Lâm Thị Thu Hương và cs (2005) [7] cho biết: tần suất xuất hiện các
nang Leucocytozoon trên một số cơ quan phủ tạng của gà tương ứng: cơ là 96,22%, phổi là 92,45%, thận là 86,80%, gan là 81,13%.
Theo Hoàng Thạch (2004) [22], các cơ quan nội tạng nếu nhiễm
Leucocytozoon. Ở cường độ nhẹ thì chưa thấy biến đổi gì, nhưng nếu nhiễm vừa và nặng (3 - 6 ký sinh trùng trên 1 vi trường) thì xuất hiện sự thoái hoá, biến màu, thậm chí hoại tử từng đám nhỏ, nếu kéo dài thì tăng sinh, làm giảm chức năng hoạt động hoặc bị phá hoại, rõ nhất là gan và lách.
Lê Đức Quyết và cs (2009) [21] cho biết: tỷ lệ nhiễm Leucocytozoon
phụ thuộc vào rất nhiều yếu tố như: tuổi gia cầm, giống, địa hình, vùng sinh thái, phương thức chăn nuôi… Bằng phương pháp nhuộm Giemsa và định loại đơn bào Leucocytozoon ký sinh trên đàn gà ở một số tỉnh Nam Trung Bộ (căn cứ vào hình thái, vị trí, mầu sắc, kích thước của các giao tử gametocyte ký sinh trong máu gà), tác giả cũng đã xác định có 2 loài ký sinh trên đàn gà là L.
caullergyi và L. sabrazesi.
Khi khảo sát tình hình nhiễm ký sinh trùng đường máu trên gà thịt tại hai tỉnh Vĩnh Long và Sóc Trăng, Nguyễn Hữu Hưng (2011) [6] cho biết: đàn gà thịt nhiễm ký sinh trùng đường máu với tỷ lệ khá cao (30,47%). Trong đó tỷ lệ nhiễm ở Vĩnh Long là 32,38% và ở Sóc Trăng là 28,22%. Tác giả cũng
cho biết gà Tam Hoàng có tỷ lệ nhiễm cao hơn hai giống Newlohman và Brown AAA. Gà nuôi nuôi theo kiểu chuồng hở tỷ lệ nhiễm cao hơn so với kiểu chuồng kín.
2.2.2. Tình hình nghiên cứu ở nước ngoài
Morii T. và cs (1984) [38] đã thử nghiệm lây nhiễm những thoi trùng
Leucocytozoon được chiết từ tuyến nước bọt của dĩn, kết quả nhận thấy: các thoi trùng được phân lập vào ngày thứ 2 sau khi dĩn hút máu gia cầm bệnh thì không lây nhiễm được cho gà. Các thoi trùng được phân lập vào ngày thứ 3 thì có khả năng gây nhiễm cho gà.
Morii T. và cs (1986) [39] đã phân lập các thoi trùng từ tuyến nước bọt của Culicoides arakawa và gây bệnh cho gà. Kết quả thấy thoi trùng xuất hiện trong ngoại vi máu gia cầm vào ngày thứ 15 và biến mất vào ngày thứ 26 sau khi gây nhiễm. Kháng nguyên hòa tan được tìm thấy trong huyết thanh của gà gây nhiễm trong khoảng 10 – 10 ngày và kháng thể tương đồng xuất hiện ở ngày thứ 10 sau gây nhiễm.
Huchzermeyer F. W. và Sutherland B. (1978) [34] lần đầu tiên đã phát hiện được Leucocytozoon smithi ở phía Bắc Châu Phi và tác giả cho rằng
Simulium nigritarse là ký chủ trung gian của ký sinh trùng này.
Steele E. J. và cs (2001) [47] cho biết: sự phát triển của Leucocytozoon
smithi có những nét tương đồng với sự phát triển của các loài Plasmodium và
Haemoproteus trong ký chủ trung gian.
Nakamura K. và cs (2001) [41] nghiên cứu ảnh hưởng của Leucocytozoon
trên gà đẻ nhận thấy: Leucocytozoon ảnh hưởng nghiêm trọng đến khả năng sản xuất trứng của gà, thậm chí có thể ngừng đẻ. Tím thấy một số lượng lớn thể phân liệt thế hệ 2 trong buồng trứng và ống dẫn trứng. Gây phù và làm giảm áp lực của các mô lận cận với các mô có đơn bào ký sinh.
Bằng phương pháp sử dụng phản ứng chuỗi polimerasa (PCR) giao thức là sự kết hợp của 3 chuỗi PCR riêng biệt của các loài Haemoproteus,
loài ký sinh trùng khác nhau gồm có 4 loài Haemoproteus, 8 loài Plasmodium và 10 loài Leucocytozoon trong 6 loài chim tước được nghiên cứu.
Omori S. và cs (2008) [43] đã phân tích bộ gen của Leucocytozoon
caulleryi. Kết quả đã mô tả được bộ gen nhiễm sắc thể của L. Caulleryi với chiều dài 5.959 bp.
Shane S. M. (2005) [46] cho biết: việc kết hợp Clopidol anticoccidial trong thức ăn chăn nuôi với các hàm lượng khác nhau từ 125 – 250 ppm đã ngăn chăn được Leucocytozoonosis ở gà tây tại Hoa Kỳ.
Tully T. N. và cs (2009) [48] cho rằng: việc sử dụng Chloriquine (250 mg/ 120 ml nước uống cho 1 – 2 tuần) hoặc pyrimethamine có thể điều trị được bệnh do Leucocytozoon gây ra.
Omori S. và cs (2010) [44] đã sử phương pháp phân tích đếm tế bào dòng chảy, tách giao bào Leucocytozoon để xác định sự có mặt của đơn bào trong máu. Phương pháp này có thể xác định được những mẫu máu bị nhiễm ký sinh trùng đường máu mà các phương pháp thông thường khác không tìm thấy được.
Hill A. G. và cs (2010) [32] sử dụng phương pháp PCR để kiểm tra 107 mẫu máu chim cánh cụt mắt vàng từ 4 khu vực riêng biệt trên khu vực phía nam đảo Oamaru. Kết quả kiểm tra thấy 83% số mẫu kiểm tra là dương tính với Leucocytozoon.
Mullen G. R., Durden L. (2009) [40] cho biết: gà đồng cỏ Attwater đang bị đe dọa tấn công bởi một loài ký sinh trùng đường máu thuộc giống
Phần 3
ĐỐI TƯỢNG, VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
3.1. Đối tượng nghiên cứu
- Bệnh đơn bào Leucocytozoon ở gà.
- Gà nuôi tại xã Hóa Trung thuộc huyện Đồng Hỷ - tỉnh Thái Nguyên và trại gia cầm khoa Chăn nuôi Thú y- trường Đại học Nông Lâm Thái Nguyên.
3.2. Vật liệu nghiên cứu
* Vật liệu nghiên cứu
- Gà khỏe và gà bị bệnh Leucocytozoonosis để thử nghiệm hiệu quả điều trị của một số phác đồđiều trị bệnh Leucocytozoon cho gà.
- Mẫu máu gà khỏe và gà bệnh (để xác định sự thay đổi các chỉ số máu) - Mẫu máu gà (để xác định tỷ lệ và cường độ nhiễm Leucocytozoon)
* Dụng cụ và hoá chất
- Kính hiển vi quang học, kính lúp - Bộ kim lấy máu
- Thuốc nhuộm giemsa
- Dầu Bạch dương, cồn 960, cồn methanol - Hoá chất và các dụng cụ thí nghiệm khác - Thuốc điều trị bệnh Leucocytozoon ở gà.
3.3. Địa điểm và thời gian nghiên cứu
3.3.1. Địa điểm nghiên cứu
- Đề tài thực hiện ở trại gia cầm khoa Chăn nuôi Thú y- trường Đại học Nông Lâm Thái Nguyên và các nông hộ, các trại chăn nuôi gà gia đình và tập thể với các quy mô khác nhau tại xã Hóa Trung thuộc huyện Đồng Hỷ - tỉnh Thái Nguyên.
- Địa điểm xét nghiệm mẫu:
Phòng thí nghiệm Khoa Chăn nuôi Thú y - Trường ĐH Nông Lâm Thái Nguyên.
3.3.2. Thời gian nghiên cứu:
Từ tháng 6/2014 đến tháng 11/2014
3.4. Nội dung nghiên cứu
3.4.1. Đặc điểm dịch tễ bệnh Leucocytozoon ở gà tại xã Hóa Trung thuộc huyện Đồng Hỷ - tỉnh Thái Nguyên và trại gia cầm khoa Chăn nuôi Thú y- huyện Đồng Hỷ - tỉnh Thái Nguyên và trại gia cầm khoa Chăn nuôi Thú y- trường Đại học Nông Lâm Thái Nguyên.
- Tỷ lệ và cường độ nhiễm Leucocytozoon theo địa phương
- Tỷ lệ và cường độ nhiễm Leucocytozoon theo phương thức chăn nuôi - Tỷ lệ và cường độ nhiễm Leucocytozoon theo tuổi
- Tỷ lệ và cường độ nhiễm Leucocytozoon theo tính biệt - Tỷ lệ và cường độ nhiễm Leucocytozoon theo loại gà
- Tỷ lệ và cường độ nhiễm Leucocytozoon theo tình trạng vệ sinh thú y
3.4.1. Nghiên cứu đặc điểm bệnh lý và lâm sàng bệnh Leucocytozoon ở gà
- Xác định các biểu hiện lâm sàng của gà bị bệnh. - Xác định một số chỉ tiêu huyết học của gà bệnh.
3.4.2. Sử dụng thuốc điều trị bệnh Leucocytozoon cho gà
- Xác định hiệu lực một số thuốc điều trị bệnh Leucocytozoon cho gà
3.5. Phương pháp nghiên cứu
3.5.1. Bố trí lấy mẫu và phương pháp xác định tỷ lệ, cường độ nhiễm Leucocytozoon ở gà tại xã Hóa Trung thuộc huyện Đồng Hỷ - tỉnh Thái Nguyên và trại gia cầm khoa Chăn nuôi Thú y- trường Đại học Nông Lâm Thái Nguyên.
3.5.1.1. Bố trí thu thập mẫu
- Bố trí lấy mẫu máu gà theo phương pháp lấy mẫu phân tầng.
- Trại gà tại trường Đại học Nông Lâm Thái Nguyên: lấy 60 mẫu, mỗi gà làm 3 tiêu bản máu
- Huyện Đồng Hỷ - tỉnh Thái Nguyên: chọn xã Hóa Trung, lấy 4 xóm trong xã, mỗi xóm lấy 6 hộ, mỗi hộ lấy 7 - 8 mẫu, mỗi gà làm 3 tiêu bản máu.
3.5.1.2. Phương pháp xác định tỷ lệ và cường độ nhiễm Lecocytozoon ở gà
tại xã Hóa Trung thuộc huyện Đồng Hỷ - tỉnh Thái Nguyên và trại gia cầm
khoa Chăn nuôi Thú y- trường Đại học Nông Lâm Thái Nguyên * Phương pháp thu thập mẫu
Mẫu máu được thu thập ngẫu nhiên từ gà nuôi tại các nông hộ, các trại chăn nuôi gà ở xã Hóa Trung của huyện Đồng Hỷ - tỉnh Thái Nguyên và trại gia cầm khoa Chăn nuôi Thú y - trường Đại học Nông Lâm Thái Nguyên.
Chuẩn bị những phiến kính mới đã được tẩy mỡ bằng cách ngâm và rửa xà phòng trong một ngày, sau đó ngâm trong cồn 960 trong 3 giờ rồi lau khô bằng khăn mềm không có xơ. Chọn những lamen kích thước 2 x 2 cm, rìa thật phẳng và nhẵn.
Trước khi lấy mẫu máu xét nghiệm, quan sát kỹ các biểu hiện lâm sàng của gà. Dùng kim lấy 1 giọt máu tươi của gà tại tĩnh mạch cánh, đặt lên phiến kính, cách bờ phiến kính khoảng 1 cm. Đặt cạnh của một lamen lên giọt máu, nghiêng 450 với phiến kính. Khi giọt máu đã tràn ra khắp cạnh của lamen thì đẩy lamen về phía trước, làm cho máu được dàn thành một lớp mỏng và đều trên phiến kính. Cốđịnh tiêu bản bằng cồn methanol. Làm 3 tiêu bản máu/ gà. Tiêu bản được ghi số thứ tự bằng bút chì mỡ. Ghi nhật ký thí nghiệm các thông tin: chủ hộ, địa chỉ, ngày lấy mẫu, giống gà, tuổi gà, phương thức chăn nuôi, điều kiện vệ sinh thú y, các biểu hiện lâm sàng (nếu có).
* Chuẩn bị thuốc nhuộm giemsa cơ bản
Dung dịch giemsa cơ bản bao gồm: - Giemsa bột: 3,8 gam
- Glycerin: 125 ml
Dùng đũa thủy tinh khuấy kỹ rồi để vào tủ ấm 37oC với thời gian 48 h, sau đó lọc qua giấy lọc, bỏ cặn và bảo quản trong lọ thủy tinh màu trung tính, có nút kín.
* Phương pháp nhuộm giemsa
Nguyễn Thị Kim Lan và cs (2008) [10] cho biết: Nhuộm tiêu bản máu bằng thuốc nhuộm giemsa gồm 3 bước như sau:
- Bước 1: Pha thuốc nhuộm giemsa + Giemsa cơ bản: 1 phần
+ Nước cất trung tính (pH = 7,2): 9 phần
Nước cất để sẵn trong 1 cốc nhỏ có mỏ (100 ml), lấy dung dịch giemsa cơ bản bằng 1 pipet, nhỏ chậm giemsa vào cốc nước, không được lắc cốc.
- Bước 2: Đổ chậm dung dịch nhuộm vào hộp nhuộm cho ngập các tiêu bản, đậy nắp hộp nhuộm để tránh bụi
Thời gian nhuộm 45 - 50 phút - Bước 3: Lấy tiêu bản
Dùng 1 pince kẹp, cặp lần lượt từng tiêu bản và để nghiêng dưới vòi nước cất chảy nhẹ (pH = 7,2) cho trôi hết thuốc nhuộm dư thừa. Sau đó dựng nghiêng tiêu bản vào cạnh 1 cái hộp, để khô tự nhiên.
* Phương pháp kiểm tra tìm Leucocytozoon trên tiêu bản máu nhuộm giemsa
Nhỏ 1 giọt dầu bạch dương lên tiêu bản, kiểm tra tiêu bản dưới kính hiển vi vật kính dầu, độ phóng đại 10 x 90 hoặc 10 x 100 để tìm Leucocytozoon.
Những mẫu máu tìm thấy đơn bào Leucocytozoon được xác định là có nhiễm, ngược lại là không nhiễm.
Cường độ nhiễm được xác định bằng tỷ lệ % số hồng cầu có đơn bào ký sinh và quy định các mức cường độ nhiễm: nhẹ, trung bình và nặng.
> 5% - 10% hồng cầu có đơn bào ký sinh: nhiễm trung bình (++) > 10% hồng cầu có đơn bào ký sinh: nhiễm nặng (+++)
3.5.2. Bố trí lấy mẫu và phương pháp xác định tỷ lệ, cường độ nhiễm Leucocytozoon ở gà theo phương thức chăn nuôi
3.5.2.1. Bố trí lấy mẫu
Chúng tôi tiến hành thu thập mẫu máu gà tại xã Hóa Trung - huyện Đồng Hỷ - tỉnh Thái Nguyên và trại gia cầm khoa Chăn nuôi Thú y - trường ĐH Nông Lâm Thái Nguyên theo 3 phương thức nuôi đó là: nuôi công nghiệp, nuôi bán công nghiệp và phương thức nuôi truyền thống.
3.5.2.2 Phương pháp xác định tỷ lệ và cường độ nhiễm Leucocytozoon ở gà
theo phương thức chăn nuôi
Tiến hành thu thập mẫu máu, phiết tiêu bản, nhuộm giemsa, kiểm tra dưới kính hiển vi tìm đơn bào Leucocytozoon của gà ở các phương thức chăn nuôi khác nhau theo phương pháp nhưđã trình bày ở mục 3.5.1.2
3.5.3. Bố trí lấy mẫu và phương pháp xác định tỷ lệ, cường độ nhiễm Leucocytozoon ở gà theo tuổi gà
3.5.3.1. Bố trí lấy mẫu
Chúng tôi thu thập mẫu máu gà tại xã Hóa Trung - huyện Đồng Hỷ- tỉnh Thái Nguyên và trại gia cầm Khoa Chăn nuôi Thú y- trường ĐH nông Lâm Thái Nguyên theo 4 lứa tuổi như sau: ≤ 2 tháng tuổi, > 2 - 4 tháng tuổi, > 4 - 6 tháng tuổi, > 6 tháng tuổi.
3.5.3.2. Phương pháp xác định tỷ lệ và cường độ nhiễm Leucocytozoon ở gà theo các lứa tuổi
Tiến hành thu thập mẫu máu, phiết tiêu bản, nhuộm giemsa, kiểm tra dưới kính hiển vi tìm đơn bào Leucocytozoon của gà ở các lứa tuổi khác nhau theo phương pháp nhưđã trình bày ở mục 3.5.1.2.
3.5.4. Bố trí lấy mẫu và phương pháp xác định tỷ lệ nhiễm Leucocytozoon ở gà theo tính biệt
3.5.4.1. Bố trí lấy mẫu
Chúng tôi tiến hành thu thập mẫu máu gà tại xã Hóa Trung - huyện Đồng Hỷ - tỉnh Thái Nguyên và trại gia cầm khoa Chăn nuôi Thú y - trường ĐH Nông Lâm Thái Nguyên theo 2 tính biệt: trống và mái.
3.5.4.2 Phương pháp xác định tỷ lệ nhiễm Leucocytozoon ở gà theo tính biệt
Tiến hành thu thập mẫu máu, phiết tiêu bản, nhuộm giemsa, kiểm tra dưới kính hiển vi tìm đơn bào Leucocytozoon của gà ở các tính biệt khác nhau theo phương pháp nhưđã trình bày ở mục 3.5.1.2
3.5.5. Bố trí theo dõi và phương pháp xác định tỷ lệ, cường độ nhiễm Leucocytozoon ở gà theo loại gà
3.5.5.1. Bố trí lấy mẫu
Chúng tôi dự kiến thu thập mẫu máu gà tại xã Hóa Trung - huyện Đồng Hỷ - tỉnh Thái Nguyên và trại gia cầm khoa Chăn nuôi Thú y - trường ĐH Nông Lâm Thái Nguyên theo 3 loại gà: gà nhập nội, gà địa phương, gà lai (Mía x Lương Phượng)
3.5.5.2. Phương pháp xác định tỷ lệ và cường độ nhiễm Leucocytozoon ở gà theo loại gà
Tiến hành thu thập mẫu máu, phiết tiêu bản, nhuộm giemsa, kiểm tra dưới kính hiển vi tìm đơn bào Leucocytozoon ở gà theo từng loại gà theo phương pháp nhưđã trình bày ở mục 3.5.1.2
3.5.6. Bố trí lấy mẫu và phương pháp xác định tỷ lệ, cường độ nhiễm Leucocytozoon theo tình trạng vệ sinh thú y
3.5.6.1. Bố trí lấy mẫu
Chúng tôi dự kiến thu thập mẫu máu gà tại xã Hóa Trung - huyện Đồng Hỷ - tỉnh Thái Nguyên và trại gia cầm khoa Chăn nuôi Thú y - trường ĐH Nông Lâm Thái Nguyên theo 3 mức tình trạng vệ sinh thú y (VSTY) như sau: - VSTY tốt, VSTY trung bình, VSTY kém.
3.5.6.2. Phương pháp xác định tỷ lệ và cường độ nhiễm Leucocytozoon ở gà theo tình trạng VSTY
Tiến hành thu thập mẫu máu, phiết tiêu bản, nhuộm giemsa, kiểm tra dưới kính hiển vi tìm đơn bào Leucocytozoon của gà ở các tình trạng VSTY khác nhau theo phương pháp nhưđã trình bày ở mục 3.5.1.2
3.5.7. Phương pháp bố trí theo dõi triệu chứng lâm sàng bệnh Leucocytozoon ở gà
Chúng tôi đã bố trí theo dõi triệu chứng lâm sàng của 46 gà nhiễm đơn bào
Leucocytozoon (46 gà này có kết quả xét nghiệm máu phát hiện thấy
Leucocytozoon trong hồng cầu).
3.5.8. Phương pháp bố trí theo dõi hiệu quả và độ an toàn của 2 phác đồ điều trị bệnh Leucocytozoon cho gà.
Chúng tôi đã bố trí thí nghiệm trên 46 gà nhiễm đơn bào
Leucocytozoon ở các cường độ nhiễm khác nhau. Trước khi dùng thuốc, xác
định cường độ nhiễm bằng % số hồng cầu bị đơn bào ký sinh. Sau 15 ngày dùng thuốc, kiểm tra lại máu của những gà đó để xác định hiệu lực của thuốc. Độ an toàn của thuốc được đánh giá bằng cách: theo dõi các trạng thái sinh lý của gà trong vòng 5 giờ sau dùng thuốc.
Việc thử nghiệm thuốc được bố trí như sau:
Phác đồ Thuốc sử dụng Số gà điều trị (con)