NGUYÊN lý HOẠT ĐỘNG của máy PHÂN TÍCH tế bào máu tự ĐỘNG

TRUNG TÂM Y TẾ KHÁNH VĨNH KHOA XÉT NGHIỆM - CĐHA NGUYÊN LÝ HOẠT ĐỘNG CỦA MÁY PHÂN TÍCH TẾ BÀO MÁU TỰ ĐỘNG (Lưu hành nội Khoa) Mở đầu Nguyên lý máy đếm tế bào theo dòng (flow cytometry) nguyên lý biến đổi điện trở dòng hạt qua cửa sổ có tế bào quang điện điện trường Nguyên lý giúp phân tích khác biệt kích thước loại tế bào khác không nhận diện xác loại tế bào Các máy đếm tế bào sử dụng chia làm loại: 1) Máy đếm tế bào nguyên lý tổng trở: phân biệt loại tế bào dựa vào kích thước tế bào 2) Các máy hệ sau: ứng dụng laser xung điện đa chiều nên có tốc độ cao phân loại tế bào xác - Với máy sản xuất trước năm 1996, khả phân loại xác thành phần bạch cầu nói chung khơng q 90% - Các máy model gần đây, với việc áp dụng tổng hợp chế tổng trở, xung điện đa chiều, laser nên khả nhận diện tế bào nâng đến 95% - Một số serial máy phân biệt loại bạch cầu ưa acid, ưa baso, hồng cầu lưới việc kết hợp với phương pháp nhuộm men Peroxydase, nhuộm ARN/AND, nhuộm huỳnh quang, phân tích huyết sắc tố (CellDyn 4000 hãng ABBOTT, Se-Advance hãng Sysmex…) Nguyên lý hoạt động máy Huyết học Sysmex KX21 Bài viết xin đề cập đến nguyên lý hoạt động máy Sysmex KX21 biện luận xung quanh vấn đề này./ Nguyên lý hoạt động máy Huyết học Sysmex KX21 NGUYÊN LÝ HOẠT ĐỘNG CỦA MÁY HUYẾT HỌC SYSMEX KX-21 VÀ BIỆN LUẬN CÁC THÔNG SỐ KẾT QUẢ I NGUYÊN LÝ ĐẾM TẾ BÀO MÁU TRÊN MÁY SYSMEX KX-21 Phương pháp điện trở kháng: DC - Mẫu máu hút pha loãng dung dịch điện phân theo tỷ lệ định Sau dẫn C vào buồng đếm R - - Cấu tạo buồng đếm: - khe đếm - điện cực (âm, dương) - Dòng điện chiều qua điện cực (-) (+) Phương pháp điện trở kháng Vì tế bào máu coi không dẫn điện nên tế bào máu ngang qua lỗ khe đếm làm dịch chuyển lượng dung dịch muối tương ứng với thể tích tế bào; đồng thời làm ngắt quãng dòng điện, dẫn đến thay đổi hiệu điện điện cực (tăng điện trở), tạo xung điện - Các xung điện thay đổi đếm được, thể số lượng tế bào Độ lớn xung tỷ lệ với thể tích loại tế bào Trung bình độ lớn xung điện thể tích trung bình tế bào (MCV) 1.2 Phương pháp quang học (đo nồng độ Hemoglobin): Nguyên lý hoạt động máy Huyết học Sysmex KX21 - Hồng cầu làm ly giải giải phóng Hb Sau đó, Hb chuyển thành Cyanmethemoglobin, mật độ quang dung dịch (đo bước sóng 555 nm) tỷ lệ thuận với lượng Hb máu Nguyên lý hoạt động máy Huyết học Sysmex KX21 II SƠ ĐỒ HỆ THỐNG PHÂN TÍCH CỦA MÁY SYSMEX KX-21 (1.960 mL) Dung dịch pha loãng (1.996 mL) (1:500) Dung dịch ly giải Buồng pha lỗng (1.994 mL) (4 µL) (1.0 mL) Hệ thống hút mẫu Buồng đếm HC/TC (40 µL) (1:25000) (1:500) Buồng đếm Bạch cầu (6 µL) Máu tồn phần Buồng đo Hb (50 µL) (1:500) Nguyên tắc chung đếm số lượng tế bào: - Tế bào có kích thước 02 – 030 fL: Tiểu cầu - Tế bào có kích thước 25 – 250 fL: Hồng cầu - Tế bào có kích thước 30 – 300 fL: Bạch cầu + Tế bào có kích thước 030 – 080 fL: Lymphocytes + Tế bào có kích thước 080 – 130 fL: Monocytes, Basophils, Eosinophils + Tế bào có kích thước 130 – 300 fL: Neutrophils Phân tích Bạch cầu/Hb: Nguyên lý hoạt động máy Huyết học Sysmex KX21 Dung dịch pha loãng (1.994 mL) Dung dịch ly giải (1 mL) Hệ thống hút mẫu Máu toàn phần Buồng đếm Bạch cầu Buồng đo Hb (1:500) (1:500) (6 µL) 2.1 Tại buồng đếm Bạch cầu: - Máu sau pha loãng bị ly giải thành phần Hồng cầu - Thành phần lại: Bạch cầu, Tiểu cầu, Hồng cầu có nhân, Hồng cầu có KSTSR, Hồng cầu có độ bền cao (trong bệnh Thalassemi)  Biện luận: - Tiểu cầu tích trung bình 10 fL (2 – 30 fL) Nếu Tiểu cầu dính lại với có kích thước 40 fL, tương đương với Lymphocyte - Giả sử SLTC bình thường 200 G/L, SLBC bình thường 10 G/L + Nếu SLTC ngưng tập theo nguyên tắc 10 Tiểu cầu = Bạch cầu 200.109 Tiểu cầu tương đương với 20.109 Bạch cầu + Như vậy, SLBC tăng giả tạo thành 10 + 20 = 30 G/L  Kết luận: - Nếu Tiểu cầu giảm giả tạo (do ngưng tập, kết dính) làm tăng SLBC - Thực tế, SLTC giảm, SLBC tăng: + Cần phải kéo lam đánh giá độ ngưng tập Tiểu cầu Nguyên lý hoạt động máy Huyết học Sysmex KX21 + Đếm lại SLBC buồng đếm  Áp dụng thực tế: Để tránh ngưng tập, kết dính Tiểu cầu chủ quan, cần phải: - Lượng chất chống đơng tương đương với thể tích máu - Sau lấy máu xong phải cho vào tube chống đơng lắc trộn kỹ sau 2.2 Tại buồng đo Hb:  Nguyên tắc: - Hồng cầu làm ly giải giải phóng Hb Sau đó, Hb chuyển thành Cyanmethemoglobin, mật độ quang dung dịch (đo bước sóng 555 nm) tỷ lệ thuận với lượng Hb máu  Biện luận: - Hb đo theo nguyên tắc quang học Do đó, nguyên nhân làm tăng mật độ quang huyết tương làm tăng nồng độ Hb giả tạo Ngược lại, trường hợp giảm nồng độ Hb giả tạo Hồng cầu chưa ly giải hoàn toàn - Những nguyên nhân làm tăng nồng độ Hb giả tạo: + Tăng Lipid máu (huyết tương có màu trắng) + Số lượng Bạch cầu tăng cao, 50 G/L (huyết tương có màu trắng) + Vàng da (huyết tương có màu vàng) + Tan máu (huyết tương có màu đỏ) Nguyên lý hoạt động máy Huyết học Sysmex KX21 - Những nguyên nhân làm giảm nồng độ Hb giả tạo: + Dung dịch ly giải hỏng (Hồng cầu chưa ly giải hoàn toàn) + Hồng cầu bị ngưng kết (chỉ ly giải phần cụm Hồng cầu)  Áp dụng thực tế: - Tốt nên lấy máu lúc bệnh nhân chưa ăn uống (tránh tăng Lipid máu) - Tránh ly giải Hồng cầu trình lấy máu - Lượng chất chống đông phù hợp với thể tích máu - Sau lấy máu xong phải cho vào tube chống đông lắc trộn kỹ sau Phân tích Hồng cầu/Tiểu cầu: Dung dịch pha loãng (1.960 mL) (1.996 mL) Hệ thống hút mẫu (1:500) Buồng pha loãng Buồng đếm HC/TC (1:500) Máu tồn phần (4 µL) (40 µL)  Thành phần buồng đếm Hồng cầu: Hồng cầu, Tiểu cầu, Bạch cầu Như vậy, dựa vào nguyên tắc phân biệt tế bào theo kích thước Bạch cầu (có Tiểu cầu khổng lồ) đếm vào Hồng cầu Nguyên lý hoạt động máy Huyết học Sysmex KX21  Biện luận 1: - Hồng cầu tăng giả tạo Bạch cầu tăng cao ( > 50 – 100 G/L) - Tiểu cầu tăng giả tạo: + Do Hồng cầu vỡ thành nhiều mảnh + Do Hồng cầu kích thước nhỏ (MCV < 65 fL) + Do mẫu máu có bụi + Do máy tiếp đất không tốt gây tượng nhiễu nên xung điện nhỏ máy ghi nhận Tiểu cầu - Tiểu cầu giảm giả: + Do Tiểu cầu bị ngưng tập: lấy máu lâu làm hoạt hóa Tiểu cầu lấy máu vào tube thủy tinh Tiểu cầu kết dính vào thành tube hoạt hóa kết dính + Do Tiểu cầu tập trung xung quanh Bạch cầu  Biện luận 2: Đánh giá “Ngưng kết Hồng cầu” - Ngưng kết Hồng cầu do: + Ngưng kết nóng: xảy thể (do Kháng thể) + Ngưng kết lạnh: xảy máu khỏi thể - Khi đo, kết phân tích máy là: + Bạch cầu: Tăng/Bình thường + Hồng cầu: Giảm nhiều + Tiểu cầu: Bình thường (không ảnh hưởng) Nguyên lý hoạt động máy Huyết học Sysmex KX21 10 + Hb: Bình thường/Giảm nhẹ + MCV: Tăng có mức độ ( 360 hịa Hb, khơng dung nạp thêm) Nguyên lý hoạt động máy Huyết học Sysmex KX21 12 III CÔNG THỨC TÍNH TỐN VÀ SUY LUẬN Cơng thức tính tốn thông số: HCT RBC - MCV (Mean Corpuscular Volume): MCV = - MCH (Mean Corpuscular Hb): MCH = - MCHC (Mean Corpuscular Hb Concentration): MCHC = HGB RBC HGB HCT Các thông số máy Sysmex KX21 đo được: - MCV: Trung bình độ lớn xung điện đo - Số lượng Hồng cầu: Tổng số xung điện đo buồng đếm Hồng cầu/Tiểu cầu - Số lượng Bạch cầu: Tổng số xung điện đo buồng đếm Bạch cầu/Hb - Số lượng Tiểu cầu: Tổng số xung điện đo buồng đếm Hồng cầu/Tiểu cầu - Lượng Hemoglobin: Tỷ lệ thuận với mật độ quang dung dịch máu sau làm ly giải Hồng cầu đo bước sóng 555 nm - Số lượng Neutrophils: Tổng số xung điện đo buồng đếm Bạch cầu/Hb - Số lượng Lymphocytes: Tổng số xung điện đo buồng đếm Bạch cầu/Hb Suy luận: Áp dụng cơng thức tính tốn thơng số máy đo được, từ suy luận thông số khác MCH, MCHC, NEUT%, LYM% Nguyên lý hoạt động máy Huyết học Sysmex KX21 13 IV BẢNG GIÁ TRỊ CÁC THÔNG SỐ HUYẾT HỌC BÌNH THƯỜNG Giá trị STT Ký hiệu Ý nghĩa WBC White Blood Cells Số lượng Bạch cầu RBC Red Blood Cells Số lượng Hồng cầu Bình thường 4.0 – 10.0 G/L Nam: 4.2 – 5.4 T/L Nữ: 4.0 – 4.9 T/L Nam: 130 – 160 g/L HGB Hemoglobin Hemoglobin Nữ: 120 – 142 g/L Nam: 0.40 – 0.47 L/L HCT 10 11 12 13 MCV MCH MCHC PLT LYM% LYM# NEUT% NEUT# MXD% 14 MXD# 15 16 17 18 MO% MO# BASO% BASO# EO% EO# RDW PDW MPV P-LCR RDW- 19 Hematocrit Thể tích khối Hồng cầu Mean Corpuscular Volume Mean Corpuscular Hb Mean Corpuscular Hb Concentration Platelet LYM% LYM# NEUT% NEUT# MID% Thể tích trung bình H.cầu Lượng Hb trung bình H.cầu Lượng Hb trung bình H.cầu Số lượng Tiểu cầu % Lymphocyte Số lượng Lymphocyte % Neutrophil Số lượng Neutrophil % Monocytes, Basophils, Eosinophils Số lượng Monocytes, Basophils, MID# Monocytes% Monocytes# Basophils% Basophils # Eosinophils% Eosinophils# Red Distribution Width Platelet Distribution Width Mean Platelet Volume Large Platelet Ratio Nữ: 0.37 – 0.42 L/L 85 – 95 fL 28 – 32 pg 320 – 360 g/L 150 – 500 G/L 25 – 40 % 1.2 – 4.0 G/L 55 – 70 % 2.8 – 6.5 G/L 5.1 – 13.2 % 0.22 – 1.32 G/L Eosinophils % Monocytes Số lượng Monocytes % Basophils Số lượng Basophils % Eosinophils Số lượng Eosinophils Độ phân bố Hồng cầu Độ phân bố Tiểu cầu Thể tích trung bình Tiểu cầu Tỷ lệ tiểu cầu khổng lồ 1–4% 0.05 – 0.40 G/L 0.1 – 1.2 % 0.01 – 0.12 G/L 4–8% 0.16 – 0.8 G/L 11 – 14 % 11 – 15 % – fL Giá trị thực tế đo Dải phân bố HC-Độ lệch chuẩn 35 – 46 fL Dải phân bố HC-Hệ số biến thiên 11 – 14.4 % SD RDW20 CV Nguyên lý hoạt động máy Huyết học Sysmex KX21 14 ... khơng nhận diện xác loại tế bào Các máy đếm tế bào sử dụng chia làm loại: 1) Máy đếm tế bào nguyên lý tổng trở: phân biệt loại tế bào dựa vào kích thước tế bào 2) Các máy hệ sau: ứng dụng laser... Nguyên lý máy đếm tế bào theo dòng (flow cytometry) nguyên lý biến đổi điện trở dòng hạt qua cửa sổ có tế bào quang điện điện trường Nguyên lý giúp phân tích khác biệt kích thước loại tế bào. .. Sysmex…) Nguyên lý hoạt động máy Huyết học Sysmex KX21 Bài viết xin đề cập đến nguyên lý hoạt động máy Sysmex KX21 biện luận xung quanh vấn đề này./ Nguyên lý hoạt động máy Huyết học