Xỏc định số lượng bào tử chủng nấm Metarhizium anisopliae bằng

Một phần của tài liệu Bước đầu phân lập và nghiên cứu chủng nấm metarhizum anisopliae trên côn trùng hại lạc tại xã nghi trung nghi lộc nghệ an (Trang 31 - 32)

phương phỏp CFU (colony forming unit) và độ đo đục (Nephelometer).

Mẫu nấm được nuụi sau 14 ngày trong ống nghiệm (lỳc đó tạo thành rất nhiều bào tử) đem pha loóng thập phõn thành dung dịch huyền phự từ 10-1 đến 10-7chuẩn bị cho thớ nghiệm.

Cú nhiều phương phỏp để định lượng vi sinh vật trong đú phương phỏp đếm số lượng khuẩn lạc trờn mụi trường đặc ở hộp petri là một phương phỏp phổ biến. Theo quy định của Việt Nam và quốc tế (tổ chức kiểm định quốc tế về dược phẩm- FDA- Food and Drug Administration)

Số lượng tế bào vi sinh vật cú trong 1g đất hay 1ml được biểu thị bằng đơn vị CFU/g( hay CFU/ml) là số khuẩn lạc được hỡnh thành từ một cơ thể vi sinh vật (tế bào ban đầu trong mụi trường nuụi cấy trong điều kiện phự hợp mà mắt thường khú cú thể quan sỏt được)

Cựng với phương phỏp CFU, chỳng tụi sử dụng phương phỏp húa lý như phương phỏp đo độ đục (Nephlometer) với mỏy Turbidity/Nephlometer của Mỹ, từ đú tớnh ra đơn vị NTU ( Nephlo Turbidity Unit) tương ứng với số bào tử (đó biết theo phương phỏp CFU) để kiểm tra nhanh hơn chớnh xỏc hơn.

Đếm số lọc khuẩn ở cỏc độ pha loóng thập phõn 10-1, 10-2, 10-3, 10-4, 10-5, 10-6, 10-7 và mỗi độ pha loóng lặp lại 3 lần.

Tớnh kết quả:

Đếm tất cả cỏc số khuẩn lạc trờn đĩa sau khi nuụi (7 ngày). Chọn cỏc đĩa cú số khuẩn lạc 30- 50 để tớnh kết quả (đối với nấm mốc theo quy định của FDA- Food and Drug Asministration)

Mật độ tổng số nấm mốc trong 1g hay 1ml mẫu được tớnh như sau: Mi (CFU/ml ) = Ai * Di/V

Trong đú:

Mi: Mật độ tế bào nấm (CFU) trờn 1g hay 1ml mẫu.

Ai: tổng số khuẩn lạc trung bỡnh đếm được trờn cỏc đĩa đó chọn. V: thể tớch vật mẫu (ml) cấy vào trong đĩa.

Di : độ pha loóng tương ứng.

Phương phỏp này cú thể được mụ tả ở hỡnh dưới đõy như sau:

Mẫu 10-1 10-2 10-3 10-4 10-5

Một phần của tài liệu Bước đầu phân lập và nghiên cứu chủng nấm metarhizum anisopliae trên côn trùng hại lạc tại xã nghi trung nghi lộc nghệ an (Trang 31 - 32)