a) Tạo hydrazon: Phương trỡnh phản ứng:
2.2.6. Thử chiết estron (folliculin) từ nước tiểu phụ nữ cú thai: Một sụ tớnh chất của estron [14]:
-Một sụ tớnh chất của estron [14]:
Tờn khoa học: 3-Hydroxy-estra-l ,3,5(10)-trien-17-on.
Cụng thức phõn tử: C18H220 2. Phõn tử lượng: 270,37.
Thành phần cỏc nguyờn tố: C: 79,96%, H: 8,20%, O: 11,84%. Nhiệt độ núng chảy: 254,5-256°C
Độ quay cực: [a ]D22= +152° (c = 0,995 / CH C13).
Phổ hấp thụ tử n g o ạ i: uv max (p-dioxane): 282, 296 nm; (acid sulfuric đặc): 300, 450 nm; (0.1M NaOH): 239, 293 nm.
Độ tan: -Trong nước(25°C): 0,003 g/100 ml.
-Trong ethanol 96%: 1,0 g/250 ml. -Trong cloroform: 1,0 g/110 ml.
-Nguyờn liệu:
-Nước tiểu phụ nữ cú thai (lấy từ bệnh viện Bảo vệ bà mẹ và trẻ sơ sinh Hà nội (bệnh viện C), được bảo quản trong tủ lạnh).
-Thuốc thử Girard T (được tổng hợp tại Bộ mụn Cụng nghiệp Dược).
■Tiến hành thớ nghiệm:
a) Tạo hydrazon của estron với thuốc thử Girard T:
Đong 1,0 lớt nước tiểu, acid hoỏ về pH=5 với acid acetic 10% rồi cho vào bỡnh cầu dung tớch 2,0 lớt. Thờm vào khối phản ứng 50,0 mg thuốc thử Girard T, lắc kĩ và đun hổi lưu trong 1 giờ. Sau đú làm nguội khối phản ứng đến nhiệt độ phũng và chiết với dicloromethan (50 ml X 3 lần) để loại cỏc tạp chất hữu cơ khỏc. Dịch chiết được trung hoà bằng dung dịch Na2C 0 3 20% đến pH=7 và để yờn qua đờm cho hydrazon kết tủa hoàn toàn.
Lọc thu tủa hydrazon trờn phễu lọc hỳt Buchner, rửa tủa bằng 15,0 ml nước lạnh và hỳt kiệt. Sấy trong bỡnh hỳt ẩm bằng acid sulfuric đặc đến trọng lượng khụng đổi. Thu được 145,0 mg một chất rắn màu trắng ngà.
b) Thuỷ phõn:
Tạo huyền phự của 145,0 mg chất rắn thu được ở trờn trong 50,0ml ethanol, acid hoỏ bằng dung dịch acid HC1 IN đến pH=2. Sau đú đun hồi lưu hỗn hợp phản ứng trong khoảng 1 gỡờ để thực hiện phản ứng thuỷ phõn.
Để nguội đến nhiệt độ phũng, thờm vào khối phản ứng 50,0 ml nước cất và trung hoà đến pH=7 bằng dung dịch Na2C 0 3 20%. Chiết khối phỏn Úna ba lần bằng dicloromethan (30 ml X 3). Rửa dịch chiết bằng nước cất, làm khan bằng 2 g Na2S 04 khan. Lọc loại chất làm khan và cất loại dung mụi dicloromethan.
Kết quả thu được một lượng rất nhỏ hợp chất hữu cơ dạng keo, màu ngà vàng. Tiến hành quột phổ u v trong dung mụi methanol, chỳng tụi thu được
phổ đồ cú 1 đỉnh hấp thụ ở 237 nm và 1 đỉnh khụng rừ ràng (xem phần phụ lục).
-Một sụ nhận xột:
Vỡ lượng estron cú trong nước tiểu phụ nữ cú thai với lượng rất nhỏ. Việc chiết xuất, tinh chế estrogen này dưới dạng tinh khiết đũi hỏi nhiều thời gian và cụng sức. Cụng việc này cần phải được thực hiện trong nhiều cụne trỡnh nghiờn cứu khỏc sau này.
Vỡ thời gian và kinh phớ khụng cho phộp, chỳng tụi chỉ coi thớ nghiệm này cú tớnh chất thử nghiệm cho cỏc sản phẩm đó được chỳng tụi tổng hợp.
2.3. Bàn luận:
2.3.1. Về giai đoạn ester hoỏ điờu chờ ethyl cloroacetat:
Khi thực hiện phản ứng ester hoỏ, cỏc kết quả được trỡnh bày trong bảng 1 và bảng 2 khụng hoàn toàn tuõn theo qui luật so với lý thuyết về phản ứng ester hoỏ. Điều đú được giải thớch như sau:
+Trong bảng 1, kết quả khảo sỏt thời gian tối ưu cho phản ứng, hiệu suất phản ỳng tăng dần từ giờ thứ nhất đến giờ thứ 3. Giai đoạn này phự hợp với lý thuyết về phản ứng ester hoỏ. Sau đú, khi tiếp tục tăng thời gian phản ỳng thỡ hiệu suất lại giảm dần. Nguyờn nhõn là nguyờn tử C1 trong phõn tử ester bị chuyển thành nhúm -OH do phản ứng thuỷ phõn. Quỏ trỡnh thuỷ phõn tạo ra sản phẩm phụ như chỳng tụi đó trỡnh bày trong phần 1.3.1.. Sản phẩm phụ (ester ethyl glicolat) dễ tan trong nước, khi rửa sẽ bị loại đi. Càng tăng thời gian phản ứng sự thuỷ phõn này càng nhiều. Vỡ vậy hiệu suất của sản phẩm chớnh là ethyl cloroacetat bị giảm.
+Trong bảng 2, hiệu suất tạo ester tốt nhất khi dựng tỷ lệ mol ethanol/acid = 2,5/1. Nếu tăng lượng alcol lờn, hiệu suất phản ứng khụng tăng, mà ngược lại lại giảm. Điều này được giải thớch như sau:
-Ethanol dựng cho phản ứng khụng hoàn toàn tuyệt đối. Khi tăng lượng ethanol, nước trong phản ứng cũng tăng, làm tăng phản ứng thuỷ phõn tạo ester ethyl glicolat như chỳng tụi đó trỡnh bày ở trờn. Vỡ vậy hiệu suất phản ứng cũng bị giảm, ở điều kiện hiện nay của phũng thớ nghiệm, chỳng tụi khụng thể làm khan hơn được ethanol, mặt khỏc thời gian dành cho việc khảo sỏt này khụng nhiều, nờn thớ nghiệm chỉ dừng lại ở những kết quả như đó trỡnh bày.