Chuẩn bị dịch chấm sắc ký: Hòa tan cắn từng phân đoạn trong methanol.
Chuẩn bị bản mỏng: Bản mỏng tráng sẵn Silica gel GF254 (MERCK), hoạt hóa ở 100-105˚C trong 1 giờ. Để nguội và bảo quản trong bình hút ẩm.
Chấm và xác định pic sắc kí: Sử dụng máy CAMAG – Linomat 5, phần mềm winCATS, phần mềm videoSCAN để chấm.
Chấm dịch chiết methanol lên bản mỏng. Sấy nhẹ cho khô, đặt vào bình sắc kí đã bão hòa dung môi. Sau khi triển khai lấy bản mỏng ra khỏi bình, sấy nhẹ 5 phút cho bay hơi hết dung môi. Phát hiện vết dưới ánh sáng tử ngoại. Sau đó nhúng thuốc thử hiện màu, sấy ở nhiệt độ phòng.
Hiện màu : - Dd vanillin/ H2SO410%.
- Soi dưới đèn tử ngoại bước sóng 254nm, 366nm. Định tính cắn phân đoạn n- Hexan bằng SKLM
- Hệ dung môi khai triển: Tiến hành thăm dò trên các hệ dung môi: Hệ I: Chloroform : Methanol (9:1).
Hệ II: Chloroform : Methanol: Nước (8:1:1).
Hệ III: Toluen: Ethhyl acetat: Acid formic (8:3:1).
Hệ IV: Chloroform : Aceton : Acid formic (70:25:5).
Hệ V: Toluen: Ethyl acetat: Acid formic (5:6:1). Hệ VI: Ethyl acetat: chloroform: Acid formic (3 :3 :1). Hệ VII: Toluen: Ethyl acetat: Acid formic (50:45:10). Sau nhiều lần triển khai thấy hệ VII tách tốt nhất.
Kết quả định tính bằng SKLM của cắn phân đoạn n-hexan khai triển với hệ dung môi VII được trình bày ở hình 3.5 và hình 3.6.
Hình 3.5. Ảnh chụp sắc ký đồ phân đoạn n-hexan khai triển với hệ dung môi VII soi dưới UV366.
Hình 3.6. Kết quả định tính cắn phân đoạn n-hexan bằng SKLM. Nhận xét: Sắc ký đồ : - AST có 3 vết.
- Soi UV254 có 6 vết.
- Soi UV366 có 15 vết, trong đó 2 vết số 11, 15 có Rf (0,516; 0,861) hấp thụ UV mạnh nhất.
- Hiện màu bằng dd vanillin/ H2SO4 10% có 10 vết.
3.4.2. Định tính cắn phân đoạn chloroform bằng SKLM
- Hệ dung môi khai triển: Tiến hành thăm dò trên các hệ dung môi: Hệ I: Chloroform : Methanol (9:1).
Hệ II: Chloroform : Methanol: Nước (8:1:1).
Hệ III: Toluen: Ethyl acetat: Acid formic (8:3:1). Hệ IV: Chloroform : Aceton : Acid formic (70:25:5). Hệ V: Toluen: Ethyl acetat: Acid formic (5:6:1). Hệ VI: Ethyl acetat: chloroform: Acid formic (3 :3 :1). Hệ VII: Toluen: Ethyl acetat: Acid formic (50:45:10). Sau nhiều lần triển khai thấy hệ III tách tốt nhất.
Kết quả định tính bằng SKLM của cắn phân đoạn chloroform khai triển với hệ dung môi III được trình bày ở hình 3.7 và hình 3.8.
Hình 3.7. Ảnh chụp sắc ký đồ phân đoạn chloroform khai triển với hệ dung môi III soi dưới UV366.
Hình 3.8. Kết quả định tính cắn phân đoạn chloroform bằng SKLM. Nhận xét: Sắc ký đồ : - AST có 4 vết.
- Soi dưới UV254 có 12 vết.
- Soi dưới UV366 có 13 vết, trong đó 3 vết số 5,6,7 có Rf (0,274; 0,317; 0,357) hấp thụ UV mạnh nhất.
- Hiện màu bằng dd vanillin/ H2SO4 10% có 11 vết.
3.4.3. Định tính cắn phân đoạn Ethyl acetat bằng SKLM
- Hệ dung môi khai triển: Tiến hành thăm dò trên các hệ dung môi: Hệ I: Chloroform : Methanol (9:1).
Hệ II: Chloroform : Methanol: Nước (8:1:1).
Hệ III: Toluen: Ethyl acetat: Acid formic (8:3:1). Hệ IV: Chloroform : Aceton : Acid formic (70:25:5). Hệ V: Toluen: Ethyl acetat: Acid formic (5:6:1). Hệ VI: Ethyl acetat: chloroform: Acid formic (3 :3 :1). Hệ VII: Toluen: Etyl acetat: Acid formic (50:45:10). Sau nhiều lần triển khai thấy hệ V tách tốt nhất.
Kết quả định tính bằng SKLM của cắn phân đoạn ethyl acetat khai triển với hệ dung môi V được trình bày ở hình 3.9 và hình 3.10.
Hình 3.9. Ảnh chụp sắc ký đồ phân đoạn ethyl acetat khai triển với hệ dung môi V soi dưới UV366.
Hình 3.10. Kết quả định tính cắn phân đoạn Ethyl acetat bằng SKLM. Nhận xét: Sắc ký đồ : - AST có 6 vết.
- Soi dưới UV254 có 7 vết.
- Soi dưới UV366 có 12 vết, trong đó 2 số 6, 8 có Rf (0,457; 0,662) hấp thụ UV mạnh nhất.