Bằng ánh sáng UV
Pha hỗn dịch bào tử: Lấy 1 vòng que cấy bào tử Streptomyces 173.113 cho vào ống nghiệm chứa 10 ml nước vô trùng, lắc đều, thu được hỗn dịch bào tử có độ pha loãng 10-1(định ước). Sau đó pha loãng tiếp đến nồn g độ 10-6 bằng nước vô trùng.
Hút 0,1 ml hỗn dịch bào tử độ pha loãng 10-6
, nhỏ vào hộp Petri có môi trường thạch, dàn đều bằng que chang vô trùng, để vào tủ ấm làm mẫu chứng.
Đột biến bằng ánh sáng UV: 9 ml còn lại trong ống nồng độ 10-1đổ ra đĩa Petri vô trùng . Chiếu ánh sáng UV (λ=254 nm) vào đĩa Petri có hỗn dịch bào tử nồng độ 10-1 đặt cách nguồn sáng 60 cm, trong thời gian 5 phút. Lấy ra để vào chỗ tối 2 giờ, rồi dùng pipet vô trùng pha loãng đến nồng độ 10-5
.
Phân tán bào tử sau đột biến: Dùng pipet vô trùng hút 0,1 ml hỗn dịch bào tử sau đột biến ở các nồng độ 10-4
, 10-5, nhỏ vào hộp Petri có MT 1, dàn đều bằng que chang vô trùng rồi cho vào tủ ấm. Sau 6 ngày, đếm số khuẩn lạc, xác định % độ sống sót theo công thức: % độ sống sót = 0 N Nm x 10-6+k x 100% Nm: Số khuẩn lạc sau đột biến,
N0: Số khuẩn lạc trong mẫu chứng,
10-k: Nồng độ pha loãng của hỗn dịch bào tử sử dụng.
Làm song song cả mẫu chứng. Sau 6 ngày để trong tủ ấm, thử hoạt tính kháng sinh. Tính % biến đổi hoạt tính theo công thức:
% biến đổi hoạt tính =
0
D Di
x 100%
Di: Đường kính trung bình vòng vô khuẩn của biến chủng thứ i sau ĐB.
D0: Đường kính trung bình vòng vô khuẩn của mẫu chứng.
Sau đột biến, dựa vào kết quả thu được để lựa chọn ra các biến chủng có % biến đổi hoạt tính cao nhất dùng cho các nghiên cứu tiếp theo.
Bằng tác nhân hoá học acid nitrơ (HNO2)
Nguyên tắc: HCl + NaNO2 = NaCl + HNO2
Pha hỗn dịch bào tử: Lấy 1 vòng que cấy bào tử Streptomyces 173.113 cho vào ống nghiệm chứa 10 ml nước cất vô trùng, lắc đều, thu được hỗn dịch bào tử có độ pha loãng 10-1
(định ước). Sau đó pha loãng tiếp đến nồng độ 10-6bằng nước cất vô trùng.
Hút 0,1 ml hỗn dịch bào tử độ pha loãng 10-6
, nhỏ vào hộp Petri có môi trường thạch, dàn đều bằng que chang vô trùng, để vào tủ ấm làm mẫu chứng.
Đột biến bằng acid nitroro: 9 ml còn lại trong ống nồng độ 10-1
cho them 0,07g NaNO2. Điều chỉnh pH xuống 4-4,5 bằng dung dịch HCl 0,1N, để yên trong 2-3 phút. Sau đó điều chỉnh pH lên 7-8 bằng dung dịch NaOH 0,1N, rồi dùng pipet vô trùng pha loãng đến nồng độ 10-5
.
Phân tán bào tử sau đột biến, chọn lọc ngẫu nhiên, tính toán kết quả các biến chủng thực hiện như đột biến bằng ánh sáng UV.