KỸ THUẬT NHUỘM METHYLENE BLUE

Phân tích ý nghĩa của kỹ thuật nhuộm Methylene blue trong xét nghiệm mô bệnh học 2.. Diễn giải quy trình nhuộm kỹ thuật nhuộm Methylene blue 3.. Thuốc nhuộm cation, màng tế bào mang điện

Bài 7 : Kỹ thuật nhuộm Methylene blue

TS Dương Hồng Quân Trung tâm Xét nghiệm, Trường Đại học Y tế công cộng

Chuẩn đầu ra bài học

Sau khi học xong, sinh viên có khả năng :

1 Phân tích ý nghĩa của kỹ thuật nhuộm Methylene blue trong xét nghiệm mô bệnh học

2 Diễn giải quy trình nhuộm kỹ thuật nhuộm Methylene blue

3 Liệt kê các vấn đề cần lưu ý khi thực hiện kỹ thuật nhuộm Methylene blue và cách khắc phục

4 Thực hiện thao tác kỹ thuật nhuộm Methylene blue

Quy trình xét nghiệm mô bệnh học

Cố định bệnh phẩm

Chuyển mô

Lấy mẫu

bệnh phẩm,

cắt lọc

Vùi bệnh phẩm

Phân tích/trả kết quả, lưu

trữ Cắt, dán

mảnh Nhuộm

Nguyên tắc

1 Thuốc nhuộm cation, màng tế bào mang điện tích âm nên khi cho thuốc nhuộm gây ra hiện tượng bắt màu do sự kết hợp của hai loại điện tích trái dấu

Nhuộm Methylene blue

Nguyên tắc

- Phương pháp nhuộm đơn giản để quan sát hình dạng của tế bào, vi khuẩn

Nhuộm Methylene blue

Trang thiết bị, vật tư

a Trang thiết bị

- Tủ an toàn sinh học (ATSH) cấp 2

- Kính hiển vi quang học

- Máy ly tâm

- Máy trộn, lắc

- Ống vô trùng có nắp đậy

- Đèn cồn, que cấy, lam kính, lá kính mỏng, dầu soi kính, giấy thấm dầu

- Pipet Pasteur vô trùng

Nhuộm Methylene blue

Trang thiết bị, vật tư

b Sinh phẩm hóa chất: thuốc nhuộm Methylene blue

Nhuộm Methylene blue

Tiến hành

a Nhuộm đơn giản

- Làm tiêu bản:

+ Chuẩn bị lam kính sạch, không xước vỡ, nhúng vào dung dịch ethanol 95% + Sử dụng kẹp gắp lam kính, để ráo cồn, hơ lam kính trên ngọn lửa đèn cồn

+ Dán nhãn thông tin mẫu bệnh phẩm

+ Dùng bút viết kính khoanh tròn, đánh dấu vị trí phết bệnh phẩm ở mặt dưới lam kính

+ Dàn tiêu bản theo hình xoáy trôn ốc hoặc hình zích zắc

Nhuộm Methylene blue

- Cố định tiêu bản:

+ Để lam kính lên máy sấy lam ở 60C đến khi tiêu bản khô

+ Cố định bằng nhiệt: Đưa tiêu bản ngang qua ngọn lửa đèn cồn 2 - 3 lần, mỗi lần 5 - 10 giây Để tiêu bản nguội

+ Cố định bằng hóa chất: Nhỏ methanol phủ kín nơi dàn tiêu bản, để khô trong 1 phút, không hơ lửa

- Phủ thuốc nhuộm Xanh methylen duy trì 1 - 3 phút, rửa dưới vòi nước chảy nhẹ

- Làm khô tiêu bản trước khi soi kính

- Sử dụng vật kính dầu, quan sát hình thể vi khuẩn

Nhuộm Methylene blue

b Nhuộm tế bào

- Nhỏ một giọt bệnh phẩm lên lam kính

- Nhỏ 2 giọt thuốc nhuộm xanh methylen, trộn đều

- Đặt lamen lên vị trí đã trộn bệnh phẩm và thuốc nhuộm

- Để tiêu bản trong 2 - 3 phút

- Quan sát ở vật kính 10x và 40x

Nhuộm Methylene blue

Diễn giải kết quả và báo cáo

- Quan sát hình thể của vi khuẩn, tế bào

- Tế bào vi khuẩn bắt màu xanh trung tính trên nền xanh nhạt

- Tế bào bạch cầu xanh sáng, có nhân màu xanh đậm

- Đếm số lượng tế bào, tính trung bình trên 1 vi trường

Nhuộm Methylene blue

Nhuộm Methylene blue

Nhuộm Methylene blue

Câu 1: Phương pháp nhuộm nào sau đây có thể dùng để nhuộm tiêu bản tế bào học

A Nhuộm Giemsa

B Nhuộm Papanicolaou

C Nhuộm Methylene blue

D A, B và C đều đúng

Câu hỏi lượng giá

Câu 2: Phương pháp nhuộm nào sau đây không dùng để nhuộm tiêu bản tế bào học

A Nhuôm P.A.S

B Nhuộm Giemsa

C Nhuộm Papanicolaou

D Nhuộm Methylene blue

Câu hỏi lượng giá

Xin chân thành cảm ơn!

Tài liệu phải học

3 Bộ Y Tế Hướng dẫn thực hành kỹ thuật xét nghiệm vi sinh lâm sàng Nhà Xuất bản Y học, 2017 ( Trang 30-32 )