Khóa luận xây dựng mô hình và bước đầu đánh giá tác dụng chống huyết khối của cao giàu saponin tam thất hoang trên chuột thực nghiệm

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI KHOA Y – DƢỢC NGUYỄN THỊ GIANG XÂY DỰNG MƠ HÌNH VÀ BƢỚC ĐẦU ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG CHỐNG HUYẾT KHỐI CỦA CAO GIÀU SAPONIN TAM THẤT HOANG (Panax stipuleanatus H.Tsai et K.M.Feng) TRÊN CHUỘT THỰC NGHIỆM KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƢỢC HỌC Hà Nội - 2018 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI dP rm ac y, VN U KHOA Y – DƢỢC NGUYỄN THỊ GIANG XÂY DỰNG MƠ HÌNH VÀ BƢỚC ĐẦU ĐÁNH GIÁ an TÁC DỤNG CHỐNG HUYẾT KHỐI CỦA CAO GIÀU ne SAPONIN TAM THẤT HOANG ed ici (Panax stipuleanatus H.Tsai et K.M.Feng) oo lo fM TRÊN CHUỘT THỰC NGHIỆM Khóa : QH.2013.Y Ngƣời hƣớng dẫn : PGS.TS.DƢƠNG THỊ LY HƢƠNG Co py rig ht © Sc h KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƢỢC HỌC Hà Nội – 2018 PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma LỜI CẢM ƠN Đầu tiên, em xin gửi lời cám ơn đến toàn thể Ban chủ nhiệm Khoa Y Dược, dP rm ac y, VN U Đại học Quốc gia Hà Nội, Bộ môn Dược lý – Dược lâm sàng, Bộ môn Y Dược học sở tạo điều kiện cho em làm khóa luận tốt nghiệp Em xin chân thành cảm ơn thầy giáo khoa dìu dắt, giúp đỡ em hồn thành chương trình học tập suốt năm qua Em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến PSG.TS Dương Thị Ly Hương người ln tận tình hướng dẫn, tạo điều kiện giúp đỡ em hồn thành khóa luận Em xin gửi lời cảm ơn đến thầy cô Bộ môn Dược lí – Dược lâm sàng giúp đỡ em q trình thực khóa luận Em xin cảm ơn đề tài thuộc an chương trình Tây Bắc: “Ứng dụng giải pháp khoa học công nghệ để phát triển nguồn nguyên liệu tạo sản phẩm từ hai loài thuốc Sâm vũ diệp (Panax ne bipinnatifidus Seem.) Tam thất hoang (Panax stipuleanatus H.Tsai et K.M.Feng) vùng Tây Bắc”, mã số KHCN-TB.07C/13-18 tài trợ kinh phí để em thực nội ici dung nghiên cứu ed Cuối em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc tới gia đình, bạn bè người thân fM ln quan tâm, động viên giúp em hồn thành khóa luận lo Dù cố gắng, lần đầu làm nghiên cứu khó tránh khỏi thiếu sót, em mong nhận ý kiến đóng góp thầy để khố luận thêm oo hoàn thiện Hà Nội, tháng năm 2018 Sinh viên Nguyễn Thị Giang Co py rig ht © Sc h Em xin chân thành cảm ơn! PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma DANH MỤC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT Giải nghĩa Bơm điện tử Cyclooxygenase DMSO Dimethyl sulfoxide Heparin TLPT thấp HKTMS IC50 Heparin trọng lượng phân tử thấp κ - carrageenan Kappa – carrageenan LD50 Liều gây chết 50% đối tượng thử ( Lethal Dose 50%) TDD Tiêm da dP rm ac y, VN U Ký hiệu BĐT COX – Co py rig ht © Sc h oo lo fM ed ici ne an Huyết khối tĩnh mạch sâu Liều ức chế 50% đối tượng thử (Inhibitory Concentration 50%) PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma DANH MỤC HÌNH Tên hình Q trình đơng máu Sơ đồ tóm tắt q trình điều trị huyết khối tĩnh mạch Hình 1.3 Tam thất hoang (Panax stipuleanatus H T Tsai et K M Feng) 14 Hình 1.4 Hình 2.1 Hình 2.2 Hình 3.1 Saponin dẫn chất acid oleanolic Sơ đồ quy trình chiết xuất cao giàu hoạt chất từ tam thất hoang Sơ đồ tiến hành mô hình gây huyết khối chuột Huyết khối chuột gây ĸ-carrageenan tiêm phúc mạc 16 19 22 23 Hình 3.2 Phần trăm huyết khối chuột sau 24 gây huyết khối (A), 24 dP rm ac y, VN U STT Hình 1.1 Hình 1.2 Trang 48 gây huyết khối (B), 72 gây huyết khối (C) Phần trăm huyết khối 24 giờ, 48 giờ, 72 sau tiêm κcarrageenan 20mg/kg 25 Hình 3.4 Ảnh hưởng đường tiêm κ-carrageenan đến hình thành huyết khối 26 Hình 3.5 Ảnh hưởng nhúng nước đá đến hình thành huyết 27 Hình 3.6 khối Ảnh hưởng aspirin heparin đến hình thành huyết khối 28 Hình 3.7 Ảnh hưởng tam thất hoang đến hình thành huyết khối 30 fM Co py rig ht © Sc h oo lo chuột ed ici ne an Hình 3.3 PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng Các thuốc sử dụng dự phòng huyết khối Mức độ gây huyết khối đuôi chuột sau 24 giờ, 48 giờ, 72 Bảng 3.2 Ảnh hưởng thời gian nhúng đuôi nước đá đến phần trăm Bảng 3.3 huyết khối Ảnh hưởng aspirin heparin đến hình thành huyết khối Ảnh hưởng tam thất hoang đến hình thành huyết khối Trang 23 26 28 29 Co py rig ht © Sc h oo lo fM ed ici ne an Bảng 3.4 dP rm ac y, VN U STT Bảng 1.1 Bảng 3.1 PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN Huyết khối dP rm ac y, VN U 1.1 1.1.1 Định nghĩa 1.1.2 Phân loại .2 1.1.3 Cơ chế bệnh sinh huyết khối Phòng điều trị huyết khối 1.2 1.2.1 Phòng điều trị huyết khối tĩnh mạch 1.2.2 Phòng điều trị huyết khối động mạch 12 1.3 Tam thất hoang 14 an 1.3.1 Đặc điểm thực vật .14 ne 1.3.2 Phân bố .15 ici 1.3.3 Thành phần hóa học 15 ed 1.3.4 Tác dụng dược lý 16 fM CHƢƠNG 2: ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 18 Đối tƣợng nghiên cứu 18 2.2 Động vật nghiên cứu 18 2.3 Hóa chất 18 2.4 Thiết bị dụng cụ 19 oo Sc h 2.5 lo 2.1 Phƣơng pháp nghiên cứu 20 © 2.5.1 Xây dựng mơ hình huyết khối chuột κ-carrageenan 20 ht 2.5.2 Đánh giá tác dụng chống huyết khối tam thất hoang 21 rig 2.6 Phƣơng pháp phân tích số liệu 22 Co py CHƢƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 23 3.1 Kết 23 3.1.1 Xây dựng mơ hình huyết khối đuôi chuột ĸ-carrageenan 23 3.1.2 Xác định thuốc chứng dương 27 PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma 3.1.3 Tác dụng chống huyết khối tam thất hoang 29 3.2 Bàn luận 30 dP rm ac y, VN U 3.2.1 Mô hình gây huyết khối κ-carrageenan .30 3.2.2 Thuốc chứng dương 33 3.2.3 Tác dụng chống huyết khối tam thất hoang 35 3.2.4 Hạn chế nghiên cứu .37 KẾT LUẬN 38 Co py rig ht © Sc h oo lo fM ed ici ne an TÀI LIỆU THAM KHẢO PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma ĐẶT VẤN ĐỀ dP rm ac y, VN U Huyết khối nguyên nhân quan trọng dẫn đến tắc nghẽn mạch máu gây tử vong để lại di chứng nặng nề cho người bệnh [39] Huyết khối hình thành động mạch tĩnh mạch Huyết khối động mạch dẫn đến nhồi máu tim, tai biến mạch máu não đột quỵ Huyết khối tĩnh mạch thường gặp chi gây biến chứng thuyên tắc phổi dẫn đến tử vong đột ngột hội chứng hậu huyết khối với biểu loét, đau nhức giới hạn vận động chi Theo Global Burden of Disease Study năm 1997, có khoảng 6,3 triệu người toàn giới tử vong thiếu máu tim 4,4 triệu người tử vong đột quỵ [46] nguyên nhân hàng đầu gây gánh nặng bệnh tật Hoa Kỳ năm 2013 [42] Nhóm thuốc sử dụng chủ yếu thuốc chống đông thuốc ức chế kết tập tiểu cầu với thời gian liều dùng phải tuân thủ theo chế độ điều trị nghiêm an ngặt có hiệu Tuy nhiên, thuốc thường kèm theo tác dụng không mong muốn như: clopidogrel aspirin dùng đơn hay kết hợp ne có liên quan đến tăng nguy loét dày tá tràng [7, 49], sử dụng heparin có nguy gây chảy máu [7, 48] …Để hạn chế nhược điểm nói Y – Dược học ici nước giới có xu hướng quay trở với liệu pháp thiên nhiên ed Tam thất hoang có tên khoa học Panax stipuleanatus H.Tsai et K.M.Feng, fM họ Nhân sâm - Araliaceae, phân bố chủ yếu Hoàng Liên Sơn Các kết nghiên cứu phân tích tách chiết thành phần hóa học trước tam thất hoang oo lo phần thân rễ chứa nhiều saponin khung olean với hàm lượng tương đối cao, báo cáo tác dụng loài hạn chế, hầu hết nghiên cứu Sc h in vitro Nghiên cứu Lê Thị Tâm Nguyễn Thị Tuyết Trinh chứng minh phân đoạn n-butanol chứa nhiều saponin tam thất hoang có tác dụng chống kết tập tiểu cầu liều mg/mL [12] tác dụng chống đông liều – mg/mL ht © [15] in vitro Mà hình thành huyết khối lại phụ thuộc vào trình đơng máu hoạt hóa tiểu cầu, vậy, với tác dụng chống đông chống kết tập rig tiểu cầu in vitro phân đoạn n-butanol, liệu chúng có tác dụng chống huyết khối in vivo hay khơng? Để trả lời câu hỏi đó, chúng tơi tiến hành đề tài: “Xây dựng mơ Co py hình bước đầu đánh giá tác dụng chống huyết khối cao giàu saponin tam thất hoang chuột thực nghiệm” với mục đích : Xây dựng mơ hình gây huyết khối đuôi chuột nhắt κ-carrageenan Bước đầu đánh giá tác dụng chống huyết khối cao giàu saponin tam thất hoang mơ hình xây dựng PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Huyết khối 1.1.1 Định nghĩa dP rm ac y, VN U Huyết khối tình trạng bệnh lý phát động lan rộng bất hợp lý phản ứng đơng cầm máu thể, dẫn đến hình thành cục máu đơng lịng (tắc hồn tồn, bán tắc hay nghẽn mạch) Trong đó, tiểu cầu loạt protein đông máu (các yếu tố đông máu) góp phần hình thành cục máu đơng [44] 1.1.2 Phân loại Tuỳ theo loại huyết khối (tĩnh mạch, động mạch hay vi mạch) mà có khác thành phần huyết khối vai trò yếu tố khác hình thành huyết khối  Huyết khối động mạch ne an Thành phần chủ yếu cục máu đông huyết khối động mạch tiểu cầu, sau fibrin thành phần khác [40] Sự tổn thương thành mạch fM  Huyết khối tĩnh mạch ed đường, rối loạn lipid, hút thuốc … ici tăng hoạt hố tiểu cầu đóng vai trị chủ yếu tăng đơng, từ gây huyết khối động mạch Các yếu tố nguy thường gặp như: tăng huyết áp, đái tháo lo Thành phần huyết khối tĩnh mạch fibrin [40] Tăng đông oo giảm chất ức chế đông máu (như giảm antithrombin III, protein C, protein S ) tăng hoạt hố yếu tố đơng máu (như động mạch sau phẫu thuật, tai biến, Sc h sản khoa thối hóa yếu tố tổ chức ) ngun nhân gây huyết khối © tĩnh mạch Tình trạng bất động, nhiễm trùng, có thai làm tăng khả bị huyết khối tĩnh mạch bệnh nhân ht  Huyết khối vi quản rig Thường gặp bệnh nhân có hội chứng đơng máu rải rác lòng mạch py (DIC: Disseminated Intravasscular Coagulation), xuất huyết giảm tiểu cầu huyết khối (TTP: Thrombotic Thrombocytopenic Purpura) … Thường tình trạng Co tăng đông gây nên đa yếu tố: thành mạch, tiểu cầu, hoạt hố yếu tố đơng máu huyết tương PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma Nhận xét: Hình 3.6 cho ta thấy lơ aspirin heparin ức chế hình thành huyết khối κ-carrageenan gây so với nhóm chứng bệnh DMSO 0,1% với p