bằng sắc ký lớp mỏng.
3.3.1 Định tính phân đoạn dịch chiết n - hexan bằng sắc ký lớp mỏng.
- Chuẩn bị:
+ Dung dịch chấm sắc ký:
Cắn n - hexan được hòa tan lại trong n - hexan để chấm sắc ký.
Chất đối chiếu β - sitosterol hòa tan trong chloroform (nồng độ 1 mg/ ml) + Bản mỏng: bản mỏng tráng sẵn silicagel GF254 được hoạt hóa ở 110°C trong 30 phút.
+ Hệ dung môi khai triển: n - hexan: EtOAc = 90: 10 - Tiến hành
Chấm sắc ký cắn n - hexan và chất đối chiếu β - sitosterol lên bản mỏng. Pha hệ dung môi, lắc đều, để ổn định 5 phút.
Đặt bản mỏng vào hệ dung môi khai triển.
Sắc ký sau khi khai triển sấy nhẹ cho bay hết dung môi.
Kết quả - bàn luận:
Kết quả thể hiện qua sắc ký đồ, hình 3.2
Quan sát các vết sắc ký dưới ánh sáng tử ngoại có bước sóng 254 nm thấy xuất hiện 6 vết chính.
Dưới ánh sáng tử ngoại có bước sóng 365 nm xuất hiện 6 vết chính
Hiện màu bằng thuốc thử H2SO4 xuất hiện 7 vết có Rf lần lượt là 0,1; 0,27; 0,33; 0,4; 0,73; 0,77; 0,96.
Kết quả sắc ký lớp mỏng cho thấy phân đoạn này có nhiều chlorophyll và carotenoid (có huỳnh quang đỏ dưới ánh sáng tử ngoại bước sóng λ = 365 nm) và các hợp chất triterpenoid (các vết có màu tím đỏ khi hiện màu
với thuốc thử H2SO4).
Từ các nghiên cứu về thành phần hóa học, mảnh bát chứa β - sitosterol là phytosterol phổ biến trong thực vật nên chúng tôi sử dụng sắc ký lớp mỏng so sánh cắn phân đoạn n – hexan với chất đối chiếu β – sitosterol. Trên sắc ký đồ, chất đối chiếu β - sitosterol không quan sát được dưới ánh sáng tử ngoại nhưng hiện màu hồng khi phun thuốc thử H2SO4 10% trong EtOH rồi hơ nóng, có cùng màu và cùng giá trị Rf với 1 vết của phân đoạn n – Hexan. Vì vậy sơ bộ có thể kết luận trong phân đoạn n – Hexan của mảnh bát
Coccinia indica có chứa β - sitosterol.
Hình 3.2: Sắc kí đồ phân đoạn n – hexan dưới ánh sáng tử ngoại hai bước sóng λ = 254 nm và λ = 365 nm
I: Cắn n – Hexan II: β – sitosterol
3.3.2 Định tính phân đoạn dịch chiết EtOAc bằng sắc ký lớp mỏng.
+ Dung dịch chấm sắc ký: Cắn EtOAc được hòa tan lại trong EtOAc để chấm sắc ký.
+ Hệ dung môi khai triển: DCM: MeOH = 90:10
- Kết quả - bàn luận:
Hình 3.3: Sắc kí đồ phân đoạn EtOAc dưới ánh sáng tử ngoại hai bước sóng
λ = 254 nm và λ = 365 nm và sau khi hiện màu với thuốc thử H2SO4.
Quan sát các vết sắc ký dưới ánh sáng tử ngoại có bước sóng 254 nm thấy các vết mờ trong đó có ít nhất 3 vết. Các vết có Rf lớn, ít phân cực hầu như không hiện UV có bước sóng 254 nm.
Soi UV với bước sóng 365 nm hiện ít nhất 8 vết của các chất ít phân cực có Rf lớn có huỳnh quang xanh lam và huỳnh quang đỏ.
Hiện màu bằng thuốc thử H2SO4 xuất hiện ít nhất 5 vết có Rf lần lượt là 0,2; 0,4; 0,52, 0,58; 0,93; 1. Trong đó vết có Rf 0,4 hiện rõ, màu hồng tím.
(adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});