máu)
2.2.5.1. Phương pháp định lượng glucose huyết
Máu dùng để định lượng glucose huyết là máu toàn phần lấy từ đuôi chuột. Định lượng glucose huyết bằng máy đo đường huyết tự động và bộ kít thử tương ứng (One Touch Ultra, Johnson & Johnson, USA) [26].
• Nguyên tắc
Nguyên tắc hoạt động của phương pháp dựa ữên chuỗi phản ứng tạo màu và được đo bằng phương pháp quang học để định lượng glucose huyết.
+ Phản ứng 1: khi máu tiếp xúc vói bề mặt của vùng phản ứng que thử, dưới xúc tác đặc hiệu của glucose oxidase (GOD) có ữong kít thử, glucose trong máu phản ứng với oxy (không khí) tạo thành gluconic acid và hydro peroxide (H2O2).
+ Phản ứng 2: hydro peroxide vừa tạo ra sẽ phản ứng với O-Dianisidin tạo phức màu và được thiết bị đo quang học trong máy One Touch Ultra chuyển hóa định lượng biểu thị bằng số mmol/1 hoặc mg/dl glucose.
• Tiến hành
Ấn nút điều khiển để khởi động máy. Gắn que thử vào máy. Dùng kim châm chuyên dụng châm vào mạch máu ở đuôi chuột, để máu chảy tự nhiên, thấm bỏ giọt đầu tiên, lấy giọt máu thứ 2. Mau máu dùng cho việc đo là lịil, phải là giọt máu tròn đầy, phủ kín giọt máu lên vùng phản ứng của que thử. Sau 5 giây, kết quả nồng độ đường huyết sẽ hiển thị trên màn hình.
2.2.5.2. Định lượng một sổ chỉ số lipid trong huyết thanh
Các chỉ số lipid huyết thanh (cholesterol toàn phần, triglycerid, HDL-C, LDL-c) được xác định trên máy xét nghiệm sinh hóa tự động (Phòng hóa sinh
- Bệnh viện Hữu Nghị Việt - Xô). Nguyên tắc xác định như sau: • Định lượng cholesterol toàn phàn
Thuỷ phân cholesterol este bằng enzyme cholesterol esterase (CHE) và oxy hoá bang cholesterol oxydase (CHO). Đo mật độ quang của quynonimin tạo nên từ phản ứng của hydrogen peroxide với 4 - aminophenazone và phenol nhờ xúc tác của peroxydase [16]. Các phản ứng:
Este hổacholesterol+HoOc/io/e 5 'fero/e.si fera.si eClylesterol+acid béotự do
Cholestero[+Oich olesteroloxidase3-(p ie-cho\estenon +H2Oz2H202+phenol+4- amino-Antipirin ( A AP )p.rn xìảasp.( POPIQuỹìonimin
Đo mật độ quang học quynonimin ở bước sóng 546nm (máy Olympus AƯ400) rồi so với chuẩn để tính kết quả.
• Định lượng triglyceride
Thủy phân TG bằng enzyme lipase,định lượng glycerol giải phóng ra
bằng phương pháp đo màu của quynonimin tạo thành từ 4 - aminoantipyrin và 4 -
chlorophenol phản ứng với peroxide hydrogen theo các phản ứng sau: Triglyceiid ỈÀpasẹ Glycerol + acid béo
Glycerol + ATP Glycerol kỉnasẹ Glycerol-3-P
Glycerol-phosphate oxidase
Glycerol-3-P+ADP ---► Dihydroxiaceton phosphate + H2O2
H2O2+ 4-amino- Antipirin + 4-chloro-Phenol pprnriAn7fị Quinonimin
Đo mật độ quang học quynonimin ở bước sóng 546nm (máy Olympus AƯ400) rồi so với chuẩn để tính kết quả.
• Định lượng HDL-C
Nguyên tắc: xét nghiệm gồm hai bước đặc hiệu. Bước thứ nhất cholesterol trong chylomicron, VLDL, LDL-C bị loại bỏ và phá hủy bằng các phản ứng
enzyme đặc hiệu. Bước thứ hai cholesterol trong HDL-C được định lượng bằng phản ứng enzyme với sự có mặt của chất surfactant đặc hiệu cho HDL-C [17].
■=> Bước 1:
Chylomicron, LDL, VLDL CHE + CHO ^ Cholesterol + H20
Điều kiện đặc biệt (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
2H202 2 H20 + 02 —Catalase---^ ■=> Bước 2: