Khảo sát các phương pháp chiết xuất, thành phần hoá học và tính chất hoá lý của tinh dầu hoa lài jasminum sambac

Hoa lài Jasminum sambac L. thuộc họ Oleaceae là một trong các loài hoa có hưong thom ngào ngạt, hấp dẫn, được ứng dụng nhiều trong công nghệ mỹ phẩm (nước hoa, dầu thom, xà phòng tắm,...) và thực phẩm (ướp trà, làm gia vị,..Hưong thom của hoa có được là nhờ thành phần các cấu tử trong tinh dầu, chúng tạo mùi thom dịu dàng và bền lâu, là hưong liệu quan trọng của các loại mỹ phẩm cao cấp.

1 PHẦN LỜI MỞ ĐẦU 1.1 ĐẶT VẤN ĐỀ Hoa lài Jasminum sambac L thuộc họ Oleaceae lồi hoa có hưong thom ngào ngạt, hấp dẫn, ứng dụng nhiều công nghệ mỹ phẩm (nước hoa, dầu thom, xà phòng tắm, ) thực phẩm (ướp trà, làm gia v ị , H o n g thom hoa có nhờ thành phần cấu tử tinh dầu, chúng tạo mùi thom dịu dàng bền lâu, hưong liệu quan trọng loại mỹ phẩm cao cấp Tinh dầu hoa lài thiên nhiên đắt ngày người ta chuyển sang sử dụng sản phẩm tinh dầu tổng hợp, nhiên việc xác định thành phần tinh dầu phục vụ cho công nghệ sản xuất tinh dầu tổng hợp chưa trọng Có nhiều phưong pháp ly trích tinh dầu, phưong pháp có ưu nhược điểm khác Chưa có phưong pháp thỏa mãn yêu cầu đặt hiệu chất lượng tinh dầu hoa lài Tinh dầu hoa lài ứng dụng rộng rãi công nghệ sản xuất mỹ phẩm dược phẩm Việc xác định tính chất vật lý hóa học tinh dầu có ý nghĩa quan trọng Tinh dầu hoa lài nghiên cứu ứng dụng rộng rãi nhiều kỷ trước, nhiều quốc gia khắp noi giới Riêng nước ta việc nghiên cứu tinh dầu hoa lài khả ứng dụng kết nghiên cứu chưa quan tâm mức Xuất phát từ yêu cầu đó, phân cơng mơn Cơng Nghệ Sinh Học, hướng dẫn thầy TS Phan Phước Hiền, thực đề tài “ Khảo sát phương pháp chiết xuất, thành phần hoá học tính chất hố lý tinh dầu hoa lài Jasmỉnum sambac L trồng An Phú Đông, quận 12 Tp.HCM” 1.2 MỤC ĐÍCH VÀ YÊU CẦU 1.2.1 Mục đích Xác định phương pháp ly trích tinh dầu tối ưu đồng thời khảo sát thành phần hoá học tính chất hố lý tinh dầu hoa lài trồng An Phú Đông, quận 12 Thành phố HCM 1.2.2 Yêu cầu >Khảo sát đặc điểm sinh học hoa lài An Phú Đơng, Tp HCM • Đặc điểm hình thái: thân, lá, hoa • Đặc tính sinh thái: điều kiện sinh trưởng, sức tăng trưởng, phân loại >So sánh hiệu suất cô kết phương pháp dung mơi ly trích khác >Khảo sát thành phần cấu tử tinh dầu hoa lài >Khảo sát tính chất hóa lý tinh dầu hoa lài • Chỉ số vật lý: tỉ trọng, số khúc xạ Chỉ số hóa học: số acid (IA), số savon hóa (IS), số ester (IE) PHẦN TỔNG QUAN 2.1 2.1.1 GIỚI THIỆU VÈ CÂY HOA LÀI Phân loại Lài thuộc: Ngành Ngọc Lan: Magnoliophyta Lóp Ngọc Lan: Magnoliopsida Phân lớp Hoa môi: Lamiidae Bộ: Oleales Họ: Oleaceae Đặc điểm Oleales: Thân to, mọc đối, khơng có bẹ Hoa có hai tiểu nhụy, hai tâm bì, hột khơng phơi nhũ Bộ Oleales có họ Oleaceae Đặc điểm họ Oleaceae: Thân gỗ leo hay mọc thành bụi, phân nhánh luông phân rõ Lá khơng có kèm, thuờng mọc đối hay kép lông chim lẽ Hoa mẫu 5, luông tính, đon tính, có bắc hai bắc Hoa mọc riêng lẻ mà xếp thành chùm kép hay xim Quả khơ (quả nang có cánh), thịt (mọng) [6] Họ Oleaceae có khoảng 500 lồi có lồi phổ biến là: + Jasmỉnum granddiflorum L + Jasmỉnum officinale L + Jasmỉnum odoratỉssnum L + Jasmỉnum sambac L Hoa lài Việt Nam chủ yếu lài Jasmỉnum sambac [9] 2.1.2 Nguồn gốc Hoa lài nguyên liệu quan trọng công nghệ sản xuất nuớc hoa đại, từ thời xa xua chúng đuợc sử dụng để trang trí Ản Độ nghi lễ [17] Ở Việt Nam, hoa lài có mặt khoảng kỷ làng hoa Ngọc Hà (Hà Nội), làng hoa Gò vấp, Hóc Mơn (TP HCM) Ở miền Nam nước Pháp có hai lồi Jasmỉnum officinale Jasmỉnum grandiỷlorum Jasminum officinale loài lài hoang dại thường sống vùng núi cao, Jasminum grandiỷlorum thường gọi lài Tây Ban Nha, trồng để chiết xuất tinh dầu tự nhiên Jasminum grandiịlorum có mặt vùng Grasse Pháp khoảng 200 năm, chúng trồng để phục vụ cho công nghệ sản xuất loại nước hoa tiếng giới [10] Jasminum officinale mọc chân núi Himalayas vùng đồng Ganges, trồng thưong mại vùng có khí hậu ơn hịa Ãn Độ đặc biệt Uttar Pradesh Andhra Pradesh Chúng mang đến Trung Quốc, Pháp Địa Trung Hải, người Marốc mang đến Tây Ban Nha Đây loài tiếng phổ biến Anh Vì có hưong thom vơ quyến rũ, chúng gọi nữ hoàng loài hoa ưa chuộng Châu Âu [17] Jasmỉnum angustỉỷolỉum Jasmỉnum humile trồng rộng rãi An Độ, Jasminum ýruticans mọc tự nhiên phía Nam châu Âu vùng Địa Trung Hải Ở Trung Quốc Jasminum paniculatum trồng khắp noi, hoa có giá trị gọi Sienhing-hwa Jasminum nudiflorum loài lài có hoa Hình 2.3 Jasminum humile vàng rực rõ trồng [17] 2.1.3 Đặc điểm hình thái Theo mô tả nhà thực vật học, lài Jasminum sambac thân gỗ nhỏ, mọc thành bụi, vưon dài leo giá đõ, thường cao 0,5 - m Phát triển nhiều cành, bóng hai mặt, phiến hình bầu dục, hoi trái xoan, mọc đối, gần không cuống Lá dài 3-7 cm, rộng 20 - 25 mm, kẽ có gân phụ, bên5-6 gân phụ, lồi giữa, cong đột ngột mép, gân hình mạng lưới Hoa màu trắng mọc thành cụm nách hay cây, hoa thơm, có nhiều vào mùa hè Phát hoa hoa, vành hoa trắng thường đơi, cánh hoa trịn hay trịn dài Lá đài hẹp, có lơng bìa, có khơng lơng Lá bắc hình sợi chỉ, màu đen hình cầu có ngăn, đường kính mm bao bọc đài [1] [3] [6] Jasminum officinale bụi thân leo mảnh khảnh, xanh quanh năm, phát triển đến 10 m Lá màu xanh đậm, hoa nhỏ màu trắng hình giống ngơi sao, hái vào buổi tối mùi hương tỏa mãnh liệt Một người có kinh nghiệm hái 10.000 - 15.000 hoa ngày [17] Jasminum grandiỷlorum loại mọc lâu năm, có nhiều cành, cành phía cứng, dạng gỗ cịn phía mọc vươn dài, yếu, dạng cỏ Cành lài dài từ 1,5 2m, hình bầu dục, nhọn phía cuối Jasminum grandiỷlorum lồi lài cánh to, có giá trị mặt hương liệu Hoa mọc cuối cành, có cuống hình chng, thường 4-5 cánh màu trắng đục, phần cánh hoa hồng, nở từ tháng đến tháng 10 [17] Jasminum angustiỷolium thân leo xanh quanh năm, cao - , m, rộng màu xanh sáng bóng, hoa màu trắng, tỏa hương thơm quanh năm ỉasminum ỷruticans có sức chịu đựng cao điều kiện khắc nghiệt, dạng bụi xanh quanh năm, cao - , m, dễ gãy, thân mảnh, cần phải chống đỡ Hoa có màu vàng, khơng tỏa hương từ mùa xuân đến mùa thu ỉasminum nudiỷlorum có hoa màu vàng rực rỡ vào mùa đơng trước lá, phát triển nhanh chóng điều kiện [17] 2.1.4 Đặc điểm sinh thái Ở nước ta lài ưa khí hậu nóng, đất khơ giàu mùn, cần nhiều ánh nắng để hoa Ở Pháp nước khác Jasminum grandiỷlorum ưa khí hậu ấm áp, nhiệt độ 5°c - 7°c chết, cành ngừng hoạt động Lài cần ánh sáng, mọc bóng râm cành bị hạn chế phát triển, thu hoạch thấp Neu đất không đủ độ ẩm phải cung cấp nước, đất ẩm khơng thích hợp, trường hợp lượng hoa có tăng hàm lượng tinh dầu mùi thơm hoa giảm [8] Ở Pháp hoa lài trồng nhiều loại đất, trừ đất có nhiều sét sạn, cần phải cung cấp đủ nước ánh sáng mặt trời Tại hoa lài trồng cách ghép loài Jasminum grandiýlorum hay năm tuổi gốc ghép loài Jasminum officinale hoang dại Hàng cách - 1,5 m khoảng 50.000 cây/ha [10] Hoa lài vùng Grasse Cannes đuợc trồng thành hàng, phải cung cấp đủ ánh sáng, đất xốp, nhạy cảm với thời tiết lạnh bị thiệt hại suông giá Ở Ai Cập cánh đồng hoa lài bụi cách lm hàng cách m, khoảng 5.000 cây/ha, Morocco hàng cách 2,5m, cách lm nên khoảng 4.000 cây/ha [10] Vì thời tiết Italia khác với miền Nam nuớc Pháp nên Jasminum grandiỷlorum đuợc trồng trực tiếp cành đuợc cắt, đoạn cắt đuợc phát triển vuờn ươm thời gian dài rễ khỏe mạnh Vào năm thứ hai sau trồng, bụi lài đuợc xén tỉa nhánh 30 - 40 cm, cánh đồng lài đuợc tuới nuớc tuần từ tháng đến tháng 10 [10] Theo Amaud, lài nhạy cảm với sng giá dễ bị bệnh thối rễ cần phải đuợc che phủ vào mùa thu để ngăn ngừa thiệt hại suông giá gây đồng thời phải làm kỹ đất trồng lài [17] Một loại nấm Agaricus melleus, gây bệnh cánh đồng hoa lài, công rễ ghép cành Khi loài nấm xâm nhiễm tràn lan chúng khó ngăn chặn, bị nhiễm thuờng bị hu rễ gây mùa Những bị nhổ bỏ thay vào hoa hồng hay oliu [17] 2.1.5 Năng suất Ở nuớc ta mùa hoa lài từ tháng đến tháng 10 miền Bắc, cịn miền Nam hoa lài có quanh năm Ở Pháp nhu Italia mùa hoa lài cuối tháng kết thúc khoảng đầu tháng 11, thời tiết ấm áp đủ ánh sáng suất cao từ tháng đến tháng 10 Hoa đuợc hái vào sáng sớm, sau 10 sáng mùi huong duờng nhu biến Theo nghiên cứu nhà khoa học Pháp hoa đuợc hái vào chiều tối chứa luợng tinh dầu thấp hon hoa đuợc hái vào sáng sớm Hoa hái vào tháng (khoảng 8.000 10.000 hoa/kg) nặng hon hoa hái vào tháng 10 (14.000 hoa/kg) Năm suất hoa 1.200 - 2.000 kg/ha, năm thứ hai năm suất tăng lên 3.0004.000 kg/ha [10] Năng suất thu hoạch trung bình Pháp tấn/ha, Nga 4-9 tấn/ha Tổng sản luợng hoa lài miền Nam nuớc Pháp đạt tối đa vào năm 1927với khoảng 1.500 Năm 1947 sản lượng thu vùng Grasse lên đến 600 Năm 1912 Ai Cập đạt 100 hoa năm, Italia sản lượng hàng năm lên đến 500 hoa [10] Ở Morocco hoa lài thu hái vào đầu tháng kết thúc tháng 12, suất khoảng 6.000 kg/ha Tại Italia suất khoảng 4.500 - 5.500 kg/ha [10] 2.1.6 Công dụng Hưong lài ứng dụng việc gia hưong trà: trà lài gói sản xuất thử nghiệm theo dự án Bộ Công Nghiệp nhẹ năm 1994 - 1996, trà lài túi lọc sản xuất TP Hồ Chí Minh năm 1997- 1998 Hoa lài ứng dụng sản xuất xà phịng lài có mùi thom dịu bền nhà máy xà phòng Hà Nội năm 1994 [9] Hình 2.4 Trà lài Lá lài có vị cay tính mát, có tác dụng nhiệt, hoa lài chữa cảm sốt, đầy bụng, rễ lài chữa ngủ giảm đau Hoa lài - 12 g phối hợp với dây chè, ngấy hưong hay ngấy tía (mỗi thứ 20 g) sắc uống lúc thuốc cịn nóng để chữa đầy bụng [6] Ở Trung Quốc Jasminum paniculatum sử dụng với Jasminum sambac , g Jasmỉnum paniculatum với 15 g Jasmỉnum sambac đế tạo mùi hưong cho trà, 20 g hỗn hợp dùng cho 50 g trà Người Trung Quốc, Ai Cập Ấn Độ sử dụng hoa lài để làm thuốc chống suy nhược thần kinh chất kích thích, người Hindu xâu hoa lài thành vịng để đeo vào cổ sử dụng nghi lễ tôn giáo Người Thổ Nhĩ Kỳ sử dụng thân lài để làm dây thừng Trà lài người Trung Hoa ưa thích Indonesia dùng để trang trí phổ biến [17] Các nhà khoa học thuộc trường đại học Wheeling Jesuit, Mỹ phát có hưong lài phịng ngủ bạn, bạn ngủ ngon hon tỉnh Hình 2.5 Nước hoa hưong lài táo hon thức dậy [6] Tinh dầu hoa lài dùng để sản xuất loại nước hoa tiếng đồng thời sử dụng để pha trộn làm dầu massage pha loãng để tắm, làm giảm căng thẳng thần kinh, stress trạng thái bồn chồn [17] Tinh dầu hoa lài giúp cho sinh đẻ dễ dàng, làm giảm co thắt xoa dịu đau đớn Vì mùi thom tự nhiên dịu dàng dễ chịu nên tinh dầu hoa lài sử dụng để giải vấn đề bất lực bệnh lãnh cảm Tinh dầu hoa lài thích hợp với da khơ, da nhờn, da bị kích thích da nhạy cảm, làm gia tăng tính đàn hồi thường sử dụng để làm căng vết lằn thẹo Giải vấn đề hô hấp xoa dịu ho, tình trạng khàn giọng viêm quản Làm giảm đau nhức co bong gân Jasminum angustiỷolium Ấn Độ có rễ đắng, trộn lẫn với rễ Acorus calamu (cây thạch xưong bồ), có giá trị việc chữa bệnh ecpet mảng tròn [17] 2.2 2.2.1 KHÁI QUÁT VÈ TINH DẦU Sơ lược tinh dầu Tinh dầu (còn gọi tinh du hay hương du) chất có mùi thơm chất có mùi hắc khó chịu mà ta chế từ loại thực vật như: tinh dầu hoa hồng, tinh dầu hoa lài, tinh dầu bạc hà, long não, hay lấy từ loài động vật như: tinh dầu cà cuống, xạ hương, [4] Tinh dầu hỗn hợp nhiều chất dễ bay hơi, có mùi đặc trưng tùy thuộc vào nguồn gốc nguyên liệu cung cấp tinh dầu Trong thiên nhiên tinh dầu trạng thái tự số trạng thái tiềm tàng Trong thực vật tinh dầu tạo tích trữ mơ, mơ diện tất nơi thể thực vật rễ, thân,lá, hoa trái tên gọi khác tế bào, túi, lông ống [4] Tinh dầu có độ sơi cao (150°c - 250°C) dễ bay nhiệt độ thấp Tinh dầu thường chất nhẹ nước nên ta chưng cất hay đổ tinh dầu vào nước tinh dầu lên Cũng có số tinh dầu nặng nước tinh dầu đinh hương, tinh dầu quế Khi chưng cất tinh dầu nằm phía đáy bình chưng cất [4] Tinh dầu khơng tan nước hay tan ít, hòa lẫn với nước tinh dầu lên hay chìm xuống Tinh dầu tan số dung mơi hữu cồn 90°, ether, chlorbrm, benzen, dầu mỡ, ta dùng dung môi để chiết lấy tinh dầu [4] Tinh dầu thuờng khơng có màu có màu vàng nhạt, số tinh dầu màu sẫm nhu tinh dầu ngải cứu có màu xanh lo, tinh dầu quế có màu nâu thẫm, tinh dầu thạch xuong bồ có màu đỏ sẫm [4] Duới ảnh huởng nhiệt độ, ánh sáng, khơng khí, nuớc, tinh dầu dễ bị oxy hóa phần biến thành nhựa Tỷ lệ tinh dầu chứa khơng cao, có tinh dầu tỷ lệ thấp nên đắt Tỷ lệ trung bình số loại có tinh dầu [4]: 2.2.2 Bạc hà: Hoa hồng: 0,1 % (tưoi) 0,03 % (tưoi) Hoa lài: 0,1 - 0,35 % (tưoi) Hưong bài: 1,2 - 2,5 % (rễ khô) Màng tang: 3,9 - % (quả khô) Các dạng sản phẩm trình ly trích tinh dầu 2.2.2.1 Tinh dầu dạng kết (concrete) Sản phẩm thu đuợc từ phuong pháp ngâm chiết tĩnh, chủ yếu dùng để sản xuất nuớc hoa thô Đây sản phẩm chua loại sáp chất béo, có dạng sệt đuợc sử dụng trực tiếp [5] 2.2.2.2 Tinh dầu tinh khiết (absolute) Sản phẩm đuợc thu cách chiết kiệt sản phẩm cô kết luợng ethanol vừa đủ làm lạnh đột ngột (15°C) để tủa lọc để loại sáp chất béo Phần dịch thu đuợc đem cô quay chân không loại ethanol thu đuợc tinh dầu tinh khiết [5] 2.2.2.3 Nước chưng Là phần nước lại sau lóng, gạn thu tinh dầu phưong pháp chưng cất lôi hoi nước loại tinh dầu có giá trị cao xem sản phẩm kỹ nghệ hưong liệu [5] 2.2.2.4 Nhựa dầu tự nhiên Dạng thu trực tiếp từ phần gỗ thân sống, từ nhựa người ta chưng cất hoi nước để lấy tinh dầu [5] Độ lượng tương Stt Rt 9,22 11,38 Benzyl alcohol Linalool (%) 2,64 1,15 hợp 97 94 13,55 17,89 Benzyl acetate Indole 1,39 4,73 97 91 19,43 23,87 24,68 25,14 Methyl anthranilate Germacrene D alpha -Farnesene Naphthalene,l,2,3,5,6,8a-hexahydro-4,7- 0,42 0,63 6,49 0,39 95 94 93 97 26,69 dimethyl-1 - (1 -methylethyl) Germacrene D-4-ol 8.42 98 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 35,91 36,77 38,38 39,86 40,01 40,59 40,73 40,89 41,37 43,81 44,29 48,45 51,77 51,96 54,28 Hexadecanoic acid, methyl ester n-Hexadecanoic acid Nerolidol 8,11-Octadecadienoic acid, methyl ester 9,12,15-Octadecatrienoic acid, methyl ester Octadecanoic acid, methyl ester 9,12-Octadecadienoic acid (Z,Z)11,14,17-Eicosatrienoic acid, methyl ester Octadecanoic acid 10-Heneicosane (c,t) Nonadecane Hexadecanoic acid, 2-hydroxy-l9,12-Octadecadienoic acid (Z,Z) Nonanoic acid, 9-(3-hexenyliden 2,6,10,14,18,22- 0,61 3,36 1,50 0,75 6,18 0,31 0,57 3,82 0,42 3,83 0,72 3,06 2,66 12,31 1,37 97 95 87 99 99 99 99 90 93 99 97 91 95 99 96 25 56,27 Tetracosahexaen,2,6,10,15,19,23 -hexamethylOxữane, 2,2-dimethyl-3- (3,7,12,16,20- 1,59 99 26 27 28 29 59,27 pentamethyl-3,7,11,15,19-heneico sapentaenyl)Vitamin E Campesterol Stigmasta-5,22-dien-3-ol gamma.-Sitosterol 2,02 1,26 1,56 9,21 96 98 96 99 60,66 61,21 62,28 Tên chất Hàm 4.3.3.2 Phương pháp siêu âm Với phương pháp siêu âm khảo sát thành phần hóa học tinh dầu hoa lài dung mơi ly trích: Petroleum ether, hexan ethanol a Dung mơi ly trích Petroleum ether Qui trình phân tích mẫu tương tự phương pháp khác, tinh dầu hoa lài bơm vào GC sau bơm vào GC/MS Chương trình nhiệt GC GC/MS theo sơ đồ 4.1 4.2 Sau sắc ký đồ GC/MS kết phân tích thành phần hóa học tinh dầu hoa lài chiết xuất theo phương pháp siêu âm, dung môi ly trích Petroleum ether: Abundance 4500000 TíC: LAI2673.D 2671 xuất theo phương pháp siêu âm, dung mơi ly trích Petroleum ether Hàm STT Rt Tên chất Benzyl alcohol Benzoic acid, methyl ester Linalool Phenylethyl alcohol 12,66 Benzyl nitrile 13,54 Benzyl acetate 13,75 Ethyl benzoate 14,56 Methyl salicylate 17,84 Indole 10 11 12 13 14 18,24 19,41 21,96 23,01 23,86 15 16 17 18 19 20 21 2234 35 23 36 24 37 25 2638 39 27 40 28 2941 42 30 31 43 32 3344 9,19 11,19 11,37 11,79 2-Propen-1 -ol,3-phenylMethyl anthranilate Caryophyllene alpha.-Caryophyllene Germacrene D lượng (%) 2,31 0,20 4,11 0,33 0,11 3,76 0,20 0,16 2,30 Độ tương hợp 97 91 94 91 95 97 90 91 91 0,69 0,98 0,23 0,32 2,59 98 95 95 97 97 24,33 Germacrene B 24,68 anpha -Farnesene 25,13 Naphthalene,l,2,3,5,6,8a-hexahydro-4,7- 0,78 14,96 0,23 83 93 96 dimethyl-1 - (1 -methylethyl) 26,51 3-Hexen-l-ol, benzoate, (Z)26,71 Germacrene D-4-ol 27,13 lH-Cycloprop[e]azulene, deca 27,46 Ledol 43,80 1-Nonadecene 28,53 tau.-Muurolol 44,29 10-Heneicosane (c,t) 28,88 alpha.-Cadinol 45,85 Tricosane 31,82 Benzyl benzoate 46,32 Cyclotetracosane 33,81 Farnesol 48,28 Tetracosane acid, methyl ester 35,90 Hexadecanoic 51,99 Heptadecane 38,37 Nerolidol 52,57 Eicosane 39,47 1-Heptadecene 53,29 Tetracosanoic acid, methyl ester ester 39,85 8,11Octadecadienoic acid, methyl 54,28 Hexacosane 40,01 9,12,15-Octadecatrienoic acid, methyl 2,6,10,14,18,2240,58 ester 55,45 Tetracosahexaen,2,6,10,15,19,23 41,01 Octadecanoic acid, methyl ester 56,25 hexamethyl41,63 1,3,12-Nonadecatriene Nonadecane 3,37 24,39 0,19 0,15 5,62 0,19 1,96 0,30 0,28 0,50 0,55 0,22 1,26 0,48 0,49 1,23 0,15 0,14 0,62 0,79 0,72 9,99 0,37 0,31 0,23 1,52 0,13 80 98 98 98 45 59,26 Oxữane, 2,2-dimethyl-3- (3,7,12,16,20pentamethyl-3,7,11,15,19-heneico sapentaenyl)Vitamin E 0,27 93 99 98 98 96 96 99 91 96 97 95 80 93 95 99 95 96 99 98 95 94 90 95 93 ® Nhận xét: Các số liệu bảng 4.20 cho thấy phưong pháp siêu âm với dung mơi ly trích Petroleum ether tách đuợc 45 cấu tử tinh dầu hoa lài, có cấu tử phát tinh dầu hoa lài vùng Sicily Calabria nuớc Italia, có 16 cấu tử phát Jasminum sambac Trung Quốc Hàm luợng 9,12,15-octadecatrienoic acid, methyl ester (9,99 %) tinh dầu hoa lài An Phú Đông cao gấp đôi hoa lài Jasminum sambac Trung Quốc (4,03 %) siêu âm, dung mơi mơi ly ly trích trích hexan b Dung hexan Stt QuiRttrình phân tích mẫu tươngTên Hàm Độ lài tự chất phương pháp khác, tinh dầu hoa lượng bơm vào GC sau bơm vào GC/MS Chương trình nhiệt trêntương GC 97 (%) hợp GC/MS theo sơ đồ 4.1 4.2 Sau sắc ký đồ GC/MS kết phân tích thành 51 9,19 Benzyl alcohol 2,43 97 91 13,54 Benzyl 3,85 phần học củaBenzoic tinh dầuacid, hoa lài lyacetate trích theo phương pháp siêu âm, 0,24 dung mơi ly methyl ester 91trích 62 hóa 11,20 13,75 Ethyl benzoate 0,22 91 hexan: 11,37 Linalool 4,88 94 14,56 Methyl salicylate 0,19 91 11,80 Phenylethyl alcohol 0,35 95 Abundance 17,85 Indole 3,07 TIC: 98 ! 26.70 LAI2672.0 0,37 94000000 18,25 2-Propen-1 -ol,3 -phenyl95 1,05 10 19,41 Methyl anthranilate 99 3500000 0,24 -11 21,96 Caryophyllene 99 24.68 23,01 alpha -C aryophyllene 0,31 12 3000000; 13 23,86 Germacrene D 14 24,33 24,68 25,13 gamma.-Elemene alpha -Farnesene Naphthalene,l,2,3,5,6,8a-hexahydro-4,7- 2500000 : 15 2000000 16 150000 17 18 1000000 19 96 2,64 0,80 83 15,87 93 0,22 94 40.01 dimethyl-1 - (1 - methylethyl) 26,51 11.37 : 26,70 13.54 27,14 9.19 80 3,53 98 25,0 93 0,19 3-Hexen-l-ol, benzoate, (Z)Germacrene D-4-ol 43.80 lH-Cycloprop[e]azulene, deca 26.5 17 85 23.851 28,89 I alpha.-Cadinol 20 31.43 24.5 30,69u iTFarnesol 21 ■ ■, ll nL I I' 1' I A Ạ, 31,82 V1 I BenzylL benzoate 22 98 0,32 48.28 0,25 90 35.90 I ' ' I ' ' ■ 0,47 96 - - - - -15.00 20.00 25.00 30.00 35.00 40.00 45 00 50.00 55.00 60.00 35,90 Hexadecanoic acid, methyl ester 0,51 23 4.16 Sắc ký đồ GC/MS phân tích thành phần hóa học tinh dầu hoa lài97 Hình chiết 38,37 Nerolidol 1,17 24 86 xuất theo siêu âm, dungacid, mơi methyl ly tríchester hexan 39,85phương 8,11-pháp Octadecadienoic 0,76 25 4.21 Thành phần 40,01 9,12,15-Octadecatrienoic acid,xuất methyl 9,44 Bảng hóa học tinh dầu hoa lài chiết theoester phương pháp99 500000 26 27 28 29 30 31 32 !! Octadecanoic acid, methyl ester 10-Heneicosane (c,t) Heptadecane 46,32 48,28 Tetracosane Nonadecane 49,22 51,99 54,27 Phthalic acid, diisooctyl ester Eicosane 2,6,10,14,18,22- 56,25 Tetracosahexaen,2,6,10,15,19,23 -hexamethylOxữane, 2,2-dimethyl-3- (3,7,12,16,20- 59,26 pentamethyl-3,7,11,15,19-heneico sapentaenyl)Vitamin E 35 36 54.2S6 25 40,58 43,80 44,29 33 34 44.29 96 0,40 99 5,01 1,81 99 0,47 97 1,05 99 0,47 97 0,29 87 1,67 95 1,55 95 83 0,27 90 c Dung mơi ly trích ethanol Qui trình phân tích mẫu tương tự phương pháp khác, tinh dầu hoa lài bơm vào GC sau bơm vào GC/MS Chương trình nhiệt GC GC/MS theo sơ đồ 4.1 4.2 Sau sắc ký đồ GC/MS kết phân tích thành phần hóa học tinh dầu hoa lài chiết xuất theo phương pháp siêu âm, dung mơi ly trích ethanol: Hình 4.17 Sắc ký đồ GC/MS phân tích thành phần hóa học tinh dầu hoa lài chiết xuất theo phương pháp siêu âm, dung mơi ly trích ethanol Hàm Stt Rt T ên chất Độ lượng tương 9,21 Benzyl alcohol 11,36 Linalool (%) 2,69 1,15 hợp 97 95 13,53 Benzyl acetate 17,87 Indole 1,13 3,62 96 91 18,25 2-Propen-1 -ol,3 -phenyl20,23 Benzoic acid, 4-formyl-, methyl ester 23,85 Germacrene D 0,34 0,94 0,65 98 91 96 24,68 alpha -Farnesene 24,85 Naphthalene,l,2,3,4,4a,5,6,8a-octahydro-7-methyl-4- 6,10 0,17 93 97 methylene-1 - (1 -methylethyl) 25,13 Naphthalene, 1,2,3,5,6,8a-hexahydro-4,7-dimethyl-1 - 0,44 95 (1-methylethyl) 26,51 3-Hexen-l-ol, benzoate, (Z)- 1,63 9,01 0,27 0,49 3,99 0,95 0,76 5,02 9,87 0,92 0,46 2,00 1,37 6,70 80 99 97 98 99 87 99 91 90 94 97 99 87 99 1,62 81 1,49 97 0,90 1,00 6,66 0,84 99 94 99 95 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 26,70 31,82 35,90 36,80 38,37 39,85 40,01 40,97 41,18 41,40 43,80 48,44 51,95 56,25 Germacrene D-4-ol Benzyl benzoate Hexadecanoic acid, methyl ester n-Hexadecanoic acid Nerolidol 9,12- Octadecadienoic acid, methyl ester 9,12,15-Octadecatrienoic acid, methyl ester 11,14,17-Eicosatrienoic acid, methyl ester 7,10,13-Hexadecatrienoic acid, methyl ester Octadecanoic acid 10-Heneicosane (c,t) Hexadecanoic acid, 2-hydroxy-lNonanoic acid, 9-(3-hexenylidenecyclopropylidene)2,6,10,14,18,22-Tetracosahexaen,2,6,10,15,19,23- hexamethyl59,26 Vitamin E 60,65 61,20 62,27 62,85 Campesrerol Stigmasta-5,22-dien-3-ol gamma.-Sitosterol ■beta.-Amyrin 4.4 TÍNH CHẤT VẬT LÝ VÀ HĨA HỌC CỦA TINH DẦU HOA LÀI 4.4.1 Tính chất vật lý tỉnh dầu hoa lài Sử dụng tinh dầu hoa lài ly trích từ phương pháp chưng cất nước cổ điển để xác định tính chất vật lý 4.4.1.1 Màu, mùi Tinh dầu hoa lài thu từ phương pháp chưng cất nước dạng lỏng, đặc, màu vàng óng, suốt, mùi Hình 4.18 Tinh dầu hoa lài thơm nhẹ nhàng 4.4.1.2 Tỷ trọng Thí nghiệm tiến hành nhiệt độ 27,5°c Xác định khối lượng tinh dầu nước thể tích bình đo tỷ trọng, thí nghiệm lặp lại lần, kết sau: Thí nghiệm mTD (gr) H20 m Trung bình 1,5555 1,5631 1,5611 1,5599 1,7202 1,7204 1,7203 1,7203 Tỷ trọng d27’5 = m TD / m H20 = 1,5599/1,7203 = 0,9068 Nhận xét: Tỷ trọng tinh dầu hoa lài An Phú Đông thấp hoa lài vùng Sicilian Calabrian nước Italia Hoa lài Italia chủ ỵếu Jasminum grandiỷlorum khác với Jasminum sambac An Phú Đông điều kiện sinh trưởng, phát triển thời điểm thu hoạch, có khác biệt tỷ trọng tinh dầu hoa lài hai vùng 4.4.I.3 Chỉ số khúc xạ Thí nghiệm tiến hành nhiệt độ 27,5°c, nhỏ giọt tinh dầu lăng kính, đậy nắp quan sát, thí nghiệm lặp lại lần, kết sau: Thí nghiệm n27^ Trung bình 1,4869 1,4875 1,4881 1,4875 Chỉ số khúc xạ: n27’5 = 1,4875 ® Nhận xét: Chỉ số khúc xạ tinh dầu hoa lài An Phú Đông tương đương với số khúc xạ tinh dầu hoa lài vùng Liguria nước Italia vùng Grasse miền Nam nước Pháp 4.5.2 Tính chất hóa học tỉnh dầu Sử dụng tinh dầu hoa lài ly trích từ phương pháp chưng cất nước cổ điển để xác định tính chất hố học 4.5.2.1 Chỉ số acid (IA) Thí nghiệm lặp lại lần, chuẩn độ acid tinh dầu hoa lài KOH 0,1 mo 1/1 thu kết sau: i Thí nghiệm mTD (gr) Vkoh (ml) 1,0074 0,66 1,0078 0,67 1,0079 0,68 Trung bình 1,0077 0,67 561*v Chỉ số acid IA = ’ = 3,73 m ® Nhận xét: Chỉ số acid tinh dầu hoa lài An Phú Đông tương đương tinh dầu hoa lài vùng Grasse miền Nam nước Pháp thu từ phương pháp chưng cất nước cao hoa lài Thạnh Lộc, quận 12, HCM Sự khác biệt số acid tinh dầu hoa lài phường An Phú Đơng Thạnh Lộc điều kiện sinh trưởng, phát triển thời điểm thu hoạch khác Ngoài phương pháp chiết xuất khác ảnh hưởng đến tính chất hóa học tinh dầu Tinh dầu hoa lài Thạnh Lộc chiết xuất dung mơi Petroleum ether có số acid thấp lài An Phú Đơng ly trích từ phương pháp chưng cất nước 4.5.2.2 Chỉ số savon hóa (IS) Xác định số savon hóa phải thực song song mẫu trắng mẫu tinh dầu để loại trừ sai số Thí nghiệm lặp lại lần, chuẩn độ mẫu tinh dầu mẫu trắng HC1 0,1 N thu kết sau: Tinh dầu Thí nghiêm mTD (g) Nước VHC1 (ml) mH20 (g) VHC1 (mi) 0,4993 11,56 0,4994 17 0,5000 11,28 0,5009 17,5 0,5009 11 0,5004 17,8 Trung bình 0,5001 11,28 0,5002 17,43 Chỉ số savon hóa: IS = 5,61 * (v0 - V, ) / m TD = 5,61 X (17,43 - 11,28)/ 0,5001= 68,99 ® Nhận xét: Chỉ số savon hóa tinh dầu hoa lài An Phú Đông thấp tinh dầu vùng Grasse miền Nam nuớc Pháp thấp tinh dầu hoa lài Thạnh Lộc, quận 12, HCM Sự khác hai lồi lài với điều kiện sinh truởng khác Lài vùng Grasse Jasminum grandiýlorum lài cánh to phát triển điều kiện khác với lài Jasminum sambac nuớc ta 4.5.2.3 Chỉ số ester (IE) Chỉ số ester hiệu số số savon hóa số acid IE = IS - IA = 68,99 - 3,73 = 65,26 PHẦN KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 5.1 KẾT LUẬN 5.1.1 Đặc điểm sinh học hoa lài S Lài An Phú Đông, HCM lài Jasminum sambac L ■S Thân bụi, nhiều nhánh S Lá lài thuôn, nhọn, cuống ngắn S Hoa màu trắng, huơng thơm nhẹ nhàng, phát hoa - hoa 5.1.2 - Hiệu suất chiết xuất Dung mơi ly trích ethanol cho hiệu suất kết cao nhiều so với dung môi khác (4,4 - 6,4 %) nhung khó loại sáp chất béo nên khó thu tinh dầu tinh khiết - Qui trình cho hiệu suất cô kết tuơng đuơng phuơng pháp siêu âm (khoảng 0,3 %) nhung thời gian ly trích kéo dài - Phuơng pháp siêu âm với dung môi ly trích Petroleum ether cho hiệu cao, thời gian ly trích ngắn, dễ thu tinh dầu tinh khiết, tốn phuơng pháp khác tinh dầu hoa lài thu đuợc có mùi thơm tự nhiên 5.1.3 - Thành phần hóa học tinh dầu hoa lài Một số cấu phần tinh dầu hoa lài chiếm hàm luợng cao: germacrene D-4-ol; oc - ĩarnesene; benzyl acetate; indole; linalool; nerolidol; 9,12,15octadecatrienoic acid, methyl ester; 10-heneicosene (c,t) benzyl alcohol - Hàm luợng linalool (9,42 %); germacrene D-4-ol (35,17 %) methyl anthranilate (3 %) cao phuơng pháp ngâm chiết tĩnh, qui trình với dung mơi ly trích Petroleum ether hexan - Hàm luợng indole (6,19 %) benzyl acetate (8,71 %) phuơng pháp lắc với dung mơi ly trích Petroleum ether đạt cao - Hàm luợng oc - famesene (24,54 %) oc - cadinol (10,76 %) đạt cao phuơng pháp chung cất nuớc cổ điển - Phương pháp ngâm chiết tĩnh qui trình phương pháp siêu âm tách nhiều cấu tử tinh dầu hoa lài - Phương pháp chưng cất nước cổ điển tách nhiều cấu tử tinh dầu hoa lài tinh dầu tạo phương pháp có mùi thơm tự nhiên Petroleum ether dung mơi có hiệu ly trích cao 5.1.4 Tính chất hóa lý tinh dầu hoa lài Tinh dầu hoa lài ly trích có: d27’5 = 0,9068 27,5 n 5.2 • Tỷ trọng: • Chỉ số khúc xạ: • Chỉ số acid: • Chỉ số savon hóa: • Chỉ số ester: = 1?4875 IA= 3,73 IS = 68,99 IE= 65,26 ĐÈ NGHỊ ♦♦♦ Ly trích tinh dầu hoa lài theo phương pháp dùng vi sóng, dioxyt carbon để so sánh hiệu suất với phương pháp khác ♦♦♦ So sánh hàm lượng thành phần hóa học tinh dầu hoa lài độ tuổi thời điểm thu hoạch khác ♦♦♦ Thử nghiệm tính kháng khuẩn tinh dầu hoa lài với nhiều loại vi khuẩn nồng độ khác TÀI LIỆU THAM KHẢO r r i • Ì i í J * Ấ T T Ị Ạ i Tài liệu tiêng Việt [1] Nguyễn Hữu Đảng Cây cảnh đẹp cho vị thuốc hay chữa bệnh Nhà xuất Hà Nội [2] Văn Đình Đệ Sản xuất chất thơm thiên nhiên tổng hợp Nhà xuất Khoa học Kỹ thuật Hà Nội [3] Phạm Hoàng Hộ, 1999 Cây cỏ Việt Nam, III Nhà xuất Trẻ [4] Đỗ Tất Lợi, 1962 Các phương pháp chế tinh dầu Nhà xuất Khoa học [5] Lê Ngọc Thạch, 2003 Tinh Dầu Nhà xuất đại học Quốc Gia Thành Phố Hồ Chí Minh [6] Huỳnh Anh Trúc, 2004 Ly trích tinh dầu hoa lài Khóa luận tốt nghiệp, ngành Sinh Học, Đại học Khoa học Tự nhiên Thành Phố Hồ Chí Minh [7] Phạm Hùng Việt Cơ sở ỉỷ thuyết phương pháp sắc Kỷ Khỉ Nhà xuất Khoa học Kỹ thuật [8] Nguyễn Năng Vinh, 1978 Kỹ thuật khai thác sơ chế tinh dầu Nhà xuất Nông nghiệp [9] Phùng Thị Bạch Yến, 2000 Hoa lài lồi hoa quỉ Phân viện Cơng nghệ Thực phẩm Thành Phố Hồ Chí Minh Tài liệu tiếng nước [10] Ernest Guenther, 1952 The Essential Oils (vol 5): p.319 - 339 [11] R p Singh T A More, 1982 The production and perỷume potential of lasminum collections Indian perĩumer (26): p.156 - 159 [12] Hien Phan Phuoc, 2003 La mỉse au point et Vbptimisation des méthodes d’extraction et de contrôle quaỉité d’extraits de plantes VietNamiennes Rapport pour le stage de post- doctorant en chimie industriclle: p.6 - 20, 52 - 62 [13] Wu Cheng-shun, Zhao De-xiou, Sun Shou-wei, Ma Ya-ping, Wang Qin-quan Lu Sheng-chun, 1987 The minor Chemical components of the absolute oil Ịrom the flower of lasmỉnum sambac (L.) aiton Acta Botanica Sinica (vol 6): p.636 - 642 Các trang Web [14] http://www.lamdong.gov.vn/cdrom/vte/hoalamthuoc.htm [15] http://www.lamdong.gov.vn/KweuHNMD/Congnghiep/Hoa%201ai.htm [16] http://www.buyaromatherapy.com/store/iasmine samban oil.html [17] http://www.botanical.eom/botanical/mgmh/i/iasmin06.html#des PHẦN PHỤ LỤC PHỤ LỤC PHƯƠNG PHÁP LẤY VÀ PHÂN TÍCH MẪU ĐẤT 1.1 Phương pháp lấy mẫu đất - Nguyên tắc: Lấy mẫu riêng biệt nhiều điểm khác hỗn hợp lại, lấy mẫu trung bình Thông thuờng lấy từ - 10 điểm Tránh vị trí cá biệt khơng đại diện nhu chỗ bón phân hay vôi tụ lại, chỗ tốt hay xấu, chỗ bị bệnh - Phuơng pháp lấy mẫu đất: Lấy mẫu theo đuờng chéo, lấy điểm phân bố đồng tồn diện tích, điểm lấy khoảng 200 g đất bỏ dồn vào túi lớn - Trộn lấy mẫu hỗn hợp: Các mẫu riêng biệt đuợc băm nhỏ trộn giấy mỏng chia phần theo đuờng chéo Lấy phần đối diện trộn lại đuợc mẫu hỗn hợp Luợng đất mẫu hỗn hợp lấy khoảng 0,5 kg - kg cho vào túi vải, ghi phiếu mẫu bút chì để tránh nhịe 1.2 Phương pháp đo pH đất Lấy g đất cho vào bình tam giác nhỏ 50 ml, thêm 25 ml nuớc cất, lắc để yên 15 phút Tiến hành đo pH 1.3 Phương pháp đo độ ẩm đất Sấy 10 g đất 60°c đến khối luợng không đổi, phần khối luợng giám luợng nuớc có mẫu Từ luợng nuớc suy độ ẩm mẫu đất Phụ lục Tên gọi khác chất hóa học tinh dầu hoa lài S Benzyl acetate: acetic acid, phenylmethyl ester S Linalool: l,6-Octadien-3-ol,3,7-dimethyl- S Germacrene D-4-ol: l-Hydroxy-l,7-dimethyl-4-isopropyl-2,7-cyclodecadiene S Methyl anthranilate: benzoic acid, 2-amino-, methyl ester SNerolidol: l,6,10-Dodecatrien-3-ol,3,7,ll- trimethyl- sFarnesol: 2,6,10-Dodecatrien-l-ol,3,7,ll- trimethyl- s Ethyl benzoate: benzoic acid, ethyl ester PHỤ LỤC PHỔ ĐỒ CỦA CÁC CHẤT CHIẾM HÀM LƯƠNG CAO TRONG TINH DẦU HOA LÀI ... định tính chất vật lý hóa học tinh dầu hoa lài Tính chất vật lý Sử dụng tinh dầu hoa lài ly trích từ phương pháp chưng cất nước cổ điển để xác định tính chất vật lý a Tỷ trọng Tỷ trọng tinh dầu. .. > Khảo sát đặc điểm sinh học hoa lài An Phú Đông, Thành phố HCM > Chiết xuất tinh dầu hoa lài phưong pháp dung môi khác > Xác định cấu tử tinh dầu hoa lài > Xác định tính chất vật lý hóa học tinh. .. cô kết phương pháp dung môi ly trích khác >Khảo sát thành phần cấu tử tinh dầu hoa lài >Khảo sát tính chất hóa lý tinh dầu hoa lài • Chỉ số vật lý: tỉ trọng, số khúc xạ Chỉ số hóa học: số acid