Nguyên tắc chung để xác định hoạt độ của một enzym là xác định lượng cơ chất được enzym đó xúc tác tham gia phản ứng. Tuy nhiên, trong trường hợp lượng cơ chất tham gia phản ứng không thể hoặc khó xác định được thì có thể tính gián tiếp thông qua lượng sản phẩm tạo thành sau phản ứng.
Đối với enzym GóPase, đây một enzym xúc tác phản ứng thuỷ phân liên kết este giữa nhóm phosphat và đường giải phóng ra đường tương ứng và phosphat vô cơ nên hoạt độ của enzym này được xác định thông qua lượng đường hoặc lượng phospho vô cơ giải phóng sau phản ứng. ở đây, chúng tôi định lượng lượng phospho vô cơ giải phóng theo phương pháp Fiske và Subbaraw.
Có ba cách làm ngừng phản ứng trước khi tiến hành định lượng phospho như đã nêu ở phần tổng quan. Qua phân tích ưu và nhược điểm của mỗi phương pháp cho thấy dùng acid trichloroacetic là phương pháp đơn giản hiệu quả nhất. Do đó trong nghiên cứu này, phương pháp xác định hoạt độ của GóPase được dùng là phương pháp thứ 3 đã được nêu ở phần tổng quan: Làm ngừng phản ứng bằng acid trichloroacetic 10%. Hỗn hợp phản ứng sẽ bị acid hoá và gây tủa protein (trong đó có enzym) dẫn đến mất hoạt tính của enzym. Sau đó, phospho vô cơ giải phóng ra được định lượng theo phương pháp Fiske và Subbaraw.
Mặt khác, qua kết quả khảo sát về mức độ tuyến tính của lượng phospho vô cơ giải phóng ra theo thời gian và lượng enzym dùng để xúc tác ở trên cho thấy:
> Với lượng cơ chất không đổi là 0,2 ml (0,05 M), khi dùng các thể tích dịch enzym khác nhau: 0,2- 0,5 ml (Ig gan /40ml đệm) để xúc tác giải
phóng ra những lượng phospho vô cơ tỷ lệ thuận với lượng enzym xúc tác.
> Trong khoảng thời gian xảy ra phản ứng từ 10- 20 phút, lượng phospho vô cơ giải phóng ra cũng tỷ lệ thuận theo thời gian phản ứng.
> Đối với cùng một mẫu gan, sau khi nghiền và tạo thành dịch enzym dùng để xác định hoạt độ, giá trị hoạt độ enzym thu được từ kết quả của 4 mẫu dịch enzym khác nhau tiến hành định lượng song song lặp lại và ổn định.
Như vậy, có thể tính hoạt độ enzym theo đơn vị : ụ mol p/ phút/gam và áp dụng phương pháp xác định hoạt độ enzym này để so sánh hoạt độ G6Pase.