phỏp đo độ đục: (Nephelo Turbiditymeter): [19]
Đõy là phương phỏp hoỏ lý, chớnh xỏc cao và nhanh rất thuận lợi cho việc kiểm tra mạt độ vi sinh vật .
- Lấy 5ml dung dịch huyền phự tế bào tế bào vi khuẩn Bacillus subtilis
ở mỗi độ pha loóng thập phõn.
Đem đo bằng mỏy đo độ đục Nephlo Turbiditymete - Hach (Mỹ sản xuất) ở bước súng 610nm của khoa Sinh học-Trường đại học vinh. Ghi kết quả theo đơn vị NTU tương ứng với số vi khuẩn .
-Nguyờn lý của phương phỏp : Cho một tia sỏng từ nguồn sỏng đi qua dung dịch huyền phự thỡ một phần bị cản lại, một phần đi qua và đến tế bào quang điện, từ đú xuất hiện dũng quang điện ( dũng thấu quang). Khi đú số lượng tế bào trong dịch huyền phự sẽ là :
A = log Tl = C. ﻉ.l (NTU) Trong đú :
A : độ hấp thụ.
l : bề dày của dung dịch. T :độ thấu quang.
ﻉ: hệ số hấp phụ. C: mật độ.