Dịch chiết collagen được tạo tủa bằng NaCl 1M ở 4oC, 4h. Lấy tủa đem phân tích thu được kết quả như sau:
z Hàm lượng ẩm: 79.11 %
đồ thị hiệu suất chiết theo thời gian
0 20 40 60 80 100 0 10 20 30 40 50 60 thời gian (h) hi ệ u s u ấ t c h i ế t N17(E 0.5%,A 0.5M) N18(E0.5%,A0.5M) N19(E 0.5%, A 0.5M) 4gda/200ml 1:50 10oC
7.2/ Xác định phân tử lượng collagen bằng phương pháp điện di
Điện di theo phương pháp SDS- Page(Laemmli) Buffer System bằng máy điện di đứng, loại mini- PROTEAN Tetra cell của hãng BIO –RAD. Với Resolving gel là 7%; stacking gel là 5%.
Kết quảđiện di cho thấy collagen thu được có phân tử lượng khoảng 110kDa
Hình III.13:Hình chụp điện di collagen trên SDS-PAGE 7.3/ Phân tích tính chất nhiệt của collagen dạng tủa
Phân tích tính chất nhiệt của collagen dạng tủa được xác định bằng máy phân tích nhiệt vi sai (DSC 1; Gas controller GC 10; hãng Mettler Toledo), trong vùng nhiệt độ từ 25-300oC, tốc độ gia nhiệt 15oC/phút.
Kết quả cho thấy xuất hiện hai pick thu nhiệt; pick thứ nhất ở 95,25oC. Theo lý giải của Machado và cộng sự (Thermanal Calorim, 2002, 67, 491) thì sự xuất hiện pick thu nhiệt ở 95,25oC có thể là kết quả của sự mất lớp áo nước bao quanh phân tử collagen tạo ra. Sự mất nước của collagen bắt đầu xảy ra ở 36,43oC (collagen bắt đầu biến tính). Pick thứ hai ở 202,5oC, bắt đầu ở 190,5oC: phân tử collagen bị cháy.
Dịch collagen Thang chuẩn
CHƯƠNG IV KẾT LUẬN
9 Xử lý da cá bằng NaOH 0,05N trong 3h; H2O2 1%, trong 2h: da cá có màu trắng, mùi cá giảm nhiều, da cá trương nhẹ, không bị biến tính.
9 Loại lipid bằng LasNa 1% có hiệu quả cao: sau 8 tiếng xử lý, hàm lượng chất béo giảm từ 5,59% xuống còn 0,29%.
9 Phương pháp chiết bằng acid acetic phối hợp với pepsin cho hiệu suất cao hơn (89.8%) phương pháp chiết bằng acid acetic (60.63%).
9 Collagen chiết được có phân tử lượng khoảng 64 – 110 kDa
Hướng nghiên cứu tiếp theo
9 Tối ưu hóa quá trình chiết collagen
9 Tinh sạch collagen (tách lipid bằng CO2 siêu tới hạn, tách muối bằng thẩm tích,…)
9 Xác định đặc tính lý hoá, vi sinh của sản phẩm collagen thu được
TÀI LIỆU THAM KHẢO
1. Đỗ Quý Hai, Nguyễn Bá Lộc, Trần Thanh Phong và Cao Đăng Nguyên - Hóa sinh - Nhà xuất Bản Đại học Huế.
2. Đặng Thị Thu, Lê Ngọc Tú, Tô Kim Anh, Phạm Thu Thủy và Nguyễn Xuân Sâm - Công nghệ enzyme - NXB Khoa học và Kỹ thuật, Hà Nội - 2004.
3. Nguyễn Tiến Thắng và Nguyễn Đình Huyên - Giáo trình sinh hóa hiện đại - Nhà xuất bản Giáo dục- 1998.
4. Nguyễn Văn Uyển và Nguyễn Tiến Thắng - Những kiến thức cơ bản về công nghệ sinh học - NXB Giáo dục, Hà Nội -1999
5. Phan Thị Thanh Quế- Công nghệ chế biến thủy sản - Đại học Cần Thơ - 2005.
6. Bains W - Biotechnology from A to Z - Oxford University Press Inc, New York – 2003
7. C.O. Chichester, Advances in Food Research, vol 28. Academic Press, 1982 8. Perumal, S., O. Antipova, and J.P. Orgel, Collagen fibril architecture, domain organization, and triple-helical conformation govern its proteolysis. Proc Natl Acad Sci U S A, 2008. 105(8): p. 2824–9.
9. Ratledge C and Kristiansen B - Basic Biotechnology - Cambridge University Press, UK -2002.
10. Shimizu, Johsuke ;Shimizu, Hideki ;Nagashima, Koji ;Yamada, Kunishige ; Takamatsu, Minori - Fish collagen and method of producing same- United states Patent 6271350 -2001.
11. Walker JM - The Protein Protocol Handbook. 2nd ed - Humana Press Inc. NewJersey, USA – 2002
12. Zhongkai Zhang, Guoying Li and Bi Shi – Physicochemical properties of collagen, gelatin and collagen hydrolysate derived from bovine limed split wastes –