Đang tải... (xem toàn văn)
Phân tích phả hệ 2 chủng CDVHN6 và CDVHN7 thu nhận tại Hà Nội năm 2019 cho thấy sự gần gũi với chủng CDV/dog/HCM/33/140816 của Việt Nam (số GenBank: LC159587) thuộc genotye Asia-1 cùng với các chủng của châu Á bao gồm Trung Quốc, Thái Lan, Đài Loan. Tuy nhiên, hiện nay mới chỉ có được một hệ gen duy nhất CDV Thành phố Hồ Chí Minh 2014 đã công bố trên Ngân hàng gen, do vậy việc bổ sung thêm thông tin về nguồn dữ liệu gen của virus care là rất cần thiết nhằm góp phần nghiên cứu và sản xuất vaccine tái tổ hợp phòng bệnh cho chó tại Việt Nam.
KHOA HỌC KỸ THUẬT THÚ Y TẬP XXVIII SỐ - 2021 GIẢI MÃ GEN KHÁNG NGUYÊN H, PHÂN TÍCH ĐẶC ĐIỂM PHÂN TỬ VÀ XÁC ĐỊNH PHẢ HỆ NGUỒN GỐC CỦA CANINE DISTEMPER VIRUS GÂY BỆNH CARE Ở CHÓ TẠI HÀ NỘI Đặng Thị Mai Lan1*, Đỗ Đức Thành1, Đồn Thị Thanh Hương *Emal: landangmaiorchiddhtn@gmail.com TĨM TẮT Chúng tơi xác định lựa chọn chủng CDV virus (CDVHN6 CDVHN7) thu nhận Hà Nội năm 2019 để tách chiết thu RNA tổng số Sản phẩm thu đem chạy RT-PCR tinh đoạn DNA có kích thước 2021 nucleotide, chứa hồn tồn gen H có kích thước 1824bp Hệ số tương đồng chủng cao so với chủng CDV thuộc genotype Asia - công bố Ngân hàng gen có tỷ lệ đồng 97,30% nucleotide tỷ lệ tương đồng 97,20% amino acid Phân tích phả hệ chủng CDVHN6 CDVHN7 thu nhận Hà Nội năm 2019 cho thấy gần gũi với chủng CDV/dog/HCM/33/140816 Việt Nam (số GenBank: LC159587) thuộc genotye Asia-1 với chủng châu Á bao gồm Trung Quốc, Thái Lan, Đài Loan Tuy nhiên, có hệ gen CDV Thành phố Hồ Chí Minh 2014 công bố Ngân hàng gen, việc bổ sung thêm thông tin nguồn liệu gen virus care cần thiết nhằm góp phần nghiên cứu sản xuất vaccine tái tổ hợp phòng bệnh cho chó Việt Nam Từ khóa: Care virus, Canine distemper, gen H, genotype Asia-1,… H antigen decode, molecular characteristics analysis and original pedigree determine of canine distemper virus of care disease in dog in hanoi Dang Thi Mai Lan, Do Duc Thanh, Doan Thi Thanh Huong SUMMARY We have identified and selected CDV virus strains (CDVHN6 and CDVHN7) collected in Hanoi in 2019 to extract and obtain total RNA The obtained product was tested RT-PCR and purified DNA fragments with the size of 2021 nucleotides, completely containing the H gene with size 1824bp The similarity coefficient of the two strains is high compared to the CDV strains of genotype Asia - published in the Gene Bank with 97.30% homogeneity rate of nucleotides and 97.20% amino acid similarity rate Genealogy analysis of the two strains CDVHN6 and CDVHN7 collected in Hanoi in 2019 shows the proximity to the Vietnamese strain CDV / dog / HCM / 33/140816 (number GenBank: LC159587) belong to genotye Asia-1 along with the strains of Asia include China, Thailand, and Taiwan However, at present, there is only one genome, CDV in Ho Chi Minh City, 2014 which has been published in the Gene Bank, so it is very necessary to add more information about the gene data source of care virus to contribute to research and production of recombinant dog vaccines in Vietnam Keywords: Virus care, Canine distemper, H gene, genotype Asia-1… ĐẶT VẤN ĐỀ Bệnh Care hay gọi bệnh sài sốt chó bệnh truyền nhiễm cấp tính virus Canine Distemper (Canine Distemper Virus - CDV) gây Virus gây bệnh Care có hệ Đại học Nông Lâm Thái Nguyên Viện Công nghệ sinh học gen RNA sợi đơn âm, có kích thước khoảng 15.7kb, thuộc lồi Canine morbillivirus, họ Paramixoviridae, chi Morbillivirus Virus có hệ gen mã hóa cho protein, đó, protein H protein F protein kháng nguyên, định tính độc lực virus Đây gen có nhiều biến đổi chủng genotype nên 81 KHOA HỌC KỸ THUẬT THÚ Y TẬP XXVIII SỐ - 2021 chọn đối tượng cho nghiên cứu dịch tễ phân tử nguồn gốc phả hệ (Ke cs.,2015) Gen H (mã hóa protein H) gen biến đổi dùng để xác định mối liên hệ di truyền chủng (Gámiz cs., 2011) Gen H có khả biến đổi cao, định tính dinh dưỡng tế bào vật chủ cách liên kết với phân tử hoạt hóa tế bào lympho báo hiệu (SLAM) thụ thể hoại tử -4 vật chủ Trần Văn Nên cs (2017) so sánh trình tự nucleotide gen H chủng virus nghiên cứu với nhau, kết thu chủng CDV-VNUA-768 có số lượng vị trí sai khác so với chủng CDV-HUA-02H, CDVHUA-03R, CDV-HUA-04H CDV-HUA-05P là: 126, 131, 154, 16 vị trí Chủng CDVHUA-02H có số lượng vị trí sai khác so với chủng CDV-HUA03R, CDV-HUA-04H CDV-HUA-05P là: 7, 153, 124 vị trí Chủng CDV-HUA-03R có số lượng vị trí sai khác so với chủng CDV-HUA-04H CDVHUA-05P 156 128 vị trí Chủng CDV-HUA-04H có 154 vị trí sai khác so với chủng CDV-HUA-05P Nguyễn Văn Dũng cs (2018) phát phân lập thành cơng gen H CDV, tồn gen chủng phân lập CDV/dog/ HCM/33/140816 CDV/dog/HCM/38/140827 phân tích Qua phân tích phát sinh dòng, kết cho thấy chủng CDV thuộc genotype Asia-1 có độ tương đồng cao (98,4 - 99,3%) với chủng CDV từ Trung Quốc Nhằm nghiên cứu, xác định gen kháng nguyên H, phân tích đặc điểm phân tử, xác định phả hệ nguồn gốc virus CDV, xác định genotype chủng virus gây bệnh Care chó chúng tơi tiến hành: “Giải mã gen kháng nguyên H, phân tích đặc điểm phân tử xác định phả hệ nguồn gốc Canine Distemper virus gây bệnh Care chó Hà Nội” II VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Vật liệu nghiên cứu - Mẫu bệnh phẩm: gỉ mắt, gỉ mũi, phân thu nhận chó mắc bệnh Care lứa tuổi (cho 82 kết dương tính với test thử nhanh One - step Canine Distemper Virus Ag test (IMMUNO)) Mẫu bảo quản lạnh -200C đến sử dụng 2.2 Phương pháp nghiên cứu 2.2.1 Phương pháp xác định vật bệnh Với chó nghi mắc bệnh care có triệu chứng lâm sàng như: sốt cao, giảm ăn bỏ ăn, nôn mửa, thời gian nôn kéo dài Chảy nước mũi, thở khó, ho viêm phổi Tiêu chảy kéo dài, phân nhày màu đen màu cà phê Chó kiệt sức nhanh, có triệu chứng thần kinh Mắt đục dần có mủ, loét Xuất chấm đỏ bẹn bụng ghi chép thông tin lấy mẫu bệnh phẩm 2.2.2 Phương pháp thu thập bệnh phẩm Dùng tăm vô trùng lấy mẫu bệnh phẩm (gỉ mắt, gỉ mũi, phân) từ chó nghi mắc bệnh Care, sau cho vào tuýp chứa 3ml môi trường vận chuyển để bảo quản, đầu tăm bơng phải nằm ngập hồn tồn mơi trường vận chuyển đóng nắp, siết chặt cho vào túi nilon có đánh dấu, ký hiệu để nhận biết Các mẫu bệnh phẩm bảo quản lạnh nhiệt độ - 80C đem phòng Miễn dịch học Viện Công nghệ sinh học 2.2.3 Phương pháp tách RNA RNA tổng số bao gồm RNA hệ gen virus tách chiết sinh phẩm QIAamp Viral Mini Kit (QIAGEN Inc.) theo hướng dẫn nhà sản xuất Mẫu bệnh phẩm bảo quản -800C sử dụng 2.2.4 Phương pháp chuyển từ RNA sang cDNA Sợi cDNA tổng hợp theo phương pháp chuyển đổi từ RNA tổng số virus mồi xác suất (hexamer), sử dụng kit chuyển đổi enzyme Maxima Reverse Transcriptase hãng Fermentas theo hướg dẫn nhà sản xuất Thành phần phản ứng với dung tích 20µl gồm có: 2µl RNA tổng số (100ng/µl); 1µl (100 picomol/µl) mồi Hexamer; 1µl hỗn hợp dNTP mix (10mM); 10.5µl H2O (nucleasefree); 4µl 5X RT buffer; 0.5µl RiboLock™ Rnase Inhibitor (50U/µl) 1µl MaximaTM Reverse Transcriptase (20U/µl) Phản ứng thực 500C giờ, sau dừng phản ứng 800C phút Sản phẩm cDNA bảo quản -200C sử dụng để thực phản ứng PCR KHOA HỌC KỸ THUẬT THÚ Y TẬP XXVIII SỐ - 2021 2.2.5 Phương pháp PCR Phản ứng PCR thực khuôn cDNA thu vùng gen H mẫu nghiên cứu Trong nghiên cứu dùng kit DreamTaq PCR Mastermix (2X) hãng Thermo Scientific (Mỹ) cung cấp phản ứng thực máy PCR (PTC-100) Phản ứng PCR thực với dung tích 50 µl, sử dụng kit Dream Taq PCR mastermix (Thermo Fisher Scientific, Mỹ), bổ sung µl (10pmol/µl) loại mồi, µl khn cDNA (50ng/µl), µl DMSO (dimethyl sulfoxide), 25 µl Dream Taq PCR mastermix (2X), thêm 17 µl nước khử ion DEPC Phản ứng PCR thực máy MJ PTC-100 (USA): chu kỳ 940C/5 phút, 35 chu kỳ (940C /30 giây, 520C/30 giây; 720C/3 phút), chu kỳ cuối 720C/10 phút Sản phẩm PCR điện di kiểm tra thạch agarose 1%, nhuộm ethidium bromide quan sát máy soi gel ánh sáng tia cực tím (Wealtech, Mỹ) Sản phẩm PCR tinh kit GeneJET Gel PCR Purification hãng Thermo theo hướng dẫn nhà sản xuất Sản phẩm tinh dùng để giải trình tự trực tiếp dịng hóa trước giải trình tự 2.2.6 Phương pháp giải trình tự trình tự sử dụng để so sánh Phương pháp giải trình tự (sequencing) dựa vào hoạt động enzyme DNA-polymerase trình tổng hợp DNA, emzym DNA-polymerase xúc tác gắn nucleotide vào mạch đơn DNA tổng hợp vị trí 3’ có chứa nhóm -OH tự do, gặp nucleotide khơng chứa nhóm 3’-OH (ddNTP) phản ứng tổng hợp dừng lại Đặc trưng phương pháp dùng ddNTP (bị nguyên tử oxy vị trí cacbon 4) để dừng phản ứng cách ngẫu nhiên Kết tạo đoạn DNA sợi đơn dài ngắn khác sai khác nucleotide Các phân đoạn gen giải trình tự trực tiếp mồi xi mồi ngược theo phương pháp Sanger Chương trình GENEDOC 2.7 sử dụng để phân tích so sánh chuỗi gen Xây dựng phả hệ nguồn gốc chương trình MEGA7, sử dụng phương pháp ”kết nối liền kề” (Neighbourjoining method) (Kumar cs., 2016) III KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Kết tình hình chó mắc bệnh Care số Quận địa bàn Hà Nội 3.1.1 Tình hình chó mắc bệnh Care số Quận Hà Nội Chúng khảo sát số phòng khám địa bàn quận Hà Đông, Cầu Giấy Nam Từ Liêm - Hà Nội ghi nhận tổng số 845 chó đến khám điều trị có triệu chứng nghi mắc bệnh care Những trường hợp lấy mẫu xét nghiệm One - step Canine Distemper Virus Ag test để xác định bệnh care chó Kết cho thấy có 161 trường hợp chó mắc bệnh chiếm 19,05% Kết thể bảng 3.1 Bảng 3.1 Tỷ lệ chó mắc bệnh Care Quận Hà Nội Địa điểm (Quận) Số chó điều tra (con) Số chó mắc bệnh (con) Tỷ lệ mắc (%) Số chó chết (con) Tỷ lệ chết (%) Hà Đơng 312 63 20,19 48 76,19 Cầu Giấy 298 48 14,30 30 62,50 Nam Từ Liêm 235 50 21,28 42 84,00 Tính chung 845 161 19,05 120 74,53 Kết bảng 3.1 cho thấy, tổng số 845 chó điều tra phòng khám Quận địa bàn Hà Nội có 161 chó phát mắc bệnh Care chiếm 19,05% với triệu chứng điển hình: sốt, bỏ ăn ăn ít, nơn mửa, ỉa chảy, phân có lẫn máu, vùng da mỏng có nốt sài, chảy dịch mắt dịch mũi có triệu chứng thần kinh… Tỷ lệ chó chết mắc bệnh chiếm tỷ lệ 74,53% chó ỉa chảy, nước, máu, đặc biệt tổn thương hệ hô hấp gây ảnh hưởng tới q trình trao đổi khí Kết cho thấy, chó bị mắc bệnh Care việc điều trị khó virus tác động, gây tổn thương 83 KHOA HỌC KỸ THUẬT THÚ Y TẬP XXVIII SỐ - 2021 nặng hệ tiêu hóa hệ hơ hấp, đồng thời làm giảm sức đề kháng chó nên tỷ lệ chết cịn cao 3.2 Kết số mẫu xét nghiệm thu nhận gen H chó mắc bệnh Care 161 mẫu bệnh phẩm hỗn hợp gỉ mắt, gỉ mũi chó mắc bệnh thơi nước tiến hành tách chiết RNA tổng số Sản phẩm thu đem chuyển đổi từ RNA tổng số virus sang sợi cDNA mồi xác suất (hexamer) sử dụng kit enzyme Maxima Reverse Transcriptase hãng Fermentas RNA tổng số sau tách chiết bảo quản - 80°C dùng làm khuôn cho phản ứng chuyển đồi cDNA Trước thực thí nghiệm RNA tổng số kiểm tra chất lượng cách đo nồng độ axit nucleic máy Nanodrop (Nhật Bản) với bước sóng 260nm Hai mẫu nghiên cứu mẫu có chất lượng RNA tốt (nồng độ cao, tạp chất) 3.3 Kết phản ứng PCR giải trình tự nucleotide, amino acid gen H Bảng 3.2 Cặp mồi sử dụng PCR STT Tên mồi C6863H-F C9071H-R Trình tự mồi (5’ 3’) GTCGATCCGRCATTTAAACCTG ATTTGGGCTATCTAGATGGACC C6863H-F, C9071H-R có kích thước khoảng 2.2kb Tồn gen H nằm trọn đoạn DNA Trước gửi đọc trình tự cơng ty The FirstBase M 2.2kb 2.0kb (Singapore) sản phẩm PCR tinh cách gel dùng kit GeneJET PCR Gel purification hãng Thermo theo hướng dẫn nhà sản xuất 2.2kb 564bp Hình 3.1 Kết điện di sản phẩm PCR nhân gen H chủng CDV nghiên cứu M: thị phân tử DNA thực khuẩn thể Lambda cắt HindII; 1: phân đoạn hệ gen CDVHN7; 2: phân đoạn hệ gen CDVHN6 Với cặp mồi: C6863H-F, C9071H-R thu nhận phân đoạn DNA có kích thước 2021 nucleotide, chứa hồn tồn gen H có kích thước 84 1824bp Trình tự nucleotide amino acid (suy diễn) gen H thu từ chủng trình bày bên đây: KHOA HỌC KỸ THUẬT THÚ Y TẬP XXVIII SỐ - 2021 Hình 3.2 Trình tự nucleotide amico acid (suy diễn) gen H chủng CDVHN7 Chú thích: Dịng trình tự nucleotide, dịng trình tự amino acid (suy diễn) Hình 3.3 Trình tự nucleotide amino acid (suy diễn) gen H chủng CDVHN6 Chú thích: Dịng trình tự nucleotide, dịng trình tự amino acid (suy diễn) 85 KHOA HỌC KỸ THUẬT THÚ Y TẬP XXVIII SỐ - 2021 3.4 Kết phân tích gen H so sánh với chủng giới America - (America-2/00-2601- US-2004), Arctic (Arctic/CDV2784-IT-2013) Africa Các chuỗi nucleotide thu nhận từ 02 virus phân lập Hà Nội năm 2019 sử dụng chương trình Blast để so sánh với Ngân hàng gen cho thấy có hệ số tương đồng cao, từ 97,30% nucleotide 97,20% amino acid so sánh với chủng CDV thuộc genotype Asia - Nghiên cứu cho thấy chủng CDVHN7 CDVHN6 có tỷ lệ đồng cao so sánh với chủng CDV-dog-HCM-33-140816 (số GenBank: LC159587) thu TP Hồ Chí Minh năm 2014 (99,40%) (https://www.ncbi.nlm nih.gov/nuccore/LC159587.1/) Trình tự nucleotide amio acid vùng gen H chủng nghiên cứu so sánh với chủng CDV giới ngân hàng gen, bao gồm đại diện genotype phổ biến: Asia - (Asia-1/CDV-dogHCM-33-140816), Asia - (Asia-2/50Con-JP-2013), Asia - (Asia-4/CDV8TH-2014), Europe (Europe/5804-US-2003), America - (America-1/Onderstepoort-US-2002), Khi so sánh với chủng CDV thuộc genotype khác, tỷ lệ đồng nucleotide tỷ lệ tương đồng amino acid thấp đáng kể (90,00% nucleotide 88,60% amino acid so với chủng Onderstepoort (số GenBank: AF378705) (https:// www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/AF378705.1/) thuộc genotype America-1 mà chủng Onderstepoort lại chủng dùng sản xuất vaccine ngày Bảng 3.3 Tỷ lệ đống nucleotide amino acid chủng CDV nghiên cứu chủng giới CDVHN6; CDVHN7; 3.CDVHN5-(VN-2018); 4.CDV-dog-HCM-33-140816(VN-2014)-LC159587; 5.Canine-NTU-2005-1-TW-2005(MK431532); Onderstepoort (AF378705);7 SnyderHill-US(JN896987); 01-2689-US-2001(AY649446) ; A75-17-US(AF164967); 10 25130-IT-2015(KX943324) ; 11 CDV2784-2013IT-2013(KF914669); 12 50Con-JP(AB476402) ; 13 55L-JP(AB475099); 14 CDV1-TH-2014(MH496772); 15 CDV8-TH-2014(MH496777); 16 5804DE(AY386315); 17 Uy251-UY-2012(KM280689); 18 WT01SA-ZA2016(KY971528) 86 KHOA HỌC KỸ THUẬT THÚ Y TẬP XXVIII SỐ - 2021 Toàn gen H chủng virus nghiên cứu gồm 1824 nucleotide Độ dài giống với đa số độ dài gen H chủng CDV nhiều genotype có chủng vaccine SnyderHill (JN896987) (thuộc genotype America - 1) lại dài độ dài gen H chủng virus vaccine Onderstepoort (AF378705) nucleotide tương ứng với amino acid Chín nucleotide nằm cuối gen H Bộ kết thúc chủng nghiên cứu TGA chủng vaccine lại TAA khiến chủng virus vaccine Onderstepoort khác hẳn với chủng virus khác vị trí kết thúc 1815 (của gen H) Chủng virus nghiên cứu CDVHN6 có sai khác (T1815C) so với chủng khác vị trí (Hình 3.4) Sự sai khác dẫn đến sai khác amino acid (L605S) Đây khác biệt rõ rệt gen H chủng virus thực địa so với chủng virus vaccine Hình 3.4 Sai khác nucleotide cuối gen H dẫn đến khác biệt chủng virus vaccine so với chủng virus nghiên cứu Kết so sánh trình tự nucleotide gen H so với chủng CDV thuộc genotype khác nhận thấy: chủng virus CDV thuộc genotype Asia có khác biệt hoàn toàn với genotype khác vị trí 30 vị trí gen H dẫn đến vị trí sai khác amino acid (A179G, T267N, V359A) vị trí 1590 (tương ứng với vị trí amino acid 530) có khác biệt hồn tồn genotype 3.5 Kết phân tích phả hệ nguồn gốc chủng CDV Việt Nam Hai chủng CDV nghiên cứu phân tích xác định phả hệ nguồn gốc 49 chủng CDV thu thập Việt Nam giới dựa trình tự tồn gen H (Hình 3.6) Trình tự gen H chủng virus CDNHN6 CDVHN7 đưa vào phần mềm tin - sinh chuyên dụng GENEDOC 2.7 MEGA để xác định tỷ lệ tương đồng nucleotide/amino acid xây dựng phả hệ nguồn gốc Kết phân tích phả hệ nguồn gốc chủng CDV dựa liệu trình tự nucleotide gen H chủng CDVHN6 gần gũi với chủng CDVHN5 thu Hà Nội, Việt Nam năm 2018 (đã giải mã toàn 87 KHOA HỌC KỸ THUẬT THÚ Y TẬP XXVIII SỐ - 2021 hệ gen) Sự gần gũi vị trí thời điểm thu mẫu tương đối giống (cùng Hà Nội năm 2018) Chủng CDVHN7 lại gần gũi với chủng CDV/dog/ HCM/33/140816 thu thành phố Hồ Chí Minh năm 2014 Cả hai chủng nghiên cứu thuộc genotype Asia - Kết thể hình 3.5 Hình 3.5 Cây phả hệ thể mối quan hệ nguồn gốc chủng CDV nghiên cứu (đánh dấu hình ) chủng giới Cây phả hệ cho thấy chủng CDVHN6 CDVHN7 thu nhận Hà Nội năm 2019 thuộc genotye Asia - với chủng châu Á bao gồm Trung Quốc, Thái Lan, Đài Loan chủng CDVHN5 Việt Nam phân lập năm 2018 Hà 88 Nội, CDV/dog/HCM/33/140816 Việt Nam phân lập năm 2014 TP.Hồ Chí Minh; chủng CDVHN6 có quan hệ gần gũi với CDVHN5 Việt Nam, chủng CDVHN7 gần gũi với chủng CDV/dog/HCM/33/140816 Việt Nam (số KHOA HỌC KỸ THUẬT THÚ Y TẬP XXVIII SỐ - 2021 GenBank: LC159587) Kết nghiên cứu hoàn toàn thống với kết nghiên cứu năm 2018 xác định genotype chủng virus CDV thu nhận Hà Nội dựa liệu gen H (Đoàn Thị Thanh Hương cs., 2018) Một số nghiên cứu Việt Nam cho thấy: chủng CDV từ năm 2013 - 2018 chưa có biến đổi lớn, thuộc genotype Asia - Điều thuận lợi cho cơng tác phịng bệnh vaccine Việt Nam Tuy nhiên, đáng ý nhiều loại vaccine sử dụng nhập từ Mỹ nước châu Âu, có khác biệt lớn trật tự hệ gen, không gần gũi phả hệ nguồn gốc với chủng thuộc genotype Asia - Do đó, nên thận trọng sử dụng chủng vaccine nhập tiêm phịng cho chó Việt Nam IV KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ - Tại Quận (Hà Đơng, Nam Từ Liêm, Cầu Giấy - Hà Nội có tỷ lệ chó mắc bệnh care 19,05% với 74,53% số chết bệnh - Đã xác định lựa chọn mẫu CDVHN6, CDVHN7 để tách chiết RNA Sản phẩm PCR thu tiếp tục tinh thu nhận phân đoạn DNA có kích thước 2021 nucleotide, chứa hồn tồn gen H có kích thước 1824bp - Đã xác định chủng virus phân lập có hệ số tương đồng cao so với chủng công bố Ngân hàng gen với tỷ lệ đồng 97,30% nucleotide tỷ lệ tương đồng 97,20% amino acid - Đã phân tích phả hệ nguồn gốc chủng CDVHN6 CDVHN7 thu nhận Hà Nội năm 2019 cho thấy gần gũi với chủng CDV/dog/HCM/33/140816 Việt Nam (số GenBank: LC159587) thuộc genotye Asia-1 với chủng châu Á bao gồm Trung Quốc, Thái Lan, Đài Loan TÀI LIỆU THAM KHẢO Nguyễn Văn Dũng, Vũ Kim Chiến, Phan Xuân Thảo (2018), “Phân lập xác định đặc tính di truyền virus gây bệnh Care chó ni thành phố Hồ Chí Minh”, Tạp chí Khoa học Kỹ thuật Thú y, 15(4): 19 - 26 Đoàn Thị Thanh Hương, Nguyễn Thị Khuê, Đỗ Thị Roan, Nguyễn Ngọc Trâm, Lê Thị Kim Xuyến, Nguyễn Thị Bích Nga, Lê Thanh Hòa (2018), “Đặc điểm phân tử phả hệ nguồn gốc virus gây bệnh Care (Cannine Distemper Virus) phân lập năm 2017 Hà Nội” Hội nghị khoa học Cơng nghệ sinh học tồn quốc 2018, Nxb Khoa học Tự nhiên & Công nghệ: 1705 - 1711 Nguyễn Thị Lan (2012), “Nghiên cứu giải trình tự đoạn gen Haemnagglutinin virus gây bệnh care cho chó địa bàn Hà Nội vùng phụ cận Hà Nội”, Tạp chí Khoa học kỹ thuật Chăn ni 7(160): 49 - 56 Trần Văn Nên, Nguyễn Thị Lan, Nguyễn Văn Thanh, Lương Quốc Hưng (2017), “Nghiên cứu số đặc điểm sinh học phân tử virus Care phân lập số tỉnh phía Bắc Việt Nam”, Tạp chí Khoa học Nơng nghiệp Việt Nam, 15(1): 44 - 57 Phan Thị Hồng Phúc, Nguyễn Thị Ngân, La Văn Công, Đặng Thị Mai Lan, Nguyễn Thị Bích Đào, Nguyễn Đình Thắng (2019), “Nghiên cứu số đặc điểm dịch tễ chó mắc bệnh Care Bệnh xá Thú y, trường Đại học Nông Lâm Thái Nguyên”, Tạp chí Khoa học Kỹ thuật Thú y, 16(4): 43 - 50 Đỗ Thị Roan, Đỗ Đức Thành, Đặng Thị Mai Lan, Phạm Hồng Ngọc, Nguyễn Hữu Đức, Nguyễn Thị Khuê, Nguyễn Thị Thu Hiền, Lê Thị Kim Xuyến, Lê Thanh Hịa,Đồn Thị Thanh Hương (2020), “Giải mã hệ gen canine distemper virus gây bệnh chó năm 2018”, Tạp chí Cơng nghệ sinh học 18(3): 465-475 Gámiz C., Martella V., Ulloa R., Fajardo R., Hernandér I Q., Martínez S (2011), “Indentification of a new genotype of canine distemper virus circulating in America”, Vet Res Commun 35: 381 - 390 Ke G.M., Ho C.H., Chiang M.J., Shanno D., Chung C.S., Lin M.Y., Shi Y.Y., Yang M.H., Tyan Y.C., Liao P.C., Chu P.Y (2015), “Phylodynamic analysis of the canine distemper virus hemagglutinin gene”, BMC Vet Res 11: 164 Kumar S, Stecher G, Tamura K (2016) MEGA7:Molecular Evolutionary Genetics Analysis version 7.0 Mol Biol Evol 30: 2725–2729 Ngày nhận 10-6-2021 Ngày phản biện 14-5-2021 Ngày đăng 15-8-2021 89 ... cứu, xác định gen kháng nguyên H, phân tích đặc điểm phân tử, xác định phả hệ nguồn gốc virus CDV, xác định genotype chủng virus gây bệnh Care chó tiến hành: ? ?Giải mã gen kháng nguyên H, phân tích. .. tích đặc điểm phân tử xác định phả hệ nguồn gốc Canine Distemper virus gây bệnh Care chó Hà Nội? ?? II VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Vật liệu nghiên cứu - Mẫu bệnh phẩm: gỉ mắt, gỉ mũi, phân. .. ? ?Đặc điểm phân tử phả hệ nguồn gốc virus gây bệnh Care (Cannine Distemper Virus) phân lập năm 2017 Hà Nội? ?? Hội nghị khoa học Cơng nghệ sinh học tồn quốc 2018, Nxb Khoa học Tự nhiên & Công nghệ: