Khóa luận phân lập và xác định cấu trúc một số hợp chất lanostan triterpen từ phân đoạn diclomethan của nấm cổ cò ganoderma flexipes pat , họ ganodermataceae thu hái tại tây nguyên

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI KHOA Y DƯỢC ĐẶNG THỊ QUỲNH PHÂN LẬP VÀ XÁC ĐỊNH CẤU TRÚC MỘT SỐ HỢP CHẤT LANOSTAN TRITERPEN TỪ PHÂN ĐOẠN DICLOROMETHAN CỦA NẤM CỔ CÒ - GANODERMA FLEXIPES PAT., HỌ GANODERMATACEAE THU HÁI TẠI TÂY NGUYÊN KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƯỢC HỌC Hà Nội - 2019 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI rm ac y an dP ĐẶNG THỊ QUỲNH ,V NU KHOA Y DƯỢC fM ed ici ne PHÂN LẬP VÀ XÁC ĐỊNH CẤU TRÚC MỘT SỐ HỢP CHẤT LANOSTAN TRITERPEN TỪ PHÂN ĐOẠN DICLOROMETHAN CỦA NẤM CỔ CÒ - GANODERMA FLEXIPES PAT., HỌ GANODERMATACEAE THU HÁI TẠI TÂY NGUYÊN Sc ho ol o KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƯỢC HỌC TS Nguyễn Hữu Tùng Co p yri g ht @ Khóa : QH.2014.Y Người hướng dẫn: TS Nguyễn Thị Duyên Hà Nội - 2019 PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma Hà Nội, ngày 10 tháng 05 năm 2019 Sinh viên Đặng Thị Quỳnh Co p yri g ht @ Sc ho ol o fM ed ici ne an dP rm ac y ,V NU LỜI CẢM ƠN Đề tài “Phân lập xác định cấu trúc số hợp chất lanostan triterpen từ phân đoạn diclomethan Nấm cổ cò - Ganoderma flexipes Pat., họ Ganodermataceae thu hái Tây Nguyên” kết cho qúa trình học tập, rèn luyện em Khoa Y - Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội q trình nghiên cứu, thực tập Khoa Hóa Thực vật, Viện Dược liệu Trong thời gian thực khóa luận tốt nghiệp này, em nhận giúp đỡ tận tình q thầy cơ, gia đình bạn bè Qua em xin gửi lời cảm ơn chân thành tới: TS Nguyễn Thị Duyên - Khoa Hóa Thực Vật - Viện Dược liệu, TS Nguyễn Hữu Tùng - Khoa Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội, trực tiếp bảo, hướng dẫn em hoàn thành đề tài khóa luận Lãnh đạo, thầy cơng tác Khoa Y - Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội giúp đỡ, hướng dẫn, tạo điều kiện để em học tập, nghiên cứu Khoa suốt năm học qua Em xin gửi lời cảm ơn đến Ban lãnh đạo Viện Dược liệu, đặc biệt cán bộ, nhân viên khoa Hóa Thực vật giúp đỡ em trình thực đề tài Gia đình, bạn bè, người ln quan tâm, giúp đỡ, động viên, tạo điều kiện cho em suốt thời gian học tập, nghiên cứu vừa qua Dù nhận hướng dẫn giúp đỡ từ nhiều nguồn kiến thức thời gian cịn hạn chế nên báo cáo khơng thể tránh khỏi thiếu sót Em mong nhận thơng cảm ý kiến đóng góp q thầy cơ, bạn bè để khóa luận em hoàn thiện Em xin chân thành cảm ơn! PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma ,V NU DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT TRONG LUẬN VĂN Các phương pháp sắc ký Column Chromatography High Performance Liquid Chromatography TLC Thin Layer Chromatography Các phương pháp phổ H-NMR 13 Proton Nuclear Magnetic Resonance Spectroscop Carbon-13 Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy Distortionless Enhancement by Polarisation Transfer Electron Spray Ionization Mass Spectrometry C-NMR Sắc ký mỏng Phổ cộng hưởng từ hạt nhân proton Phổ cộng hưởng từ hạt nhân carbon 13 an dP Sắc ký cột thường Sắc ký lỏng hiệu cao rm ac y CC HPLC DEPT ed ici ne ESI-MS HMBC Heteronuclear Multiple Bond Correlation Heteronuclear Single Quantum Coherence Mass Spectroscopy Ultra Violet - Visible fM HSQC MS UV-Vis Phổ DEPT Phổ khối ion hóa phun mù điện tử Phổ tương tác dị hạt nhân qua nhiều liên kết Phổ tương tác dị hạt nhân qua nhiều liên kết Phổ khối Phổ tử ngoại yri g ht @ DCM DL/DM DNCC ENCC EtOAc MeOH WNCC Sc ho ol o Các loại dung môi, phân đoạn dịch chiết Diclomethan Dược liệu/Dung mơi Phân đoạn diclomethan nấm Cổ cị Phân đoạn etyl acetat nấm Cổ cò Etyl acetat Methanol Phân đoạn nước nấm Cổ cò Các ký hiệu sinh học Co p AChE AD AIDS Acetylcholinesterase Alzheimer Acquired Immuno Deficiency Syndrom Hội chứng trí nhớ Hội chứng suy giảm miễn dịch mắc phải PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma Enzyme Catalase Deoxyribonucleic acid Effective dose 50% m/z Mp STT TLTK v/v VKH&CNVN Khối lượng/điện tích Melting Point Điểm nóng chảy Số thứ tự Tài liệu tham khảo Thể tích/ Thể tích Viện Khoa học Công nghệ Việt Nam ,V NU CAT DNA ED50 Co p yri g ht @ Sc ho ol o fM ed ici ne an dP rm ac y Liều có hiệu 50% động vật thí nghiệm ERK Extracellular signal - regulated Kinase điều hịa tín hiệu kinases ngoại bào FGFR Fibroblast growth factor Yếu tố tăng trưởng nguyên receptor bào sợi GPx Enzyme Glutathione Peroxidase HBV Hepatitis B virus HIV Human immunodeficiency virus HSV Virus herpes simplex IC50 Half maximal inhibitory Nồng độ ức chế 50% concentration NPC Neural progenitor cell Tế bào tiền thân thần kinh Nrf2 Nuclear factor (erythroidYếu tố hạt nhân có nguồn gốc từ erythroid derived 2)-like RNA Ribonucleic acid ROS Reactive oxygen species Gốc tự oxy hóa SOD Superoxide dismutase Enzyme xúc tác q trình phân hủy superoxide Các ký hiệu viết tắt khác PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma DANH MỤC CÁC BẢNG Tên bảng Trang Bảng 1.1 Một số triterpen nhóm I phân lập từ chi Ganoderma Bảng 1.2 Một số triterpen nhóm II phân lập từ chi Ganoderma Bảng 1.3 Một số triterpen nhóm III phân lập từ chi Ganoderma Bảng 1.4 Một số sterol phân lập từ chi Ganoderma rm ac y Kết tra cứu tài liệu tham khảo tính đến tháng 7/2018 17 Dữ liệu phổ hợp chất NCC03 NCC06 31 Co p yri g ht @ Sc ho ol o fM ed ici ne an dP Bảng 1.5 Bảng ,V NU Bảng PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma DANH MỤC CÁC HÌNH Tên hình Trang ,V NU Hình Hình 1.1 Cấu trúc Triterpen nhóm I Hình 1.2 Cấu trúc Triterpen nhóm II rm ac y Hình 1.3 Cấu trúc Triterpen nhóm III Hình 1.4 Nấm cổ cị – Ganoderma flexipes Pat., thu Tây Nguyên Hình Nguyên liệu nấm Cổ cò - Ganoderma flexipes Pat 16 19 24 Hình 3.2 Sắc ký đồ TLC cao tổng cao phân đoạn nấm Cổ cị 25 Hình 3.3 Sơ đồ phân lập hợp chất từ cao nấm Cổ cị phân đoạn DCM 27 Hình 3.4 Kết chạy HPLC kiểm tra độ tinh khiết hợp chất NCC03 NCC06 28 Hình 3.5 Cấu trúc hóa học hợp chất NCC03 30 Hình 3.6 Cấu trúc hóa học hợp chất NCC06 31 Co p yri g ht @ Sc ho ol o fM ed ici ne an dP Hình 3.1 Sơ đồ chiết xuất phân đoạn nấm Cổ cò PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma ,V NU MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT TRONG LUẬN VĂN DANH MỤC CÁC BẢNG rm ac y DANH MỤC CÁC HÌNH ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan chi Ganoderma an dP 1.1.1 Vài nét thực vật chi Ganoderma 1.1.2 Thành phần hóa học ed ici ne 1.1.2.1.Triterpen/ Triterpenoid 1.1.2.2.Sterol 1.1.2.3.Polysaccharit 1.1.3 Tác dụng sinh học 10 fM 1.1.3.1.Tác dụng gây độc tế bào chống ung thư 10 Sc ho ol o 1.1.3.2.Tác dụng chống oxi hóa, bảo vệ gan 12 1.1.3.3.Tác dụng kháng virut 13 1.1.3.4.Tác dụng kháng vi khuẩn, kháng nấm 13 1.1.3.5.Tác dụng hệ thần kinh 14 1.2 @ 1.1.3.6.Tác dụng khác 15 Tổng quan đối tượng nghiên cứu - Nấm Cổ cò 15 ht CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 19 Đối tượng nghiên cứu 19 2.2 Hóa chất, thiết bị 19 Co p yri g 2.1 2.2.1 Hóa chất, dung môi 19 2.2.2 Thiết bị 19 PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma ,V NU 2.3 Phương pháp chiết xuất phân lập xác định cấu trúc hợp chất tinh khiết 20 2.3.1 Phương pháp chiết xuất phân lập 20 2.3.2 Phương pháp xác định nhận dạng cấu trúc 21 rm ac y CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 24 3.1 Chiết phân đoạn nấm Cổ cò phân lập hợp chất từ cao phân đoạn diclomethan 24 3.1.1 Kết chiết phân đoạn nấm Cổ cò 24 an dP 3.1.2 Kết phân lập hợp chất tinh khiết từ cao phân đoạn diclomethan nấm Cổ cò 26 3.1.3 Kết kiểm tra độ tinh khiết 27 Biện luận cấu trúc hợp chất NCC03 NCC06 28 ed ici ne 3.2 3.2.1 Hợp chất NCC03 28 3.2.2 Hợp chất NCC06 30 Bàn luận 32 fM 3.3 3.3.1 Về chiết xuất 32 Sc ho ol o 3.3.2 Về phân lập, tinh chế nhận dạng cấu trúc hợp chất 33 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 35 Kết luận 35 Kiến nghị 35 @ TÀI LIỆU THAM KHẢO Co p yri g ht PHỤ LỤC PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma ĐẶT VẤN ĐỀ rm ac y ,V NU Cùng với tiến khoa học – kỹ thuật, xu hướng quay với thiên nhiên, tìm phương thuốc truyền thống dân gian ngày quan tâm, phát triển Dược thảo thiên nhiên ngày đóng vai trị quan trọng phịng, chữa bệnh nâng cao sức khoẻ Trong đó, việc tìm loại dược liệu có nguồn gốc thiên nhiên để chữa bệnh hiểm nghèo sở khoa học có ý nghĩa vơ to lớn [10] ed ici ne an dP Nấm Linh chi loại dược liệu quý y học cổ truyền Với thành phần hóa học có chứa polysaccharit (giàu β-glucan), triterpenoid, steroid, saponin…, nấm Linh chi ghi nhận có tác dụng phòng chống ung thư, tăng cường hệ miễn dịch, giải độc gan, hỗ trợ điều trị tiểu đường, giảm cholesterol máu… Chính thế, nhu cầu sử dụng nấm Linh chi phòng ngừa điều trị bệnh lớn, khơng Việt Nam, mà cịn nhiều nơi giới Nhật Bản, Trung Quốc, Hàn Quốc, Đài Loan, Malaysia, Thái Lan,…[9] yri g ht @ Sc ho ol o fM Theo Nấm linh chi - Tài nguyên dược liệu quý Việt Nam Nhà xuất Khoa học kỹ thuật, nước ta có khoảng 80 lồi nấm Linh chi, chiếm khoảng 1/3 số lồi giới với khơng loài mới, đặc hữu [7] Riêng Vườn Quốc gia Kon Ka Kinh thuộc khu vực Tây Nguyên, chi Ganoderma có 25 lồi, 10 lồi có tác dụng dược liệu Ganoderma tornatum, Ganoderma amboinense, Ganoderma gibbosum, Ganoderma capense, Ganoderma lobatum, Ganoderma applanatum, Ganoderma lucidum, Ganoderma flexipes, Ganoderma tropicum, Ganoderma cochlear, lồi cịn lại chưa biết rõ ý nghĩa [6] Do đó, nghiên cứu tài nguyên nấm Linh chi Việt Nam cơng trình có ý nghĩa mang lại hiệu to lớn cho người trồng nấm Tuy nhiên, hầu hết nghiên cứu (cả nước) chi Ganoderma dừng lại đối tượng Ganoderma lucidum Trong công bố số 10 lồi có tác dụng dược liệu Vườn Quốc gia Kon Ka Kinh, nấm Cổ cò - Ganoderma flexipes lại chưa nghiên cứu thành phần hóa học giá trị sử dụng Co p Vì vậy, để góp phần làm sáng tỏ thành phần hóa học Ganoderma flexipes, em thực đề tài “Phân lập xác định cấu trúc số hợp chất lanostan triterpen từ phân đoạn dicloromethan nấm Cổ cò PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma ,V NU rm ac y an dP ed ici ne fM Sc ho ol o @ ht yri g Co p PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma PHỤ LỤC BỘ PHỔ CỦA HỢP CHẤT NCC03 d n a e n i c i ed V , y c a m r a h P Cấu trúc hóa học hợp chất NCC03 M f o (3β-Acetoxyl- lanosta-7,9(11),24-triene-26-ol) l o o @ t h U N h c S g i r y p Co PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the watermark U N d n a e n i c i ed l o o @ t h V , y c a m r a h P M f o h c S Phổ khối ESI-MS hợp chất NCC03 g i r y p Co PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the watermark U N d n a e n i c i ed l o o @ t h g i r y p Co V , y c a m r a h P M f o h c S Phổ 1H-NMR hợp chất NCC03 PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the watermark U N d n a e n i c i ed l o o @ t h g i r y p Co V , y c a m r a h P M f o h c S Phổ 13C-NMR hợp chất NCC03 PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the watermark U N d n a e n i c i ed l o o @ t h g i r y p Co V , y c a m r a h P M f o h c S Phổ DEPT hợp chất NCC03 PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the watermark ,V NU rm ac y an dP ed ici ne fM Sc ho ol o @ ht yri g Co p Phổ HMBC hợp chất NCC03 PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma ,V NU rm ac y an dP ed ici ne fM Sc ho ol o @ ht yri g Co p Phổ HSQC hợp chất NCC03 PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma ,V NU rm ac y an dP ed ici ne fM Sc ho ol o @ ht yri g Co p PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma PHỤ LỤC BỘ DỮ LIỆU KHỐI PHỔ CỦA HỢP CHẤT NCC06 d n a e n i c i ed V , y c a m r a h P Cấu trúc hóa học hợp chất NCC06 M f o (lanostan-7,9(11),24-triene-3β,26-diol, ganodermadiol) l o o @ t h U N h c S g i r y p Co PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the watermark U N d n a e n i c i ed l o o @ t h h c S V , y c a m r a h P M f o Phổ khối ESI-MS hợp chất NCC06 g i r y p Co PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the watermark U N d n a e n i c i ed l o o @ t h g i r y p Co V , y c a m r a h P M f o h c S Phổ 1H-NMR hợp chất NCC06 PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the watermark U N d n a e n i c i ed l o o @ t h g i r y p Co V , y c a m r a h P M f o h c S Phổ 13C-NMR hợp chất NCC06 PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the watermark U N d n a e n i c i ed l o o @ t h g i r y p Co V , y c a m r a h P M f o h c S Phổ DEPT hợp chất NCC06 PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the watermark ,V NU rm ac y an dP ed ici ne fM Sc ho ol o @ ht yri g Co p PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma ... 4 9,3 4 9,1 5 0,4 2 2,8 2 2,8 2 3,0 2 3,3 11 9,9 11 9,9 12 0,2 12 0,3 14 2,8 14 2,8 14 2,7 14 2,7 14 5,7 14 5,7 14 6,0 14 5,9 3 7,3 3 7,2 3 7,4 3 7,9 11 6,6 11 6,6 11 6,3 11 6,3 3 7,6 3 7,9 3 7,9 3 7,9 4 3,8 4 3,8 4 3,8 4 3,8 5,4 7... 5 0,9 5 0,9 5 0,9 5 0,9 0,5 7 (3H, s) 1 5,7 1 5,7 1 5,7 1 5,7 1,0 0 (3H, s) 2 2,8 3 6,1 2 2,8 3 6,1 2 2,8 3 6,1 2 2,8 3 6,1 1 8,4 1 8,4 3 6,0 3 6,0 2 4,6 2 4,6 5,4 0 (1H, t, 7,0 Hz) 12 7,0 12 7,0 13 4,4 - 13 4,4 13 4,3 6 9,1 ... 1,0 1(3H, s) 0,9 2 (3H, d, 6,5 ) 24 5,4 0 (1H, t, 7,0 Hz) 12 7,0 25 - 13 4,4 26 4,0 0 (2H, s) 6 9,1 27 1,6 7 (3H, s) 1 3,7 28 0,8 9 (3H, s) 2 8,1 2 8,1 H28→C3 0,8 8 (3H, s) 2 5,6 2 5,6 29 0,9 6 (3H, s) 1 6,9 1 6,9