- Nguyên tắc: Sau khi có kết quả xác định được các môi trường nuôi cấy bề mặt tối thích cho việc sản xuất kháng sinh, sử dụng giống cấp 1 để lên men gián đoạn trong các môi trường lỏng tương ứng.
- Tiến hành
+ Tạo giống cấp 1: Chủng giống Streptomyces 183.219 sau khi nuôi cấy trên thạch nghiêng (MT2) đủ 6 ngày tuổi được cấy vô trùng sang bình nón 500 ml chứa 100 ml MT2dt bằng 10 ml nước cất vô trùng, lắc trên máy lắc tròn ở nhiệt độ 28°C ± 0,1°C, tốc độ quay 140 vòng/phút trong 48 h.
+ Lên men: Sau 48 h nhân giống, tiến hành lên men trên các MT dịch thể khác nhau để chọn MTdt lên men tốt nhất. Giống cấp 1 được cấy vô trùng sang bình nón 500 ml chứa các MTdt với tỷ lệ Vgiống:Vmôi trường = 1:10. Các bình lên men được lắc ở nhiệt độ 28°C ± 0,1°C, tốc độ quay 140 vòng/phút trong 120 h. Để chọn chủng
có khả năng lên men sinh tổng hợp kháng sinh tốt nhất: giống cấp 1 trên MT2dt được lên men trên môi trường tối ưu cho việc sinh tổng hợp kháng sinh, sau đó lựa chọn chủng cho dịch lên men có HTKS tốt nhất.
2.3.8.Xác định độ bền của kháng sinh trong dịch lên men
- Mục đích: Xác định khả năng chịu nhiệt của kháng sinh và mức độ ảnh hưởng của các pH khác nhau lên độ bền vững của kháng sinh.
- Tiến hành:
+ Thử độ bền nhiệt: Dịch lọc được phân vào 3 ống nghiệm, mỗi ống khoảng 7 ml. Một ống được đun sôi trực tiếp 10 phút, một ống được đun cách thủy 30 phút, một ống để ở nhiệt độ bình thường. Sau khi ba ống trở về nhiệt độ bình thường, đem thử HTKS bằng phương pháp giếng thạch.
+ Thử độ bền pH: Dịch lọc được cho vào 5 ống nghiệm (làm 3 dãy song song), mỗi ống khoảng 7 ml. Điều chỉnh pH trong các ống lần lượt là 3, 5, 7, 9, 11, bảo quản trong tủ lạnh. Sau 1 ngày và 5 ngày, chỉnh pH mỗi ống về pH trung tính, thử HTKS bằng phương pháp giếng thạch. Theo dõi sự thay đổi HTKS.