Hàm lượng meloxicam trong nguyên liệu và trong các mẫu thử được xác định bằng phương pháp sắc kí lỏng hiệu năng cao (HPLC) tiến hành theo DĐ Mỹ (USP 32).
Dung môi pha mẫu: Hỗn hợp methanol : H2O trong môi trường kiềm.
Dung dịch đệm amoni acetat: Hòa tan 1,00 gam CH3COONH4
khan vào khoảng 900 mL nước. Dùng dung dịch NH3 10% (kl/tt) điều chỉnh về pH = 9,1. Pha loãng bằng nước đến thể tích 1000 ml. Lắc kỹ, lọc qua màng lọc 0,45 m và siêu âm loại khí trước khi dùng.
Điều kiện sắc ký:
- Cột Inertsil ODS-3 (5 m; 4,6 x 250 mm - GL Sciences Inc – Japan)
- Pha động: hỗn hợp MeOH : dung dịch đệm amoni acetat tỉ lệ thể tích 53 : 47
- Tốc độ dòng: 1 ml/phút - Thể tích tiêm mẫu: 10μl
- Detector UV-VIS, bước sóng phân tích 360 nm - Nhiệt độ phân tích: nhiệt độ phòng
Pha dung dịch chuẩn: Cân chính xác khoảng 30mg MX chuẩn cho
vào bình định mức 200ml, thêm khoảng 100 ml MeOH và 0,4 ml NaOH 1N, lắc kĩ và siêu âm 20 phút cho tan hoàn toàn. Bổ sung nước vừa đủ 200 ml được dung dịch có nồng độ khoảng 150 g/ml. Từ dung dịch này tiếp tục pha loãng thành các dung dịch chuẩn có nồng độ mong muốn bằng hỗn hợp dung môi
MeOH : H2O tỉ lệ 1:1. Lọc qua màng lọc 0,45μm rồi đem định lượng bằng HPLC.
Pha dung dịch thử: Cân chính xác một lượng bột hệ phân tán rắn hoặc vi hạt đã nghiền nhỏ (hoặc HPTR) tương ứng khoảng 30 mg MX cho vào bình định mức 100 ml, thêm 50 ml MeOH và 0,2 mL NaOH 1N, lắc kĩ, siêu âm 15-20 phút để hòa tan hoàn toàn MX, bổ sung nước đến vạch. Tiếp tục pha loãng đến nồng độ mong muốn bằng hỗn hợp dung môi MeOH : H2O tỉ lệ 1:1 được các dung dịch thử. Lọc qua màng 0,45μm rồi đem định lượng bằng HPLC.
Tiến hành phân tích: Lần lượt tiêm các dung dịch chuẩn và dung
dịch thử. Trên sắc ký đồ ghi lại diện tích pic của 2 dung dịch. Tính nồng độ MX có trong mẫu thử bằng đường chuẩn thu được từ dung dịch chuẩn, từ đó tính ra hàm lượng MX trong mẫu thử.