BÁO cáo THỰC HÀNH CHẨN đoán PHÒNG THÍ NGHIỆM xác định số lượng hồng cầu, bạch cầu và công thức bạch cầu

Trường Đại Học Nơng Lâm TP Hồ Chí Minh Khoa Chăn nuôi – Thú Y BÁO CÁO THỰC HÀNH CHẨN ĐỐN PHỊNG THÍ NGHIỆM GVHD: PGS TS Nguyễn Tất Tồn SVTH: Văn Dương Tuất MSSV:15112392 Lớp: DH15TY TP Hồ Chí Minh, tháng 6/2019 Xác định số lượng hồng cầu, bạch cầu công thức bạch cầu: I Xác định số lượng hồng cầu, bạch cầu: 1.1 Vật liệu cần thiết: Mẫu máu ( máu heo) Ống trộn hồng cầu, bạch cầu Dung dịch pha hồng cầu Buồng đếm Kính hiển vi Thuốc nhuộm Giemsa Dầu soi kính Đếm số lượng hồng cầu: A Các bước tiến hành: Bước 1: hút máu vào ống pha loãng hồng cầu đến vạch 0,5 (cột máu liên tục khơng lẫn bọt khí, lau máu dính đầu ống trộn) Bước 2: hút tiếp dung dịch pha loãng hồng cầu tới vạch 101 (lưu ý lòng ống mao dẫn rộng nên dung dịch chảy mau hơn) máu pha loãng 200 lần Bước 3: bịt kín đầu ống trộn ngón ngón cái, lắc ống trộn theo hình số 2-3 phút Bước 4: buồng đếm làm sạch, sấy khơ Đâyh lamelle lên hai khu vực có kẻ ô đếm, nhỏ giọt cho đầy khe hình chữ H buồng đếm chổ kính đậy lên, dung dịch máu theo luật mao dẫn lan đầy khắp mặt ô đếm (nên bỏ hai giọt máu đầu khơng nhỏ lên mặt kính) Bước 5: đưa buồng đếm lên kính hiển vi Hồng cầu đếm vng lớn góc, dung kính x10 sau chuyển sang kính x40 để đếm - 1.2 B Kết quả: HỒNG CẦU Ô 1: 98 Ô số 4:129 HỒNG CẦU Ô 2: 154 Ô số 5: 159 HỒNG CẦU Ô 3: 122 HỒNG 94 HỒNG CẦU CẦU Ô Ô 4: 5:162 Tổng số hồng cầu ô = 98 + 154 +122 + 94 + 162 = 630 1.3 Số hồng cầu 1mm3= 630 x 25 x 10 x 200/5=63 x 105 Đếm bạch cầu: A Các bước tiến hành: Bước 1: hút máu vào ống pha loãng hồng cầu đến vạch 0,5 (cột máu liên tục khơng lẫn bọt khí, lau máu dính đầu ống trộn) Bước 2: hút tiếp dung dịch pha loãng hồng cầu tới vạch 11 (lưu ý lòng ống mao dẫn rộng nên dung dịch chảy mau hơn) máu pha loãng 20 lần Bước 3: bịt kín đầu ống trộn ngón ngón cái, lắc ống trộn theo hình số 2-3 phút Bước 4: buồng đếm làm sạch, sấy khơ Đâyh lamelle lên hai khu vực có kẻ ô đếm, nhỏ giọt cho đầy khe hình chữ H buồng đếm chổ kính đậy lên, dung dịch máu theo luật mao dẫn lan đầy khắp mặt ô đếm (nên bỏ hai giọt máu đầu khơng nhỏ lên mặt kính) Bước 5: đưa buồng đếm lên kính hiển vi, bạch cầu đếm vng lớn góc Đầu tiên dung vật kính x10 sau dung vật kính x40 Kết quả: BẠCH BẠCH CẦU CẦU ÔÔ 2: 1: 55 46 BẠCH BẠCH CẦU CẦU ÔÔ 4: 3: 37 44 Tổng số bạch cầu ô = 46+55+44+37=182 Số bạch cầu 1mm3 = 182x10x20/4= 9100 Lập công thức bạch cầu: 2.1 Vật liệu cần thiết: - Mẫu máu - Lame khô sạch, không trầy sước - Kính hiển vi - Dầu xem kính, cồn methanol - Dd Giemsa - Buồng đếm bạch cầu 2.2 Các bước tiến hành: Bước 1: Phết máu: - Lấy giọt máu cho lên lame A, dung thêm lame B khác để trước giọt máu Đẩy lùi miếng lam B đến chạn giọt máu để máu tràn hết chiều ngang cạnh miếng lam (đặt lame B lệch góc với lame A góc 30-450) Đẩy lame tới đầu lame cách trượt lame đặt ngang với động tác nhẹ Bước 2: nhuộm mẫu: - Để vết máu khô tự nhiên, cố định cồn methanol, để khô Nhuộm Giemsa: dung giấy lọc cắt thành miếng vừa đủ phủ lên miếng lam, sau nhỏ dung dịch Giemsa phủ lên tiêu cố định để từ 15-20 phút, rửa nước với áp lực nước yếu, để khô Bước 3: Lập công thức bạch cầu: - Nhỏ giọt dầu vào 1/3 tiêu phía Đặt tiêu lên kính hiển vi, điều chỉnh ánh sáng tùy vào mắt người xem Dùng vật kính x10, x40 tìm nơi tế bào phân tán ăn màu nhuộm tốt Xoay qua vật kính x100 để nhận diện loại bạch cầu đếm liên tục 100 bạch cầu Lập công thức 2.3 Kết quả: BC lympho 23 BC đơn nhân BC trung tính 27 BC ưa kiềm BC ưa axit Tổng số bạch cầu đếm được: 59 % bạch cầu lympho = (23/59 ) x100 = 39% % bạch cầu mono = (9/59) x 100 = 15% % bạch cầu trung tính = (27/59)x100 = 46% % bạch cầu ưa kiềm = 0% % bạch cầu ưa acid = 0% Kết luận:  Mẫu máu phần thí nghiệm máu heo  Số lượng hồng cầu đếm 63x 105 so sánh với khoảng đối chiếu số lượng hồng cầu máu heo (4,4 – 7,9 triệu/mm3) nằm khoảng bình thường  Số lượng bạch cầu mẫu đếm 9100 nằm khoảng bình thường máu heo ( – 16 nghìn bc/ mm3)  Về công thức bạch cầu ta thấy xuất bạch cầu ưa kiềm ưa axit Bạch cầu ưa axit xuất phản ứng dị ứng, ngộ độc heo bị nhiễm kí sinh trùng cịn bạch cầu ưa bazo có tỷ lệ ( 0,5-1%) Thấy có tăng nhẹ bạch cầu lympho giảm nhẹ bạch cầu trung tính Bạch cầu lympho tăng ung thư máu, nhiễm khuẩn máu bệnh mạn tính Cịn bạch cầu trung tính giảm shock phản vệ đáp ứng với nội độc tố huyết ta lại không thấy xuất bạch cầu ưa axit nên giảm nhẹ bạch cầu trung tính bình thường Như cơng thức bạch cầu có thay đổi nhẹ mà cụ thể tăng nhẹ bạch cầu Lympho chưa thể khẳng định điều gì, số lượng - bạch cầu đếm chưa đủ (66 so với chuẩn 100) sai sót trình thao tác II Xét nghiệm nước tiểu: Mẫu nước tiểu: Heo bị Tính chất vật lý: - Màu sắc: màu vàng nhạt - Sự hình thành bọt: khơng có - Độ trong, độ nhớt: nước tiểu trong, khơng có kết tủa - Mùi: có mùi amoniac nhẹ Hóa nghiệm nước tiểu: II.1 Định tính phương pháp hóa học: II.1.1 Protein niệu: Phương pháp Heller: Tiến hành cho 3ml HNO3 50% vào ống nghiệm đựng 2ml nước tiểu Xem kết sau 2-3 phút Có kết tủa vòng (+) Kết quả: (-) II.1.2 Glucose niệu: A Phương pháp Heines: Đun nóng 3ml dd Heines nhỏ từ từ khoảng 10 giọt nước tiểu xem kết Có kết tủa nâu vàng vàng nâu (+) Kết quả: (-) B Phương pháp Benediot: Cho 3-4 giọt nước tiểu vào ống nghiệm đựng 1,5ml dd Benediot đun nóng phút Nếu có kết tủa (+) Kết quả: (-) 2.2.3 Ketone niệu: Phương pháp Lieber: Cho 10ml nước tiểu vào ống nghiệm Sau thêm 2-3 giọt Lugol 2-3 giọt KOH 10% Nếu có tủa vàng đục có mùi iodoform (+) Kết (-) 2.2.4 Bilirubin niệu: Dùng giấy Bacl2 bão hịa: tẩm Bacl2 vào nước tiểu, làm khơ thêm 2-3 giọt fouchar Nếu giấy Bacl2 chuyển màu xanh dương tính Kết quả: (-) 2.3 Định tính, định lượng que test:    Đánh giá tiêu tỷ trọng, glucose, bilirubin, ketone, máu, bạch cầu, protein, urobilinogen nitrite Tiến hành: o Nhận que thử, so sánh quan sát màu lúc bình thường o Cho 10ml nước tiểu vào ống nghiệm, sau tẩm que thử vào nước tiểu o Lấy que thử khỏi ống nghiệm o So màu nhãn chai test, đọc theo thời gian quy định Kết quả: Leu o kocyte: Cả nước tiểu heo bò âm tính o Nitrite:âm tính mẫu nước tiểu o Urobilinogen: Normal mẫu o Protein: âm tính o PH: 7,5 o Máu: âm tính o Tỷ trọng: 1.005 heo 1.01 bò o Ketone: âm tính o Bilirubin: âm tính o Glucose: âm tính 2.4 Kiểm tra nước tiểu:  Cặn vô cơ: acid uric  Cặn hữu cơ: tế bào biểu mô, trụ tế bào NƯỚC TIỂU HEO NƯỚC TIỂU BÒ 2.5 Kết luận: Thông qua đánh giá tiêu vật lý lẫn hóa học mẫu nước tiểu bị heo thấy tỷ trọng nước tiểu bò heo thấp bình thường Có thể phần thức ăn chứa nhiều nước thú uống nước nhiều Ngồi cịn gặp bệnh ketone huyết viêm thận mãn lượng ketone nước tiểu mức bình thường nên loại khả bị ketone huyết Glucose, protein, leukocyte,đều âm tính cho thấy chức thận q trình biến dưỡng khơng có bất thường Dịch viêm, dịch phù: Có mẫu sau: III Chỉ tiêu Mẫu Mẫu Mùi Tanh Tanh mẫu Độ đục Không Không Màu sắc Vàng nhạt Đỏ Sử dụng que test cho mẫu:  Thực giống phần xét nghiệm nước tiểu  Kết quả: Mẫu Tỷ trọng Protein 1.02 0,3 Mẫu 1.01 Nitrite Lymphocyte Tb máu (-) Vừa trace Lớn Thực nhuộm Giemsa : Các bước tiến hành nhuộm giống nhuộm phần xét nghiệm máu Kết quả: MẪU MẪU2 Mẫu thấy xuất nhiều bạch cầu lympho số lượng bạch cầu trung tính Mẫu thấy xuất tế bào nội mô, xuất vài bạch cầu lympho Kết luận:   IV Qua đánh giá vài tiêu thấy mẫu có tỷ 1,02 mẫu 1,01, Mẫu có số lượng bạch cầu lympho nhiều mẫu chủ yếu tế bào nội mơ,…Mẫu có lượng protein thấp mẫu Kết luận mẫu dịch viêm mẫu dịch phù Định lượng Canxi, phosphor Bilirubin: Mẫu huyết heo Định lương calcium:  Cho ml mẫu vào ống nghiệm  Thêm 3ml nước cất + 1ml Amonium Oxalate 4%  Lắc đều, để yên 30 phút Ly tâm (3000 rpm/15’) sau thu cặn  Thêm vào tiếp 4ml NH4OH 2%  Ly tâm 3000 rpm/10’, thu cặn  Thêm tiếp 4ml NH4OH 2% ly tâm (3000rpm/10’), thu  Thêm vào 2ml H2SO4 1N chuyển vào bình tam giác đun cách thủy 70-80 0C/5’  Chuẩn độ với KMnO4 0,01N Kết quả: Thể tích KMnO4 dung 2,95ml  Ca(mg%) = 2,95x 0,2x100/1=59 mg% Định lượng Phospho vô cơ:   Cho vào ống nghiệm 1ml huyết thanh, 3ml nước cất 1ml Trichlorua acetic acid 20% Ly tâm 15000rpm/5’ thu nước lọc Dung môi Nước lọc vừa thu Phospho chuẩn Nước cất Ammonium molybdate Acid ascorbic Nước cất ống chuẩn(ml) 3,5 1,5 1 3,5 Để yên 10 phút, đo OD ɤ= 650 nm với OD nước cất  Kết quả: OD thử= 1,332 OD chuẩn= 0,715  Phospho(mg%)= OD thử/OD chuẩnx10 = 1,332/0,715x10 = 1,866  Đối chiếu với số phosphor heo (3,95-6,76 mg%) thấy chênh lệch tương đối lớn kết q trình thao tác thực chưa xác Định lượng Bilirubin trực tiếp:  Thực thí nghiệm  Thực thí nghiệm  Cả thí nghiệm bước thứ 5: đo OD λ=650 nm ta có: o OD chuẩn: 1,023 o OD thử: 0,06 o Bilirubin trực tiếp = 1,023/0,06x10= 1,7 mg%  ống thử (ml) 2,5 1,5 1 ... trộn hồng cầu, bạch cầu Dung dịch pha hồng cầu Buồng đếm Kính hiển vi Thuốc nhuộm Giemsa Dầu soi kính Đếm số lượng hồng cầu: A Các bước tiến hành: Bước 1: hút máu vào ống pha loãng hồng cầu đến... vi, bạch cầu đếm vng lớn góc Đầu tiên dung vật kính x10 sau dung vật kính x40 Kết quả: BẠCH BẠCH CẦU CẦU ÔÔ 2: 1: 55 46 BẠCH BẠCH CẦU CẦU ÔÔ 4: 3: 37 44 Tổng số bạch cầu ô = 46+55+44+37=182 Số bạch. .. hiển vi Hồng cầu đếm vng lớn góc, dung kính x10 sau chuyển sang kính x40 để đếm - 1.2 B Kết quả: HỒNG CẦU Ô 1: 98 Ô số 4:129 HỒNG CẦU Ô 2: 154 Ô số 5: 159 HỒNG CẦU Ô 3: 122 HỒNG 94 HỒNG CẦU CẦU Ô