khuyếch tán
- Nguyên tắc: Mẫu khử được đặt trên hộp Petri có chứa vi sinh vật kiểm định. Kháng sinh từ mẫu khử khuếch tán vào môi trường thạch sẽ ức chế sự phát triển của v s v kiểm định tạo thành các vòng vô khuẩn (vô nấm).
- Tiến hành.
+ lấy một vòng que cấy v s v kiểm định cấy vào môi trường canh thang (ủ ở 37°c trong 18-24h đối với vi khuẩn) và môi trường Sabouraud lỏng (ủ ở 30°c trong 18-24h đối vói vi nấm) để tạo thành nhũ dịch v s v có nồng độ 10'6-10'7 tế bào/ ml.
+ Nhũ dịch v s v được cấy vào môi trường thạch thường (đối với vi khuẩn) và môi trường Sabouraud đặc (đối với vi nấm) với tỉ lệ 2,5:100 (105 tế bào/ml) lắc đều đổ vào các đĩa Petri với thể tích 20ml/lđĩa).
+ Đưa mẫu thử vào môi trường kiểm định: Có 3 cách;
□ Đặt khoanh giấy lọc: khoanh giấy lọc vô trùng (đường kính 6mm) đã tẩm mẫu thử được đặt theo sơ đồ định sẵn, trên môi trường kiểm định.
Áp dụng: thử hoạt tính của các dịch chiết kháng sinh dễ bay hơi.
□ Đục giếng thạch đường kính 6mm, nhỏ mẫu thử vào các giếng thạch . Áp dụng: Thử hoạt tính kháng sinh của dịch lên men.
□ Đặt khối thạch: Mẫu khử là khối thạch đường kính 6mm có chứa xạ khuẩn sinh kháng sinh được đặt lên bề mặt môi trường kiểm định.
- Nuôi cấy: Các đĩa petri trên được nuôi cấy ở t° 37°c (đối với vi khuẩn) hoặc 30°c (đối với vi nấm) trong 18-24h.
Mỗi mẫu được thử trên 3 đĩa đối vófi một loại v s v . Sau khi nuôi cấy đo đường kính vòng vô khuẩn bằng thước kẹp Pamer có độ chính xác 0,02mm. Kết quả được đánh giá dựa trên đường kính vòng vô khuẩn xử lý theo công thức:
D = i=i
n
n
Với: Dị là các đường kính vòng vô khuẩn (vô nấm) đo được. B: là đường kính vòng vô khuẩn (vô nấm) trung bình,
n: số thí nghiệm song song, s: độ lệch chuẩn có hiệu chỉnh.