Năm flavonoid (1 - 5) đã được phân lập từ phân đoạn ethyl acetat cây tầm bóp (Physalis angulata L.) thu hái ở huyện Gia Lâm, Hà Nội, Việt Nam. Cấu trúc hóa học của chúng được xác định gồm quercetin (1), quercetin 3-O-α-L-rhamnopyranosid (2), quercetin 3-O-β-D-glucopyranosid (3), myricetin 3-O-α-L-rhamnopyranosid (4) và quercetin 3-O-α-L-rhamnopyranosyl- (1→6)-β-D-glucopyranosid (5) dựa trên cơ sở các dữ liệu phổ thực nghiệm MS, NMR và so sánh với các dữ liệu phổ NMR đã công bố. Trong số các hợp chất trên, hợp chất 2 và 4 lần đầu tiên được công bố phân lập từ cây này.
www.vanlongco.com scavenging properties from Fagraea blumei, Helvetica Chimica Acta, 80(4), 1144-1152 Mouffok S, Haba H, Lavaud C, Long C, Benkhaled M (2012), Chemical constituents of Centaurea omphalotricha Coss & Durieu ex Batt & Trab., Records of Natural Products, 6(3), 292-295 Agrawal P K., Markham K R (1989), Carbon-13 NMR of flavonoids in studies in organic chemistry 39, Elsevier Science Publishers, 95-172 Cristiane P., Cleber B B J., Ricardo M K., Naomi K S., Cassia M S., Andrea P., Ludger W (2012), Flavonoids and a neolignan glucoside from Guarea macrophylla (Meliaceae), Quím Nova, 35(6), 1123-1126 10 Markham KR., Ternai B, Stanley R, Geiger H and Mabry TJ (1978), Carbon-13NMR studies of flavonoids—III: Naturally occurring flavonoid glycosides and their acylated derivatives, Tetrahedron, 34(9), 1389-1392 11 Chen GY, Dai CY, Wang TS, Jiang CW, Han CR, Song XP (2010), A new flavonol from the stem-bark of Premna fulva, ARKIVOC, 2010(2), 179185 12 Wen P, Han H, Wang R, Wang N, Yao X (2007), C-glycosylfavones and aromatic glycosides from Campylotropis hirtella (Franch.) Schindl, Asian Journal of Traditional Medicines, 2(4), 149-153 13 Guvenalp Z, Ozbek H, Unsalar T, Kazaz C, Demirezer LO (2006), Iridoid, flavonoid, and phenylethanoid glycosides from Wiedemannia orientalis, Turkis Journal of Chemistry, 30(3), 391- 400 14 Petrus AJA, Siva HS, Suguna G (2012), Isolation and characterisation of the antioxidant phenolic metabolites of Boerhaavia erecta L leaves, Journal of Pharmaceutical Sciences and Research, 4(7), 1856-1861 15 Vidal OE , Elias R, Faure F, Babad A, Jamian, Crespin F, Balansard G, Boudon G (1989), Flavonol Glycosides from Calendula officinalis flowers, Planta Medica, 55(1), 73-74 16 Xu LR, Zhou P, Zhi YE, Wu J, Zhang S (2009), Three new flavonol triglycosides from Derris trifoliate, Journal of Asian Natural Products Research, 11(1), 79-84 Tạp chí Dược liệu, tập 22, số 2/2017 (Trang 72 - 77) FLAVONOID PHÂN LẬP TỪ CÂY TẦM BĨP Hồng Thái Hòa1,*, Nguyễn Thượng Dong1, Trần Thị Oanh2, Lê Việt Dũng1, Huỳnh Đăng Khoa3, Đào Thị Thanh Hiền4 Viện Dược liệu; 2Bộ Y tế; 3Cao Đẳng Y tế Huế; 4Đại học Dược Hà Nội *Email: thaihoavietnam@yahoo.com (Nhận ngày 27 tháng 02 năm 2017) Tóm tắt Năm flavonoid (1 - 5) phân lập từ phân đoạn ethyl acetat tầm bóp (Physalis angulata L.) thu hái huyện Gia Lâm, Hà Nội, Việt Nam Cấu trúc hóa học chúng xác định gồm quercetin (1), quercetin 3-O-α-L-rhamnopyranosid (2), quercetin 3-O-β-D-glucopyranosid (3), myricetin 3-O-α-L-rhamnopyranosid (4) quercetin 3-O-α-L-rhamnopyranosyl(1→6)-β-D-glucopyranosid (5) dựa sở liệu phổ thực nghiệm MS, NMR so sánh với liệu phổ NMR công bố Trong số hợp chất trên, hợp chất lần cơng bố phân lập từ Từ khóa: Cây tầm bóp, Physalis angulata L., Flavonoids Summary Flavonoids Isolated from Physalis angulata L Five flavonoids (1 – 5) were isolated from an ethyl acetate extract of Physalis angulata L growing in Gia Lam district, Ha Noi city, Vietnam The structures of these compounds were identified to be quercetin (1), quercetin 3-O-α-Lrhamnopyranoside (2), quercetin 3-O-β-D-glucopyranoside (3), myricetin 3-O-α-L-rhamnopyranoside (4), and quercetin 3O-α-L-rhamnopyranosyl-(1→6)-β-D-glucopyranoside (5) based on the basis of MS and NMR analysis, and in comparison with the published NMR data Among them, compounds and were isolated from this plant for the first time Keywords: Physalis angulata L., Flavonoids Đặt vấn đề Cây tầm bóp hay cịn gọi tầm phốc, lồng đèn…, có tên khoa học Physalis angulata Linnaeus 1753, thuộc họ Cà (Solanaceae), loại thảo, sống năm, nhân dân sử dụng để tắm trị rôm sẩy cho trẻ em, người bị mẩn ngứa; tồn cịn dùng sắc uống điều trị viêm khớp, cứng khớp, họng sưng đau,… với hiệu cao Ở Việt Nam, mọc khắp nơi từ đồng 72 đến v ng núi có độ cao 1500 m Sơn La, Lạng Sơn, Bắc Giang, Hà Nội, Ninh Bình, Thanh Hóa, Đà Nẵng, Kon Tum, Gia Lai thành phố Hồ Chí Minh [1] Các nghiên cứu thành phần hóa học giới cho thấy toàn chứa steroid, alcaloid, phenol, tannin, glycosid carbonhydrat [2] Hai nhóm hợp chất tầm bóp flavonoid steroid (nhóm withanolid physalin: Tạp chí Dược liệu, tập 22, số 2/2017 www.vanlongco.com Withaminimin, withagulatin A, pubesenolid, physagulin B, physagulin D, physagulin J-O, physalin B, physalin D, physalin F-J, physalin TW) [3], [4] Các flavonoid myricetin 3-Oneohesperidosid [5], quercetin, quercetin 3-Omethyl ether, isoquercetrin kaempferol 7-Orhamnosid [6] có mặt Một số tác dụng sinh học chất phân lập cao phân đoạn công bố chống viêm loét [7], chống khối u, ung thư vú [8], chống oxy hóa [9], giảm glucose máu, giảm cholesterol, triglycerid,… [10] Ở Việt Nam, công trình nghiên cứu tầm bóp cịn hạn chế Vì vậy, nghiên cứu thành phần hóa học số tác dụng sinh học tầm bóp góp phần tăng giá trị sử dụng loài này, đồng thời cung cấp số liệu khoa học cho nghiên cứu sâu dược lý tương lai Bài báo trình bày kết phân lập số flavonoid từ phân đoạn ethyl acetat tầm bóp Nguyên liệu phương pháp nghiên cứu 2.1 Nguyên liệu Mẫu nghiên cứu tồn tầm bóp (Physalis angulata L.) thu hái huyện Gia Lâm, Hà Nội, Việt Nam vào tháng 11/2014 Mẫu sấy khô nhiệt độ 50ºC xay thành bột Mẫu PGS.TS Nguyễn Khắc Khôi - Viện Sinh thái Tài nguyên sinh vật PGS.TS Trần Văn ƠnBộ môn Thực vật - Đại học Dược Hà Nội giám định tên khoa học Mẫu tiêu lưu Phòng Tiêu - Bộ môn Thực vật - Đại học Dược Hà Nội với mã số HNIP/18111/15 phòng Tiêu bản, khoa Tài nguyên Dược liệu Viện Dược liệu 2.2 Phương pháp nghiên c u 2.2.1 Phương pháp chiết xuất, phân lập hợp chất: Dược liệu chiết phương pháp ngâm nhiệt độ thường với dung môi ethanol 96% Phân đoạn dịch chiết dung mơi hữu có độ phân cực tăng dần: n-hexan, ethyl acetat nbutanol Phân lập chất sắc ký cột hở với chất hấp phụ silica gel pha thường (cỡ hạt 63-200, 40-63 μm, Merck) Theo dõi phân đoạn chất sắc ký lớp mỏng pha thường (DC-Alufolien Tạp chí Dược liệu, tập 22, số 2/2017 60 F254, Merck 1,05715) Phát vết chất đèn tử ngoại hai bước sóng 254 nm 365 nm dùng dung dịch H2SO4 10% ethanol 96% hơ nóng mỏng dung dịch FeCl3/ethanol 5% Kiểm tra độ tinh khiết hợp chất phân lập sắc ký lớp mỏng 2.2.2 Phương pháp xác định cấu trúc hóa học hợp chất: Xác định cấu trúc hợp chất phân lập dựa tính chất lý hóa phương pháp phổ bao gồm: Điểm nóng chảy (đo máy Stuart SMP3); phổ khối lượng ESI-MS (ghi máy Hewlett Packard HP 5890, Serie II), phổ cộng hưởng từ hạt nhân 1H-NMR, 13C-NMR, DEPT (được ghi máy Bruker Avance - 500 MHz, chuẩn nội TMS - tetramethyl silan) kết hợp so sánh với liệu phổ chất công bố 2.3 Chiết xuất phân lập 3,0 kg bột dược liệu ngâm với ethanol 96% nhiệt độ phòng (3 lần, lần ngày) Các dịch chiết gộp lại cất thu hồi dung môi áp suất giảm thu cặn chiết tổng ethanol 96% (150,13 g) Phân tán cặn chiết nước chiết lỏng lỏng với dung mơi có độ phân cực tăng dần: n-hexan, ethyl acetat nbutanol Cất thu hồi dung môi áp suất giảm thu cặn chiết tương ứng n-hexan (TBH, 36,04 g), ethyl acetat (TBE, 40,01 g), n-buthanol (TBB, 50,03 g) nước (TBN, 20,02 g) Cặn ethyl acetat (30,0 g) phân tách sắc ký cột pha thường silica gel (63-200 µm), rửa giải ethyl acetat hệ dung môi gradient diclomethan-methanol (100:1, 20:1, 15:1, 10:1, 4:1, 2:1, v/v) thu 30 phân đoạn (TBE1-TBE30) Phân đoạn TBE3 (0,57 g) rửa aceton sau tiếp tục tinh chế cột silica gel, rửa giải với hệ dung môi diclomethan - methanol (10:1, v/v) thu hợp chất (23 mg), (31 mg) (27 mg) Phân đoạn TBE21 (0,25 g) rửa aceton tiếp tục tinh chế cột silica gel, rửa giải với hệ dung môi diclomethanmethanol-nước (10:1:0,1, v/v) thu hợp chất (19 mg) Phân đoạn TBE26 (0,74 g) rửa aceton kết tinh lại methanol thu hợp chất (68 mg) 73 www.vanlongco.com Hợp chất 1: Tinh thể hình kim màu vàng, đnc 313-314ºC; Rf = 0,41 (TLC, silica gel, diclomethan - methanol 8:1, v/v), màu đen với dung dịch FeCl3/ethanol 5% H-NMR (500 MHz, aceton-d6), (ppm): 6,26 (1H, d, J = 2,0 Hz, H-6), 6,51 (1H, d, J = 2,0 Hz, H8), 7,82 (1H, d, J = 2,0 Hz, H-2'), 6,99 (1H, d, J = 8,5 Hz, H-5'), 6,26 (1H, dd, J = 8,5; 2,0 Hz, H-6') 13CNMR (125 MHz, aceton-d6), (ppm): Xem Bảng Hợp chất 2: Chất rắn màu vàng, đnc 181183oC; Rf = 0,54 (TLC, silica gel, diclomethanmethanol-nước 85:15:0,1, v/v), màu đen với dung dịch FeCl3/ethanol 5% ESI-MS: m/z 471 [M+Na]+ (pos), M = 448 đvC H-NMR (500 MHz, CD3OD), (ppm): 6,22 (1H, d, J = 1,5 Hz, H-6), 6,39 (1H, d, J = 1,5 Hz, H-8), 7,36 (1H, d, J = 2,0 Hz, H-2'), 6,93 (1H, d, J =7,5 Hz, H-5'), 7,33 (1H, dd, J =1,5; 8,0 Hz, H6'), 5,37 (1H, d, J = 1,0 Hz, H-1''), 4,24 (1H, d, J=1,0 Hz, H-2''), 3,78 (1H, dd, J = 3,0; 9,0 Hz, H-3''), 3,36 (1H,d, m, J = 9,5 Hz, H-4''), 3,45 (1H, m, H-5''),0,95 (1H, t, J = 7,0 Hz, H-6'') 13C NMR (125MHz, CD3OD), (ppm): xem Bảng Hợp chất 3: Tinh thể hình kim màu vàng, đnc 224-226 ºC; Rf = 0,52 (TLC, silica gel, ethyl acetat-acid formic-nước 18:1:1, v/v), màu đen với dung dịch FeCl3/ethanol 5% ESI-MS: m/z 487 [M+Na]+ (pos), M = 464 đvC H-NMR (500 MHz, CD3OD&DMSO-d6), (ppm): 6,24 (1H, d, J = 2,0 Hz, H-6), 6,44 (1H, d, J = 2,5 Hz, H-8), 7,85 (1H, d, J = 2,5 Hz, H-2'), 6,91 (1H, d, J = 8,5 Hz, H-5'), 7,63 (1H, dd, J = 2,0; 8,5 Hz, H-6'); glc: 5,29 (1H, d, J = 7,5 Hz, H-1''), 3,51-3,60 (1H, m, H-2''), 3,51-3,60 (1H, m, H-3''), 3,51-3,60(1H, m, H-4''), 3,81 (1H, d, J = 1,5 Hz, H-5''), 3,88 (1H, d, J = 3,0 Hz, H-6a''), 3,67 (1H, m, H-6b'') 13C-NMR (125MHz, CD3OD & DMSO-d6), (ppm): Xem Bảng Hợp chất 4: Bột màu vàng, đnc.198-200 ºC; Rf = 0,56 (TLC, silica gel, toluen-acid aceticnước 4:1:5, v/v/v), màu đen với dung dịch FeCl3/ethanol 5% ESI-MS: m/z: 487 [M+Na]+ (pos), M = 464 đvC, CTPT: C21H20O12 H-NMR (500MHz, CD3OD), δ (ppm): 6,97 (2H, s, H-2' & H-6'), 6,38 (1H, d, J = 2,0 Hz, H8), 6,22 (1H, d, J = 2,5 Hz, H-6), 5,34 (1H, d, J = 1,0 Hz, H-1''), 4,24 (1H, q, J = 1,5 Hz, H-2''), 3,81 (1H, dd, J = 3,0; 9,0 Hz, H-3''), 3,36 (1H, t, J = 9,5 Hz, H-4''), 3,54 (1H, m, H-5''), 0,99 (3H, d, J = 6,5 Hz, H-6'') 13C-NMR (500MHz, CD3OD), δ (ppm): xem Bảng Hợp chất 5: Chất rắn màu vàng, đnc 188190oC; Rf = 0,33 (TLC, silica gel, n-butanol-acid acetic-nước 4:1:5, v/v), màu đen với dung dịch FeCl3/ethanol 5% H-NMR (500 MHz, CD3OD), δ (ppm): 6,23 (1H, d, J = 2,0 Hz, H-6), 6,42 (1H, d, J = 2,0 Hz, H-8), 7,69 (1H, d, J = 2,5 Hz, H-2'), 6,90 (1H, d, J = 8,5 Hz, H-5'), 7,65 (1H, dd, J = 2,0; 8,5 Hz, H-6'), glc: 5,12 (1H, d, J = 8,0 Hz, H-1''), 3,48 (1H, s, H-2''), 3,46 (1H, m, H-3''), 3,65 (1H, dd, J =2,0;7,5 Hz, H-4''), 3,35 (1H, m, H-5''), 3,43 (1H, m, H-6''a), 3,82 (1H, dd, J = 1,0; 11,0 Hz, H6''b); rham: 4,54 (1H, d, J = 1,5 Hz, H-1'''), 3,55 (1H, dd, J = 9,0; 3,0 Hz, H-2'''), 3,29 (1H, m, H3'''), 3,30 (1H, m, H-4'''), 3,46 (1H, m, H-5'''), 1,14 (3H, d, J = 6,0 Hz, H-6''') 13C-NMR (125 MHz, CD3OD), δ (ppm): Xem Bảng Bảng Phổ 13C-NMR (125 MHz) hợp chất 1-5 Hợp chất C 10 1′ 2′ 74 13 C (aceton-d6) 146,9 136,7 176,5 162,3 99,1 164,9 94,4 157,7 104,1 123,7 115,7 Hợp chất 13 Hợp chất C (CD3OD&DMSOd6) 158,3 135,6 179,4 162,9 99,9 165,9 94,8 158,6 105,6 122,9 116,3 13 C (CD3OD) 158,5 136,3 179,7 163,2 99,8 165,9 94,7 159,3 105,9 122,9 116,4 Hợp chất 13 C (CD3OD) 159,4 136,3 179,7 163,2 99,8 165,8 94,7 158,5 105,9 121,9 109,6 Hợp chất 13 C (CD3OD) 158,5 135,7 179,4 163,0 99,9 166,0 94,9 159,3 105,7 123,6 116,1 Tạp chí Dược liệu, tập 22, số 2/2017 www.vanlongco.com 3′ 4′ 5′ 6′ 1′′ 2′′ 3′′ 4′′ 5′′ 6′′ 1‴ 2‴ 3‴ 4‴ 5‴ 6‴ 145,8 148,3 116,2 121,4 146,4 149,8 116,9 123,0 103,6 71,9 72,2 73,3 72,0 17,7 145,8 149,9 117,8 123,0 104,9 73,1 75,0 69,9 77,2 61,9 Kết bàn luận Hợp chất 1: Phân tích phổ 1H-NMR, 13CNMR DEPT cho tín hiệu đặc trưng flavonol Phổ 1H-NMR xuất tín hiệu proton vịng thơm tín hiệu tương tác ABX δH 7,82 (1H, d, J = 2,0 Hz, H-2′); 7,69 (1H, dd, J = 2,0; 8,5 Hz, H-6′); 6,99 (1H, d, J = 8,5 Hz, H-5′) thuộc vòng thơm B, hai tín hiệu proton tương tác meta δH 6,51 (1H, d, J = 2,0 Hz, H-8) 6,26 (1H, d, J = 2,0 Hz, H-6) thuộc vòng thơm A Phổ 13C-NMR DEPT gồm 15C với nhóm CH đặc trưng cho CH nhân thơm δC 99,1 (C-6); 94,4 (C-8); 115,7 (C2′); 116,2 (C-5′) 121,4 (C-6′), 10 carbon bậc tín hiệu δC 176,5 ppm đặc trưng cho nhóm carbonyl, carbon bậc bốn có độ chuyển dịch δC 145,8; 148,3; 162,3; 164,9 ppm đặc trưng cho dạng liên kết nhân thơm với nhóm OH C-3′, C-4′, C-5, C-7 Ngồi ra, tín hiệu carbon δC 136,7 (C-3) đặc trưng cho carbon nối đôi liên kết với nhóm hydroxyl Dựa vào kiện phổ đồng thời so sánh với liệu phổ công bố [11], cấu trúc xác định 3,3′,4′,5,7-pentahydroxyflavon hay quercetin Hợp chất 2: Phổ 1D-NMR tương tự với phần aglycon quercetin Ngồi ra, phổ 1D-NMR cịn có thêm phân tử đường với tín hiệu proton anome δH 5,37 (1H, d, J = 1,0 Hz, H-1′′) proton khác 4,24 (1H, d, J = 1,0 Hz, H-2′′); 3,78 (1H, dd, J = 3,0; 9,0 Hz, H-3′′); 3,36 (1H, d, J = 9,5 Hz, H4′′); 3,45 (1H, m, H-5′′); 0,95 (1H, t, J = 7,0 Hz, Tạp chí Dược liệu, tập 22, số 2/2017 146,8 137,9 146,8 109,6 103,6 71,9 72,1 73,4 72,0 17,7 145,8 149,8 117,7 123,2 104,7 75,7 78,2 72,1 77,2 68,6 102,4 72,3 71,4 73,9 69,7 17,9 H-6′′), c ng với carbon δC 103,6 (C-1′′); 71,9 (C-2′′); 72,2 (C-3′′); 73,3 (C-4′′); 72,0 (C-5′′); 17,7 (C-6′′) khẳng định glycosid L-rhamnopyranose Vị trí liên kết -Lrhamnopyranose với C-3 aglycon khẳng định dựa tương tác HMBC δH 5,37 (H-1′′) 136,3 (C-3) Dựa vào phân tích tham khảo tài liệu [11], cho phép kết luận hợp chất quercetin 3-O- -Lrhamnopyranosid Hợp chất 3: Phổ 1D-NMR tương tự với aglycon quercetin, khác biệt nhận biết qua tín hiệu cộng hưởng phần glycosid, với tín hiệu proton δH 5,29 (1H, d, J = 7,5 Hz, H-1′′); 3,51-3,60 (3H, m, H2′′, H-3′′, H-4′′); 3,81 (1H, d, J = 1,5 Hz, H-5′′); 3,88 (1H, d, J = 3,0 Hz, H-6′′b); 3,67 (1H, m, H6′′a), c ng với carbon δC 104,9 (C-1′′); 73,1 (C2′′); 75,0 (C-3′′); 69,9 (C-4′′); 77,2 (C-5′′); 61,9 (C-6′′) khẳng định glycosid β-Dglucopyranose So sánh liệu phổ NMR với tài liệu tham khảo [12], cho phép kết luận quercetin 3-O- -D-glucopyranosid Hợp chất lần phân lập từ tầm bóp Hợp chất 4: Phổ 1H-NMR 13C-NMR xuất tín hiệu cộng hưởng flavonol glycosid phần aglycon đặc trưng với hai tín hiệu proton meta δH 6,38 (1H, d, J = 2,0 Hz, H-8) 6,22 (1H, d, J = 2,5 Hz, H6) vịng A, tín hiệu singlet δH 6,97 (2H, s, H-2′ & H-6′) proton vịng B đối xứng, có dạng bốn vị trí 1,3,4,5 Trên phổ 75 www.vanlongco.com C-NMR, 12 tín hiệu cộng hưởng tương ứng với 15 carbon với carbon carbonyl C 179,7 (C-4), tín hiệu vòng B C 121,9 (C1′); 109,6 (C-2′); 146,8 (C-3′); 137,9 (C-4′); 146,8 (C-5′); 109,6 (C-6′), tín hiệu thuộc vòng A C 163,2 (C-5); 99,8 (C-6); 165,8 (C-7); 94,7 (C-8); 158,5 (C-9); 105,9 (C10) Ngồi ra, tín hiệu carbon δC 136,3 (C3) đặc trưng cho carbon nối đôi liên kết với nhóm OH Các kiện cho ta giả thuyết cấu trúc 3′,4′,5′,5,7-pentahydroxyflavonol hay myricetin aglycon Ở v ng trường cao phổ 1H-NMR tín hiệu proton đặc trưng cho phân tử đường, tín hiệu proton anome xuất δH 5,34 (1H, d, J = 1,0 Hz, H-1′′), tín hiệu proton lại phân tử đường H 4,24 (1H, q, J = 1,5 Hz, H-2′′); 3,81 (1H, dd, J = 3,0; 9,0 Hz, H-3′′); 3,54 (1H, m, H5′′); 3,36 (1H, t, J = 9,5 Hz, H-4′′); 0,99 (3H, d, J = 6,5 Hz, H-6′′) Kết hợp phân tích tín hiệu carbon v ng đường phổ 13C-NMR C 103,6 (C-1′′); 71,9 (C-2′′); 72,1 (C-3′′); 73,4 (C4′′); 72,0 (C-5′′); 17,7 (C-6′′) cho phép nhận biết L-rhamnopyranose Trên phổ HMBC cho thấy tương tác proton anome H-1′′ đường với C-3 khung myricetin Căn vào việc phân tích kiện phổ kết hợp với tham khảo tài liệu [13] cho phép kết luận myricetin 3-O-α-L-rhamnopyranosid Hợp chất 5: Tương tự 3, phổ 1D-NMR 13 R1 H H H OH H cho hai v ng tín hiệu cộng hưởng rõ rệt Các tín hiệu trường thấp thuộc aglycon khung quercetin: Tín hiệu cộng hưởng proton nhân thơm với số tương tác J = 2,0 Hz đặc trưng cho proton vị trí meta vịng A 5,7-flavonol với H 6,23 (1H, H-6); 6,42 (1H, H-8) Ngoài cịn có tín hiệu cộng hưởng proton nhân thơm thuộc hệ tương tác spin ABX với H 7,69 (1H, d, J = 2,5 Hz, H-2′); 6,90 (1H, d, J = 8,5 Hz, H-5′); 7,65 (1H, dd, J = 2,5; 8,5 Hz, H-6′) Ở v ng trường cao tín hiệu phần đường So sánh số nguyên tử carbon (27 C) với quercetin (15 C), kết hợp phân tích tín hiệu cộng hưởng nhiều proton vùng H 3,29-5,11 ppm cho thấy có phân tử đường Trong đường rhamnose đặc trưng tín hiệu cộng hưởng proton doublet, cường độ mạnh H 1,14 ppm (3H, d, J = 6,0 Hz) nhóm CH3 Một đường khác glucose với proton anome H 5,12 (d, J = 8,0 Hz, H-l′′) gắn trực tiếp vào nhân quercetin vị trí C-3 ( C 135,7) qua liên kết O-glycosid Liên kết dissacharid hai đường (1→6)-Oglycosid liên kết đường aglycon khẳng định qua phổ HMBC tương tác H-1′′′ ( H 4,54) C-6′′ ( C 68,6); H-1′′ ( H 5,12) C-3 ( C 135,7) So sánh liệu phổ với tài liệu tham khảo [14] cho phép kết luận quercetin 3-O-α-L-rhamnopyranosyl-(1→6)-βD-glucopyranosid R2 H Rhamnopyranosid Glucopyranosid Rhamnopyranosid Rhamnopyranosyl-(1→6)-β-D-glucopyranosid Hình Các flavonoid phân lập từ phân đoạn ethyl acetat tầm bóp Kết luận Bằng phương pháp sắc ký kết hợp với phương pháp phổ, phân lập xác định cấu trúc flavonoid quercetin (1), quercetin 3O-α-L-rhamnopyranosid (2), quercetin 3-O-β-Dglucopyranosid (3), myricetin 3-O-α-Lrhamnopyranosid (4), quercetin 3-O-α-Lrhamnopyranosyl-(1→6)-β-D-glucopyranosid (5) 76 từ phân đoạn ethyl acetat tầm bóp (Physalis angulata L.) Trong số hợp chất này, hợp chất lần phân lập từ lồi Lời cảm ơn: Nhóm tác giả trân trọng cám ơn Trung tâm NMR Viện Hóa học-Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam giúp đo phổ cộng hưởng từ hạt nhân hợp chất tinh khiết phân lập từ tầm bóp Tạp chí Dược liệu, tập 22, số 2/2017 www.vanlongco.com Tài liệu tham khảo Viện Dược liệu (2006), Cây thuốc Động vật làm thuốc Việt Nam, Nxb Khoa học Kỹ thuật Porika R., Poojari S., Lunavath V., Mamidala E (2014), Preliminary phytochemical investigation and TLC analysis of P angulata fruit extract, Journal of Pharmacy and Biological Sciences, 9(2), 11-14 Damu A G., Kuo P C., Su C R., Kuo T H., Chen T H., Bastow K F., Lee K H., Wu T S (2007), Isolation, structures, and structure-cytotoxic activity relationships of withanolides and physalins from Physalis angulata, Journal of Natural Products, 70(7), 1146-1152 Makino B., Kawai M., Ogura T., Nakanishi M., Yamamura H., Butsugan Y (1995), Structural revision of physalin H isolated from Physalis algulata, Journal of Natural Products, 58(11), 1668-1674 Ismail N., Alam M (2001), A novel cytotoxic flavonoid glycoside from Physalis angulata, Fitoterapia, 72(6), 676-679 Augustine A A., Ufuoma A O (2013), Flavonoids from the leaves of Physalis angulata Linn., Planta Medica, 5(1), 40-43 Nanumala S K., Kannadhasan R., Gunda K., Sivakumar G., Somasekhar P (2012), Antiulcer activity of the ethanolic extract of leaves Physalis angulate L., International Journal of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences, 4(4), 226-228 Hsieh W.-T (2006), Physalis angulata induced G2/M phase arrest in human breast cancer cells, Food and Chemical Toxicolog, 44(7), 974-983 Murali K T., Vadluri R., Manoj K E (2013), In vitro determination of antioxidant activity of Physalis angulata L., International Journal of Pharma and Bio Sciences, 4(3), 541549 10 Abo K A., Lawal I O (2013), Antidiabetic activity of Physalis algulata extracts and fractions in alloxan- induced diabetic rats, Journal of Advanced Scientific Research, 4(3), 32-36 11 Agrawal P K (1989), Carbon-13 NMR of flavonoids in Studies in organic chemistry 39, Elsevier Science Publishers, 95-172 12 Markham K R., Ternai B., Stanley R., Geiger H., Mabry T J (1978), Carbon-13 NMR studies of flavonoids-III: Naturally occurring flavonoid glycosides and their acylated derivatives, Tetrahedron, 34(9), 1389-1392 13 Toan Phan N H., Kannadhasan R., Gunda K., Sivakumar G., Somasekhar P (2009), Flavonoids isolated from Dipterocarpus obtusifolius, Vietnam Journal of Chemistry, 53(2e), 131-136 14 Petrus A J A., Hemalatha S S., Suguna G (2012), Isolation and characterisation of the antioxidant phenolic metabolites of Boerhaavia erecta L leaves, Journal of Pharmaceutical Sciences and Research, 4(7), 1856-1861 Tạp chí Dược liệu, tập 22, số 2/2017 (Trang 77 - 82) PHÂN LẬP VÀ ĐỊNH LƯỢNG ĐỒNG THỜI HAI HỢP CHẤT DITERPENOID CHÍNH TRONG DƯỢC LIỆU HY THIÊM BẰNG HPLC Nguyễn Thị Phương1,*, Vũ Văn Tuấn1, Nguyễn Đình Quân1, Phương Thiện Thương1, Lê Văn Ninh2, Lê Văn Mạnh2, Ngô Thị Mai Anh3 Viện Dược liệu; 2Công ty cổ phần Dược vật tư y tế Thanh Hóa; 3Đại học Y Hà Nội *Email: vudangquang148@gmail.com (Nhận ngày 22 tháng năm 2017) Tóm tắt Từ cắn chiết ethanol 96% dược liệu hy thiêm, 02 diterpenoid glycosid (1-2) phân lập phương pháp sắc ký Các hợp chất xác định darutosid 16-O-acetyldarutosid dựa liệu phổ thực nghiệm so sánh với liệu phổ công bố Phương pháp định lượng đồng thời 02 hợp chất HPLC-UV/VIS xây dựng thẩm định Phương pháp sắc ký thực cột pha đảo VertisepTM UPS (4,6 x 250 mm, µm), hệ dung mơi acetonitril-nước rửa giải theo trương trình gradient, bước sóng phát 210 nm Khoảng tuyến tính darutosid 3,8-282 µg/ml (r=0,999) 16-O-acetyldarutosid 9,0-360 µg/ml (r=0,999) Phương pháp xây dựng đảm bảo yêu cầu độ độ lặp lại Giới hạn phát (LOD) giới hạn định lượng (LOQ) hợp chất darutosid 1,0 µg/ml 3,3 µg/ml; hợp chất 16-O-acetyldarutosid 2,5 µg/ml 8,3 µg/ml Phương pháp áp dụng để xác định hàm lượng darutosid 16-O-acetyldarutosid mẫu dược liệu hy thiêm thu hái Thanh Hóa, Nghệ An, Hà Nội Từ khóa: Hy thiêm, HPLC, Darutosid, 16-O-Acetyldarutosid Summary Isolation and Simultaneous Quantification of two Major Diterpenoids from the Herba Siegesbeckiae by HPLC From the 96% ethanol extract of the Herba Siegesbeckiae, two diterpenoid glycosides (1-2) were isolated by using chromatographic methods These isolates were identified as darutoside (1) and 16-O-acetyldarutoside (2) by spectroscopic analyses and comparison with published literature data An HPLC-UV/VIS method for simultaneous quantification of darutoside and 16-O-acetyldarutoside from Herba Siegesbeckiae was developed and validated The method was carried out using a VertisepTM UPS (4.6 x 250 mm, µm) reverse phase column with a gradient solvent system of acetonitrile-water and Tạp chí Dược liệu, tập 22, số 2/2017 77 ... Rhamnopyranosyl-(1→6)-β-D-glucopyranosid Hình Các flavonoid phân lập từ phân đoạn ethyl acetat tầm bóp Kết luận Bằng phương pháp sắc ký kết hợp với phương pháp phổ, phân lập xác định cấu trúc flavonoid quercetin (1),... tương lai Bài báo trình bày kết phân lập số flavonoid từ phân đoạn ethyl acetat tầm bóp Nguyên liệu phương pháp nghiên cứu 2.1 Nguyên liệu Mẫu nghiên cứu toàn tầm bóp (Physalis angulata L.) thu... 3-O-α-Lrhamnopyranosyl-(1→6)-β-D-glucopyranosid (5) 76 từ phân đoạn ethyl acetat tầm bóp (Physalis angulata L.) Trong số hợp chất này, hợp chất lần phân lập từ loài Lời cảm ơn: Nhóm tác giả trân trọng cám