Luận văn thạc sĩ nghiên cứu sản xuất đường erythritol từ nấm men moniliella phân lập tại việt nam

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN Nguyễn Thị Ánh Thao NGHIÊN CỨU SẢN XUẤT ĐƢỜNG ERYTHRITOL TỪ NẤM MEN MONILIELLA PHÂN LẬP TẠI VIỆT NAM LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Hà Nội - 2016 - Nguyễn Thị Ánh Thao NGHIÊN CỨU SẢN XUẤT ĐƢỜNG ERYTHRITOL TỪ NẤM MEN MONILIELLA PHÂN LẬP TẠI VIỆT NAM Chuyên ngành: Sinh học thực nghiệm Mã số: 60420114 LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC NGƢỜI HƢỚNG DẪN KHOA HỌC: PGS.TS LÊ ĐỨC MẠNH TS LÊ HỒNG ĐIỆP Luận văn Thạc sĩ Khoa học Nguyễn Thị Ánh Thao LỜI CẢM ƠN Lời đầu tiên, xin đƣợc bày tỏ lịng cảm ơn và kính trọng sâu sắc tới PGS.TS Lê Đức Mạnh và TS Lê Hồng Điệp tận tình hƣớng dẫn, đồng thời tạo điều kiện thuận lợi cho tơi suốt q trình học tập, nghiên cứu và thực luận văn này Lời cảm ơn xin gửi tới Cán bộ Trung tâm Hóa sinh cơng nghiệp và mơi trƣờng - Viện Công nghiệp thực phẩm chia sẻ, hƣớng dẫn và tạo điều kiện tốt để học tập, nghiên cứu và hoàn thành luận văn Tơi c ng xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến thầy giáo, cô giáo Khoa Sinh học c ng nhƣ thầy, cô thuộc Bộ môn Sinh lý Thực vật và Hóa sinh, Khoa Sinh học, Trƣờng Đại học Khoa học Tự nhiên truyền đạt cho tơi nhiều kiến thức tảng bổ ích Tơi xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến bố m , ơng bà và ngƣời thân gia đình ln dành tình cảm và đợng viên, khích lệ tơi suốt q trình học tập Và cuối xin cảm ơn bạn bè ủng hộ và giúp đỡ hoàn thành luận văn Hà Nội, tháng 12 năm 2016 Học viên Nguyễn Thị Ánh Thao Khóa 2014 - 2016 Luận văn Thạc sĩ Khoa học Nguyễn Thị Ánh Thao MỤC LỤC MỞ ĐẦU Chƣơng TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Đƣờng erythritol 1.1.1 Cấu tạo và tính chất đƣờng erythritol 1.1.2 Lợi ích cho sức khỏe đƣờng erythritol 1.1.3 Ứng dụng đƣờng erythritol 1.2.Công nghệ sản xuất ertythritol từ tinh bột 1.3 Tình hình sản xuất erythritol giới và Việt Nam 1.4 Nấm Moniliella 1.4.1 Đặc điểm nấm men Moniliella 1.4.2 Ƣu điểm và ứng dụng nấm men đen Moniliella sản xuất erythritol 1.4.3 Con đƣờng sinh tổng hợp đƣờng erythritol nấm men 10 1.5 Một số phƣơng pháp thu nhận erythritol dịch lên men 14 Chƣơng ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 17 2.1 Đối tƣợng, nguyên vật liệu nghiên cứu 17 2.1.1 Đối tƣợng nghiên cứu 17 2.1.2 Các môi trƣờng nghiên cứu 17 2.1.3 Các hóa chất dùng nghiên cứu 18 2.1.4 Các thiết bị sử dụng nghiên cứu 18 2.2 Phƣơng pháp nghiên cứu 19 2.2.1 Phƣơng pháp lên men sinh tổng hợp erythritol 19 2.2.2 Phƣơng pháp sắc ký HPLC 19 2.2.3 Phƣơng pháp nghiên cứu đặc điểm sinh học nấm men Moniliella .20 2.2.4 Phƣơng pháp khảo sát một số yếu tố ảnh hƣởng đến trình sinh tổng hợp đƣờng erythritol 22 2.2.5 Các phƣơng pháp làm dịch lên men thu hồi đƣờng erythritol .23 2.2.6 Phƣơng pháp khảo sát yếu tố ảnh hƣởng tới trình kết tinh .24 2.2.7 Phƣơng pháp kiểm tra một số tiêu chất lƣợng đƣờng erythritol 26 Khóa 2014 2016 i Luận văn Thạc sĩ Khoa học Nguyễn Thị Ánh Thao Chƣơng KẾT QUẢ THẢO LUẬN 27 3.1 Sàng lọc chủng nấm men đen Moniliella có khả sinh tổng hợp đƣờng erythritol 27 3.2 Đặc điểm chủng nấm men M megachiliensis TBY 3406.6 30 3.2.1 Đặc điểm hình thái khuẩn lạc và tế bào chủng TBY 3406.6 30 3.2.2 Đặc tính sinh lý, sinh hóa chủng M megachiliensis TBY 3406.6 31 3.3 Nghiên cứu điều kiện lên men sinh tổng hợp erythritol chủng M megachiliensis TBY 3406.6 từ dịch đƣờng thủy phân là sản phẩm q trình dịch hóa đƣờng hóa tinh bột sắn 33 3.3.1 Nghiên cứu lựa chọn hàm lƣợng đƣờng glucose 33 3.3.2 Nghiên cứu lựa chọn tỷ lệ cao nấm men 35 3.3.3 Ảnh hƣởng tỷ lệ ure 36 3.3.4 Ảnh hƣởng nhiệt độ 37 3.3.5 Ảnh hƣởng pH 37 3.3.6 Ảnh hƣởng tốc độ khuấy lắc 38 3.3.7 Ảnh hƣởng thời gian 39 3.4 Nghiên cứu trình làm và thu hồi eyrthritol 41 3.4.1 Nghiên cứu loại bỏ tạp chất dịch lên men - Xử lý than hoạt tính (khử mùi, khử màu) 41 3.4.1.1 Ảnh hƣởng tỷ lệ than hoạt tính 41 3.4.1.2 Ảnh hƣởng thời gian xử lý chất hấp phụ 42 3.4.2 Xử lý dịch đƣờng cợt trao đổi ion (tẩy khống) 42 3.4.3 Nghiên cứu điều kiện kết tinh đƣờng erythritol 43 3.4.3.1 Nghiên cứu ảnh hƣởng nồng đợ chất khơ hịa tan tới q trình kết tinh 43 3.4.3.2 Nghiên cứu ảnh hƣởng tỉ lệ mầm tinh thể tới trình kết tinh 44 3.4.3.3 Nghiên cứu ảnh hƣởng nhiệt đợ đến q trình kết tinh 46 3.4.3.4 Nghiên cứu ảnh hƣởng thời gian đến trình kết tinh 46 Khóa 2014 2016 ii Luận văn Thạc sĩ Khoa học Nguyễn Thị Ánh Thao 3.4.4 Nghiên cứu điều kiện sấy và thu hồi sản phẩm 48 3.4.4.1 Nghiên cứu ảnh hƣởng nhiệt độ sấy đến chất lƣợng đƣờng 48 3.4.4.2 Nghiên cứu ảnh hƣởng thời gian sấy kết hợp với mức nhiệt độ đến độ ẩm đƣờng thu đƣợc 48 3.5 Sơ đồ quy trình cơng nghệ 50 3.6 Sản xuất thử nghiệm quy mơ phịng thí nghiệm 51 3.7 Phân tích đánh giá sản phẩm 54 3.7.1 Đánh giá cảm quan đƣờng erythritol thu nhận đƣợc 54 3.7.2 Phân tích đánh giá thành phần sản phẩm đƣờng erythritol 54 3.7.3 Đánh giá tiêu vi sinh vật 54 3.7.4 Đánh giá tiêu kim loại nặng 55 3.8 Một số ứng dụng đƣờng erythritol vào sản phẩm thƣơng mại 55 3.8.1 Qui trình sản xuất viên nén đƣờng erythritol 56 3.8.2 Nghiên cứu sản xuất thử nghiệm nƣớc uống có thành phần erythritol 57 KẾT LUẬN 60 KIẾN NGHỊ 60 TÀI LIỆU THAM KHẢO 61 PHỤ LỤC 65 Khóa 2014 2016 iii DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt Viết đầy đủ AMG o Bx CFU CNTP CTPT DE DNA DNS DSMZ Amyloglucosidase (Glucoamylase) Độ Brix - Nồng đợ chất khơ hịa tan Colony Forming Unit Cơng nghiệp thực phẩm Công thức phân tử Dextrose equivalent Deoxyribonucleic acid acid dinitrosalicylic Ký hiệu chủng giống thuộc Bộ sƣu tập Vi sinh vật và Tế bào Đức, Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH Food and Agriculture Organization Frozen Carbonated Beverage Glycemic index General High fructose corn syrup High fructose corn syrup High-performance liquid chromatography of high-pressure liquid chromatography Joint Expert Committee on Food Additives Khối lƣợng phân tử Kilo Novo Unit alpha-amylase Nicotinamide adenine diculeotide phosphate Polymerase Chain Reaction ARN riboxom Tiêu chuẩn Việt Nam Volume/volume Volatile fatty acids Weigh/volume Weigh/weigh World Health Organisation Yeast Malt Association of Official Analytical Chemist Hiệu suất chuyển hóa FAO FCB GI GSFA HFCS HFCS HPLC JECFA KLPT KNU NADPH PCR rARN TCVN v/v VFA w/v w/w WHO YM AOAC HSCH DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 So sánh đặc điểm hình thái chi Moniliella với một số chi thƣờng gặp bị nhầm lẫn với Monilliela [4] Bảng 2.1 Bảng thành phần dịch đƣờng thủy phân sau cô đặc 120 phút 17 Bảng 2.2 Danh sách nguồn chất 20 Bảng 3.1 Hàm lƣợng erythritol tích l y chủng nấm men đen sau ngày nuôi cấy môi trƣờng chứa 20% 27 Bảng 3.2 Hàm lƣợng erythritol tích l y dịch lên men chủng thuộc loài M megachiliensis 28 Bảng 3.3 Khảo sát sơ bộ sinh tổng hợp erythritol chủng TBY 3406.6 và TBY 3438.2 30 Bảng 3.4 Bảng đặc điểm hình thái khuẩn lạc và tế bào chủng TBY 3406.6 31 Bảng 3.5 Một số đặc điểm M megachiliensis TBY 3406.6 31 Bảng 3.6 Khả đồng hóa nguồn cacbon chủng M megachiliensis TBY 3406.6 32 Bảng 3.7 Ảnh hƣởng tỷ lệ dịch đƣờng đến q trình chuyển hóa erythritol chủng M megachiliensis TBY 3406.6 34 Bảng 3.8 Đánh giá dịch sau lên men chủng sau 13 ngày nuôi cấy 41 Bảng 3.9 Ảnh hƣởng tỷ lệ than hoạt tính 42 Bảng 3.10 Ảnh hƣởng thời gian xử lý than hoạt tính 42 Bảng 3.11 Thành phần dịch đƣờng sau làm 43 Bảng 3.12 Ảnh hƣởng nồng đợ chất khơ hịa tan q trình kết tinh .44 Bảng 3.13 Kết ảnh hƣởng thời gian đến trình kết tinh 47 Bảng 3.14 Kết ảnh hƣởng nhiệt độ đến trình sấy (sấy giờ) 48 Bảng 3.15 Ảnh hƣởng thời gian sấy đến độ ẩm đƣờng 49 Bảng 3.16 Chỉ tiêu cảm quan đƣờng erythritol 54 Bảng 3.17 Kết tiêu đánh giá sản phẩm đƣờng erythritol 54 Bảng 3.18 Các tiêu vi sinh vật erythritol 55 Bảng 3.19 Hàm lƣợng kim loại nặng 55 DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 Cơng thức hóa học erythritol [10] Hình 1.2 Hình ảnh khuẩn lạc nấm men Moniliella suavedens var suavedens nuôi cấy đĩa thạch [7] Hình 1.3 Hình ảnh sinh sản nảy chồi nấm men đen [2] Hình 1.4 Quá trình sinh tổng hợp erythritol nấm men và vi khuẩn [26] 11 Hình 1.5 Tác đợng enzym chuyển hóa Transketolase và Transaldoase đƣờng pentose – phosphate [26] 12 Hình 1.6 Con đƣờng pentose phosphate chuyển hóa đƣờng glucose thành đƣờng erythritol [26] 13 Hình 3.1 Ảnh hƣởng tỷ lệ dịch đƣờng tới khả tích l y erythritol chủng M megachiliensis TBY 3406.6 34 Hình 3.2 Ảnh hƣởng tỷ lệ cao nấm men đến sinh trƣởng và phát triển chủng TBY 3406.6 35 Hình 3.3 Ảnh hƣởng tỷ lệ cao nấm men đến sinh trƣởng và phát triển chủng TBY 3406.6 36 Hình 3.4 Ảnh hƣởng nhiệt đợ tới khả tích l y erythritol chủng TBY 3406.6 37 Hình 3.5 Đồ thị biểu diễn tốc độ sinh trƣởng phụ thuộc vào pH 38 Hình 3.6 Đồ thị biểu diễn ảnh hƣởng tốc độ khuấy lắc đến khả sinh tổng hợp erythritol 39 Hình 3.7 Biểu đồ thể tốc độ sinh trƣởng phụ thuộc vào thời gian lên men 40 Hình 3.8 Hình ảnh đƣờng erythritol kết tinh nồng độ khác khoảng thời gian 16 44 Hình 3.9 Quá trình kết tinh lƣợng mầm tinh thể bổ sung thay đổi 45 Hình 3.10 Đồ thị mối liên hệ lƣợng mầm tinh thể và hiệu suất kết tinh .45 Hình 3.11 Đồ thị ảnh hƣởng nhiệt độ kết tinh đến hiệu suất kết tinh đƣờng Hình 3.12 Quá trình kết tinh đƣờng theo thời gian 47 Hình 3.13 Sơ đồ quy trình sản xuất erythritol quy mơ phịng thí nghiệm .50 46 Hình 3.14 Q trình lên men thu dịch len men sử dụng chủng 3406.6 51 Hình 3.15 Dịch lên men trƣớc và sau ly tâm 52 Hình 3.16 Dịch lên men đƣợc lọc qua than hoạt tính và chất trợ lọc 52 Hình 3.17 Quá trình kết tinh đƣờng erythritol 53 Hình 3.18 Đƣờng đƣợc rửa sau kết tinh 53 Hình 3.19 Sản phẩm đƣờng erythritol 53 Hình 3.20 Quy trình sản xuất viên nén đƣờng erythritol 56 Hình 3.21 Các ví viên nén đƣờng erythritol 57 Hình 3.22 Quy trình sản xuất nƣớc uống dâu tằm erythritol 58 Hình 3.23 Sản phẩm thử nghiệm nƣớc dâu tằm có chứa thành phần erythritol 59 Đƣờng erythritol bôt Nấu: 800C, 40 phút axit citric 0,07%, axit benzoat 0,03% Siro Phối trôn tỉ lệ siro/nƣớc dâu:1/2 Nƣớc dâu tằm Lọc Thanh trùng: 900C, 15 phút Làm ng̣i: 600C Chiết rót, xiết nắp Hoàn thiện sản phẩm: dán nhãn, đóng thùng Nƣớc uống dâu tằm erythritol ≥ 10% Hình 3.22 Quy trình sản xuất nƣớc uống dâu tằm erythritol - Làm nguội: Dung dịch đƣợc làm nguội xuống 60oC để chuẩn bị cho q trình chiết rót dễ dàng - Chiết rót, xiết nắp: Chiết rót nóng 60oC để tránh xâm nhập vi sinh vật Sản phẩm đƣợc chiết rót và xiết nắp vào chai tùy theo thể tích để kéo dài thời gian bảo quản nhờ việc tránh đƣợc tác động bên ngoài, thuận lợi cho trình phân phối, vận chuyển sản phẩm và hoàn thiện sản phẩm tốt - Hoàn thiện sản phẩm: Sản phẩm đƣợc lau khơ, dán nhãn, đóng thùng, bảo quản nhiệt đợ phịng < 30oC, tránh ánh sáng trực tiếp Hình 3.23 Sản phẩm thử nghiệm nƣớc dâu tằm có chứa thành phần erythritol KẾT LUẬN Tuyển chọn đƣợc chủng nấm men Moniliella có hiệu suất chuyển hóa đƣờng erythritol cao bao gồm: Moniliella megachiliensis TBY3438.2 và M megachiliensis TBY 3406.6 Nghiên cứu đƣợc một số đặc điểm hình thái, sinh trƣởng chủng M megachiliensis TBY 3406.6 Lựa chọn điều kiện phù hợp cho trình lên men thu đƣờng erythritol từ dịch đƣờng thủy phân từ tinh bột sắn: Môi trƣờng lên men: dịch đƣờng glucose có hàm lƣợng 300 g/l, % cao nấm men, 0,1 % urê Điều kiện lên men: Nhiệt độ 30oC; pH – 5,0 - 5,5; thời gian ni cấy 13 ngày, khuấy lắc 200 vịng/phút Nghiên cứu lựa chọn điều kiện làm sạch, kết tinh, thu hồi sản phẩm đƣờng erythritol từ dịch lên men: Làm 3% than hoạt tính, nhiệt đợ dịch lọc 70°C, thời gian lọc 45 phút Trao đổi anion và cation để tiến hành khử khống đặc tới dịch có nồng đợ chất khơ đạt 65oBx Để kết tinh: bổ sung % mầm tinh thể, giữ 10°C thời gian 18 Tinh thể đƣờng đƣợc rửa 2-3 lần nƣớc lạnh 10°C Sấy sơ bộ 50°C và 80°C Đã tiến hành thử nghiệm sản xuất sản phẩm sử dụng nguyên liệu erythritol nhƣ là viên nén, siro dâu KIẾN NGHỊ Nghiên cứu thêm mợt số yếu tố tối ƣu hóa q trình lên men chủng nấm men để đạt hiệu suất tích l y cao Xây dựng quy trình sản xuất đƣờng erythritol quy mô công nghiệp TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Việt Nguyễn Lân D ng (2010), Phân loại nấm men Việt Nam, NXB Đại học Quốc gia Hồ Chí Minh Nguyễn Lân D ng, Đào Thị Lƣơng (2006), Tuyển tập Vi sinh vật học, NXB Khoa học & Kỹ thuật, Hà Nội Nguyễn Lân D ng, Nguyễn Đình Quyến, Phạm Văn Ty( 2010), Vi sinh vật học, NXB Giáo dục, Hà Nội Đinh Đức Hiền (2014), Nghiên cứu phân loại nấm men Moniliella phân lập Việt Nam, Luận văn Thạc sĩ Vi sinh vật, Trƣờng Đại học Khoa học tự nhiên, Đại học Quốc gia Hà Nội, Hà Nội Nguyễn Thị Thu Huyền (2011), Đường thấp lượng, Đồ án công nghệ thực phẩm, Đại học Cơng nghiệp Thực phẩm, Tp Hồ Chí Minh V Nguyên Thành (2009), Bảo tồn lưu giữ nguồn gen vi sinh vật công nghiệp thực phẩm, Báo cáo tổng kết đề tài cấp bộ, Viện Công nghiệp thực phẩm, Bộ Công thƣơng, Hà Nội V Nguyên Thành (2011), Bảo tồn lưu giữ nguồn gen vi sinh vật công nghiệp thực phẩm, Báo cáo tổng kết đề tài cấp bộ, Viện Công nghiệp thực phẩm, Bộ Công thƣơng, Hà Nội V Nguyên Thành (2012), Bảo tồn lưu giữ nguồn gen vi sinh vật công nghiệp thực phẩm, Báo cáo tổng kết đề tài cấp bộ, Viện Công nghiệp thực phẩm, Bộ Công thƣơng, Hà Nội Lê Bạch Tuyết (1996), Các q trình cơng nghệ sản xuất thực phẩm, NXB Giáo Dục, Hà Nội Tài liệu tiếng Anh 10 Bernt W O., Borzelleca J F., Flammj T G (1996), “Erythritol – a review of biological and toxicological studies”, Regulatory toxicology and pharmacology, 24 (2), pp S191-S197 11 Bornet F R., Blayo A., Dauchy F., Slama G (1996), “Gastrointestinal response and plasma and urine determinations in human subjects given erythritol”, Regulatory toxicology and pharmacology, 24 (2), pp S296S302 12 Burschäpers J., Schustolla D., Schügerl K., Röper H., de Troostembergh J C (2002), “Engineering aspects of the production of sugar alcohols with the osmophilic yeast Moniliella tomentosa var pollinis Part I Batch and fedbatch operation in stirred tank”, Process Biochemistry, 38 (4) pp 497-506 13 De Cock P., Berchert C L (2002), “Erythritol Funtionality in noncaloric funtional beverages”, Pure and Applied Chemistry, 74 (7), pp 1281-1290 14 Den Hartog G J., Boots A W., Adam-Perrot A., Brouns F., Verkooijen I W., Weseler A R., Haenen G R., Bast A (2010), “Erythritol is a sweet antioxidant”, Nutrition, 26 (4), pp 449-458 15 Dooms L., Hennebert G L., Verachtert H (1971), “Polyols synthesis and taxonomic characters in the genus Moniliella” Antoni van Leeuwenhoek, 37 (1), pp 107-118 16 Gholam G., Iraj N., Mohammad R (2012), “Study of polyols production by Yarrowia lipolytica in Batch Culture and Optimization of growth condition for maximum production”, Jundishapur Journal of Microbiology, 5(4), pp 546-549 17 Greenley D., Smith D (1979), “A novel pathway of glucose catabolism in Thiobacillus novellus”, Archives of Microbiology, 122 (3), pp 257–261 18 Röper H H., Goossens J (1993), “Erythritol, a New Raw Material for Food and Non-food Applications” Starch, 45 (11), 400-405 19 Ishizuka H., Waka K., Kasumi T., Sasaki T (1989), “Breeding of a mutant of Aureobasidium sp with High erythritol production”, Jourmal of Fermentation and Bioengineering, 68 (5), pp 310-314 20 Jeya M., Lee K M., Tiwari M K., Kim J S., Gunasekaran P., Kim S Y., Kim I W., Lee J K (2009), “Isolation of a novel high erythritol-producing Pseudozyma tsukubaensis and scale-up of erythritol fermentation to industrial level”, Applied Microbiological Biotechnology, 83 (2), pp 225231 21 Kawanabe J., Hirasawa M., Takeuchi T., Oda T., Ikeda T (1992), “Noncariogenicity of erythritol as a substrate”, Caries Research, 26 (5), pp 258-362 22 Kim K A., Noh B S., Lee J K., Kim S Y., Park Y C., & Oh D K (2000), “Optimization of culture conditions for erythritol production by Torula sp”, Journal of Microbiology and Biotechnology, 10 (1), pp 69-74 23 Kohl E S., Leet T H., Lee D Y., Kim H J., Ryu Y W., Seo J H (2003), “Scale-up of erythritol production by an osmophilic mutant of Candida magnolia” Biotechnology Letters, 25 (24), pp 2103-2105 24 Laxman S S., Ramchandra V G., Bhalchandra K V., Karthik N (2011), “Strain improvement and statistical media optimization for enhanced erythritol production with minimal by-products from Candida magnoliase mutant R23” Biochemical Engineering Journal, 55 (2), pp 92-100 25 Martinez A T., de Hoog G S., Smith M T (1979), “Physiological characteristics of Moniliella, Trichosporonoides and Hyalodendron” Studies in Mycology, 19, pp 58-68 26 Moon H J., Kim I W., Lee J K (2010), “Biotechnological production of erythritol and its applications”, Applied Microbiology and Biotechnology, 86 (4), pp 1017-1025 27 Ohmori S., Ohno Y., Makino T., Kashihara T (2004), “Characteristics of erythritol and formulation of a novel coating with erythritol termed thinlayer sugarless coating”, Int J Pharm, 278(2), pp 447-457 28 Park J B., Seo B C., Kom J R (2000), “Fermentation process for preparing erythritol using Trichosporonoides madida DS 911”, USA Patent No US6060291 A 29 Park J., Seo B., Kim J (1998), “Production of erythritol in fed-batch culture of Trichosporon sp”, J Ferment Bioenginieering, 86 (6), pp 577-580 30 Perko R., De Cock P (2007), Sweeteners and sugar Alternatives in Food Technology, Blackwell Publishing Ltd, Oxford, London 31 Pfeifer V F., Sohns V E., Conway H F., Lancaster E B., Dabic S., Griffin E (1960), “Two Stage Process for: Dialdehyde Starch Using Electrolytic Regenaration of Periodic Acid” Industrial & Engineering Chemistry, 52 (3), pp 201-206 32 Robert E., & Stefan T (2012), “Process for producing erythritol using Moniliella tomentosa strains in the presence of neutral inorganic nitrates, such as potassium nitrate, ammonium nitrate or sodium nitrate, as nitrogen source”, United State Patent No 8187847 B2 33 Sasaki S T., Miki Y., Eguchi T., Hagiwara K., Ichikawa T (1988), “Dertermination of erythritol in fermented foods by high performance liquid chromatography”, Shokuhin Eiseigaku Zasshi, 6, pp 419-422 34 Shie-Jea L., Chiou-Yen W., Pei-Ming W., Jang-Cheng H (2010), “Highlevel production of erythritol by mytants of osmophilic Moniliella sp”, Process Biochemistry, 45 (6), pp 973-979 35 Shindou T., Sasaki Y., Euguchi K., Hagiwara K., Ichikawa T (1989), “Identification of erythritol by HPLC and GC-MS and quantitative measurement in pulps of various fruit”, Agric Food Chem, 37 (6), pp 1474-1476 36 Thanh V N., Hai D A., Hien D D., Takashima M., Lachance M A (2012), “Moniliella carnis sp.nov and Moniliella dehoogii sp nov, two novel species of black yeast isolated from meat processing environment”, Int J Syst Evol Microbiol, 62 (Pt12), pp 3088-3094 37 Yoshida H., Hayashi J., Sugahara T (1986), “Studies on free sugar, free sugar alcohols and organic acids of wild mushroom”, J Japan SocFood Sci Technol (Japan), 33 (6), pp 426-433 Luận văn Thạc sĩ Khoa học Nguyễn Thị Ánh Thao PHỤ LỤC Phụ lục Bảng thống kê chủng vi sinh vật phân lập đƣợc từ nguồn mẫu khác TT Loài Chủng Nguồn phân lập M acetoabutans TBY 237.2 Chai dầu ăn M acetoabutans TBY 38.4 Chai dầu ăn M acetoabutans TBY 76 Chai dầu ăn M barkeri sp nov TBY 372 Hoa đậu bắp Viện CNSH, Hà Nội M barkeri sp nov TD Hoa bìm bìm Tam Đảo, Vĩnh Phúc M byzovii TBY 2041.7 Hoa muống biển M i Kê Gà, Phan Thiết M byzovii(w) TBY 2042.1 Hoa muống biển M i Kê Gà, Phan Thiết M byzovii(w) TBY 2045.5 Hoa muống biển M i Kê Gà, Phan Thiết M carnis KFP 246 Nem chua M carnis KFP 452 Nem chua 10 M carnis TBY 4372.3 Bàn thái thịt 11 M carnis TBY 4442.6 Bàn thái thịt 12 M dehoogii KFP 211 Nem chua 13 M dehoogii TBY 2118.3 Bìm bìm biển (héo) M i Kê Gà, Phan Thiết 14 M dehoogii TBY 4549.1 Nem chua Chợ Sinh Viên Nông nghiệp, Gia Lâm, Hà Nội 15 M floricola TBY 30.1 Hoa muống biển Cù Lao Chàm, Quảng Nam 16 M floricola TBY 3446.1 Hoa muống biển M i Kê Gà, Phan Thiết 17 M floricola TBY 5105.1 Hoa Ng Sắc Diễn Lợi - Diễn Châu Nghệ An M megachileiensis TBY 2056.2 Bìm bìm biển (héo) M i Kê Gà, Phan Thiết 18 Khóa 2014 2016 a Địa điểm Trƣờng Yên, Ninh Bình, Việt Nam Trƣờng Yên, Ninh Bình, Việt Nam Trƣờng Yên, Ninh Bình, Việt Nam Cơ sở sản xuất nem chua, Hà Nội, Việt Nam Cơ sở sản xuất nem chua, Hà Nội, Việt Nam Chợ Quang Trung, Vinh, Nghệ An Nghĩa Tân, Nghĩa Hƣng, Nam Định Cơ sở sản xuất nem chua, Hà Nội, Việt Nam Luận văn Thạc sĩ Khoa học Nguyễn Thị Ánh Thao 19 M megachileiensis TBY 2125.1 Hoa sữa Đông Anh, Hà Nội 20 M megachileiensis TBY 2127.3 Hoa sữa Đông Anh, Hà Nội 21 M megachileiensis TBY 2127.4 22 M megachileiensis TBY 3404.4 Hoa ng sắc Bãi Lữ, Nghệ An 23 M megachileiensis TBY 3404.5 24 M megachileiensis TBY 3406.6 Hoa ng sắc Bãi Lữ, Nghệ An 25 M megachileiensis 26 M megachileiensis TBY 3419.1 TBY 3408 27 M megachileiensis TBY 3425 28 M megachileiensis TBY 3432 29 Thevetia peruvian a (trúc đào vàng) Bãi Lữ, Nghệ An Hoa vừng Bãi Lữ, Nghệ An M megachileiensis TBY 3438.1 Hoa vừng Bãi Lữ, Nghệ An 30 M megachileiensis TBY 3438.2 Hoa vừng Bãi Lữ, Nghệ An 31 M megachileiensis TBY 3440 Hoa vừng Bãi Lữ, Nghệ An 32 M megachileiensis TBY 3476 Hoa mủ biển Bãi Lữ, Nghệ An 33 M mellis TBY 1885 Hoa dẻ Tam Đảo, Vĩnh Phúc 34 M mellis TBY 3678.2 Bàn thái thịt Chợ Dốc Lã, Gia Lâm, Hà Nội 35 M mellis TBY 3679.8 Bàn thái thịt Chợ Dốc Lã, Gia Lâm, Hà Nội 36 M mellis TBY 4375.3 Bàn thái thịt Chợ Quang Trung-Tp VinhNghệ An BY2 Nem chua Hà Nội TBY 3072.1 Bàn thái thịt Hà Nội TBY 367 Bàn thái thịt Chợ Giếng Vuông, Lạng Sơn TBY 368.2 Bàn thái thịt Chợ Giếng Vuông, Lạng Sơn TBY 1922.4 Hoa mủ M i Kê Gà, Phan Thiết 37 38 39 40 41 M nemchuae sp nov M nemchuae sp nov M nemchuae sp nov M nemchuae sp nov M nigrescens Khóa 2014 2016 b Luận văn Thạc sĩ Khoa học Nguyễn Thị Ánh Thao 42 M nigrescens TBY 2038.1 Bìm bìm biển (héo) M i Kê Gà, Phan Thiết 43 M pollinis TBY 3679.1 Bàn thái thịt Chợ Dốc Lã, Gia Lâm, Hà Nội 44 M pollinis TBY 3679.4 Bàn thái thịt Chợ Dốc Lã, Gia Lâm, Hà Nội 45 M sojae sp nov SS 4.2 46 M sojae sp nov TBY 1065.1 47 M sojae sp nov TBY 3838.1 48 M sojae sp nov TBY 3832.1 49 M spathulata TBY 1320.1 Tƣơng 50 M spathulata TBY 5295.1 Hoa Ng sắc 51 M spathulata TBY 5339.3 Hoa Ng sắc 52 M spathulata TBY 5360.1 Hoa Ng sắc 53 M suaveolens TBY 38.7 Oil bottle 54 M suaveolens TBY 4388.4 Bàn thái thịt 55 M suaveolens TBY 4412.2 Bàn thái thịt 56 M suaveolens TBY 4473 Bàn thái thịt 57 Moniliella sp1 TBY 38.6 Chai dầu ăn 58 Moniliella sp1 TBY 4807.3 59 Moniliella sp1 TBY 4839.1 60 Moniliella sp1 TBY 5089.2 Khóa 2014 2016 Chum ngâm tƣơng Chum ngâm tƣơng Chum ngâm tƣơng Chum ngâm tƣơng c Thị trấn Bần, Hƣng Yên Thị trấn Bần, Hƣng Yên Cơ sở Hƣờng Đạt, Bần, Hƣng Yên Cơ sở Hƣờng Đạt, Bần, Hƣng Yên Cự Đà, Cự Khê, Thanh Oai, Hà Nội Vƣờn hoa Hà Đông, Hà Nội Chúc Sơn,Chƣơng Mỹ, Hà Nội Chúc Sơn,Chƣơng Mỹ, Hà Nợi Qn bia, Trƣờng n, Ninh Bình, Việt Nam Chợ Phùng-Đức HƣơngV Quang-Hà Tĩnh Chợ Tạm Xa La, Hà Đông, Hà Nội Chợ Bông Đỏ-Hà ĐôngHà Nội Trƣờng Yên, Ninh Bình, Việt Nam Luận văn Thạc sĩ Khoa học Nguyễn Thị Ánh Thao Phụ lục Hình ảnh chạy sắc kí Sắc ký đồ dịch lên men chủng M.megachiliensis TBY 3406.6, TBY 2127.1, TBY 3438.2, TBY 3439 Sắc ký đồ dịch lên men chủng M.barkeri TBY 372, M.barkeri TBY 4375.3, M.pollinis TBY 3679.4 Sắc ký đồ dịch lên men chủng M.acetoabutains TBY 83, TBY 78 M.spathulatla TBY 5345.1 Khóa 2014 2016 d Luận văn Thạc sĩ Khoa học Nguyễn Thị Ánh Thao Sắc ký đồ dịch lên men chủng TBY3406.6 môi trƣờng dịch đƣờng 40 % Sắc ký đồ dịch lên men có nồng độ cao nấm men % 1,25 % Sắc ký đồ dịch lên men có chứa 0,1 % ure Khóa 2014 2016 e Luận văn Thạc sĩ Khoa học Nguyễn Thị Ánh Thao ngày 13 ngày 20 ngày Sắc ký đồ dịch lên men sau ngày, 13 ngày 20 ngày Khóa 2014 2016 f Luận văn Thạc sĩ Khoa học Nguyễn Thị Ánh Thao Phụ lục 7: Kết phân tích sản phẩm đƣờng erythritol Khóa 2014 2016 g Luận văn Thạc sĩ Khoa học Khóa 2014 2016 Nguyễn Thị Ánh Thao h ... cịn Xuất phát từ lý thực đề tài : ? ?Nghiên cứu sản xuất đƣờng erythritol từ nấm men Moniliella phân lập Việt Nam? ?? nhằm Khóa 2014 2016 thu nhận đƣờng erythritol và đƣa quy trình sản xuất quy mơ... - Nguyễn Thị Ánh Thao NGHIÊN CỨU SẢN XUẤT ĐƢỜNG ERYTHRITOL TỪ NẤM MEN MONILIELLA PHÂN LẬP TẠI VIỆT NAM Chuyên ngành: Sinh học thực nghiệm Mã số: 60420114 LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC NGƢỜI... Tình hình sản xuất erythritol giới Việt Nam Hiện giới erythritol đƣợc sản xuất thƣơng mại quy mô công nghiệp sử dụng chủng Moniliella Công nghệ sản xuất erythritol sử dụng nấm men Moniliella