- Phõn lập nấm trờn xỏc sõu bị chết ngoài tự nhiờn:
+ Đưa xỏc sõu về phũng thớ nghiệm
+ Nấm được tạo thuần khiết bằng phương phỏp nuụi cấy đơn bào tử trờn mụi trường Czapeck bằng kĩ thuật hộp trải và nuụi in vitro.
* Thành phần mụi trường Czapeck gồm cú:
Sacchazoza 30,0 g FeSO4 0,01 g NaNO3 2,0 g H2O 1000ml K2HPO4 1,0 g pH 5 KCl 0,5 g Agar 20 g/l MgSO4 0,5 g Phõn lập:
- Từ xỏc sõu đó mọc nấm, dựng cặp (đó khử trựng) giữ mẫu và dựng que cấy (đó khử trựng) gạt một ớt nấm mốc phớa ngoài xỏc sõu lờn đĩa petri chứa mụi trường Czapeck và gạt đều trờn bề mặt đĩa thạch bằng que trang (đó khử trựng).
- Đặt đĩa petri vào tủ ấm ở 300C (gúi bao etylen hoặc giấy bỏo) đến khi nấm mọc, phõn lập và bảo quản trong tủ lạnh.
- Từ mẫu xỏc sõu (khoảng 20 con sõu bất kỡ chết cú nấm trong khoảng 50 mẫu thu được) khử trựng bằng cồn 70% (2 phỳt) để loại bỏ bớt vi sinh vật ở phớa ngoài, sau đú bỏ vào bỡnh tam giỏc 250ml.
- Mỗi mẫu bỏ trong cỏc ống nghiệm riờng đó được khử trựng và dựng cỏc đũa thuỷ tinh riờng biệt (đó được khử trựng) cho từng mẫu và nghiền nỏt, sau đú bổ sung một ớt nước cất, lắc đều liờn tục trong 10 phỳt, để lắng trong vũng 30 phỳt, chắt lọc lấy dịch ta được dung dịch huyền phự chuẩn bị cho thớ nghiệm.
- Lấy 0,1 ml dịch huyền phự bằng pipet vụ trựng vào đĩa petri chứa mụi trường thạch Czapeck. Dựng que trang đó khử trựng trang đều trờn bề mặt đĩa petri.
- Đặt đĩa petri cú gúi giấy bỏo vào tủ ấm ở 300C trong 5 ngày sau đú mụ tả đăc điểm khuẩn lạc và đặt tờn cho từng chủng nấm cú trờn đĩa thạch.
- Lựa chọn khuẩn lạc điển hỡnh tiếp tục cấy ria và làm sạch chủng.
- Cấy chuyền sang ống thạch nghiờng cú chứa mụi trường Czapeck, ghi nhón bảo quản trong tủ lạnh.
* Để đạt kết quả cao cần tiến hành phõn lập với 3 đến 5 lần lặp lại, từ đú lựa chọn chủng điển hỡnh.