Thông tin tài liệu
ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN Nu nT n Đ NH GI KHẢ N NG CH NG OXI H A KH NG VIÊM TRÊN M H NH CHU T SWISS CỦA CAO CHI T T M T S THỰC V T TRONG C C I THU C TR GOUT CỔ TRUY N LU N V N THẠC SĨ KHOA HỌC H N I - 2020 Nu nT n Đ NH GI KHẢ N NG CH NG OXI H A KH NG VIÊM TRÊN M H NH CHU T SWISS CỦA CAO CHI T T M T S THỰC V T TRONG C C I THU C TR GOUT CỔ TRUY N Chuy n ng nh: Sinh học th c nghi m Mã số: 8420101.14 LU N V N THẠC SĨ KHOA HỌC Cán ƣớn dẫn: TS Đỗ Min Hà LỜI CẢM ƠN Lời đầu tiên, tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc tới TS Đỗ Minh Hà, người thầy ln quan tâm, tận tình bảo, hướng dẫn tơi suốt q trình học tập thực khóa luận Tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành đến PGS.TS Trịnh Hồng Thái, TS Trịnh Tất Cường giúp đỡ tạo điều kiện vật chất tinh thần suốt q trình tơi học tập làm việc phịng thí nghiệm Tơi xin gửi lời cảm ơn đến TS Lưu Thị Thu Phương BM Sinh lý học sinh học người, Th.S Nguyễn Thị Vân Khánh BM Sinh học Tế bào, CN Dương Đức Thiện giúp đỡ cho suốt trình thực luận văn Tơi xin gửi lời cảm ơn chân thành đến thầy cô, anh chị bạn sinh viên làm việc học tập Phòng Proteomic Sinh học cấu trúc thuộc Phịng thí nghiệm Trọng điểm cơng nghệ Enzyme Protein Bộ môn Sinh lý học trường Đại học Khoa học Tự nhiên, Đại học Quốc gia Hà Nội giúp đỡ, hỗ trợ tơi nhiều trình học tập, làm việc thực luận văn Tơi xin bày tỏ lịng cảm ơn tới Phịng thí nghiệm Trọng điểm Cơng nghệ Enzyme Protein, Trung tâm Khoa học Sự sống, Khoa sinh học, PTN Hóa dầu, Khoa Sinh học TT Khoa học vật liệu, Khoa Vật lý trường Đại học Khoa học Tự nhiên tạo điều kiện giúp hồn thành luận văn Tơi xin cảm ơn tồn thể anh chị bạn học viên lớp K26 cao học Sinh học, trường Đại học Khoa học Tự nhiên, Đại học Quốc gia Hà Nội Tôi xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến gia đình, người thân bạn bè, người động viên, giúp đỡ, tạo điều kiện cho suốt trình học tập, làm việc thực luận văn Tôi xin cảm ơn đề tài QG.18.11 tài trợ kinh phí cho nghiên cứu Hà Nội, tháng 02 năm 2020 Học viên Nguyễn Thị Ân MỤC LỤC MỞ ĐẦU Ch ng 1: T NG QUAN 1.1 nh gout 1.1.1.Khái quát chung b nh gout 1.1.2.Nguy n nhân v biểu hi n lâm s ng 1.1.2.1 Nguyên nhân 1.1.2.2 iểu hi n lâm s ng: 1.1.3.C chế sinh b nh: 1.1.3.1 C chế hình th nh acid uric 1.1.3.2 C chế gây vi m MSU b nh Gout 1.1.3.3 ROS v qu trình ho t h a th thể vi m NLRP3 10 1.1.4.C c h ớng điều trị hi n t i d a tr n c chế phân tử b nh 11 1.1.4.1 C c chất ức chế Xanthine oxidase 11 1.1.4.2 C c thuốc uricosuric – Thuốc lợi tiểu 11 1.1.4.3 C c thuốc kh ng vi m 11 1.2 Điều trị gout y học c truyền 12 1.2.1.C c b i thuốc dân gian dùng điều trị Gout .12 1.2.2.Một số lo i d ợc li u c c b i thuốc Nam đ ợc sử d ng điều trị gout 13 1.2.2.1 G m Gnetum parvifolium) 13 1.2.2.2 T a t Perilla ocymoides L) 14 1.2.2.3 Dâu tằm Morus alba) 15 1.3 C c hợp chất t nhi n điều trị gout 16 1.3.1.Alkaloid 16 1.3.2.Phenolic 18 Ch ng 2: NGUY N LI U VÀ PH NG PH P 21 2.1 Nguy n li u 21 2.1.1.V t li u nghi n cứu 21 2.1.2.H a chất 23 2.1.3.Thiết bị 24 2.2 Ph ng ph p: 25 2.2.1.T ch chiết m u d ợc li u: 25 2.2.2.S c ký mỏng Thin Layer Chromatography - TLC) .26 2.2.3.Ph ng ph p s c k lỏng ph khối l ợng Liquid chromatography - Mass spectrometry – LC - MS) 27 2.2.4.Định l ợng khả chống oxi h a t ng số ph ng ph p quét gốc t DPPH [42] 28 2.2.5.Gây b nh tr n m hình chuột Swiss v thử nghi m thuốc tr n chuột 29 2.2.6.Đ nh gi tình tr ng vi m tr n chuột th nghi m 29 2.2.7.Đ nh gi tình tr ng stress oxi h a tr n chuột th nghi m .31 2.2.7.1 Đ nh gi t nh tr ng stress oxi h a m u gan [56] .31 2.2.7.2 Đ nh gi t nh tr ng stress oxi h a m u m u [56] 32 2.2.8.Phân t ch số li u 33 Ch ng 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 34 3.1 Đ nh giá kết t ch chiết c c m u d ợc li u 34 3.1.1 X c định thành phần có dịch chiết d a vào ph hấp th .34 3.1.2 X c định thành phần có dịch chiết ph ng ph p S c ký mỏng (TLC): 36 3.1.3.X c định th nh phần c c c cao chiết ph ng ph p Thin layer chromatography (TLC) 38 3.1.4.Đ nh gi khả chống oxy h a c c m u dịch chiết 39 3.1.5.Định danh số ho t chất c cao ph ng ph p khối ph 39 3.2 Đ nh gi kết xây d ng m hình động v t bị gout .42 3.2.1 Chỉ số hình th i 42 3.2.2 Đ nh gi tình tr ng vi m m hình động v t đ ợc gây gout MSU 45 3.3 Đ nh gi t c động cao chiết l n động v t 46 3.3.1 Chỉ số hình th i 46 3.3.2 Đ nh gi tình tr ng vi m chuột uống cao chiết .48 3.3.3 Đ nh gi t c động cao chiết c c c quan chuột 49 3.4 Đ nh gi t c động cao chiết l n m hình động v t gout 49 3.4.1 Chỉ số hình th i 50 3.4.2 Đ nh gi tình tr ng stress oxy h a m hình chuột bị gây b nh gout đ ợc thử nghi m uống cao chiết 53 3.4.2.1 Đ nh gi h m l ợng MDA m u 53 3.4.2.2 Đ nh gi h m l ợng MDA m u m gan 54 3.4.2.3 Đ nh gi h m l ợng MDA m u m c chân tr i, chân phải55 3.4.3 Đ nh gi tình tr ng vi m m hình chuột bị gây b nh gout đ ợc thử nghi m uống cao chiết 58 KẾT LUẬN 60 KIẾN NGHỊ 61 TÀI LI U THAM KHẢO 62 DANH MỤC H NH Hình C chế hình th nh acid uric Hình C chế t c động MSU Hình G m Gnetum parvifolium) [6] 14 Hình Tía tơ (Perilla ocymoides L.) [6] 15 Hình Dâu tằm Morus alba) [6] 16 Hình Ho t t nh chống vi m số lo i alkaloids [72] .18 Hình ản ch y s c ký mỏng TLC 26 Hình S đồ cấu t o đ n giản h thống khối ph 28 Hình Ph hấp th dịch chiết 35 Hình 10 S c ký đồ TLC số dịch chiết với h dung m i TEAF 37 Hình 11 S c ký đồ TLC số dịch chiết với h dung m i CEF .37 Hình 12 ản s c ký th nh phần c dịch chiết, cao chiết T a t , Dâu tằm, G m với h dung m i CEF 38 Hình 13 S c ký đồ khối ph 41 Hình 14 C c ho t chất c cao chiết 42 Hình 15 Chân chuột tr ớc v sau ti m MSU 43 Hình 16 C c c quan nội t ng chuột th nghi m .49 DANH MỤC IỂU ĐỒ iểu đồ Nồng độ IL-1β huyết chuột tr n nh m ĐC SH, ĐC Âm v ĐC D ng 45 iểu đồ 2.Nồng độ IL-1β huyết chuột uống c c cao chiết 48 iểu đồ 3.H m l ợng MDA m u chuột 54 iểu đồ 4.H m l ợng MDA m u m gan chuột .55 iểu đồ H m l ợng MDA m u m c chân chuột 56 iểu đồ H m l ợng MDA m u m c chân tr i chuột 57 iểu đồ Nồng độ IL-1β huyết c c nh m chuột 58 DANH MỤC ẢNG ảng Ký hi u c c nh m chuột đ ợc sử d ng nghi n cứu 22 ảng H a chất sử d ng nghi n cứu 23 ảng Thiết bị đ ợc sử d ng nghi n cứu 24 ảng Hi u suất chống oxy h a c c m u dịch chiết 39 ảng Chỉ số cân nặng t i c c thời điểm th nghi m Đ n vị t nh: gam) 42 ảng K ch th ớc chân chuột t i c c thời điểm th nghi m Đ n vị t nh: mm3) 44 ảng Chỉ số cân nặng t i c c thời điểm th nghi m Đ n vị t nh: gram) 46 ảng K ch th ớc chân chuột t i c c thời điểm th nghi m Đ n vị t nh: mm3) 47 ảng Chỉ số cân nặng t i c c thời điểm th nghi m Đ n vị t nh: gram) 50 ảng 10 K ch th ớc chân chuột t i c c thời th nghi m Đ n vị t nh: mm) 52 Luận văn thạc sĩ Nguyễn Thị Ân Cao lốt Search Spectrum 1A 100% 7.628 min, Scan: 157, Merged 93.1 1.241e+7 75% 91.1 6.833e+6 50% 77.1 3.949e+6 25% 121.1 1.395e+6 67.1 1.263e+6 0% MatchMatch of 44 100% 93.0 999 75% 91.0 500 50% 79.0 320 25% 41.0 79 67.0 72 121.0 241 94.0 151 0% R.Match: 874, F.50 tch: 874 Ma 100 150 (+)-3-carene 200 250 m/z Luận văn thạc sĩ Nguyễn Thị Ân Search Spectrum 1A 100% 8.956 min, Scan: 236, Merged 101.0 119454.291 75% 73.1 74181.633 50% 144.1 47568.677 25% 55.1 20638.928 0% Match 100% Match of 43.0 961 73.0 863 101.0 999 HO O 75% 25% O 144.0 471 50% OH 45.0 156 0% R.Match: 793, F 50 tch: 780 Ma 100 150 200 2,4-dihydroxy-2,5-dimethylfuran-3(2H)-one 250 m/z Luận văn thạc sĩ Nguyễn Thị Ân Search Spectrum 1A 100% 17.222 min, Scan: 728, Merged 104.1 2.521e+6 75% 91.1 1.405e+6 50% 105.1 890313.535 25% 55.1 358021.921 103.1 328209.632 0% MatchMatch of 19 100% 104.0 999 O 75% 91.0 632 50% 25% 164.1 506512.626 105.0 382 77.0 51.0150 111 103.0 87 O 164.0 368 133.0 112 0% R.Match: 881, F.Ma 50 tch: 845 100 150 methyl 3-phenylpropanoate 200 250 m/z Luận văn thạc sĩ Nguyễn Thị Ân Search Spectrum 1A 100% 19.339 min, Scan: 854, Merged 105.1 7.967e+6 161.2 6.142e+6 75% 91.1 3.769e+6 50% 25% 92.1 2.103e+6 55.2 1.162e+6 133.1 1.124e+6 95.1 425947.943 0% MatchMatch of 95 100% 204.3 746552.391 161.0 999 119.0 938 75% 93.0 507 50% 41.0 308 25% 43.0 118 91.0 308 77.0 161 120.0 232 136.0162.0 107137 204.0 199 189.0 59 0% R.Match: 875, F.50 tch: 875 Ma 100 150 Copaene 200 250 m/z Luận văn thạc sĩ Nguyễn Thị Ân Search Spectrum 1A 100% 20.128 min, Scan: 901, Merged 91.1 5.013e+6 133.1 3.844e+6 75% 67.1 2.452e+6107.1 2.173e+6 50% 53.2 1.311e+6 25% 52.2 266030.980 0% MatchMatch of 100 100% 41.0 769 75% 161.2 1.295e+6 95.1 1.104e+6 93.0 999 133.0 921 79.0 763 105.0 623 107.0 77.0483 439 50% 53.0 299 25% 106.0 342 95.0 216 27.068.0 10395 161.0 330 134.0 244 162.0 94 122.0 87 189.0 166 0% R.Match: 934, F.Ma50 tch: 934 100 150 beta-caryophyllene 200 250 m/z Luận văn thạc sĩ Nguyễn Thị Ân Search Spectrum 1A 100% 21.773 min, Scan: 999, Merged 121.1 433403.241 75% 50% 134.1 98952.282 25% 91.1 50773.668 0% MatchMatch of 100% 194.1 66439.379 121.0 999 O O 75% O 50% 25% 91.0 77 194.0 243 134.0 166 0% R.Match: 79850 Match: 784 100 , F 150 200 methyl 3-(4-methoxyphenyl)propanoate 250 m/z Luận văn thạc sĩ Nguyễn Thị Ân Search Spectrum 1A 100% 23.586 min, Scan: 1107, Merged 208.2 4.457e+7 165.1 3.907e+7 75% 137.1 2.732e+7 50% 91.1133.1 1.793e+71.776e+7 25% 134.1 7.514e+6 63.1 5.714e+6 0% Match 100% Match of 209.2 1.539e+7 179.1 3.783e+6 SS SSSSSSSSSSS SSS S SS SSSSSSSS SSSSSSSS SSSSS SSS SS SS SSSSSSSSSSSSSSSSSSSSS SSSSSSSSSSSSSSSSSSSSSSS S SSS 208.0 999 75% 193.0 530 50% 15.0 338 25% 165.0 373 69.0 294 79.0105.0 165169 39.0 167 O 137.0 228162.0 179 134.0 83 O 209.0 137 O 0% R.Match: 934, F.Ma 50 929 tch: 100 150 200 (E)-1,2,4-trimethoxy-5-(prop-1-en-1-yl)benzene 250 m/z Luận văn thạc sĩ Nguyễn Thị Ân Spectrum 1A 100% 26.089 min, Scan: 1256, Merged 86.1 134876.857 75% 50% 85.1 36374.293 25% 208.2 15429.745 71.1 11742.532 0% 50 100 150 200 250 m/z Luận văn thạc sĩ Nguyễn Thị Ân Search Spectrum 1A 100% 28.037 min, Scan: 1372, Merged 95.1 566048.204 75% 71.1 319447.338 123.1 287619.195 50% 0% Match 100% 111.1 129832.590 53.2 108671.602 25% Match of 100 43.0 965 41.0 811 81.0 999 83.0 467 79.0 339 50% 27.0 89 OH 71.0 748 75% 25% 123.0 892 53.0 227 65.0 82 109.0 263 93.0 136 278.0 113 137.0 91 0% R.Match: 858, F.Ma 50 tch: 850 100 150 Phytol 200 250 m/z Luận văn thạc sĩ Nguyễn Thị Ân Search Spectrum 1A 100% 17.556 min, Scan: 748, Merged 124.0 1.727e+7 78.1 1.191e+7 75% 123.0 1.004e+7 50% 77.1 4.861e+6 25% 125.1 1.370e+6 79.1 1.359e+6 0% MatchMatch of 100% 124.0 999 OH 75% OH 123.0 541 78.0 454 50% 25% 77.0 51.0172 131 107.0 111 0% R.Match: 881, F.Ma 50 tch: 864 100 Cao Dâ ắm Homocatechol 150 200 250 m/z Luận văn thạc sĩ Nguyễn Thị Ân Search Spectrum 1A 100% 23.568 min, Scan: 1106, Merged 87.1 8.878e+6 75% 50% 85.1 2.976e+6 25% 59.1 1.149e+6 0% MatchMatch of 100% 116.1 1.103e+6 73.0 999 OH 75% 50% 25% HO OH HO OH OH 87.0 231 43.0 164 71.0 107 116.0 68 0% R.Match: 763, F.Ma 50 tch: 761 100 150 methyl inositol 200 250 m/z Luận văn thạc sĩ Nguyễn Thị Ân Search Spectrum 1A 100% 55.2 3.162e+6 75% 71.1 2.012e+6 50% 61.1 58975.957 25% 0% Match 100% 26.505 min, Scan: 1281, Merged 73.1 4.625e+6 Match of 12 43.0 949 129.1 1.954e+6 213.3 934466.708 157.1 115.1 810354.104 845473.205 73.0 999 O 41.0 790 OH 75% 129.0 441 50% 25% 29.0 259 27.0 107 69.0 363 61.0 228 70.0 101 85.0 241 115.0 145 143.0 164 171.0 81 199.0 186 242.0 159 0% R.Match: 789, F.Ma50 tch: 789 100 150 Pentadecanoic acid 200 250 m/z Luận văn thạc sĩ Nguyễn Thị Ân Search Spectrum 1A 29.039 min, Scan: 1432, Merged 70.1 3.587e+6 100% 75% 149.0 2.296e+6 50% 57.2 1.368e+6 112.1 1.300e+6 167.1 1.154e+6 25% 56.2 429594.891 0% Match 100% 113.2 336228.272 Match of 70.0 999 112.0 762 75% 149.0 671 O 261.0 667 O 57.0 470 50% O 71.0 323 25% O 43.0 195 42.0 57 113.0 256 82.0 65 279.0 185 150.0 72 0% R.Match: 50 24, F Matc 100 h: 72 150 200 Dioctyl isophthalate 250 300 350 m/z Luận văn thạc sĩ Nguyễn Thị Ân Luận văn thạc sĩ Nguyễn Thị Ân ... m tr n m hình chuột Swiss cao chiết th c v t t số b i thuốc trị Gout c truyền? ?? nhằm: T o cao, t ch chiết v phân t ch th nh phần c dịch chiết số d ợc li u đ ợc sử d ng điều trị gout c truyền Thử... Chỉ số hình th i 46 3.3.2 Đ nh gi tình tr ng vi m chuột uống cao chiết .48 3.3.3 Đ nh gi t c động cao chiết c c c quan chuột 49 3.4 Đ nh gi t c động cao chiết l n m hình động v t gout. ..Nu nT n Đ NH GI KHẢ N NG CH NG OXI H A KH NG VIÊM TRÊN M H NH CHU T SWISS CỦA CAO CHI T T M T S THỰC V T TRONG C C I THU C TR GOUT CỔ TRUY N Chuy n ng nh: Sinh học th c nghi m Mã số: 8420101.14
Ngày đăng: 23/12/2021, 21:31
Xem thêm:
