Tài liệu Bài thuyết trình - Công nghệ sinh học pdf

MÔN: SINH HỌ C PHÂN T Ử GVHD: GVHD: NGUY NGUYỄ ỄN N TH TH ỊỊDUY DUY KHOA KHOA NGUYỄN ĐÌNH B O Ả TRẦ N QU C ỐH C Ọ NGUYỄN H U Ữ SĨ PHAN NGỌ C TH NH Ị TRẦ N XUÂN ÁI QUÁCH THỊ QUỲNH MAI 7.VÕHTH ỒTHỊ B NH Ị Ả ƯÁI OSANG PHẠM TH ỊT NH Ỉ VÕ THỊ B Ả OTR ÁI Ầ N NG ĐÔNG ANH Ọ Ị PHAN C TH NH  TRẦ Ố Ọ N QU C H C 10 NGUY Ễ N TH Ị THU L U Ự NGUYỄNTR ĐÌNH BO Ả ÁI Ầ N XUÂN 11 Ễ NGUY ỄN MINH NGUY N TH ỊTHUTHLTẬỰU TH Ị QUỲNH MAI PHẠM THQUÁCH NH Ỉ  ỊT ỮSĨ NGUYỄN U ỄNH MINH NGUY TH Ậ T I KHÁI NIỆM     PCR chữvi ết tắt c m ụ t Polymerase Chain Reaction PCR Phản ứng chuỗi trùng h pợ hay gọi "ph nả ứng khuếch đ iạgen" PCR k ỹthu t ậph biổ ến sinh học phân t nhằm khuyếch đ iạ(t ạo nhiều sao) m tộđo nạDNA mà không cần s ửd ng ụ sinh v t sậngốnh E coli hay nấm men PCR sửd ng ụ nghiên c uứsinh h c ọ yhc ọ phục v ụnhi ều mục đích khác nhau, nh ưphát hi ện bệnh di truy nề , nhận d ng, ch nẩđoán nh ngữ bệnh nhi ễm trùng, tách dòng gene, xác định huyết th ng ố II LỊCH S Ử Phương pháp ch yạPCR đ ược Kary Mullis phát minh, ông đoạt giải Nobel vềHóa h cọ vào tháng 10 năm 1993 cho thành tựu này, sau năm ông đưa ý t ưởng Ý kiến Mullis phát triển quy trình mà DNA có th ểnhân lên nhi ều lần cách nhân t ạo qua nhiều chu kỳ chép enzyme DNA polymerase III THỰ C NGHI ỆM PCR   PCR dùng đểkhu ch m t đo ng n, ế đ iạ ộ n DNA ắ xác định ph n ầ Đó có th ể m t gen ộ đ n, hay ph n ầ c aủgen PCR cần r ất nhiều thành phần - DNA mẫu (template) ch aứ m nh ả DNA c n ầ khu ch ếđ i - Cặp m i(primer), - DNA-polymerase enzym xúc tác cho việc nhân lên DNA - Nucleotides (ví dụdNTP)là nguyên li ệu cho DNA-polymerase đểxây d ng ự DNA m i.ớ - Dung dịch đệm, cung c pấ môi tr ường hóa học cho DNA-polymerase III THỰ C NGHI ỆM PCR chu kỳ nhiệt Đây máy đun nóng làm nguội ống phản ứng nhiệt độchính xác cho ph nả ứng Đểngăn ng aừ s bay ự h i cơa ủ hỗn h p ợ ph nả ứng, phần n pắ đậy c aủ máy PCR đ ược đun nóng, trường hợp l ượng dung dịch phản ứng ít, người ta cho lớ p dầu (natural oil) lên bềm tặ hỗn h p ợ ph nả ứng Năm 2004, giá máy khoảng 2500 USD Phản ứng PCR thực hi ện PCR machine III.1 Đoạn mồi ợ nhân t ạo – Mồi nh ữ ng đo nạng n,ắs i DNA khơng q 50 (thường 18-25) nucleotides (vì DNA thường sợi đơi, chi ều dài đ ược xác đị nh s ốl ượ ng cặp base (bp); chi ều dài s ợ i đ nơDNA đ ược đo base hay nucleotides) III.2 Quy trình Quy trình PCR gồm 20 đ ến 30 chu kỳ M iỗ chu kỳ gồm b ước: - Nhiệt độtăng lên 94-96°C đ ểtách hai s iợ DNA Bước gọi bi ến tính, phá vỡ cầu nối hydrogen n ố i s iợDNA - Sau sợi DNA tách ra, nhi ệt độđ ược hạ ể i có th g ển vào ắ s i DNA ợ đ n thấp xu ố ng đ m Bước gọi g ắ n m i.ồ - Cuối cùng, DNA polymerase g ắn ti ếp vào ộ dcọ sợi tr ống Nó bắt đ ầ u bám vào ho tạđ ng theo sợi DNA B ước gọi kéo dài IV Những ứng dụng c PCR         Vân tay di truyền Kiểm tra huyết th ng ố Chuẩn đoán b nh ệ di truy nề Tách dòng gen Gây đột bi ến điểm Phân tích mẫu DNA c ổ Xác định gen đ tộbi ến So sánh mức đ ộbi ểu gen ... thành phần - DNA mẫu (template) ch aứ m nh ả DNA c n ầ khu ch ếđ i - Cặp m i(primer), - DNA-polymerase enzym xúc tác cho việc nhân lên DNA - Nucleotides (ví dụdNTP)là nguyên li ệu cho DNA-polymerase... PCR k ỹthu t ậph biổ ến sinh học phân t nhằm khuyếch đ iạ(t ạo nhiều sao) m tộđo nạDNA mà không cần s ửd ng ụ sinh v t sậngốnh E coli hay nấm men PCR sửd ng ụ nghiên c u? ?sinh h c ọ yhc ọ phục... sánh mức đ ộbi ểu gen Bến Tre ứng dụng công ngh ệPCR Real-time xét nghiệm bệnh tôm Việc xét nghiệm bệnh tôm h ệth ng ố PCR Real-time tiến hành theo qui trình khép kín Trước tiên, mẫu tơm Post