Đang tải... (xem toàn văn)
Phương pháp nghiên cứu và sản xuất thành công vắc xin giải độc tố (CLOSTOXOI I.VAC) phòng bệnh viêm ruột hoại tử do vi khuẩn Clostridium perfringens gây ra trên bò, dê, cừu. Kết quả kiểm tra các chỉ tiêu: thuần khiết, an toàn và hiệu lực của vắc xin đều đạt yêu cầu theo tiêu chuẩn cơ sở. Đây là sản phẩm vắc xin giải độc tố của vi khuẩn C. perfringens đầu tiên tại Việt Nam. Vắc xin giải độc tố (CLOSTOXOI I.VAC) đã được cấp phép lưu hành bởi Cục Thú Y với mã số TW IV-35. Sản phẩm sẽ giúp giảm thiểu thiệt hại do bệnh viêm ruột hoại tử gây ra, mang lại lợi ích kinh tế cho người chăn nuôi.
KHOA HỌC KỸ THUẬT THÚ Y TẬP XXVIII SỐ - 2021 NGHIÊN CỨU SẢN XUẤT VACXIN GIẢI ĐỘC TỐ (CLOSTOXOI I.VAC) PHÒNG BỆNH VIÊM RUỘT HOẠI TỬ DO VI KHUẨN CLOSTRIDIUM PERFRINGENS GÂY RA TRÊN TRÂU, BÒ, DÊ, CỪU Nguyễn Đức Tân, Nguyễn Thị Thắm*, Lê Lập Phòng kỹ thuật phát triển sản phẩm, Phân viện Thú y miền Trung * Email: thamtb87@gmail.com TĨM TẮT Chúng tơi nghiên cứu sản xuất thành công vắc xin giải độc tố (CLOSTOXOI I.VAC) phòng bệnh viêm ruột hoại tử vi khuẩn Clostridium perfringens gây bò, dê, cừu Kết kiểm tra tiêu: khiết, an toàn hiệu lực vắc xin đạt yêu cầu theo tiêu chuẩn sở Đây sản phẩm vắc xin giải độc tố vi khuẩn C perfringens Việt Nam Vắc xin giải độc tố (CLOSTOXOI I.VAC) cấp phép lưu hành Cục Thú Y với mã số TW IV-35 Sản phẩm giúp giảm thiểu thiệt hại bệnh viêm ruột hoại tử gây ra, mang lại lợi ích kinh tế cho người chăn ni Từ khóa: Clostridium perfringens, vacxin giải độc tố, viêm ruột hoại tử Study on production of toxid vaccine (CLOSTOXOI I.VAC) to prevent necrotic enteritis caused by Clostridium perfringens in buffaloes, cows, goats and sheeps Nguyen Duc Tan, Nguyen Thi Tham*, Le Lap SUMMARY We have researched and developed successful the toxoid vaccine (CLOSTOXOI I.VAC) to prevent necrotic enteritis caused by Clostridium perfringens in buffaloes, cows, goats and sheeps The results of quality control showed that the citeria of the vaccine including purity, safety and efficacy meet the basic standard of IVRD This is the first prodution toxoid vaccine C perfringens in Vietnam The vaccine (CLOSTOXOI I.VAC) has been licensed by Deparment of Animal Healthy with number TW IV-35 codes The vaccine would decrease the effect of necrotic enteritis, bring many economic benefits to farmers Keywords: Clostridium prefringens, toxoid vaccine, necrotic enteritis I ĐẶT VẤN ĐỀ Chăn ni trâu, bị, dê, cừu nước ta phát triển số lượng chất lượng Theo số liệu thống kê chăn nuôi ngày 01/01/2021 tổng đàn trâu 2.387.887 con, bò 6.278.034, dê 2.654.573 con, cừu 121.416 (Tổng Cục Thống kê, 2021) Hiệu kinh tế chăn ni trâu, bị, dê, cừu mang lại khơng nhỏ, góp phần đa dạng hóa sản phẩm nơng nhiệp, ổn định kinh tế xã hội Tuy nhiên nhiều loại dịch bệnh xảy bệnh tụ huyết trùng, lở mồm long móng, loét da quăn tai, viêm ruột tiêu chảy, viêm đường hô hấp,… gây thiệt hại đáng kể cho người chăn 48 nuôi Trong đó, vi khuẩn Clostridium perfringens (C perfringens) thường xác định nguyên nhân chủ yếu gây bệnh viêm ruột hoại tử trâu, bò, dê, cừu (Vance, 1967) C perfringens thường trú thể vật nuôi phân bố rộng rãi môi trường Khi thể gặp điều kiện bất lợi, C perfringens tăng sinh số lượng sản sinh loại độc tố khác độc tố alpha (α), beta (β), epsilon (ε), iota (ι), độc tố ruột (enterotoxin), độc tố beta2 (β2), độc tố delta (δ), theta (θ), Mu, Nu (Songer, 1996) gây bệnh cho vật nuôi Trên giới có nhiều nghiên cứu vắc xin phịng bệnh vi khuẩn C perfringens gây động vật vắc xin toàn khuẩn-giải độc tố KHOA HỌC KỸ THUẬT THÚ Y TẬP XXVIII SỐ - 2021 (bacterin-toxoid), vắc xin giải độc tố (toxoid) Các vắc xin chứng minh có hiệu lợn con, gia súc, cừu non dê (Goossens, 2017; Ferreira, 2016; Kennedy, 1977; Schäfer, 2012; Springer, 1999; Titball, 2009) Vắc xin thú y lưu hành thị trường thường vắc xin đa giá chứa loại độc tố CPA (anpha), CPB (beta) ETX (epsilon) toàn khuẩn-giải độc tố (Moreira, 2016) Một số loại vắc xin giải độc tố phòng bệnh viêm ruột hoại tử cho bò, dê, cừu có mặt thị trường nước ta, như: Electroid D; Electroid (Bovilis vision 7); Siteguard MLG (Bovilis C8S) Các vắc xin bổ sung chất bổ trợ keo phèn Hydroxide aluminium để tăng khả đáp ứng miễn dịch Tuy nhiên, loại vắc xin ngoại nhập có giá thành cao Reinforced Clostridial (RCM) cải tiến Hiện Việt Nam, chưa có loại vắc xin nội địa phòng bệnh viêm ruột hoại tử độc tố epsilon vi khuẩn C perfringens cấp phép lưu hành Vì vậy, để góp phần hạn chế thiệt hại bệnh C perfringens gây giảm thiểu chi phí tiêm phịng vắc xin phịng bệnh viêm ruột hoại tử, tiến hành nghiên cứu chế tạo vắc xin giải độc tố epsilon C perfringens typ D phòng bệnh viêm ruột hoại tử bò, dê, cừu 2.2.4 Phương pháp sản xuất độc tố II NỘI DUNG, NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Nội dung nghiên cứu Các loại hóa chất, dung dịch sử dụng để tinh chế độc tố [NaOH 5N, amonium sulphate (NH4)2SO4, đệm phosphate, túi thẩm tích] Các loại hóa chất sử dụng để xác định hàm lượng protein: chất phản ứng A (BCA Protein Assay Reagent A), chất phản ứng B (BCA Protein Assay Reagent B) (Pierce, USA) hãng Merck, Đức cung cấp 2.2.3 Động vật thí nghiệm Chuột nhắt trắng khỏe mạnh từ 18 g - 22 g/con Bò từ – tháng tuổi, khỏe mạnh Dê từ – tháng tuổi, khỏe mạnh Cừu từ – tháng tuổi, khỏe mạnh Q trình lên men kỵ khí thực hệ thống lên men BioFlo110 Modular Benchtop Fermentor Module M1273-0054 (USA) dựa theo mô tả tác giả công bố: Alouf cs., (1981), Mollby cs., (1976) Độc tố thu cách ly tâm canh khuẩn 4.500 vòng/phút 15 phút oC, loại bỏ xác vi khuẩn, lấy dịch lọc qua hệ thống lọc Seitz (Φ 0,2 µm) Hỗn dịch qua lọc (độc tố) bảo quản -20 oC để thực tinh độc tố 2.2.5 Phương pháp sản xuất vắc xin giải độc tố Nghiên cứu, sản xuất vắc xin giải độc tố (CLOSTOXOI I.VAC) phòng bệnh viêm ruột hoại tử vi khuẩn Clostridium perfringens gây ra; đánh giá tiêu vơ trùng, an tồn, hiệu lực vắc xin động vật thay (chuột nhắt trắng) động vật (bò, dê, cừu) Độc tố sau giải độc đạt tiêu chuẩn vô trùng an toàn chuột tập trung để tiến hành phối hợp vắc xin giải độc tố với chất bổ trợ hydroxide aluminium (20 %) cho hàm lượng giải độc tố vắc xin gây miễn dịch đạt theo yêu cầu hiệu lực (1mg/liều) 2.2 Nguyên liệu Ra chai, bảo quản: Kiểm tra vô trùng, đạt yêu cầu tiến hành chai bảo quản oC 2.2.1 Đối tượng nghiên cứu Sử dụng chủng vi khuẩn C perfringens CV 135 typ D, thẩm định giống Trung tâm kiểm nghiệm thuốc thú y Trung ương I dùng sản xuất vắc xin 2.2.2 Các loại mơi trường, hóa chất Mơi trường sản xuất: Cooked Meat cải tiến, nước thịt gan cải tiến, Thioglycolate cải tiến, 2.2.6 Phương pháp kiểm nghiệm vắc xin giải độc tố Kiểm tra vô trùng Theo TCVN 8684:2011 “Vắc xin chế phẩm sinh học dùng thú y – Phép thử độ khiết” gồm nội dung sau: - Kiểm tra tạp nhiễm vi khuẩn 49 KHOA HỌC KỸ THUẬT THÚ Y TẬP XXVIII SỐ - 2021 ruột hoại tử vi khuẩn Clostridium perfringens gây bò, dê, cừu - Kiểm tra tạp nhiễm nấm mốc Kiểm tra vật lý Vắc xin đạt tiêu chuẩn vật lý phải đảm bảo yếu tố sau : - Tất chai vắc xin lơ phải có màu đồng - Vắc xin phải khơng có vật lạ ngoại trừ chất bổ trợ keo phèn lắng xuống đáy Kiểm tra an toàn hiệu lực Vắc xin giải độc tố Clostridium perfringens typ D kiểm nghiệm dựa theo tiêu chuẩn Châu Âu (EUROPEAN PHARMACOPOEIA 5.0.) vắc xin Clostridium perfringens dùng thú y TCCS 19:2019-IVRD tiêu chuẩn sở Phân viện thú y miền Trung kiểm nghiệm vắc xin giải độc tố (CLOSTOXOI I.VAC) phòng bệnh viêm 2.2.7 Phương pháp xử lý số liệu Các số liệu thu thập trình nghiên cứu xử lý phương pháp thống kê sinh học phần mềm Microsoft Excel 2010 III KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Kết kiểm tra vô trùng Kết kiểm tra vô trùng TCVN 8684:2011 “Vắc xin chế phẩm sinh học dùng thú y – Phép thử độ khiết” cho thấy tất 03 lô vắc xin sản xuất đạt tiêu chuẩn khiết, vô trùng sau kiểm tra loại môi trường: thạch máu, thạch nấm, nước thịt nước thịt yếm khí (bảng 3.1) Bảng 1: Kết kiểm tra tiêu khiết vacxin giải độc tố Nhiệt độ ủ mẫu Môi trường Số lượng Ngày theo dõi 50 Nhiệt độ phòng (20250C) 370 C Thạch máu Nước thịt Nước thịt gan yếm khí Thạch Sabouraud 3 3 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 10 - - - - 11 - 12 - 13 - 14 - Yêu cầu TCVN 8684:2011 - - - - Tiêu chuẩn - - - - KHOA HỌC KỸ THUẬT THÚ Y TẬP XXVIII SỐ - 2021 Kết kiểm tra vật lý vắc xin giải độc tố cho thấy: Tất chai vắc xin lơ có màu vàng đồng nhất, khơng có vật lạ ngoại trừ chất bổ trợ keo phèn lắng xuống đáy (Hình 1) Hình 1: Vacxin giải độc tố (CLOSTOXOI I.VAC) Như vậy, vắc xin giải độc tố đạt tiêu vô trùng vật lý theo TCVN 8684:2011 “Vắc xin chế phẩm sinh học dùng thú y – Phép thử độ khiết” tiêu chuẩn sở Phân viện thú y miền Trung 3.2 Kết kiểm tra an toàn vắc xin giải độc tố 3.2.1 Kết kiểm tra an toàn vắc xin chuột nhắt trắng Dựa theo tiêu chuẩn sở kiểm nghiệm vắc xin giải độc tố C perfringens typ D sử dụng thú y, kiểm tra an toàn vắc xin cách tiêm 0,7 ml vắc xin cho chuột nhắt trắng, trọng lượng từ 18 g – 22 g vào da, theo dõi biểu lâm sàng chuột vòng ngày Kết kiểm tra an tồn lơ vắc xin trình bày bảng 3.2 Bảng 3.2: Kết kiểm tra an toàn vacxin chuột nhắt trắng Lô vacxin Liều vacxin (ml) Số chuột tiêm (con) Đường tiêm Sau ngày Kết 1/2020 0,7 Duới da Bình thường Đạt 2/2020 0,7 Duới da Bình thường Đạt 3/2020 0,7 Duới da Bình thường Đạt Kết bảng 3.2 cho thấy sau ngày tiêm vắc xin giải độc tố, tất chuột thí nghiệm khỏe mạnh bình thường, khơng có biểu bất thường Như 03 lô vắc xin sản xuất đạt tiêu an tồn, vơ độc chuột thí nghiệm 3.2.2 Kết kiểm tra an toàn vắc xin động vật Vắc xin tiêm da với liều gấp đơi liều sử dụng Theo dõi tình trạng sức khỏe bị, dê cừu thí nghiệm thời gian 10 ngày Kết kiểm tra an toàn lơ vắc xin sản xuất năm 2020 trình bày bảng 3.3 51 KHOA HỌC KỸ THUẬT THÚ Y TẬP XXVIII SỐ - 2021 Bảng 3.3: Kết kiểm tra an tồn vacxin bị, dê, cừu Số động vật tiêm Đường tiêm Sức khỏe động vật sau 10 ngày Kết Duới da Khỏe mạnh Đạt con Duới da Khỏe mạnh Đạt 2con Duới da Khỏe mạnh Đạt Lô vacxin Bò Dê Cừu 1/2020 con 2/2020 3/2020 Kết kiểm tra cho thấy bị, dê cừu tiêm vắc xin khơng có biểu bất thường, khơng sốt, giảm ăn hay phản ứng cục vị trí tiêm; tất bị, dê cừu lơ thí nghiệm khỏe mạnh sau 10 ngày theo dõi Kết cho phép kết luận lô vắc xin đạt tiêu an toàn động vật 3.3 Kết kiểm tra hiệu lực vắc xin giải độc tố 3.3.1 Kết kiểm tra hiệu lực vắc xin giải độc tố chuột nhắt trắng Kết kiểm tra hiệu lực lô vắc xin thể bảng 3.4 Bảng 3.4: Kết kiểm tra hiệu lực lô vacxin chuột nhắt trắng Lô vacxin 1/2020 2/2020 32020 Nhóm thí Nghiệm Liều vắcxin (ml) Đường tiêm Số chuột thử thách (con) Liều thử thách/con Đường tiêm Số chết (con) Tỷ lệ bảo hộ (%) Đối chứng - MLD TM Thí nghiệm 0,5 DD 10 MLD TM 100 Đối chứng - 10 MLD TM Thí nghiệm 0,5 DD MLD TM 100 Đối chứng - MLD TM Thí nghiệm 0,5 DD 10 MLD TM 100 Ghi chú: DD: Dưới da; TM: Tĩnh mạch Kết kiểm tra hiệu lực lô vắc xin bảng 3.4 cho thấy: Nhóm chuột đối chứng (khơng tiêm vắc xin) có 5/5 chuột chết (100 %) sau thử thách độc tố liều MLD/chuột Đối với nhóm miễn dịch, chuột tiêm liều 0,5 ml vắc xin giải độc tố/con, sau thử thách độc tố liều MLD/chuột, khơng có chuột chết chứng tỏ vắc xin giải độc tố có khả bảo hộ chuột khỏi tác động gây bệnh độc tố với liều Đồng thời khẳng định việc bất hoạt độc tố formalin khơng làm tính kháng ngun giải độc tố Kết cho phép kết luận 03 lô vắc xin giải độc tố đạt tiêu hiệu lực động vật thí nghiệm Kết nghiên cứu tương tự kết nghiên cứu 52 Oyston cs., (1998) Nhóm tác giả thực thí nghiệm đánh giá đáp ứng miễn dịch vắc xin giải độc tố epsilon (vắc xin tái tổ hợp, sử dụng chủng đột biến H106P) chuột phương pháp công cường độc Kết cho thấy, sau thử thách liều 1500 LD50 độc tố epsilon, chuột gây miễn dịch sống khỏe mạnh bình thường, đó, chuột đối chứng không gây miễn dịch chết 100% 3.3.2 Kết kiểm tra hiệu lực vắc xin giải độc tố động vật Kiểm tra hiệu lực vắc xin giải độc tố dê thực Sau tiêm vắc xin 21 ngày, động vật nhóm thí nghiệm thử thách độc tố C perfringens typ D hoạt hóa trypsin với KHOA HỌC KỸ THUẬT THÚ Y TẬP XXVIII SỐ - 2021 liều 6,5 MLD chuột/kg thể trọng theo đường tiêm tĩnh mạch với nhóm đối chứng khơng tiêm vắc xin Theo dõi triệu chứng lâm sàng vòng 10 ngày Kết trình bày bảng 3.5 Bảng 3.5: Kết kiểm tra hiệu lực vacxin dê Lô vacxin Bản động vật 01/2021 Dê 02/2021 Dê 02/2021 Dê Nhóm thí nghiệm Liều vacxin (ml) Số thử thách (con) Liều tiêm (MLDc/kg thể trọng) Đường tiêm Số chết (con) ĐC 6,5 TM 2/2 TN 6,5 TM 0/5 100 ĐC 6,5 TM 2/2 Tỷ lệ bảo hộ (%) TN 6,5 TM 0/5 100 ĐC 6,5 TM 2/2 TN 6,5 TM 0/5 100 Ghi chú: ĐC: Đối chứng; TN: Thí nghiệm; TM: Tĩnh mạch Kết bảng 3.5 cho thấy: Ở nhóm dê đối chứng (kháng thể kháng độc tố epsilon âm tính): Sau thử thách dê bắt đầu có triệu chứng: ủ rũ, ăn ít, sốt (39,5 C): sau dê run rẩy, húc đầu vào tường, co giật mạnh toàn thân, kêu rống, bốn chân co giật mạnh, sau nằm liệt, sùi bọt mép chết sau - (Hình 2.1) Mổ khám cho thấy bệnh tích chủ yếu tập trung phổi: khí quản chứa đầy bọt khí (Hình 2.4), phổi tụ huyết chứa đầy bọt khí (Hình 2.3), gan sưng nhẹ (Hình 2.2) Hình 2: Kết mổ khám dê nhóm đối chứng Ghi chú: Hình 2.1 Dê đối chứng chết sau - giờ; Hình 2.2 Gan dê đối chứng sưng nhẹ; Hình 2.3 Phổi dê đối chứng tụ huyết chứa đầy bọt khí; Hình 2.4 Khí quản dê đối chứng chứa đầy bọt khí 53 KHOA HỌC KỸ THUẬT THÚ Y TẬP XXVIII SỐ - 2021 Triệu chứng bệnh tích dê đối chứng thử thách độc tố nghiên cứu tương tự với kết nhóm tác giả Niilo cs., (1963), Uzal cs., (1997, 1998, 2002) Các nghiên cứu cho thấy thử thách độc tố epsilon bò, dê đường tiêm tĩnh mạch triệu chứng thần kinh điển hình xuất sớm sau gây nhiễm từ - 60 phút kéo dài vòng 70 - 110 phút tùy theo liều tiêm Biến đổi bệnh lý cho điển hình gồm não, phổi bị phù nặng, có nhiều bọt khí làm tắt đường thở; hoại tử niêm mạc manh tràng Kết thử thách phương pháp cơng cường độc nhóm dê miễn dịch, sau 15 ngày theo dõi tất dê khỏe mạnh, phát triển bình thường Như vậy, với liều 2ml vắc xin/con, vắc xin giải độc tố bảo hộ 5/5 dê thí nghiệm lơ vắc xin Kết nghiên cứu chủng phù hợp với nghiên cứu vắc xin giải độc tố epsilon Chandran cs., (2010) Nhóm tác giả chứng minh vắc-xin có giải độc tố epsilon sử dụng chất bổ trợ keo phèn (nhơm hydroxit) có khả kích thích sinh miễn dịch đặc hiệu chống lại bệnh viêm ruột hoại tử cừu gia súc Nghiên cứu nhóm tác giả Lobato cs., (2010), vắc xin tái tổ hợp dựa độc tố epsilon Clostridium perfringens typ D chứng minh hiệu đáp ứng miễn dịch tốt thỏ, gia súc, dê, cừu, hiệu giá kháng thể đạt 40, 14.3, 26 13.1 IU/m Trong nghiên cứu khác nhóm tác giả Kennedy cs., (1977) chứng minh sau tiêm vắc xin giải độc tố, kết hợp giải độc tố chủng vi khuẩn Clostridium perfringens typ C Clostridium perfringens typ D cho gia súc cừu, vắc xin có khả kích thích sinh miễn dịch đặc hiệu, hiệu giá kháng thể kháng độc tố cao tiến hành tiêm vắc xin nhắc lại lần sau lần từ – tuần Kết đánh giá đáp ứng miễn dịch vắc xin giải độc tố (CLOSTOXOI I.VAC) dê chúng tơi chứng minh sau 21 ngày tiêm phịng, vắc xin có khả kích thích sinh miễn dịch đặc hiệu, bảo hộ 100% động vật thí nghiệm tiêm vắc xin Như vậy, vắc xin đạt hiệu tốt việc phòng bệnh viêm ruột hoại tử vi khuẩn Clostridium perfringens gây gia súc Hình 3: Dê miễn dịch khỏe mạnh sau 15 ngày công cường độc IV KẾT LUẬN 03 lô vắc xin giải độc tố (CLOSTOXOI I.VAC) phòng bệnh viêm ruột hoại tử vi khuẩn Clostridium perfringens gây bò, dê, cừu đạt tiêu vật lý vô trùng theo TCVN 8684:2011 Kiểm tra an 54 tồn chuột nhắt trắng bị, dê, cừu cho thấy tất động vật tiêm vắc xin khỏe mạnh Kết kiểm tra hiệu lực phương pháp công cường độc chuột nhắt trắng dê cho thấy vắc xin có khả bảo hộ 100% động vật thí nghiệm Như vậy, KHOA HỌC KỸ THUẬT THÚ Y TẬP XXVIII SỐ - 2021 vắc xin giải độc tố (CLOSTOXOI I.VAC) cấp phép lưu hành với mã số TW IV-35, ngày 28 tháng 10 năm 2020 Phân viện thú y miền Trung đạt yêu cầu chất lượng, hiệu đáp ứng miễn dịch cao TÀI LIỆU THAM KHẢO TCVN 8684, 2011 “Vắc xin chế phẩm sinh học dùng thú y – Phép thử độ khiết” TCCS 19: 2019/IVRD: Tiêu chuẩn sở kiểm nghiệm vắc xin giải độc tố (CLOSTOXOI I.VAC) phòng bệnh viêm ruột hoại tử vi khuẩn Clostridium perfringens gây trâu, bò, dê, cừu Phân viện Thú y miền Trung Tổng Cục Thống kê, 2021 Thống kê chăn nuôi Việt Nam số lượng đầu sản phẩm gia súc, gia cầm, https://www.gso.gov.vn/nong-lam-nghiep-vathuy-san/, truy cập 01/01/2021 Alouf, J E., Jolivet-Reynaud, C., 1981 Purification and characterization of Clostridium perfringens delta toxin Infect.Immun 536-546 Chandran D, Naidu SS, Sugumar P, Rani GS, Vijayan SP, Mathur D, 2010 Development of a recombinant epsilon toxoid vaccine against enterotoxemia andits use as a combination vaccine with live attenuated sheep pox virus against enterotoxemia and sheep pox Clin Vaccine Immunol 17: 1013– 1016 Immunogenicity of a Trivalent Recombinant Vaccine Against Clostridium perfringens Alpha, Beta, and Epsilon Toxins in Farm Ruminants Sci Rep 23, 22816 12 Niilo L, Moffatt RE, Avery RJ, 1963 Bovine ‘‘enterotoxemia’’ II Experimental reproduction of the disease Can Vet J 4:288–29 13 Lobato, F C., Lima, C G., Assis, R A., Pires, P S., Silva, R O., Salvarani, F M., & Kalapothakis, E., 2010 Potency against enterotoxemia of a recombinant Clostridium perfringens type D epsilon toxoid in ruminants Vaccine, 28(38), 6125-6127 14 Oyston PCF, Payne DW, Havard HL, Williamson ED, Titball RW, 1998 Production of a non-toxic sitedirected mutant of Clostridium perfringens epsilontoxin which induces protective immunity in mice Microbiology.144:333–41 15 Vance, H.N., 1967 Clostridium perfringens as a pathogen of cattle: a literature review Canadian journal of comparative medicine and veterinary science 31(10), p.248 16 Schäfer, K.; Wyder, M.; Gobeli, S.; Candi, A.; Doherr, M.G.; Zehnder, B.; Zimmermann, W.; Posthaus, H., 2012 Detection of Clostridium perfringens type C in pig herds following disease outbreak and subsequent vaccination Vet Rec 171, 503 EUROPEAN PHARMACOPOEIA 5.0., 2005 Clostridium perfringens vaccine for veterinary use 0363, 747-749 17 Songer, J G., 1996 Clostridial enteric diseases of domestic animals Clinical Microbiology Reviews 9(2): 216–234 Ferreira, Marcos R.A.; Moreira, Gustavo M.S.G.; Cunha, Carlos E.P.d.; Mendonỗa, Marcelo; Salvarani, Felipe M.; Moreira, ngela N.; Conceiỗóo, Fabricio R., 2016 Recombinant Alpha, Beta, and Epsilon Toxins of Clostridium perfringens: Production Strategies and Applications as Veterinary Vaccines” Toxins 8, no 11: 340 18 Springer, S.; Selbitz, H.J., 1999 The control of necrotic enteritis in sucking piglets by means of a Clostridium perfringens toxoid vaccine FEMS Immunol Med Microbiol 24, 333–336 19 Titball, R.W., 2009 Clostridium perfringens vaccines Vaccine 27, D44–D47 Goossens, E., Valgaeren, B.R., Pardon, B et al., 2017 Rethinking the role of alpha toxin in Clostridium perfringens-associated enteric diseases: a review on bovine necro-haemorrhagic enteritis Vet Res 48, 20 Uzal, F A., Nielsen, K., & Kelly, W R., 1997 Detection of Clostridium perfringens typ D epsilon antitoxin in serum of goats by competitive and indirect ELISA Vet Microbiol 57, 223-231 Kennedy KK, Norris SJ, Beckenhauer WH, White RG, 1977 Vaccination of cattle and sheep with a combined Clostridium perfringens types C and D toxoid American Journal of Veterinary Research 38(10):1515-1517 21 Uzal, F A., Bodero, D A., Kelly, W R., & Nielsen, K., 1998 Variability of serum antibody responses of goat kids to a commercial Clostridium perfringens epsilon toxoid vaccine Vet Rec 143, 472-474 10 Mollby, R., Holme, T., Nord, C E., Smyth, C J., Wadstrum, T., 1976 Production of Phospholipase C (Alpha-toxin), Haemolysins and Lethal Toxins by Clostridiurn perfringens Types A to D Journal of General Microbiology 96, 137-144 22 Uzal, F.A, W R Kelly, W E Morris, R.A Assis., 2002 Effects of intravenous injection of C perfringens typ D epsilon toxin in calves J Comp Path 2002 Vol 126, 71-75 11 Moreira, G.M.S.G.; Salvarani, F.M.; Da Cunha, C.E.P.; Mendonỗa, M.; Moreira, .N.; Gonỗalves, L.A.; Pires, P.S.; Lobato, F.C.F.; Conceiỗóo, F.R., 2016 Ngày nhận 1-6-2021 Ngày phản biện 26-6-2021 Ngày đăng 15-8-2021 55 ... tiêm phòng vắc xin phòng bệnh vi? ?m ruột hoại tử, tiến hành nghiên cứu chế tạo vắc xin giải độc tố epsilon C perfringens typ D phòng bệnh vi? ?m ruột hoại tử bò, dê, cừu 2.2.4 Phương pháp sản xuất độc. .. 2.2.5 Phương pháp sản xuất vắc xin giải độc tố Nghiên cứu, sản xuất vắc xin giải độc tố (CLOSTOXOI I.VAC) phòng bệnh vi? ?m ruột hoại tử vi khuẩn Clostridium perfringens gây ra; đánh giá tiêu vô... xin giải độc tố (CLOSTOXOI I.VAC) phòng bệnh vi? ?m ruột hoại tử vi khuẩn Clostridium perfringens gây trâu, bò, dê, cừu Phân vi? ??n Thú y miền Trung Tổng Cục Thống kê, 2021 Thống kê chăn nuôi Vi? ??t
