- Phương pháp chọn lọc ngẫu nhiên.
+ Pha hỗn dịch bão tử: lấy 1 vòng que cấy bào tử Streptomyces 6.25 cho vào ống nghiệm chứa 10ml nước vô trùng, lắc cho bào tử phân tán đều, thu được hỗn dịch bào tử có độ pha loãng 10'1, lấy lm l hỗn hợp bào tử này cho vào 9ml nước vô trùng thu được nồng độ 10'2, tiếp tục pha loãng thành nồng độ 10~6 .
+ Cấy bào tử:
Dùng Pipet vô trùng hút 0,lm l các mẫu hỗn dịch bào tử ở các độ pha loãng 10 4 đến 10'6, nhỏ lên bề mặt thạch của MT3 trong đĩa Petri.
Dùng que trang vô trùng dàn đều giọt hỗn dịch bào tử. Tiến hành làm 3 Petri cho mỗi độ pha loãng ủ các đĩa ở 30°c trong 6 ngày rồi lấy ra đem cấy vạch để thử hoạt tính kháng sinh bằng phương pháp khối thạch, 3 giống tốt nhất được nhân giống và giữ lại để chuẩn bị cho đột biến.
- Phương pháp đột biến bằng ánh sáng UV:
+ Pha hỗn dịch bào tử tương tự như phương pháp chọn lọc ngẫu nhiên 1 ml hỗn dịch bào tử này pha loãng đến nồng độ 10'6 làm mầu chứng, 9ml còn lại được đưa vào điã Petri vô trùng.
+ Chiếu ánh sáng u v với khoảng cách và thời gian thích hợp vào đĩa Petri để độ sống sót khoảng 1% sau đó để chỗ tối 2-3h rồi dùng Pipet lm l vô trùng pha loãng đến nồng độ 10'5
+ Cấy bào tử sau đột biến:
Tương tự như cấy bào tử ở chọn lọc ngẫu nhiên với mẫu thử là các bào tử sau đột biến ở độ pha loãng 10'4, 10'5, mẫu chứng ở nồng độ 10~6
Đếm khuẩn lạc, xác định % độ sống sót theo công thức.
% độ sống sót = ^ ỉ-x io o No
V ớ i:
No : Là số khuẩn lạc trong mẫu chứng.
Tiến hành sàng lọc vói các khuẩn lạc sau đột biến tương tự như phương pháp chọn lọc ngẫu nhiên.
Làm song song mẫu chứng.
% biến đổi hoạt tính được xác định theo công thức:
% biến đổi hoạt tính = = * 100
Do
Với:
Di Là đường kính vòng vô khuẩn trung bình của biến chủng thứ i, Do Là đường kính vòng vô khuẩn trung bình của mẫu chứng.
Dựa vào kết quả thu được lựa chọn ra các biến chủng có % biến đổi hoạt tính dương cao nhất để tiến hành các nghiên cứu tiếp theo.