Flavonoid phân lập từ cây Mễ tử liễu

Mễ tử liễu có tên khoa học là Polygonum plebeium R.Br., thuộc họ Rau răm (Polygonaceace) là cây thân thảo một năm, được sử dụng trong dân gian để thanh nhiệt, lợi tiểu, chữa viêm đường tiết niệu, sỏi thận, lỵ, lở ghẻ, mẩn ngứa, mụn nhọt, giun đũa. Cây phân bố ở vùng nhiệt đới và á nhiệt đới châu Á, Australia, châu Phi; Ở Việt Nam, cây mọc ở Sơn La, Lạng Sơn, Tuyên Quang, Quảng Ninh, Bắc Giang, Hà Nội, Nam Định, Ninh Bình, Nam Bộ.

www.vanlongco.com NGHIÊN CỨU KHOA HỌC Tạp chí Dược liệu, tập 22, số 2/2017 (Trang 63 - 72) FLAVONOID PHÂN LẬP TỪ CÂY MỄ TỬ LIỄU Trần Thanh Hà1,2,*, Nguyễn Văn Đậu2, Đỗ Thị Hà1, Nguyễn Minh Khởi1 Viện Dược liệu; Khoa Hoá học- Đại học Khoa học Tự nhiên- Đại học Quốc gia Hà Nội *Email: thanhha.tran889@gmail.com (Nhận ngày 18 tháng năm 2017) Tóm tắt 10 flavonoid phân lập từ phân đoạn chiết ethyl acetat n-butanol mễ tử liễu (Polygonum plebeium R Br.) thu hái Việt Nam bao gồm: chrysin (1), quercetin (2), quercetin 3-O-β-D-galactopyranosid (3), quercetin 3-O-β-D-arabinopyranosid (4), quercetin 3-O- -D-glucopyranosid (5), vitexin (6), apigenin7-O-β-D-glucopyranosid (7), rutin (8), isorhamnetin 3-O-α-Lrhamnopyranosyl-(1→2)-rutinosid (9), quercetin-3-O-α-L-rhamnopyranosyl-(1→6)-β-D-glucopyranosyl-(1→3)-β-D-glucopyranosid (10) Cấu trúc hóa học chúng xác định dựa sở kiện phổ thực nghiệm MS, NMR kiện phổ NMR công bố Trong số hợp chất này, hợp chất 10 lần phân lập từ chi Polygonum thể khả chống oxy hóa quét gốc DPPH với giá trị EC50 50,40 45,92 µg/ml so với chất đối chứng quercetin (EC50=10,82 µg/ml) Từ khóa: Polygonum, Polygonum plebeium, Rutin, Isorhamnetin 3-O-α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)-rutinosid, Quercetin-3-Oα-L-rhamnopyranosyl-(1→6)-β-D-glucopyranosyl-(1→3)-β-D-glucopyranosid Summary Flavonoids Isolated from Polygonum plebeium R Br 10 flavonoids were isolated from ethyl acetate and n-butanol extracts of the rhizome of Polygonum plebeium R Br growing in Vietnam, including: chrysin (1), quercetin (2), quercetin 3-O-β-D-galactopyranoside (3), quercetin 3-O-β-D-arabinopyranoside (4), quercetin 3-O- -D-glucopyranoside (5), vitexin (6), apigenin7-O-β-D-glucopyranoside (7), rutin (8), isorhamnetin 3-O-α-Lrhamnopyranosyl-(1→2)-rutinoside (9), quercetin-3-O-α-L-rhamnopyranosyl-(1→6)-β-D-glucopyranosyl-(1→3)-β-D-glucopyranoside (10) The structures of these compounds were identified on the basis of NMR and MS analysis, and in comparison with the published NMR data Among them, compounds and 10 were isolated from Polygonum genus for the first time and exhibited free radical scavenging capacity by DPPH with EC50 values as 50.40 and 45.92 µg/ml, respectively, comparison with quercetin with EC50 value of 10.82 µg/ml Key-words: Polygonum, Polygonum plebeium, Rutin, Isorhamnetin 3-O- α-L-rhamnopyranosyl-(1→6) -rutinoside, Quercetin 3-O-α-L-rhamnopyranosyl-(1→6)-β-D-glucopyranosyl-(1→3)-β-D-glucopyranoside Đặt vấn đề Mễ tử liễu có tên khoa học Polygonum plebeium R.Br., thuộc họ Rau răm (Polygonaceace) thân thảo năm, sử dụng dân gian để nhiệt, lợi tiểu, chữa viêm đường tiết niệu, sỏi thận, lỵ, lở ghẻ, mẩn ngứa, mụn nhọt, giun đũa Cây phân bố vùng nhiệt đới nhiệt đới châu Á, Australia, châu Phi; Ở Việt Nam, mọc Sơn La, Lạng Sơn, Tuyên Quang, Quảng Ninh, Bắc Giang, Hà Nội, Nam Định, Ninh Bình, Nam Bộ [1] Các nghiên cứu thành phần hóa học cho thấy toàn chứa 11% tanin, thân rễ chứa oxymethylanthraquinon; người ta tìm thấy acid oleanolic, acid betulinic, epi-friedelanol, β-sitosterol, quercetin, quercetin3-arabinosid quercetin-3-rutinosid từ hoa lồi Ấn Độ [2] Tạp chí Dược liệu, tập 22, số 2/2017 Các nghiên cứu ban đầu chúng tơi thành phần hóa học mễ tử liễu thu hái Việt Nam có mặt phytosterol, triterpen, flavonoid từ phân đoạn chiết nhexan, ethyl acetat bao gồm acid montanic, βsitosterol, stigmasterol, lupeol, acid betulinic, daucosterol, kaempferol, kaempferol 3-rhamnosid, kaempferol-3-arabinofuranosid, kaempferol 3glucosid [3], [4] Bài báo tiếp tục công bố kết phân lập hợp chất từ phân đoạn ethyl acetat n-butanol Nguyên liệu phương pháp nghiên cứu 2.1 Nguyên liệu Mẫu nghiên cứu: toàn mễ tử liễu (Polygonum plebeium R Br.) thu Hưng Yên vào tháng 07/2013, sau sấy khô nhiệt độ 50ºC xay thành bột Mẫu nhà khoa 63 www.vanlongco.com học khoa Tài nguyên Dược liệu- Viện Dược liệu giám định tên khoa học Tiêu mẫu số DL291213 lưu khoa Hóa thực vật - Viện Dược liệu 2.2 Phương pháp nghiên c u 2.2.1 Phương pháp phân lập hợp chất: Sắc ký lớp mỏng (TLC) thực mỏng tráng sẵn DC-Alufolien 60 F254 (Merck 1,05715) Phát chất đèn tử ngoại bước sóng 254 366 nm dùng thuốc thử màu dung dịch H2SO4 10% phun lên mỏng, sấy khô hơ nóng bếp điện từ từ đến màu, dung dịch FeCl3/ethanol 5% Sắc ký cột (CC) tiến hành với chất hấp phụ silica gel pha thường (cỡ hạt 63-200, 4063 μm, Merck) 2.2.2 Phương pháp xác định cấu trúc hóa học hợp chất: Điểm nóng chảy đo máy Stuart SMP3 Phổ khối lượng (ESI-MS) ghi máy Hewlett Packard HP 5890, Serie II Phổ cộng hưởng từ hạt nhân 1H-NMR, 13CNMR, DEPT ghi máy Bruker Avance500 MHz, chuẩn nội TMS (tetramethyl silan) 2.2.3 Phương pháp quét gốc DPPH: 1,1diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) gốc tự bền, dung dịch có màu tím, bước sóng cực đại hấp thụ 517 nm Các chất có khả chống oxy hóa trung hòa gốc DPPH cách cho hydrogen, làm giảm độ hấp thụ bước sóng cực đại màu dung dịch phản ứng nhạt dần, chuyển từ tím sang vàng nhạt [5], [6] 2.3 Chiết xuất phân lập 2,5 kg bột dược liệu ngâm với cồn 90% nhiệt độ phòng (3 lần, lần ngày) Các dịch chiết gộp lại cất loại cồn nước áp suất giảm thu cặn chiết tổng (289,85 g) Cặn chiết phân bố lại dung mơi có độ phân cực tăng dần: n-hexan, ethyl acetat, n-butanol Cất loại hết dung môi áp suất giảm thu phần cặn chiết tương ứng n-hexan (MTH, 71,86 g), ethyl acetat (MTE, 71,25 g), n-butanol (MTB, 41,43 g) Phần chiết ethyl acetat (70 g) phân tách sắc ký cột cột silica gel (63-200 µm) 64 Mẫu đưa lên cột theo phương pháp tẩm mẫu khô Rửa giải sắc ký với ethyl acetat hệ dung môi gradient ethyl acetat-methanol (99:1, 9:1, 8:1, 5:1, 1:1, v/v) thu 125 phân đoạn, phân đoạn 250 ml Các phân đoạn có TLC giống gộp lại cất loại dung môi áp suất giảm cho 11 nhóm phân đoạn MTE1→11 Nhóm phân đoạn MTE2 (17,11 g) tinh chế cột silica gel cỡ hạt 40-63 µm, rửa giải sắc ký với diclomethan hệ dung môi gradient diclomethan-methanol (9:1, 8:1, 4:1, 2:1, v/v) thu 13 nhóm phân đoạn từ MTE2.1 → MTE2.13 Nhóm phân đoạn MTE2.4 tiếp tục tinh chế với cột silica gel cỡ hạt 40-63 µm rửa giải sắc ký với hệ dung môi diclomethanaceton (50:1) thu chất (17 mg) Nhóm phân đoạn MTE2.5 tiếp tục tinh chế với cột silica gel cỡ hạt 40-63 µm rửa giải sắc ký với hệ dung môi diclomethan-aceton (20:1) thu chất (10 mg) Nhóm phân đoạn MTE2.9 tinh chế với cột silica gel cỡ hạt 40-63 µm rửa giải sắc ký với hệ dung môi diclomethan-aceton (7:1) thu hợp chất (17 mg) Nhóm phân đoạn MTE2.10 tiếp tục tinh chế với cột silica gel cỡ hạt 40-63 µm rửa giải sắc ký với hệ dung môi diclomethan-aceton (6:4) thu (20 mg) Nhóm phân đoạn MTE4 (1,50 g) rửa ethyl acetat sau kết tinh lại methanol cho tinh thể hình kim màu vàng nhạt (30 mg) Nhóm phân đoạn MTE5 (0,50 g) rửa methanol sau kết tinh lại methanol nóng cho tinh thể hình kim màu vàng nhạt (15 mg) Nhóm phân đoạn MTE8 (9,34 g) tinh chế cột silica gel cỡ hạt 40-63 µm, rửa giải sắc ký với ethyl acetat hệ dung môi gradient ethyl acetat-methanol (9:1), 8:1, 5:1) thu nhóm phân đoạn từ MTE8.1 → MTE8.5 Nhóm phân đoạn MTE8.1 tiếp tục tinh chế cột silica gel RP-18 rửa giải sắc ký với hệ dung môi methanol-nước (1:5) thu chất (7 mg) Phần chiết n-butanol (MTB) (40 g) phân tách sắc ký cột (CC) cột silica gel (Merck, 63-200 µm) Mẫu đưa lên cột theo phương pháp tẩm mẫu khô Rửa giải sắc ký với ethyl acetat hệ dung môi gradient ethyl acetat- Tạp chí Dược liệu, tập 22, số 2/2017 www.vanlongco.com methanol-nước (99:1:0,11, 9:1:0,1, 8:1:0,1, 5:1:0,1, 1:1:0,1, v/v) cho 230 phân đoạn, phân đoạn 250 ml Các phân đoạn có TLC giống gộp lại cất loại dung mơi áp suất giảm cho 12 nhóm phân đoạn MTB1 → MTB12 Nhóm phân đoạn MTB4 (5,86 g) rửa aceton sau kết tinh lại hệ diclomethan-methanol thu chất rắn màu vàng (35 mg) Nhóm phân đoạn MTB6 (4,50 g) tiếp tục sắc ký với silica gel Rửa giải sắc ký với hệ dung môi gradient diclomethanmethanol 10:1, 4:1 thu chất rắn màu vàng (32 mg) Nhóm phân đoạn MTB10 (5,95 g) tiếp tục sắc ký với silica gel Rửa giải sắc ký với hệ dung môi diclomethan-methanol-H2O (4:1:0,1 thu chất rắn màu vàng, ký hiệu 10 (56 mg) Chrysin (1) Tinh thể màu vàng nhạt, đnc 204-206ºC Rf = 0,67 (TLC, silica gel, diclomethanmethanol (9:1, v/v), màu đen với dung dịch FeCl3/ethanol 5% H-NMR (500 MHz, aceton-d6), (ppm): 6,28 (1H, d, J = 2,0 Hz, H-6), 6,58 (1H, d, J = 2,0 Hz, H-8), 6,79 (1H, s, H-3), 8,07 (2H, dd, J = 6,5; 1,5 Hz, H-2' & H-6'), 7,59 (3H, m, H-3', H-4', H-5'), 12,88 (1H, s, 5-OH) 13 C-NMR (125 MHz, aceton-d6), (ppm): 165,1 (C-2), 106,2 (C-3), 183,1 (C-4), 163,4 (C5), 99,9 (C-6), 164,7 (C-7), 94,9 (C-8), 158,9 (C9), 105,6 (C-10), 132,3 (C-1'), 127,2 (C-2' & C6'), 129,9 (C-3' & C-5'), 132,7 (C-4') Quercetin (2) Tinh thể hình kim màu vàng, đnc 313-314 ºC Rf = 0,35 (TLC, silica gel, diclomethanmethanol (9:1, v/v), màu đen với dung dịch FeCl3/ethanol 5% H-NMR (500 MHz, aceton-d6), (ppm): 6,26 (1H, d, J = 2,0 Hz, H-6), 6,51 (1H, d, J = 2,0 Hz, H8), 7,82 (1H, d, J = 2,0 Hz, H-2'), 6,99 (1H, d, J = 8,5 Hz, H-5'), 6,26 (1H, dd, J = 8,5; 2,0 Hz, H-6') 13 C-NMR (125 MHz, aceton-d6), (ppm): 146,9 (C-2), 136,7 (C-3), 176,5 (C-4), 162,3 (C5), 99,1 (C-6), 164,9 (C-7), 94,4 (C-8), 157,7 (C9), 104,1 (C-10), 123,7 (C-1'), 115,7 (C-2'), 145,8 (C-3'), 148,3 (C-4'), 116,2 (C-5'), 121,4 (C-6') Quercetin 3-O-β-D-galactopyranosid (3) Tạp chí Dược liệu, tập 22, số 2/2017 Chất rắn màu vàng, đnc 232-233ºC Rf = 0,33 (TLC, silica gel, ethyl acetat-acid formic-nước (10:2:3, v/v), màu đen với dung dịch FeCl3/ethanol 5% H NMR (500 MHz, DMSO-d6), (ppm): 6,20 (1H, d, J = 2,0 Hz, H-6), 6,40 (1H, d, J = 2,0 Hz, H-8), 7,52 (1H, d, J =2,5 Hz, H-2'), 6,82 (1H, d, J = 9,0 Hz, H-5'), 7,66 (1H, dd, J =2,0; 8,5 Hz, H-6'); gal: 5,37 (1H, d, J = 7,5 Hz, H-1''), 3,45 (1H, m, H-2''), 3,55 (1H, t, J = 8,5 Hz, H-3''), 3,30-3,40 (H-4'', H-5'', H-6''), 12,62 (1H, s, 5OH), 5,10 (1H, s, OH-gal), 4,83 (1H, s, OH-gal), 4,42 (2H, brs, OH-gal) 13 C NMR (125 MHz, DMSO-d6), (ppm): 156,2 (C-2), 133,5 (C-3), 177,5 (C-4), 161,2 (C5), 98,7 (C-6), 164,1 (C-7), 93,5 (C-8), 156,3 (C9), 103,9 (C-10), 121,1 (C-1'), 115,2 (C-2'), 144,8 (C-3'), 148,4 (C-4'), 115,9 (C-5'), 121,9 (C-6'); gal: 101,8 (C-1''), 71,2 (C-2''), 73,2 (C-3''), 67,9 (C-4''), 75,8 (C-5''), 60,1 (C-6'') Quercetin 3-O- β-D-arabinopyranosid (4) Chất rắn màu vàng, đnc 265-267°C Rf = 0,43 (TLC, silica gel, ethyl acetatmethanol-nước (4:1:1, v/v/v), màu đen với dung dịch FeCl3/ethanol 5% H-NMR (500 MHz, CD3OD), (ppm): 6,22 (1H, d, J = 2,0 Hz, H-6), 6,42 (1H, d, J = 2,0 Hz, H-8), 7,76 (1H, d, J = 2,0 Hz, H-2'), 6,89 (1H, d, J = 7,5 Hz, H-5'), 7,59 (1H, dd, J = 2,0; 7,5 Hz, H-6'); arap: 5,16 (1H, d, J = 6,5 Hz, H-1''), 4,92 (1H, dd, J = 2,0; 8,5 Hz, H-2''), 3,66 (1H, dd, J = 3,5; 8,5 Hz, H-3''), 3,85 (1H, m, H-4''), 3,46 (1H, dd, J = 3,0; 13,5 Hz, H-5''a), 3,83 (1H, m, H-5'' b) 13 C-NMR (125 MHz, CD3OD), (ppm): 158,4 (C-2), 135,7 (C-3), 179,5 (C-4), 163,0 C-5), 99,9 (C-6), 166,0 (C-7), 94,7 (C-8), 158,7 (C-9), 105,6 (C-10), 122,9 (C-1'), 116,2 (C-2'), 145,9 (C-3'), 149,9 (C-4'), 117,5 (C-5'), 123,1 (C-6'); ara: 104,6 (C-1''), 72,9 (C-2''), 74,1 (C-3''), 69,1 (C-4''), 66,9 (C-5'') Quercetin 3-O- -D-glucopyranosid (5) Tinh thể hình kim màu vàng, đnc 224-226 ºC Rf = 0,52 (TLC, silica gel, ethyl acetat-acid formic-nước (18:1:1, v/v), màu đen với dung dịch FeCl3/ethanol 5% 65 www.vanlongco.com H-NMR (500 MHz, CD3OD & DMSO-d6), (ppm): 6,24 (1H, d, J = 2,0 Hz, H-6), 6,44 (1H, d, J = 2,5 Hz, H-8), 7,85 (1H, d, J = 2,5 Hz, H-2'), 6,91 (1H, d, J = 8,5 Hz, H-5'), 7,63 (1H, dd, J = 2,0; 8,5 Hz, H-6'); glc: 5,29 (1H, d, J = 7,5 Hz, H-1''), 3,51-3,60 (1H, m, H-2''), 3,51-3,60 (1H, m, H-3''), 3,51-3,60(1H, m, H-4''), 3,81 (1H, m, H5''), 3,88 (1H, m, H-6a''), 3,67 (1H, m, H-6b'') 13 C-NMR (125MHz, CD3OD&DMSO-d6), (ppm): 158,3 (C-2), 135,6 (C-3), 179,4 (C-4), 162,9 (C-5), 99,9 (C-6), 165,9 (C-7), 94,8 (C-8), 158,6 (C-9), 105,6 (C-10), 122,9 (C-1'), 116,3 (C-2'), 145,8 (C-3'), 149,9 (C-4'), 117,8 (C-5'), 123,0 (C-6'); glc: 104,9 (C-1''), 73,1 (C-2''), 75,0 (C-3''), 69,9 (C-4''), 77,2 (C-5''), 61,9 (C-6'') Vitexin (6) Bột vô định hình màu vàng nhạt Rf = 0,45 (TLC, silica gel, n-butanol-acid acetic-nước (4:1:5, v/v), màu đen với dung dịch FeCl3/ethanol 5% H-NMR (500 MHz, DMSO-d6), (ppm): 6,27 (1H, s, H-3), 6,77 (1H, s, H-6), 8,02 (2H, d, J = 8,5 Hz, H-2', 6'), 6,89 (2H, d, J = 8,5 Hz, H-3', 5'); glc: 4,69 (1H, d, J = 10,0 Hz, H-1''), 3,84 (1H, t, J = 9,0 Hz, H-2''), 3,24-3,35 (1H, m, H-3''), 3,24-3,35 (1H, m, H-4''), 3,24-3,35 (1H, m, H-5''), 3,76 (1H, brd, J = 9,0 Hz, H-6''a), 3,53 (1H, m, H-6''b), 13,16 (1H, s, 5-OH), 4,97 (2H, m, OHglc), 4,58 (1H, brs, OH-glc) 13 C-NMR (125MHz, DMSO-d6), d (ppm): 163,9 (C-2), 102,4 (C-3), 182,1 (C-4), 160,4 (C5), 98,1 (C-6), 161,1 (C-7), 104,6 (C-8), 155,9 (C-9), 104,0 (C-10), 121,6 (C-1'), 128,9 (C-2'), 115,8 (C-3'), 161,1 (C-4'), 115,8 (C-5'), 128,9 (C6'); glc: 73,4 (C-1''), 70,8 (C-2''), 78,7 (C-3''), 70,6 (C-4''), 81,8 (C-5''), 61,3 (C-6'') Apigenin-7-O-β-D-glucopyranosid (7) Chất rắn màu vàng, đnc 216-218°C Rf = 0,54 (TLC, silica gel, ethyl acetatmethanol - nước (1:2:1, v/v), màu đen với dung dịch FeCl3/ethanol 5% H -NMR (500 MHz, DMSO-d6,), δ (ppm): 12,97 (1H, s, OH-5), 10,42 (1H, s, OH-4'), 6,87 (1H, s, H-3), 6,44 (1H, d, J = 2,0 Hz, H-6), 6,83 (1H, d, J = 2,0 Hz, H-8), 7,96 (2H, d, J = 9,0 Hz, H-2' & H-6'), 6,93 (2H, d, J = 9,0 Hz, H-3' & H- 66 5'); glc: 5,05 (1H, d, J = 7,5 Hz, H-1''), 3,17-3,35 (4H, m, H-2'', H-3'', H-4'', H-5''), 3,49 (1H, m, H6''b), 3,71 (1H, dd, J = 6,0; 10,5 Hz, H-6''a) 13 C- NMR (125 MHz, DMSO-d6,), δ (ppm): 181,8 (C-4), 164,2 (C-2), 163,6 (C-7), 162,5 (C5), 161,3 (C-4'), 156,9 (C-9), 128,6 (C-2' & C-6'), 121,0 (C-1'), 115,9 (C-3' & C-5'), 105,3 (C-10), 103,1 (s, C-3), 99,5 (C-6), 94,8, (C-8); glc: 99,9 (C-1''), 77,1 (C-3''), 76,4 (C-5''), 73,1 (C-2''), 69.5 (C-4''), 60,6 (C-6'') Rutin (8) Chất rắn màu vàng, đnc 188-190oC Rf = 0,33 (TLC, silica gel, n-butanol-acid acetic-nước (4:1:5, v/v), màu đen với dung dịch FeCl3/ethanol 5% H-NMR (500 MHz, CD3OD), δ (ppm): 6,26 (1H, d, J = 2,0 Hz, H-6), 6,46 (1H, d, J = 2,0 Hz, H-8), 7,69 (1H, d, J = 2,5 Hz, H-2'), 6,93 (1H, d, J = 8,5 Hz, H-5'), 7,65 (1H, dd, J = 2,0; 8,5 Hz, H-6'), glc: 5,11 (1H, d, J = 7,5 Hz, H-1''), 3,48 (1H, s, H-2''), 3,46 (1H, m, H-3''), 3,67 (1H, s, H4''), 3,38 (1H, m, H-5''), 3,43 (1H, m, Ha-6''), 3,82 (1H, d, J = 10,5 Hz, Hb-6''); rham: 4,55 (1H, s, H-1'''), 3,57 (1H, dd, J = 9,5; 3,5 Hz, H-2'''), 3,29 (1H, m, H-3'''), 3,31 (1H, m, H-4'''), 3,42 (1H, m, H-5'''), 1,15 (3H, d, J = 6,0 Hz, H-6''') 13 C-NMR (125 MHz, CD3OD), δ (ppm): 158,4 (C-2), 135,4 (C-3), 179,4 (C-4), 163,5 (C5), 100,0 (C-6), 166,0 (C-7), 95,0 (C-8), 159,4 (C-9), 105,6 (C-10), 123,5 (C-1'), 116,2 (C-2'), 145,8 (C-3'), 149,8 (C-4'), 117,7 (C-5'), 123,1 (C6'); glc: 104,4 (C-1''), 75,6 (C-2''), 78,0 (C-3''), 71,9 (C-4''), 77,0 (C-5''), 68,5 (C-6''); rham: 102,3 (C-1'''), 72,3 (C-2'''), 71,3 (C-3'''), 73,8 (C4'''), 69,7 (C-5'''), 17,8 (C-6''') Isorhamnetin 3-O-α-L-rhamnopyranosyl(1→2)-rutinosid (9) Chất rắn màu vàng, đnc 185-188oC Rf = 0,25 (TLC, silica gel, n-butanol-acid acetic-nước (4:1:5, v/v), màu đen với dung dịch FeCl3/ethanol 5% ESI-MS: m/z: pos 793,1 [M+Na]+, neg 769,1 [M-H]-, CTPT: C34H42O20 H-NMR (500 MHz, CD3OD), δ (ppm): 6,21 (1H, d, J = 2,0 Hz, H-6), 6,42 (1H, d, J = 2,0 Hz, H-8), 7,96 (1H, d, J=2,0 Hz, H-2'), 6,93 (1H, d, J Tạp chí Dược liệu, tập 22, số 2/2017 www.vanlongco.com = 8,0 Hz, H-5'), 7,60 (1H, dd, J = 8,5; 2,0 Hz, H6'), 3,99 (3H, s, O-CH3); glc: 5,75 (1H, d, J = 7,5 Hz, H-1''), 3,64 (1H, m, H-2''), 3,58 (1H, m, H3''), 3,62 (1H, s, H-4''), 3,41 (1H, m, H-5''), 3,85 (1H, m, H-6a''), 3,43(1H, m, H-6b''); rham: 4,56 (1H, s, H-1'''), 3,79 (1H, dd, J = 9,5; 3,0 Hz H2'''), 3,49 (1H, s H-3'''), 3,24 (1H, m H-4'''), 4,05 (1H, q, H-5'''), 1,09 (3H, d, J = 6,5 Hz, H-6'''); rham: 5,21 (1H, s, H-1''''), 4,02 (1H, s, H-2''''), 3,49 (1H, s, H-3''''), 3,35 (1H, m, H-4''''), 3,42 (1H, m, H-5''''), 0,94 (3H, d, J = 6,0 Hz, H-6'''') 13 C-NMR (125 MHz, CD3OD), δ (ppm): 158,4 (C-2), 134,3 (C-3), 179,2 (C-4), 163,1 (C5), 99,8 (C-6), 165,7 (C-7), 94,7 (C-8), 158,6 (C9), 105,9 (C-10), 123,7 (C-1'), 114,5 (C-2'), 148,4 (C-3'), 150,6 (C-4'), 116,1 (C-1'), 123,4 (C-6'), 57,0 (O-CH3); glc: 100,5 (C-1''), 80,1 (C-2''), 78,8 (C-3''), 72,0 (C-4''), 77,2 (C-5''), 68,2 (C-6''); rham: 102,3 (C-1'''), 72,3 (C-2'''), 72,1 (C-3'''), 73,8 (C-4'''), 69,9 (C-5'''), 17,8 (C-6'''); rham: 102,7 (C-1''''), 72,4 (C-2''''), 72,1 (C-3''''), 73,9 (C-4''''), 69,7 (C-5''''), 17,5 (C-6'''') Quercetin-3-O-α-L-rhamnopyranosyl-(1→6)-βD-glucopyranosyl-(1→3)-β-D-glucopyranosid (10) Chất rắn màu vàng, đnc 191-193°C Rf = 0,23 (TLC, silica gel, n-butanol-acid acetic-nước (4:1:5, v/v), màu đen với dung dịch FeCl3/ethanol 5% ESI-MS: m/z: pos 795,2 [M+Na]+, M=772 đvC, CTPT: C33H40O21 H-NMR (500 MHz, CD3OD), δ (ppm): 6,23 (1H, d, J = 2,0 Hz, H-6), 6,41 (1H, d, J = 2,0 Hz, H-8), 7,68 (1H, d, J = 2,0 Hz, H-2'), 6,95 (1H, d, J = 8,5 Hz, H-5'), 7,56 (1H, dd, J = 8,5; 2,0 Hz, H-6'); β-glc: 5,30 (1H, d, J = 7,5 Hz, H-1''), 3,33 (1H, m, H-2''), 3,77 (1H, s, H-3''), 3,44(1H, m, H4''), 3,42 (1H, m, H-5''), 3,83 (1H, dd, J = 1,5; 2,0 Hz, H-6''b), 3,74 (1H, dd, J = 11,5; 5,0 Hz, H6''a); β-glc: 4,78 (1H, d, J = 7,5 Hz, H-1'''), 3,42 (1H, m, H-2'''), 3,35 (1H, m, H-3'''), 3,33 (1H, m, H-4'''), 3,60 (1H, m, H-5'''), 3,37 (1H, s, H-6'''a), 3,80 (1H, m , H-6'''b); α-rham: 4,51(1H, d, J = 1,0 Hz, H-1''''), 3,50 (1H, dd, J = 9,5; 3,5 Hz, H2''''), 3,60 (1H, m, H-3''''), 3,27 (1H, t, J = 9,5 Hz, H-4''''), 3,45 (1H, m, H-5''''), 1,11 (3H, d, J=6,5 Hz , H-6'''') Tạp chí Dược liệu, tập 22, số 2/2017 C-NMR (125 MHz, CD3OD), δ (ppm): 158,5 (C-2), 134,9 (C-3), 179,6 (C-4), 163,1 (C5), 99,9 (C-6), 165,9 (C-7), 94,9 (C-8), 159,2(C9), 105,7 (C-10), 123,23 (C-1'), 116,2 (C-2'), 145,9 (C-3'), 149,8 (C-4'), 117,7 (C-1'), 123,17 (C-6'); β-glc: 101,2 (C-1''), 76,99 (C-2''), 82,6 (C3''), 71,1 (C-4''), 77,9 (C-5''), 62,4 (C-6''); β-glc: 104,8 (C-1'''), 75,5 (C-2'''), 78,2 (C-3'''), 71,3 (C4'''), 77,9 (C-5'''), 68,1 (C-6'''); α- rham: 102,2 (C1''''), 72,3 (C-2''''), 72,1 (C-3''''), 73,9 (C-4''''), 69,7 (C-5''''), 17,8 (C-6'''') 2.4 Thử hoạt tính chống oxy hóa Cách tiến hành: Pha dung dịch DPPH có nồng độ mM methanol Chất thử 9, 10 chất đối chứng quercetin pha DMSO 100% cho nồng độ cuối đạt dãy nồng độ 256, 64, 16, 4, mg/ml Để thời gian phản ứng 30 phút 370C, đọc mật độ hấp thụ DPPH chưa phản ứng máy Genios Tecan bước sóng 517 nm Khả bắt gốc tự DPPH (SC%) mẫu thử tính theo cơng thức sau: 13 SC% = (OD trắng – OD mẫu thử)/OD¬trắng (%) Trong đó: OD mẫu thử (trắng) giá trị mật độ quang giếng chứa mẫu thí nghiệm (mẫu trắng) EC50 tính theo giá trị SC tương quan với nồng độ khác chất thử, thí nghiệm lặp lại với n = Phương trình tương quan mật độ quang học nồng độ DPPH y = 0,3325 x + 0,0241 với R2= 0,9938 Kết bàn luận Chrysin (1) Phổ 1H-NMR xuất tín hiệu đặc trưng flavon: hai tín hiệu proton tương tác meta (vòng A) δH 6,58 (1H, d, J = 2,0 Hz, H-8) 6,28 (1H, d, J = 2,0 Hz, H-6), hai tín hiệu multiplet δH 7,59 (3H, m, H-3', 4', 5'), 8,07 (2H, dd, J = 6,5; 1,5 Hz, H-2' & H-6') thuộc proton vòng B khơng mang nhóm thế, tín hiệu singlet δH 6,79 thuộc proton methin (H-3) Phổ 13 C-NMR DEPT cho tín hiệu cộng hưởng 15 carbon gồm carbon methin δC (94,9; 99,9; 106,2; 127,2; 129,9; 132,7), có hai tín hiệu cao gấp đơi so với tín hiệu cịn lại khẳng định tính đối xứng cấu trúc vòng B, carbon bậc bốn δC (105,6; 132,3; 158,9; 163,4; 67 www.vanlongco.com 165,1; 164,7; 183,1) tín hiệu δC 183,1 đặc trưng cho carbon carbonyl flavon Từ kiện nêu kết hợp với tài liệu tham khảo [7] cho phép kết luận hợp chất 5,7-dihydroxyflavon hay chrysin Hợp chất lần phân lập từ mễ tử liễu Quercetin (2) Phân tích phổ 1H-NMR, 13C-NMR DEPT chất cho tín hiệu đặc trưng flavonol Phổ 1H-NMR xuất tín hiệu proton vịng thơm tín hiệu tương tác ABX δH 7,82 (1H, d, J = 2,0 Hz, H-2'), 7,69 (1H, dd, J = 8,5; 2,0 Hz, H-6'), 6,99 (1H, d, J = 8,5 Hz, H-5') thuộc vịng thơm B, hai tín hiệu proton tương tác meta δH 6,51 (1H, d, J = 2,0 Hz, H-8) 6,26 (1H, d, J = 2,0 Hz, H-6) thuộc vòng thơm A Phổ 13C-NMR DEPT chất gồm 15C với nhóm CH đặc trưng cho CH nhân thơm δC 99,1 (C-6), 94,4 (C-8), 115,7 (C-2'), 116,2 (C-5') 121,4 (C-6'), 10 carbon khơng liên kết với hydro tín hiệu δC 176,5 ppm đặc trưng cho nhóm carbonyl, bốn tín hiệu có độ chuyển dịch δC 145,8, 148,3, 162,3, 164,9 ppm đặc trưng cho dạng liên kết nhân thơm với nhóm OH carbon C-3', C-4', C-5, C-7 Ngồi ra, tín hiệu carbon δC 136,7 (C-3) đặc trưng cho carbon nối đôi liên kết với nhóm hydroxyl Dựa vào kiện phổ đồng thời so sánh điểm nóng chảy so sánh với liệu phổ công bố trước [8], cấu trúc chất xác định 3,3',4',5,7-pentahydroxyflavon hay quercetin Quercetin 3-O-β-D-galactopyranosid (3) Hợp chất nhận dạng chất bột màu vàng Phổ 1H-NMR hợp chất xuất hai v ng phổ: Một v ng trường thấp với hai tín hiệu singlet vòng A δH 6,20 (1H, d, J =2,0 Hz, H-6), 6,40 (1H, d, J = 2,0 Hz, H-8); ba tín hiệu cộng hưởng với tương tác spin dạng ABX vịng B vị trí 1,3,4 δH 7,52 (1H, d, J =2,5 Hz, H-2'), 6,82 (1H, d, J = 9,0 Hz, H5'), 7,66 (1H, dd, J =2,0;8,5 Hz, H-6') Các tín hiệu tương tự hợp chất cho dự đoán hợp phần quercetin cấu trúc chất 68 V ng trường cao tín hiệu phân tử đường với proton anome δH 5,37 (1H, d, J = 7,5 Hz, H-1''), số tương tác J=7,5 Hz khẳng định có mặt liên kết β-O-glycosid Các tín hiệu cịn lại phân tử đường xuất δH 3,45 (1H, m, H-2''), 3,56 (1H, t, J = 8,5 Hz, H-3''), 3,29-3,40 (H-4'', H-5'', H-6'') Phổ 13C-NMR xuất tín hiệu 21 nguyên tử carbon, 15 nguyên tử thuộc vào khung flavon nguyên tử thuộc vào phân tử đường Các tín hiệu phần aglycon tương tự với tín hiệu tương ứng hợp chất quercetin, carbon carbonyl δC 177,5 (C-4), tín hiệu hai vòng thơm nằm khoảng δC 93,5-164,1 Các tín hiệu C 101,8 (C1''), 71,2 (C-2''), 73,2 (C-3''), 67,9 (C-4''), 75,8 (C-5''), 60,1 (C-6'') ph hợp với giá trị tương ứng đường galactopyranose Tương tác proton H-1'' (δH 5,37) với C-3 (δC 133,5) phổ HMBC khẳng định phân tử đường liên kết với aglycon vị trí C-3 Từ ta đưa giả thiết cấu trúc quercetin 3-O-β-Dgalactopyranosid Kết hoàn toàn ph hợp so sánh giá trị phổ NMR với liệu tài liệu tham khảo [8] cho phép kết luận quercetin 3-O-β-D-galactopyranosid Hợp chất lần phân lập từ mễ tử liễu Quercetin 3-O- β-D-arabinopyranosid (4) Tương tự hợp chất 3, kiện phổ NMR hợp chất dẫn xuất 3O-glycosid quercetin, khác biệt phụ thuộc vào cấu trúc vòng đường với giá trị C 104,6 (C-1''), 72,9 (C-2''), 74,1 (C-3''), 69,1 (C4''), 66,9 (C-5'') đặc trưng cho giá trị đường arabinopyranose Giá trị số tương tác spin J = 6,5 Hz proton anome H 5,16 (H-1'') chứng tỏ đường liên kết với C-3 theo liên kết β-O-glycosid Các tín hiệu cịn lại phân tử đường xuất H 4,92 (1H, dd, J = 2,0; 8,5 Hz, H-2''), 3,66 (1H, dd, J = 3,5; 8,5 Hz, H-3''), 3,85 (1H, m, H-4''), 3,46 (1H, dd, J = 3,0; 13,5 Hz, H-5''a), 3,83 (1H, m, H-5''b) Từ việc phân tích kiện phổ kết hợp với tham khảo tài liệu [9] cho phép kết luận hợp chất quercetin 3-O-β-D-arabinopyranosid Tạp chí Dược liệu, tập 22, số 2/2017 www.vanlongco.com Quercetin 3-O- -D-glucopyranosid (5) Ở hợp chất tín hiệu proton carbon cho độ chuyển dịch v ng trường tương tự phổ hợp chất với aglycon quercetin, phần glycosid cho tín hiệu proton anome δH 5,29 (1H, d, J = 7,5 Hz, H-1''), proton khác 3,97 (1H, brs, H-2''), H-3'', H-4''), 3,81 (1H, d, J = 1,5 Hz, H-5''), 3,88 (1H, d, J = 3,0 Hz, H-6''b); 3,67 (1H, m, H-6''a), c ng với carbon δC 104,9 (C-1''), 73,1 (C-2''), 75,0 (C-3''), 69,9 (C-4''), 77,2 (C-5''), 61,9 (C-6'') cho khẳng định glycosid β-D-glucopyranose Sau so sánh đặc kiện vật lý số liệu phổ NMR với tài liệu tham khảo [10], cho phép kết luận hợp chất quercetin 3-O- -Dglucopyranosid Hợp chất lần phân lập từ mễ tử liễu Vitexin (6) Hợp chất phân lập dạng bột vơ định hình màu vàng nhạt Phổ ESI-MS chất cho pic ion m/z 433,67 ([M + H]+) tương ứng với khối lượng phân tử 432 đvC ph hợp với công thức phân tử C21H20O10 Hợp chất xác định flavon Cglucosid dựa kiện phổ 1H-NMR, 13CNMR DEPT Phổ 1H-NMR hợp chất cho tín hiệu proton hai vịng thơm flavon có tín hiệu singlet proton vịng A δH 6,77 (1H, s, H-6), hai tín hiệu doublet proton vòng B tương tác octo với δH 8,02 (2H, d, J = 8,5 Hz, H-2', 6'), 6,86 (2H, d, J = 8,5 Hz, H-3', 5'); tín hiệu singlet proton methin δH 6,27 (1H, s, H-3), tín hiệu trường thấp nhóm 5-OH tạo liên kết hiđro với nhóm carbonyl C-4 δH 13,16 Trên phổ cịn cho tín hiệu gốc đường glucose liên kết với aglycon qua liên kết β-Cglycosid đặc trưng proton anomeric δH 4,69 (1H, d, J = 10,0 Hz, H-1'') tín hiệu khác 3,84 (1H, t, J = 9,0 Hz, H-2''); 3,24-3,35 (3H, m, H-3'', 4'', 5''); 3,76 (1H, br d, J = 9,0 Hz, H-6''b); 3,53 (1H, m, H-6''a) So sánh tín hiệu cộng hưởng từ carbon 13 chất với apigenin xác định chất apigenin Cglucosid [11] Các thay đổi độ chuyển dịch hóa học quan sát chủ yếu C-7 (∆δC -1,6), Tạp chí Dược liệu, tập 22, số 2/2017 C-8 (∆δC +10,0) C-9 (∆δC -1,4) Gốc đường xác định nhóm glucopyranosyl dựa phổ 13C-NMR DEPT δC 61,3 (C-6''), 70,6 (C-4''), 70,8 (C-2''), 73,4 (C-1''), 78,7 (C-3'') 81,8 (C-5'') Các giá trị δC hoàn toàn xác định khả liên kết nhóm glucopyranosyl vào C-8 vịng A apigenin gây chuyển dịch δC vị trí C-7, C-8 C-9 Điều khẳng định chắn tương tác proton anome đường δH 4,69 (H-1′′) δC 104,6 (C-8), 155,9 (C-9), 161,1 (C-7) quan sát thấy phổ HMBC Trên sở kiện phổ 6, kết hợp với tham khảo tài liệu [12], hợp chất xác định apigenin 8-C-β-D-glucopyranosid hay vitexin Hợp chất lần phân lập từ mễ tử liễu Apigenin-7-O-β-D-glucopyranosid (7) Phổ NMR hợp chất cho đặc trưng glucosid flavonoid Trong aglycon xác định apigenin tương tự hợp chất Tuy nhiên hợp chất đơn vị đường β-Dglucose liên kết với nhân apigenin qua liên kết Oglucosid vị trí C-7 vịng A Điều nhận phổ vịng A xuất hai proton vị trí meta 6,44 (1H, d, J = 2,0 Hz, H-6), 6,83 (1H, d, J = 2,0 Hz, H-8) C-8 dịch chuyển lên trường cao δC 94,8 so với δC 104,6 (C-8) Kết hợp với tham khảo tài liệu [13] cho phép kết luận cấu trúc apigenin 7-O-β-Dglucopyranosid Hợp chất lần phân lập từ mễ tử liễu Rutin (8) Trên phổ 1H-NMR cho tín hiệu cộng hưởng proton nhân thơm với số tương tác J = 2,0 Hz đặc trưng cho proton vị trí meta vòng A 5,7-flavonol với H 6,26 (1H, H-6), 6,46 (1H, H-8) Ngồi cịn có thêm tín hiệu cộng hưởng proton nhân thơm thuộc hệ tương tác spin ABX với H 7,69 (1H, d, J = 2,5 Hz, H-2'), 6,93 (1H, d, J = 8,5 Hz, H-5'), 7,64 (1H, dd, J= 8,5; 2,0 Hz, H-6') Các kiện cho ta giả thiết flavonoid glycosid có nhân quercetin So sánh số nguyên tử carbon (27 C) với quercetin (15 C), kết hợp phân tích 69 www.vanlongco.com tín hiệu cộng hưởng nhiều proton vùng H 3,29 - 5,11 ppm cho thấy phải chứa đường Trong đường rhamnose đặc trưng tín hiệu cộng hưởng proton doublet, cường độ mạnh H 1,15 ppm (3H, d, J = 6,0 Hz) nhóm CH3 Một đường khác glucose với proton anome H 5,11 (d, J = 7,5 Hz, H-l'') gắn trực tiếp vào nhân quercetin vị trí C-3 ( C 135,4) qua liên kết O-glycosid Liên kết dissacharid hai đường (1→6)-O-glycosid điều khẳng định chắn qua liệu phổ HMBC tương tác H-1'' ( H 5,11) C-3 ( C 135,4), H-1''' ( H 4,55) C-6'' ( C 68,5) quan sát thấy So sánh liệu phổ với tài liệu tham khảo [14] cho kết luận chất phân lập quercetin 3-O-α-L-rhamnopyranosyl-(1→6)-βD-glucopyranosid hay rutin Isorhamnetin 3-O-α-L-rhamnopyranosyl(1→2)-rutinosid (9) Hợp chất có dạng bột màu vàng, nhiệt độ nóng chảy 185-188oC Phổ ESI-MS pic ion phân tử m/z 793,1 [M+Na]+, 769,1 [MH]- tương ứng với khối lượng phân tử M=770 đvC, công thức phân tử C34H42O20 Trên phổ 1H-NMR cho tín hiệu cộng hưởng proton vòng thơm H 6,21-7,96 ppm, tín hiệu nhóm methoxy δH 3,99 ppm, tín hiệu proton thuộc vùng đường H 3,24-5,74 ppm Phân tích kỹ phổ 1HNMR cho thấy tín hiệu H 6, 21 (1H, d, J = 2,0 Hz, H-6) H 6,42 (1H, d, J = 2,0 Hz, H-8) đặc trưng cho hai proton vị trí meta vịng A vị trí 5, flavonol Ba tín hiệu proton khác H 7,96 (1H, d, J = 2,0 Hz, H-2'), 7,60 (1H, dd, J = 8,5; 2,0 Hz, H-6') 6,93 (1H, d, J = 8,0 Hz, H-5') thuộc vòng thơm lại (vòng B) Các kiện cho ta giả thiết flavonoid glycosid có nhân isorhamnetin Nhân isorhamnetin khẳng định chắn phân tích thêm phổ 13C-NMR với tín hiệu 16 carbon carbon carbonyl C 175,9 (C-4), nhóm methin thơm C 99,8 (C-6), 94,7 (C-8), 114,5 (C-2'), 116,1 (C5'),123,4 (C-6'), carbon bậc C 158,4 (C-2), 134,3 (C-3), 163,1 (C-5), 165,7 (C-7), 158,6 (C- 70 9), 105,9 (C-10), 123,7 (C-1'), 148,4 (C-3'), 150,6 (C-4') Ngồi tín hiệu C 57,0 đặc trưng cho nhóm methoxy So sánh số nguyên tử carbon (34 C) với isorhamnetin (16 C), kết hợp phân tích tín hiệu cộng hưởng proton v ng đường H 3,24 - 5,74 ppm cho thấy phải chứa đường Trong hai đường xác định rhamnose đặc trưng tín hiệu cộng hưởng proton doublet, cường độ mạnh C 1,09 (3H, d, J = 6,5 Hz, H-6''') 0,94 (3H, d, J = 6,0 Hz, H-6'''') nhóm CH3 Đường cịn lại glucose với proton anome C 5,75 (1H, d, J = 7,5 Hz, H-1'') gắn trực tiếp vào nhân isorhamnetin vị trí C-3 ( C 134,3) qua liên kết O-glycosid Hai đường rhamnose liên kết với đường glucose vị trí C-2'' C- 6'',được khẳng định qua tương tác HMBC H-6'' với C-1''' H-1'''' với C-2'' So sánh liệu phổ với tài liệu tham khảo [15] cho kết luận chất phân lập isorhamnetin 3-O-[α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)]α-L-rhamnopyranosyl-(1→6))-β-D-glucopyranosid hay isorhamnetin 3-O-α-L-rhamnopyranosyl(1→2) rutinosid Đây lần hợp chất phân lập từ chi Polygonum Kết thử khả chống oxy hóa quét gốc DPPH hợp chất EC50 = 50,40 µg/ml Quercetin-3-O-α-L-rhamnopyranosyl-(1→6)β-D-glucopyranosyl-(1→3)-β-D-glucopyranosid (10) Phổ 1H 13C-NMR hợp chất 10 cho đặc trưng flavonoid glycosid Trong phần aglycon xác định quercetin Khi so sánh số carbon hợp chất 10 với quercetin (chất 2) cho thấy khả có mặt đơn vị đường cấu trúc hợp chất Dựa vào việc phân tích kiện phổ 1D-NMR cho phép xác định có đơn vị đường β-glucose đường α-L-rhamnose Vị trí liên kết đường với nhân quercetin đường với xác định dựa phổ HMBC Trên phổ HMBC cho tương tác proton anome đường β-glucose δH 5,30 (1H, d, J = 7,5 Hz, H1'') với carbon δC 134,9 (C-3) chứng tỏ đường β– glucose liên kết với nhân quercetin theo liên kết 3-O-glycosid Điểm đáng ý v ng cộng hưởng carbon đường xuất pic Tạp chí Dược liệu, tập 22, số 2/2017 www.vanlongco.com chuyển dịch δC 82,6 (C-3''), carbon cho tương tác với proton anome đường glucose thứ δH 4,78 (1H, d, J = 7,5 Hz, H-1''') cho ta hình dung mối liên kết (1→3)-glucosid hai đường Tiếp tục phân tích tương quan HMBC đường rhamnose với hai đường lại cho thấy đường phải liên kết với glucose thứ hai theo liên kết (1→6) - glycosid tương tác proton δH 4,51 (1H, d, J = 1,0 Hz, H-1'''') với carbon δC 68,1 (C-6'''), đồng thời δH 3,37 (1H, m, H-6'''a) với carbon δC 102,2 (C-1'''') quan sát thấy Từ phân tích kết hợp với tài liệu tham khảo [16] cho phép kết luận cấu trúc hợp chất 10 quercetin-3-O-α-L-rhamnopyranosyl(1→6) - β - D - glucopyranosyl - (1→3) - β - D glucopyranosid Đây lần hợp chất phân lập từ chi Polygonum Kết thử khả chống oxy hóa quét gốc DPPH hợp chất EC50 = 45,92 µg/ml Cấu trúc hóa học 10 hợp chất flavonoid phân lập từ mễ tử liễu Hình Hình Các flavonoid (1 – 10) phân lập từ phần chiết ethyl acetat n-butanol mễ tử liễu Kết luận Bằng phương pháp sắc ký kết hợp với phương pháp phổ, phân lập nhận dạng cấu trúc 10 chất chrysin (1), quercetin (2), quercetin 3-O-β-D-galactopyranosid (3), quercetin 3-O-β-D-arabinopyranosid (4), quercetin 3-O-D-glucopyranosid (5), vitexin (6), apigenin7O-β-D-glucopyranosid (7), rutin (8), isorhamnetin 3-O-α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)-rutinosid (9), quercetin-3-O-α-L-rhamnopyranosyl-(1→6)-β-D- glucopyranosyl-(1→3)-β-D-glucopyranosid (10) từ phân đoạn ethyl acetat n-butanol mễ tử liễu (Polygonum plebeium R Br.) Trong số hợp chất này, hợp chất 10 lần phân lập từ chi Polygonum thể khả chống oxy hóa quét gốc DPPH với giá trị EC50 50,40 45,92 µg/ml so với chất đối chứng quercetin (EC50 = 10,82 (µg/ml) Đây nghiên cứu thành phần hóa học loài Việt Nam Tài liệu tham khảo Nguyễn Hữu Đại, Nguyễn Thị Đỏ (2007), Thực vật chí Việt Nam, Nhà xuất Khoa học kỹ thuật, Hà Nội, 11, 145147 Khare CP (2008), Indian Medicinal Plants, Springer reference, 510 Nguyễn Văn Đậu, Trần Thanh Hà, Đặng Thị Chín, Nguyễn Thị Hà (2015), Flavonoid phân lập từ cặn chiết ethyl acetat mễ tử liễu, Tạp chí Hóa học, 53(4e2), 160-165 Trần Thanh Hà Nguyễn Văn Đậu, Nguyễn Minh Khởi, Đỗ Thị Hà (2015), Phytosterol triterpen phân lập từ cặn n-hexan mễ tử liễu, Tạp chí Dược liệu, 20(4), 231-235 Burits M., Bucar F (2000), Antioxidant activity of Nigella sativa essential oil, Phytotherapy Research, 14(5), 323-328 Cuendet M., Hostettmann K., Potterat O (1997), Iridoid glucosides with free radical Tạp chí Dược liệu, tập 22, số 2/2017 71 www.vanlongco.com scavenging properties from Fagraea blumei, Helvetica Chimica Acta, 80(4), 1144-1152 Mouffok S, Haba H, Lavaud C, Long C, Benkhaled M (2012), Chemical constituents of Centaurea omphalotricha Coss & Durieu ex Batt & Trab., Records of Natural Products, 6(3), 292-295 Agrawal P K., Markham K R (1989), Carbon-13 NMR of flavonoids in studies in organic chemistry 39, Elsevier Science Publishers, 95-172 Cristiane P., Cleber B B J., Ricardo M K., Naomi K S., Cassia M S., Andrea P., Ludger W (2012), Flavonoids and a neolignan glucoside from Guarea macrophylla (Meliaceae), Quím Nova, 35(6), 1123-1126 10 Markham KR., Ternai B, Stanley R, Geiger H and Mabry TJ (1978), Carbon-13NMR studies of flavonoids—III: Naturally occurring flavonoid glycosides and their acylated derivatives, Tetrahedron, 34(9), 1389-1392 11 Chen GY, Dai CY, Wang TS, Jiang CW, Han CR, Song XP (2010), A new flavonol from the stem-bark of Premna fulva, ARKIVOC, 2010(2), 179185 12 Wen P, Han H, Wang R, Wang N, Yao X (2007), C-glycosylfavones and aromatic glycosides from Campylotropis hirtella (Franch.) Schindl, Asian Journal of Traditional Medicines, 2(4), 149-153 13 Guvenalp Z, Ozbek H, Unsalar T, Kazaz C, Demirezer LO (2006), Iridoid, flavonoid, and phenylethanoid glycosides from Wiedemannia orientalis, Turkis Journal of Chemistry, 30(3), 391- 400 14 Petrus AJA, Siva HS, Suguna G (2012), Isolation and characterisation of the antioxidant phenolic metabolites of Boerhaavia erecta L leaves, Journal of Pharmaceutical Sciences and Research, 4(7), 1856-1861 15 Vidal OE , Elias R, Faure F, Babad A, Jamian, Crespin F, Balansard G, Boudon G (1989), Flavonol Glycosides from Calendula officinalis flowers, Planta Medica, 55(1), 73-74 16 Xu LR, Zhou P, Zhi YE, Wu J, Zhang S (2009), Three new flavonol triglycosides from Derris trifoliate, Journal of Asian Natural Products Research, 11(1), 79-84 Tạp chí Dược liệu, tập 22, số 2/2017 (Trang 72 - 77) FLAVONOID PHÂN LẬP TỪ CÂY TẦM BĨP Hồng Thái Hòa1,*, Nguyễn Thượng Dong1, Trần Thị Oanh2, Lê Việt Dũng1, Huỳnh Đăng Khoa3, Đào Thị Thanh Hiền4 Viện Dược liệu; 2Bộ Y tế; 3Cao Đẳng Y tế Huế; 4Đại học Dược Hà Nội *Email: thaihoavietnam@yahoo.com (Nhận ngày 27 tháng 02 năm 2017) Tóm tắt Năm flavonoid (1 - 5) phân lập từ phân đoạn ethyl acetat tầm bóp (Physalis angulata L.) thu hái huyện Gia Lâm, Hà Nội, Việt Nam Cấu trúc hóa học chúng xác định gồm quercetin (1), quercetin 3-O-α-L-rhamnopyranosid (2), quercetin 3-O-β-D-glucopyranosid (3), myricetin 3-O-α-L-rhamnopyranosid (4) quercetin 3-O-α-L-rhamnopyranosyl(1→6)-β-D-glucopyranosid (5) dựa sở liệu phổ thực nghiệm MS, NMR so sánh với liệu phổ NMR công bố Trong số hợp chất trên, hợp chất lần cơng bố phân lập từ Từ khóa: Cây tầm bóp, Physalis angulata L., Flavonoids Summary Flavonoids Isolated from Physalis angulata L Five flavonoids (1 – 5) were isolated from an ethyl acetate extract of Physalis angulata L growing in Gia Lam district, Ha Noi city, Vietnam The structures of these compounds were identified to be quercetin (1), quercetin 3-O-α-Lrhamnopyranoside (2), quercetin 3-O-β-D-glucopyranoside (3), myricetin 3-O-α-L-rhamnopyranoside (4), and quercetin 3O-α-L-rhamnopyranosyl-(1→6)-β-D-glucopyranoside (5) based on the basis of MS and NMR analysis, and in comparison with the published NMR data Among them, compounds and were isolated from this plant for the first time Keywords: Physalis angulata L., Flavonoids Đặt vấn đề Cây tầm bóp hay cịn gọi tầm phốc, lồng đèn…, có tên khoa học Physalis angulata Linnaeus 1753, thuộc họ Cà (Solanaceae), loại thảo, sống năm, nhân dân sử dụng để tắm trị rôm sẩy cho trẻ em, người bị mẩn ngứa; tồn cịn dùng sắc uống điều trị viêm khớp, cứng khớp, họng sưng đau,… với hiệu cao Ở Việt Nam, mọc khắp nơi từ đồng 72 đến v ng núi có độ cao 1500 m Sơn La, Lạng Sơn, Bắc Giang, Hà Nội, Ninh Bình, Thanh Hóa, Đà Nẵng, Kon Tum, Gia Lai thành phố Hồ Chí Minh [1] Các nghiên cứu thành phần hóa học giới cho thấy tồn chứa steroid, alcaloid, phenol, tannin, glycosid carbonhydrat [2] Hai nhóm hợp chất tầm bóp flavonoid steroid (nhóm withanolid physalin: Tạp chí Dược liệu, tập 22, số 2/2017 ... chất phân lập từ chi Polygonum Kết thử khả chống oxy hóa quét gốc DPPH hợp chất EC50 = 45,92 µg/ml Cấu trúc hóa học 10 hợp chất flavonoid phân lập từ mễ tử liễu Hình Hình Các flavonoid (1 – 10) phân. .. Hợp chất lần phân lập từ mễ tử liễu Vitexin (6) Hợp chất phân lập dạng bột vơ định hình màu vàng nhạt Phổ ESI-MS chất cho pic ion m/z 433,67 ([M + H]+) tương ứng với khối lượng phân tử 432 đvC... (2015), Flavonoid phân lập từ cặn chiết ethyl acetat mễ tử liễu, Tạp chí Hóa học, 53(4e2), 160-165 Trần Thanh Hà Nguyễn Văn Đậu, Nguyễn Minh Khởi, Đỗ Thị Hà (2015), Phytosterol triterpen phân lập từ