2.2.2.1. Phát hiện hoạt tính catalase
Nhỏ một giọt H2O2 3% lên bề mặt khuẩn lạc, nếu thấy hiện tượng sủi bọt khí thì chủng vi khuẩn đó được coi là có hoạt tính catalase (catalase +). Ngược lại, chủng vi khuẩn đó không có hoạt tính catalase (catalase -) [1]
2.2.2.2. Phát hiện khả năng oxy hoá acid acetic
Sử dụng môi trường sau để thử khả năng oxy hoá acid acetic của vi khuẩn tuyển chọn.
Thành phần (g/l): Cao nấm men : 10g Canxi acêtat: 10g Thạch : 20g Nước máy: 1000ml pH : 7,0-7,2
Phân phối môi trường vào bình tam giác đem khử trùng ở nhiệt độ 1210C trong 20 phút, để nguội khoảng 40 – 450C đổ thạch đĩa, cấy vi khuẩn tuyển chọn mới hoạt hóa (18 – 24 giờ) nuôi từ 6 -7 ngày trong điều kiện thích hợp.Quan sát hiện tượng nếu xung quanh khuẩn lạc có vòng phân giải canxi là phản ứng dương tính (acetat bị oxi hóa, calcium giải phóng ra tạo màu trắng sữa) , ngược lại là âm tính [1].
2.2.2.3. Phát hiệnkhả năng chuyển hoá glycerol thành dihydroaceton
Để phát hiện khả năng hình thành dihydroxyaceton từ glycerol. Chúng tôi tiến hành trên môi trường bao gồm thành phần sau:
Glycerol: 4% (g/l) Cao nấm men: 0,3 % (g/l) Cao ngô: 3% (g/l) CaCO3: 0,3% (g/l) (NH4)2SO4 : 0,1% (g/l) H2O: 1000ml pH : 5,3
18
Hấp thanh trùng 121oC trong 10 phút. Để môi trường nguội cấy giống vi khuẩn nghiên cứu nuôi lắc 140 vòng/ phút ở nhiệt độ 30oC trong vòng 48h. Nhỏ dung dịch Fehling để kiểm tra sự tạo thành dihydroxyaceton (có sự xuất hiện kết tủa Cu2O màu đỏ gạch) [1].
2.2.2.4. Phương pháp phát hiện khả năng tổng hợp cellulose
Nuôi cấy chủng vi khuẩn Gluconacetobacter BHN2 trên môi trường dịch thể ở nhiệt độ phòng trong 3-4 ngày, quan sát sự hình thành màng. Kiểm tra khả năng bắt màu của màng bằng cách nhỏ lên đó dung dịch lugol và H2SO4 60% thấy màng chuyển từ màu trắng đục sang màu xanh lam.
Qua đó, nhận thấy rằng chủng vi khuẩn Gluconacetobacter BHN2 đã được hoạt hóa và thuần chủng lại, đáp ứng được nhu cầu cho quá trình nghiên cứu của đề tài.