Nghiên cứu xác định thành phần và cấu tạo một số hợp chất hóa học trong tinh dầu từ cây ngãi cứu ở quảng nam

1 B GIÁO D C VÀ ĐÀO T O Đ I H C ĐÀ N NG Cơng trình đư c hoàn thành t i Đ I H C ĐÀ N NG NGUY N TH H NG Ngư i hư ng d n khoa h c: GS.TS Đào Hùng Cư ng Ph n bi n 1: GS.TSKH.Tr n Văn Sung NGHIÊN C U XÁC Đ NH THÀNH PH N VÀ C U T OM TS D UT H P CH T HÓA H C TRONG TINH CÂY NG I C U QU NG NAM Chuyên ngành: Hóa h u Mã s : 60.44.27 Ph n bi n 2: PGS.TS Trương Th Minh H nh Lu n văn ñã ñư c b o v t i H i ñ ng b o v ch m Lu n văn t t nghi p Th c sĩ Khoa h c h p t i Đ i h c Đà N ng vào ngày 30 tháng12 năm 2011 TÓM T T LU N VĂN TH C SĨ KHOA H C Có th tìm hi u lu n văn t i: - Trung tâm thông tin - H c li u - Đ i h c Đà N ng - Thư vi n trư ng Đ i h c Sư Ph m, Đ i h c Đà N ng Đà N ng - Năm 2011 M Đ i tư ng nghiên c u Đ U Lý ch n ñ tài Phương pháp nghiên c u Nư c ta có khí h u nhi t đ i m nên th m th c v t phong phú ña d ng Dân t c Vi t nam có truy n th ng s d ng 4.1 Nghiên c u lý thuy t 4.2 Phương pháp th c nghi m loài th o m c làm thu c ch a b nh Theo s li u th ng kê - L y m u, thu hái x lí m u m i nh t th m th c v t Vi t Nam có 12000 lồi, s có - Xác đ nh m t s ch tiêu hóa lý 3200 lồi th c v t ñư c s d ng làm thu c y h c dân gian - Phương pháp chưng c t lôi cu n nư c [1], [2], [8], [10] - Phương pháp chi t tách b ng dung môi h u Trong lo i th c v t đó, ng i c u m t v thu c thơng d ng đơng y ñ ng th i m t v thu c dân gian ñư c ph bi n r ng rãi c nư c, nh t gia đình nơng thơn, phịng - Xác đ nh thành ph n hóa h c c a tinh d u b ng phương pháp s c kí khí ghép kh i ph (GC/MS) - Xác ñ nh thành ph n hóa h c c a d ch chi t dung ch a nhi u ch ng b nh Dân gian thư ng s d ng ng i c u đ ch mơi h u (metanol, cloroform, hexan) b ng phương pháp s c kí khí bi n làm ăn rán tr ng gà v i ng i c u, n u c nh th t n c ghép kh i ph (GC/MS) v i ng i c u, ñ c bi t m i ngư i s d ng làm thu c ch a b nh Ý nghĩa khoa h c th c ti n c a ñ tài ñau ñ u, làm thu c ñi u kinh, rong kinh, ñ ng thai, s y thai, tăng C u trúc c a lu n văn s c kh e cho th , thi u máu, ho, viêm h ng, huy t áp th p, Đ làm sáng t nh ng công d ng c a ng i c u, tác gi lu n văn ch n ñ tài: “Nghiên c u xác ñ nh thành ph n c u t o m t s h p ch t hóa h c tinh d u t ng i c u Qu ng Lu n văn g m 75 trang, có 34 b ng 18 hình Ph n m đ u (4 trang), k t lu n ki n ngh (2 trang), tài li u tham kh o (2 trang) N i dung c a lu n văn chia làm chương Chương 1- T ng quan (21 trang) Chương 2- Nh ng nghiên c u th c nghi m (13 trang) Nam” M c đích nghiên c u - Xác ñ nh hàm lư ng, ch tiêu hóa lý m t s h p ch t hóa h c tinh d u ng i c u t nh Qu ng Nam - Xây d ng quy trình chi t tách m t s h p ch t hóa h c t d ch chi t ng i c u - Xác ñ nh thành ph n hóa h c, cơng th c c u t o c a m t s h p ch t d ch chi t Chương 3- K t qu bàn lu n (33 trang) 5 Chương I - T NG QUAN t bào ch t, làm m m da v t chai, giúp máu lưu thông m nh hơn, làm d u ñang b ñau ch b sưng hay viêm Ngoài ra, 1.1 KHÁI QUÁT V H CÚC & GI I THI U M T S Đ C ĐI M V CÂY NG I C U 1.1.2.4 1.1.1 Khái quát v h cúc 1.1.1.1 Phân b 1.1.1.3 1.2 Phân lo i khoa h c 1.1.1.2 Đ c tính th c v t Ng i c u có tên khoa h c Artemisia vulgris L Ngồi cịn có tên khác là: Ng i Di p, B c ng i, Nh ng i, Quá sú, Ng i, C linh chi 1.2.3 Vai trò 1.2.4 Cách s d ng 1.2.5 Tính ch t v t lí c a tinh d u 1.2.6 Thành ph n hóa h c ch y u c a tinh d u ñ bay 1.2.7 Ki m ñ nh cách b o qu n tinh d u 1.2.8 Đ nh lư ng tinh d u Gi i: Plantae 1.3 Ngành: Angiospermae LÝ THUY T V CHƯNG C T 1.3.1 Đ nh nghĩa L p: Magnoliidae 1.3.2 Nh ng nh hư ng s chưng c t nư c B : Cúc (Asterales) 1.3.3 Phân lo i H : cúc (Asteraceae) 1.3.4 Phương pháp chưng c t lôi cu n nư c Chi: Astemisia L 1.3.5 Các phương pháp ti n hành tách s c ký Loài: Artemisia vulgris L 1.3.6 Các phương pháp s c kí Đ c m v sinh thái 1.1.2.3 T NG QUAN V TINH D U 1.2.2 Phân lo i Đ c ñi m v th c v t 1.1.2.2 Y h c dân gian t ng i c u[12], [13] 1.2.1 Khái ni m 1.1.2 Gi i thi u m t s ñ c ñi m v ng i c u 1.1.2.1 cịn ăn hàng ngày c a ngư i Vi t Dư c tính c a ng i c u Chương 2: NGUYÊN LI U VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN C U Hi n Ng i c u m t v thu c thư ng dùng nhân dân Vi t Nam, ñư c dùng ch a tr b nh kinh nguy t khơng đ u, b ng l nh đau, t cung l nh khơng th có thai, th huy t, n c huy t, băng l u kinh nhi u, có thai, ñ i h ph n Tr m n tr ng cá, m n ng a, gh l , tăng s c kho cho th Ng i c u có th t y 2.1 NGUYÊN LI U 2.1.1 Thu m u cây, xác ñ nh tên khoa h c Nguyên li u ñ nghiên c u Ng i c u ñư c thu hái vào cu i tháng ñ u tháng năm 2011 t i huy n Đ i L c, t nh Qu ng Lá ng i c u non, ng i c u già Nam Cây Ng i c u cịn đư c g i Ng i Di p, B c ng i, Nh ng i, Quá sú, Ng i, C linh chi Có tên khoa h c Artemisia vulgris L, X lí thu c h Cúc Asteraceae [5] 2.1.2 X lý m u 2.2 HÓA CH T VÀ THI T B NGHIÊN C U Xác ñ nh ñ 2.2.1 Hóa ch t 2.2.2 Thi t b thí nghi m m Chi t b ng phương pháp chưng c t lôi cu n nư c Xác ñ nh hàm lư ng tro 2.3 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN C U 2.3.1 L y m u x lý m u + Ph n tươi (lá ng i c u non ng i c u già): dùng ñ xác ñ nh ñ Xác ñ nh hàm lư ng kim lo i Tinh d u Làm khan b ng Na2SO4 m, hàm lư ng, chưng c t lôi cu n nư c + Ph n khô: dùng đ chi t tách b ng dung mơi h u 2.3.2 Xác ñ nh ñ 2.3.2.1 Xác ñ nh ñ Xác ñ nh thành ph n, công th c c u t o c a h p ch t m, hàm lư ng tro, hàm lư ng kim lo i m c a nguyên li u Kh o sát y u t sát nh hư ng đ n q trình chưng c t trìn 2.3.2.2 Xác ñ nh hàm lư ng tro c a nguyên li u 2.3.2.3 Xác ñ nh hàm lư ng kim lo i Đo GC-MS 2.3.3 Nghiên c u chi t tách m t s h p ch t hóa h c Hình 2.5 Sơ đ chi t tách tinh d u ng i c u tinh d u ng i c u [9] 2.3.3.2 Kh o sát y u t 2.3.3.1 Chi t tách tinh d u Quy trình chi t tách tinh d u hình 2.5 nh hư ng đ n lư ng tinh d u 2.3.3.3 Xác ñ nh hàm lư ng tinh d u 2.3.3.4 Nghiên c u xác ñ nh thành ph n, c u t o m t s h p ch t tinh d u 2.3.4 Nghiên c u chi t tách m t s h p ch t hóa h c c a d ch chi t ng i c u dung môi 2.3.4.1 Phương pháp chi t 10 a Phương pháp chưng ninh b Phương pháp soxhlet 2.3.4.2 Kh o sát ch n dung môi chi t - Dung môi: butanol, etanol metanol a B ng phương pháp quang ph h p th phân t UV-VIS b B ng phương pháp phân tích tr ng lư ng 2.3.4.3 Kh o sát ñi u ki n chi t a B ng phương pháp chưng ninh a1 Kh o sát th i gian chi t a2 Kh o sát t l r n – l ng b B ng phương pháp chi t soxhlet b1 Kh o sát th i gian chi t b2 Kh o sát t l r n-l ng 2.3.4.3 Xác ñ nh thành ph n c u t o m t s h p ch t Hình 2.6 Quy trình chi t tách h p ch t dung môi d ch chi t S d ng phương pháp phân tích s c ký khí - kh i ph (GC/MS) đ phân tích xác đ nh thành ph n, c u t o m t s h p ch t d ch chi t Quy trình chi t tách m t s h p ch t hóa h c ng i Chương K T QU VÀ TH O LU N 3.1 XÁC Đ NH Đ M, HÀM LƯ NG TRO VÀ HÀM LƯ NG KIM LO I 3.1.1 Xác ñ nh ñ m Đ m trung bình c a ng i c u non 84,33% Đ c u b ng dung môi h u cơ, ñư c th c hi n theo sơ ñ hình 2.6 m trung bình c a ng i c u già 80,89% 3.1.2 Hàm lư ng tro Đ tro trung bình c a ng i c u non 13,92% Đ tro trung bình c a ng i c u già 15,24% 3.1.3 Hàm lư ng kim lo i Thu x lý nguyên li u Căn c vào quy t ñ nh s 867/1998/ QĐ-BYT ngày 04 tháng năm 1998 c a B y t v vi c ban hành danh m c “Tiêu B t ng i c u 12 11 chu n v sinh ñ i v i lương th c th c ph m”, ñ i chi u v i m c hàm B ng 3.8.Th tích tinh d u ng i c u già không xay lư ng kim lo i cho phép rau qu thành ph n kim lo i n ng Th i gian (h) ng i c u nghiên c u nh nhi u so v i hàm lư ng t i ña Vtinh d u(ml) 0,3 0,7 0,9 1,0 1,0 1,0 cho phép nên s d ng, an tồn, khơng nh hư ng ñ n s c kho ngư i * Nguyên li u xay nh : B ng 3.9 K t qu kh o sát th tích tinh d u ng i c u non xay nh 3.2 K T QU NGHIÊN C U CHI T TÁCH TINH D U Th i gian (h) 3.2.1 Tính ch t c m quan c a tinh d u ng i c u non Vtinh d u(ml) 0,4 0,6 0,9 1,1 1,1 1,1 ng i c u già: Tinh d u thu ñư c theo phương pháp chưng c t lôi cu n nư c t ng i c u non ng i c u già ñ u có màu màu vàng nh t, mùi h c, v cay, nh nư c, không tan nư c nh hư ng ñ n hàm lư ng 3.2.2 K t qu kh o sát y u t 3.2.2.1 K t qu kh o sát nguyên li u không xay nguyên li u xay: Ti n hành chưng c t 100g nguyên li u (lá ng i c u non Vtinh d u(ml) 0,9 1,2 1,3 1,4 1,4 1,4 nguyên li u xay nh 3.2.2.2 K t qu kh o sát th i gian chưng c t Cân kho ng 100g nguyên li u (lá ng i c u non ng i c u ng i c u già) v i th tích nư c 300 ml th i gian 2-7 gi già), xay nh , ngâm v i 300 ml dung d ch NaCl 10% gi , sau * Nguyên li u khơng xay: ti n hành chưng c t lôi cu n nư c th i gian t 2, 3, 4, 5, B ng 3.7.Th tích tinh d u ng i c u non không xay Vtinh d u(ml) Th i gian (h) Nh n xét: Tinh d u thu đư c có hi u su t cao nh t ñ i v i tinh d u Th i gian (h) B ng 3.10 K t qu kh o sát th tích tinh d u ng i c u già xay nh 0,1 0,3 0,5 0,8 0,8 0,8 6, gi K t qu thu tinh d u ñư c: B ng 3.11.Tth i gian chưng c t tinh d u ng i c u non Th i gian (gi ) Vtinh d u(ml) 0,8 1,0 1,1 1,2 1,2 1,2 B ng 3.12 Th i gian chưng c t tinh d u ng i c u già Th i gian (gi ) Vtinh d u(ml) 0,8 1,1 1,3 1,4 1,4 1,4 14 13 Nh n xét: Theo phương pháp chưng c t lôi cu n nư c, 3.2.2.4 K t qu kh o sát n ng ñ mu i ăn NaCl: th i gian t gi ñ n gi , th tích tinh d u thu đư c tăng Ngâm kho ng 100g nguyên li u (lá ng i c u non ng i c u già) nhanh, t gi đ n gi , th tích tinh d u tăng thêm khơng đáng k , xay nh 300 ml dung d ch mu i ăn NaCl v i n ng ñ l n sau gi th tích khơng tăng thêm n a Do v y, ch n gi lư t 0%, 5%, 10%, 15% 20% gi Sau ti n hành th i gian chưng c t thích h p nh t chưng c t gi 3.2.2.3 K t qu kh o sát t l kh i lư ng tươi / th tích nư c Cân kho ng 100g nguyên li u (lá ng i c u non ng i c u già) xay nh , v i th tích nư c l n lư t 200 ml, 250 ml, 300 ml, B ng 3.15 Kh o sát n ng ñ mu i ăn NaCl ñ i v i ng i c u non N ng ñ NaCl(%) 10 15 20 Vtinh d u(ml) 0,9 1,3 1,5 1,5 1,5 350 ml, 400 ml ñun gi b ng phương pháp chưng c t lôi cu n nư c K t qu kh o sát t l kh i lư ng tươi/th tích nư c đư c trình bày b ng 3.13 3.14, dư i ñây B ng 3.16 Kh o sát n ng ñ mu i ăn NaCl ñ i v i ng i c u già N ng ñ NaCl(%) B ng 3.13 Kh o sát t l kh i lư ng ng i c u non/ th tích nư c mnguyên li u/Vnư c( g/ml) 1:2,0 1:2,5 1:3,0 1:3,5 1:4,0 Vtinh d u(ml) 0,8 1,1 1,2 1,2 1,2 10 15 20 Vtinh d u(ml) 1,2 1,5 1,6 1,6 1,6 Nh n xét: Căn c vào th tích tinh d u thu đư c kh o sát n ng ñ mu i ăn tăng d n t 0% đ n 20%, ta có th l a ch n n ng đ NaCl thích h p nh t dùng ñ ngâm nguyên li u trư c chưng c t B ng 3.14 Kh o sát t l kh i lư ng ng i c u già / th tích nư c mnguyên li u/Vnư c( g/ml) 1:2,0 1:2,5 1:3,0 1:3,5 1:4,0 Vtinh d u(ml) 0,9 1,2 1,5 1,5 1,5 Nh n xét: Qua b ng chúng tơi ch n th tích nư c 300 ml th tích thích h p nh t ñ chưng c t 100 g nguyên li u, hay nói cách khác, t l kh i lư ng nguyên li u / th tích nư c 1:3 t l thích h p nh t cho q trình chưng c t thu tinh d u ng i c u K t qu ñúng ñ i v i c lo i non già tinh d u 10% ñ i v i c hai lo i nguyên li u kh o sát Đi u ki n chưng c t lôi cu n nư c thích h p là: + Nguyên li u: xay nh + Th i gian chưng c t: gi + T l kh i lư ng tươi/th tích nư c: 1:3 (g/ml) +N ng đ mu i ăn: 10% 3.2.3 K t qu xác ñ nh hàm lư ng tinh d u Hàm lư ng tinh d u ng i c u non 1,27% Hàm lư ng tinh d u ng i c u già 1,57% 15 16 3.2.4 K t qu nghiên c u xác ñ nh thành ph n, hàm lư ng tetramethyl 15 germacrene B 16 17 C15H24 14,178 0,67 p-menth-3-ene,2-isopropenyl-1-vinyl C15H24 14,261 0,81 alpha-cubebene C15H24 14,578 0,15 18 alpha-amorphene C15H24 15,261 0,14 hình 3.2 v i thư vi n chu n 19 copaene C15H24 15,478 3,35 cho th y thành ph n c a tinh d u ng i c u t i Qu ng Nam 20 cyclobuta1,2:3,4dicyclopetene,decahydro- C15H24 15,678 0,36 công th c c u t o m t s h p ch t hóa h c tinh d u ng i c u So sánh s c kí đ - kh i ph thu đư c có kho ng 52 c u t (b ng 3.25) Các c u t ch y u thu c 3A-methyl 21 elemene C15H24 15,845 3,17 nhóm monoterpen, secquiterpen, diterpen bao g m d n xu t c a 22 isocaryophyllene C15H24 16,862 19,22 phenol, ancol, xeton Trong có 51 h p ch t ñư c xác ñ nh v i 23 1H-cyclopenta 1,3cyclopropa 1,2bezene, C15H24 17,011 0,89 C12H20O 17,245 0,40 thành ph n là: isocaryophyllen (19,22%); Germacrene D octahydro-7-methyl-3methylene 24 (18,67%); Dispiro2.0.2.5 undecan, 8-methylene (14,15%); O-menth- 2-petanone,5-(2-methylenecyclohexyl)stereoisomer chưa ñ nh danh 26 8-ene-4-methanol,α,α-dimethyl-1-vinyl-(1S,2S,4R) (6,15%); Cadina- 25 naphthalene,1,2,3,4,6,8a-hexahydro-1- 3,9-diene (6,00%); Alpha-caryophyllen (4,12%) CTPT 0,36 gian bicyclo7.2.0 undec-4-ene,4,11,11-trimethyl- C15H24 17,561 0,50 8-methylene Th i H p ch t 0,35 17,478 isopropyl-4,7-dimethyl 27 B ng 3.19 Thành ph n hóa h c c a tinh d u ng i c u TT 17,345 C15H24 28 lưu alpha-caryophyllene C15H24 17,745 4,12 29 germacrene D C15H24 18,562 18,67 30 (%) 1H-cycloprop[E]azulene,decahydro-1,1,7- C15H24 18,811 2,70 01 beta-cis-ocimene C10H16 4,043 0,27 02 β-pinen C10H16 4,960 0,21 31 Delta cadinene C15H24 18,911 0,40 03 beta-mycrene C10H16 5,093 0,16 32 Delta muurolene C15H24 19,211 0,36 04 limonene C10H16 6,093 0,07 33 cadina-3,9-diene C15H24 19,395 6,00 05 2-norpinene,3,6,6- trimethyl C10H16 6,160 0,11 34 cadina-1,3,5-triene C15H22 19,478 0,30 06 tricyclene C10H16 6,433 0,44 35 o-menth-8-ene-4-methanol,α,α-dimethyl-1- C15H26O 20,312 6,15 07 beta-limalool C10H18O 7,927 0,13 08 trimethyl-4-methylene vinyl-(1S,2S,4R) cyclohexen-5,6-diethenyl-3-methyl C11H16 8,777 1,63 36 caryophylleneoxide C15H24O 21,095 0,26 09 Dispiro2.0.2.5 undecan, 8-methylene C12H18 9,161 14,15 37 ledol C15H26O 21,428 0,41 10 p-menth-1-en-4-ol C10H18O 10,261 0,07 38 alpha-bisabolol C15H26O 22,178 0,92 11 linalyl propanoate C13H22O2 10,727 0,07 39 eudesmol C15H26O 22,345 1,02 12 isopyrethrone C11H14O 12,011 0,07 40 cadinol C15H26O 22,578 0,72 13 cyclohexen-3,4-diethenyl-3-methyl C11H16 12,161 0,11 41 1-cadin-4-en-10-ol C15H26O 22,662 1,11 14 tricyclo3.2.1.02,7oct-3-ene,2,3,4,5- C12H18 13,094 0,50 42 copaen-11-ol C15H24O 22,828 0,50 17 18 43 eudesm-4(14)-en-11-ol C15H26O 22,995 3,28 44 3,7,11,15-tetramethyl-2-hexadecen-1-ol C20H40O 25,995 0,06 45 hexadecanoic acid C16H32O2 27,945 0,38 46 3,7,11,15-tetramethylhexadecen-1,3,6,10- C20H32 28,495 0,04 K t lu n: qua phương pháp kh o sát ch n dung môi chi t, ta ch n dung mơi metanol đ chi t c u t ng i c u 3.3.2 pentaene t ng i c u 47 2,4-dioctylphenol C22H38O 28,845 0,05 48 phytol C20H40O 29,495 3,72 49 hexadecanan diallyl acetal C22H42O2 29,795 0,09 50 kauren-18-ol,acetate,(4.beta) C22H34O2 29,895 0,14 51 pentacosane C25H52 33,396 0,08 52 bis(2-ethylhexyl)phthalate C24H38O4 33,979 0,15 3.3.2.1 B ng phương pháp chưng ninh a Kh o sát th i gian chi t: th i gian chi t thích h p c u t ng i c u ñi u ki n 4h b Kh o sát t l r n – l ng: Như v y t l r n – l ng thích h p đ chi t c u t t Như v y tinh d u ng i c u thu ñư c m t s h p ch t ng i c u 10g nguyên li u /100ml metanol có hàm lư ng cao b ng 3.22 sau: B ng 3.20 Thành ph n hóa h c có hàm lư ng cao c a tinh d u H p ch t 3.3.2.2 B ng phương pháp chi t soxhlet a Kh o sát th i gian chi t: Qua b ng 3.25 th i gian thích h p đ ng i c u TT K t qu kh o sát ñi u ki n chi t c u t CTPT Th i gian lưu (%) chi t soxhlet 8h thu đư c kh i lư ng c n l n nh t b Kh o sát t l r n – l ng: Qua b ng 3.26 ta ch n ñư c t l r n – 01 isocaryophyllene C15H24 16,862 19,22 02 germacrene D C15H24 18,562 18,67 03 Dispiro2.0.2.5 undecan, 8-methylene C12H18 9,161 14,15 04 o-menth-8-ene-4-methanol,α,α- C15H26O 20,312 6,15 05 dimethyl-1-vinyl-(1S,2S,4R) cadina-3,9-diene C15H24 19,395 6,00 l i phương pháp chi t soxhlet v i lư ng b t ng i c u alpha-caryophyllene C15H24 17,745 4,12 ban ñ u lư ng dung mơi th i gian chi t phương pháp 06 l ng thích h p ñ chi t 10g nguyên li u/ 100ml dung mơi T s li u thu đư c gi a phương pháp chưng ninh so sánh v i phương pháp chi t soxhlet ta th y phương pháp chưng ninh thu n chi t soxhlet mà kh i lư ng c n thu ñư c l i x p x Do ch n phương pháp chưng ninh đ chi t c u t t 3.3 K T QU NGHIÊN C U D CH CHI T LÁ NG I C U 3.3.1 K t qu kh o sát ch n dung môi chi t Dung môi kh o sát: butanol, etanol metanol 3.3.1.1 B ng phương pháp quang ph h p th phân t UV-VIS 3.3.1.2 B ng phương pháp phân tích tr ng lư ng ng i c u, v i t l r n – l ng 10g nguyên li u/ 100ml dung môi methanol chưng ninh gi 3.3.3 Phương pháp phân l p ch t dung mơi - Q trình phân l p ti n hành l n lư t qua dung mơi có ñ phân c c tăng d n là: n-hexan, chloroform, etylaxetat, methanol 20 19 3.3.3 Xác ñ nh thành ph n hóa h c c a d ch chi t ng i - Cách t n hành: theo sơ đ + Cho 25 ml dung mơi n-hexan vào hịa tan cao methanol ñư c c u dung mơi d ch chi t màu vàng đ m, khu y ñ u ñ n cân b ng, cho vào ph u chi t 3.3.3.1 Thành ph n hóa h c c a d ch chi t ng i c u dung ñ yên gi , chi t l y ph n d ch l ng màu vàng r t nh t dung môi hexan mơi n-hexan Sau ti n hành chi t liên t c nhi u l n, m i l n 25 ml dung mơi n-hexan đ n ph n d ch l ng n-hexan ñ n l n chi t cu i tr nên không màu thu ñư c d ch n-hexan + Cho ph n c n hexan sau qua n-hexan có màu vàng ñ m, ti p t c cho 25ml dung môi chloroform vào khu y ñ u, làm tương t cho ñ n ph n d ch l ng dung môi cloroform h t màu vàng nh t thu ñư c d ch chloroform + Cho ph n c n chloroform sau qua dung môi cloroorm có màu vàng l i cho ti p dung mơi etylaxetat vào, khu y đ u th c hi n thao tác cho ñ n ph n d ch l ng dung môi etylaxetat t màu vàng chuy n sang khơng màu d ng thu ñư c d ch etylaxetat + Cho ph n c n etylaxetat sau qua dung môi etylaxetat có màu đ đ m, ti p t c cho 25ml dung mơi metanol vào, khu y đ u th c hi n thao tác cho ñ n ph n d ch l ng dung mơi metanol chuy n sang khơng màu d ng thu ñư c d ch methanol Qua trình phân l p ta thu đư c d ch chi t dung môi n-hexan, cloroform, etylaxetat, methanol Đu i b t dung mơi, đem ño GC/MS máy ño s c ký khí ghép kh i ph (GC/MS) Perkin Elmer (Trung tâm d ch v phân tích thí nghi m Tp H Chí Minh, s 2, Nguy n Văn Th , phư ng Đa Kao, qu n 1, Tp H Chí Minh) B ng 3.27 Thành ph n c u t d ch chi t n-hexane 21 22 B ng 3.28 Thành ph n c u t dung mơi n-hexane B ng 3.30 Thành ph n c u t dung mơi chloroform Di n tích peak % TT Scan Tên Phytol 904589312 8,17 1273 Hexandecanoic acid 433549024 18,42 1415 9,12-Octadecadienoic acid 165849520 9,42 1365 Phytol 355174336 15,09 1287 Hexandecanoic acid 2005697280 18,12 1406 Linolenic acid,methyl ester 189959520 8,07 TT Scan Tên h p ch t 1373 % 3.3.3.4 Thành ph n hóa h c c a d ch chi t ng i c u 3.3.3.2 Thành ph n c u t d ch chi t cloroform B ng 3.29 Thành ph n c u t Di n tích peak dung mơi metanol d ch chi t chloroform B ng 3.33 Thành ph n c u t d ch chi t metanol Nh n xét: Thành ph n hoá h c c u t d ch chi t metanol sau ñư c ño b ng GC/MS có 20 c u t thành ph n c u t ñư c trình bày B ng 3.34 Thành ph n c u t b ng 3.46, sau d ch chi t methanol TT Scan Công th c phân t Tên g i T l (%) 1190 C7H16O4 M=194 Myo-in ositol, 4-C-methyl 15,14 1271 C16H32O2 M=256 Hexa ñecanoic axit 16,98 1403 C39H76O5 M=624 9,12-Octa decadienoic acid 12,59 24 23 Nh n xét: Thành ph n ch t d ch metanol có hàm K T LU N VÀ KI N NGH lư ng l n g m có c u t , c u t có cơng th c ph c t p nh t hàm lư ng l n l Myo-inositol, 4-C-methyl v i hàm lư ng 15,14% K T LU N Đã xác ñ nh đư c đ m, hàm lư ng tro vơ cơ, hàm lư ng kim lo i n ng, hàm lư ng tinh d u ng i c u - Đ m (lá ng i c u non 84,33%, ng i c u già 80,89%), hàm lư ng tro vô (lá ng i c u non 13,92%, ng i c u già 15,24%), hàm lư ng tinh d u (lá ng i c u non 1,27%, ng i c u già 1,57%) - Hàm lư ng kim lo i n ng ng i c u n m gi i h n cho phép s d ng c a B y t Đã kh o sát u ki n thích h p đ chi t tách tinh d u c u t có d ch chi t dung môi h u - Đi u ki n thích h p đ chi t tinh d u là: + Lá ng i c u già, + Nguyên li u: xay nh phút + Th i gian chưng c t: gi + T l kh i lư ng tươi/th tích nư c: 1:3 ( g/ml) +N ng ñ mu i ăn: 10% - Kh o sát dung mơi t i ưu đ chi t tách c u t ng i c u metanol Đi u ki n thích h p đ chi t tách c u t ng i c u phương pháp chưng ninh dung môi metanol v i th i gian gi , t l r n- l ng 10g nguyên li u/100ml metanol c Đã ñ nh danh ñư c ch t có tinh d u ng i c u d ch chi t ng i c u dung môi - Trong tinh d u: c u t ch y u thu c nhóm monoterpen, secquiterpen, diterpen bao g m d n xu t c a phenol, ancol, xeton 25 Trong có 51 h p ch t đư c xác đ nh v i thành ph n là: isocaryophyllen (19,22%); Germacrene D (18,67%); Dispiro2.0.2.5 undecan, 8-methylene (14,15%); O-menth-8-ene-4-methanol,α,αdimethyl-1-vinyl-(1S,2S,4R) (6,15%); Cadina-3,9-diene (6,00%); Alpha-caryophyllen (4,12%) Trong d ch chi t n-hexan, cloroform,etylaxetat: S lư ng c u t , c u t có hàm lương cao d ch chi t dung môi là: Dung môi S lư ng c ut C u t hàm lư ng cao nh t Hàm lư ng (%) n-hexan 49 Hexadecanoic 18,12 Clorofom 35 Hexadecanoic 18,42 Etylaxetat 28 Phthalic anhydride 25,07 Metanol 20 Hexadecanoic 16,98 KI N NGH Ti p t c nghiên c u theo hư ng sâu hơn: ch y s c ký c t ñ tách ñư c c u t tinh t t tinh d u d ch chi t ng i c u, ño c ng hư ng t h t nhân ñ xác ñ nh c u trúc h p ch t Làm giàu c u t chính, th ho t tính sinh h c nghiên c u ph n ng chuy n hóa chúng Có th nghiên c u theo hư ng m r ng ñ xác ñ nh thành ph n ch t có hoa c a ng i c u, so sánh v i thành ph n ch t có ng i c u T đó, s l a ch n ñư c ngu n nguyên li u thích h p đ ti p t c nghiên c u ho t tính sinh h c ph c v cho y h c  ... t tách tinh d u Quy trình chi t tách tinh d u hình 2.5 nh hư ng đ n lư ng tinh d u 2.3.3.3 Xác ñ nh hàm lư ng tinh d u 2.3.3.4 Nghiên c u xác ñ nh thành ph n, c u t o m t s h p ch t tinh d u... trang) Chương 2- Nh ng nghiên c u th c nghi m (13 trang) Nam? ?? M c đích nghiên c u - Xác đ nh hàm lư ng, ch tiêu hóa lý m t s h p ch t hóa h c tinh d u ng i c u t nh Qu ng Nam - Xây d ng quy trình... lý m u 2.2 HÓA CH T VÀ THI T B NGHIÊN C U Xác ñ nh đ 2.2.1 Hóa ch t 2.2.2 Thi t b thí nghi m m Chi t b ng phương pháp chưng c t lôi cu n nư c Xác ñ nh hàm lư ng tro 2.3 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN C U