... sang vikhuẩn nhận) 4.1.1 .2 Nuôi cấy vikhuẩn môi trƣờng KB Môi trƣờng KB môi trƣờng dinh dƣỡng cho các dòng vikhuẩn tiếp hợp Hút dịch vikhuẩn cho: vikhuẩn hỗ trợ: vikhuẩn nhận các tỷ lệ: ... Chloramphenicol (20 µg/ml) Vikhuẩn nhận: Vikhuẩn Pseudomonas fluorescens 5ml LB, tùy dòng mà có chứa lọai nồng độ kháng sinh thích hợp Hút lần lƣợt dòng với tỉ lệ vikhuẩn cho: vikhuẩn hỗ trợ: vikhuẩn ... dòng vikhuẩn có chu kỳ tƣơng đƣơng nhau.Khi Các dòng vikhuẩn bƣớc vào pha cấp số vách tếbào hình thành đặc điểm thích hợp cho tiếp hợp (nhƣ hình thành cầu tiếp hợp từ vikhuẩn cho sang vi khuẩn...
... máy Gel Doc 2. 000, sử dụng phần mềm Quatity One 2. 000 (Bio - Rad) 3.3 .3 Phƣơng pháp Dot Blot 3.3 .3. 1 Chuyển DNA lên màng Bƣớc 1: Chuẩn bị màng Hybond N kích thƣớc 20 cm x 12 cm, dùng vi t chì kẻ ... trí tếbào cho, tếbào nhận Còn R Bhatia , 20 02 xây dựng marker gfp vào vikhuẩn Bradyrhizobium cho nghiên cứu sinh thái cạnh tranh, sống sót đất, môi trƣờng chứa than đá Trong năm 20 03 Johan ... fluorescens 73 tƣơng đối tốt dòng Pseudomonas fluorescens khác Khuẩn lạc phát sáng Khuẩn lạc không phát sáng Hình 3 .2 Vikhuẩn Pseudomonas fluorescens nuôi môi trƣờng KB sau 24 38 Bảng 3. 1 Đặc...
... agar/X-gal/IPTG, ủ qua đêm 37 0C 39 A B C D Hình 4 .2 Biến nạp plasmid vào tếbàovikhuẩn thể tích 3: 0.5 (A)Biến nạp với tỷ lệ tếbào khả nạp plasmid theo thể tích (µl) 3: 0.5 phục hồi 20 0µl môi trường ... LUẬN 4.1 Các quy trình biến nạp plasmid vào tếbàovikhuẩn B A C Hình 4.1 Biến nạp plasmid vào tếbàovikhuẩn thể tích 10:1.5 (A) Biến nạp với tỷ lệ tếbào khả nạp plasmid theo thể tích (µl) 10:1.5 ... hợp vào vikhuẩnkhuẩn lạc màu trắng tếbàovikhuẩn bị đột biến kháng kháng sinh tạo thành Còn đĩa đối chứng xuất khuẩn lạc màu xanh trắng 4.6 Tách chiết plasmid tái tổ hợp Chọn lọc khuẩn lạc...
... primer T3, T7 Sơ đồ 3.3 Quy trình biến nạp đoạn DNA vào vikhuẩn E coli DH5α kiểm tra 27 3. 4 .3 Tăng sinh vikhuẩn E coli DH5α môi trƣờng LB Từ dòng vikhuẩn E coli DH5α gốc hút 20 µl dịch vikhuẩn ... number buffer M 021 0S usb BioLabs 25 3. 4 Phƣơng pháp nghiên cứu 3. 4.1 Quy trình biến nạp plasmid vào tếbàovikhuẩnVikhuẩn Ecoli Xử lí CaCl2 Sốc nhiệt 420 C 45 giây Cấy lên đĩa Sơ đồ 3 .2 Quy trình ... chuẩn bị tếbào khả nạp 3. 4.4 Chuẩn bị tếbào khả nạp Bƣớc 1: Hút 20 µl dịch vikhuẩn vào ống nghiệm chứa 3ml môi trƣờng LB lỏng Bƣớc 2: Nuôi cấy lắc vòng 3- 4 Bƣớc 3: Chuyển ống nghiệm chứa vi khuẩn...
... DNA đƣợc methyl hoá Hình 2. 4 : Hiện tƣợng giới hạn vikhuẩn (a) DNA phage bị phân huỷ tếbàovikhuẩn (b) DNA vikhuẩn không đƣôc nhận biết enzym cắt Các kiểu cắt RE loại 2: Cắt tạo đầu (blunt-ends): ... sàng nhiễm vào vikhuẩn Để tăng bội DNA phage ngƣời ta cho phage nhiễm vào vikhuẩn Các phage chứa DNA lạ sinh sản mạnh phá vỡ vikhuẩn Các vikhuẩn sau đƣợc trải thạch hộp petri 2. 7 Các nghiên ... ông cho thấy sử dụng tếbào đầu phage log ảnh hƣởng lớn đến thành công vi c chuẩn bị tếbào khả nạp Giá trị OD600 thích hợp dịch nuôi cấy chuẩn bị tếbào khả nạp với chủng vikhuẩn nhƣ sau: XL-blue...
... (đường kính 2- 2,5nm), số lượng khoảng 25 0 -30 0 sợi/ vikhuẩn Kết cấu khuẩn mao giản đơn nhiều so với tiên mao Chúng có tác dụng giúp vikhuẩn bám vào giá thể ( nhiều vikhuẩn gây bệnh dùng khuẩn mao ... trường hợp chi Bdellovibrio hay vikhuẩn tả Vibrio cholera Tiên mao khuẩn mao vikhuẩn Tiên mao VK Gram dương Tiên mao VK Gram âm Tiên mao vikhuẩn G + Tiên mao vikhuẩn G - Các tiểu phần (subunit) ... quanh tếbào (chu mao, peritricha) Có loại tiên mao mọc tếbào trường hợp vikhuẩn Selenomonas ruminantium Các loại tiên mao vikhuẩn Kiểu xếp tiên mao liên quan đến hình thức di động vi khuẩn...
... enzyme số vikhuẩn sinh để kháng kháng sinh thuộc họ β-lactam - Một số chủng có khả sinh β-lactamase phát hiện: E.cloacae, S.marcescens, P.aeruginosa, B.subtilis,… I Tổng quan Nguồn gen -Vi khuẩn ... P.aeruginosa, B.subtilis,… I Tổng quan Nguồn gen -Vi khuẩn B.subtilis BEST70 03 phân lập từ đất -Vị trí gen: nucleotide thứ 20 14 727 -20 15647 II.Thiết kế mồi PCR Xác định trình tự gen đích Xác định trình ... http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi http://bioinfo.ut.ee/primer3-0.4.0/ http://www.helmholtz-muenchen.de/fileadmin/PEPF/pET_vectors/pET -32 a-c_map.pdf http://tools.neb.com/NEBcutter2/listbycuts.php http://www.promega.com/techserv/tools/biomath/calc11.htm...
... protein *Thành tếbào (Cell – wall): Chiếm 25 – 30 % khối lượng khô tế bào. Thành tếbào có kích thước khác tuỳ loại vi khuẩn, đa số vikhuẩn Gram dương có kích thước lớn (14 – 18 nm), vikhuẩn Gram ... (khoảng 10 nm) + Chức thành tế bào: - Giữ cho tếbào có hình dạng ổn định - Bảo vệ tếbàovi khuẩn: Giúp tếbàovikhuẩn đề kháng với lực tác động từ bên ngoài,ví dụ: Vikhuẩn Gram dương chịu áp ... âm: thành tếbào tạo thành kháng nguyên O, kháng nguyên có tầm quan trọng công tác chẩn đoán bệnh Thành tếbào sinh nội độc tố vikhuẩn Gram âm 13 + Thành phần hoá học thành tế bào: vikhuẩn Gram...
... không qua màngtế bào, bắt buộc tếbào phải tiêu tốn số lượng định để chuyển chất vào tếbào nồng độ chất bên tếbào cao nhiều so với bên (chẳng hạn nồng độ K+) Sơ đồ vận chuyển chất qua màng theo ... Sau E2 chuyển photphat từ HPr-P đến C6 đường đơn Chú ý: E1 chung cho nhiều loại đường, E2 đặc trưng cho loại đường Ngoài màng Trên màngtếbào chất Trongmàng E2 glucoza Glucoza PrH E1 PEP E2 – ... chế vận chuyển tích cực: Phía Màng Phía SPP S PS PS ATP ADP + Pvc Pi P S S “hoạt hoá lại” * Kiểu chuyển dịch nhóm: kiểu thường gặp vận chuyển đường vikhuẩn Ở vi khuẩn, hầu hết vận chuyển đường...
... D- L- acid amin Thành tếbàovikhuẩn Gram dương Thành tếbàovikhuẩn Gram âm 2- Màng sinh chất: Màng sinh chất hay Màngtếbào chất (Cytoplasmic membrane, CM) vikhuẩntương tự sinh vật khác ... ribosomvikhuẩn so với ribosom 80S sinh vật nhân thật (nấm, thực vật, động vật) trình bày bảng sau (Giáo vi n giảng để sinh vi n thích vào hình tiếng Vi t) Ribosomvikhuẩn So sánh RibosomVi ... (đường kính 2- 2,5nm), số lượng khoảng 25 0 -30 0 sợi/ vikhuẩn Kết cấu khuẩn mao giản đơn nhiều so với tiên mao Chúng có tác dụng giúp vikhuẩn bám vào giá thể ( nhiều vikhuẩn gây bệnh dùng khuẩn mao...
... Thành tếbàovikhuẩn Gram dương Thành tếbàovikhuẩn Gram âm 2- Màng sinh chất: Màng sinh chất hay Màngtếbào chất (Cytoplasmic membrane, CM) vikhuẩntương tự sinh vật khác ... ribosomvikhuẩn so với ribosom 80S sinh vật nhân thật (nấm, thực vật, động vật) trình bày bảng sau (Giáo vi n giảng để sinh vi n thích vào hình tiếng Vi t) Ribosomvikhuẩn So sánh RibosomVi ... (đường kính 2- 2,5nm), số lượng khoảng 25 0 -30 0 sợi/ vikhuẩn Kết cấu khuẩn mao giản đơn nhiều so với tiên mao Chúng có tác dụng giúp vikhuẩn bám vào giá thể ( nhiều vikhuẩn gây bệnh dùng khuẩn mao...
... 22 3 .2 Vật liệu nghiên cứu 22 3 .2. 1 Vikhuẩn E coli DH5α 22 3 .2. 2 pBluescript II SK(+/-) 22 3 .2. 3 Đoạn DNA 23 3.3 Dụng cụ hóa chất 23 ... 23 3. 3.1 Dụng cụ thí nghiệm 23 iv 3.3 .2 Các thiết bị máy móc 23 3.3 .3 Các loại môi trƣờng nuôi cấy vikhuẩn 23 3. 3.4 Các loại hóa chất dùng thí nghiệm 24 3. 3.5 ... pol I) 15 2.3 .2. 2 Taq polymerase 15 2.3 .2. 3 Terminal transferase 15 2.3 .2. 4 Các DNase 15 2.3 .2. 5 Các enzym khử phosphoril hóa 16 2.3.3 Các enzym nối...
... dẫn Bùi Trang Vi t, 20 02) 2.3.3 Chuẩn bị tếbào khả nạp Có hai phƣơng pháp chuẩn bị tếbào E.coly khả nạp 2.3. 3.1 Phƣơng pháp vật lý Phƣơng pháp sử dụng xung điện tác động lên tếbào chủ từ gây ... Phƣơng pháp nghiên cứu 3. 3.1 Quy trình biến nạp plasmid vào tếbàovikhuẩn Nhiễm sắc thể + CaCl2 + DNA plasmid Màngtếbào trở nên khả nạp sốc nhiệt ổn định tếbàoMàngtếbào hồi phục plasmid ... chiết plasmid,kiểm tra Sơ đồ 3 .2 Quy trình biến nạp plasmid vào tếbàovikhuẩn 26 3.3 .2 Quy trình biến nạp đoạn DNA vào vikhuẩn E.coly DH5α kiểm tra + CaCl2 Vikhuẩn Ecoly DH5α Khả nạp Plasmid...
... 2. 1 .3. 5 Cơ chế quá trình tiếp hợp 11 2. 1 .3. 6 Lập đồ tiếp hợp 11 2.2 Vách tếbàovikhuẩn 12 2 .2. 1 Cấu tạo vách tếbào Gram (+) 13 vi vii 2.2 .2 Cấu tạo vách tếbào ... trình tiếp hợp vikhuẩn Hfr vikhuẩn F- Hình 2. 6 Quá trình tiếp hợp vikhuẩn F’ vikhuẩn F- 10 Hình 2. 7 Vách tếbàovikhuẩn Gram (+) 13 Hình 2. 8 Vách tếbàovikhuẩn Gram ... dƣơng vào tếbào cho vi c dự trữ phospho Hình 2. 7 Váchtếbàovikhuẩn Gram (+) 2.2 .2 Cấu tạo váchtếbào Gram (-) So với tếbào Gram (+) vách tếbào Gram (-) phức tạp nhiều.Thành phần gồm: màng...
... dẫn Bùi Trang Vi t, 20 02) 2.3.3 Chuẩn bị tếbào khả nạp Có hai phƣơng pháp chuẩn bị tếbào E.coly khả nạp 2.3. 3.1 Phƣơng pháp vật lý Phƣơng pháp sử dụng xung điện tác động lên tếbào chủ từ gây ... Phƣơng pháp nghiên cứu 3. 3.1 Quy trình biến nạp plasmid vào tếbàovikhuẩn Nhiễm sắc thể + CaCl2 + DNA plasmid Màngtếbào trở nên khả nạp sốc nhiệt ổn định tếbàoMàngtếbào hồi phục plasmid ... chiết plasmid,kiểm tra Sơ đồ 3 .2 Quy trình biến nạp plasmid vào tếbàovikhuẩn 26 3.3 .2 Quy trình biến nạp đoạn DNA vào vikhuẩn E.coly DH5α kiểm tra + CaCl2 Vikhuẩn Ecoly DH5α Khả nạp Plasmid...
... 2. 1 .3. 5 Cơ chế quá trình tiếp hợp 11 2. 1 .3. 6 Lập đồ tiếp hợp 11 2.2 Vách tếbàovikhuẩn 12 2 .2. 1 Cấu tạo vách tếbào Gram (+) 13 vi vii 2.2 .2 Cấu tạo vách tếbào ... trình tiếp hợp vikhuẩn Hfr vikhuẩn F- Hình 2. 6 Quá trình tiếp hợp vikhuẩn F’ vikhuẩn F- 10 Hình 2. 7 Vách tếbàovikhuẩn Gram (+) 13 Hình 2. 8 Vách tếbàovikhuẩn Gram ... dƣơng vào tếbào cho vi c dự trữ phospho Hình 2. 7 Váchtếbàovikhuẩn Gram (+) 2.2 .2 Cấu tạo váchtếbào Gram (-) So với tếbào Gram (+) vách tếbào Gram (-) phức tạp nhiều.Thành phần gồm: màng...