Nghiên cứu đặc điểm cận lâm sàng và đột biến gene JAK2 v617f trên bệnh nhân tăng tiểu cầu tiên phát tại bệnh viện trung ương thái nguyên​

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC LÊ HẠNH HUYÊN NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM CẬN LÂM SÀNG VÀ ĐỘT BIẾN GENE JAK2 V617F TRÊN BỆNH NHÂN TĂNG TIỂU CẦU TIÊN PHÁT TẠI BỆNH VIỆN TRUNG ƯƠNG THÁI NGUYÊN LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC ỨNG DỤNG THÁI NGUYÊN - 2019 Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ thông tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC LÊ HẠNH HUYÊN NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM CẬN LÂM SÀNG VÀ ĐỘT BIẾN GENE JAK2 V617F TRÊN BỆNH NHÂN TĂNG TIỂU CẦU TIÊN PHÁT TẠI BỆNH VIỆN TRUNG ƯƠNG THÁI NGUYÊN Ngành: Công nghệ Sinh học Mã số: 84 20 201 LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC ỨNG DỤNG Hướng dẫn khoa học: Ts Nguyễn Thế Tùng Ts Nguyễn Thị Hải Yến THÁI NGUYÊN - 2019 Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ thông tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn i LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan số liệu kết trình bày luận văn trung thực chưa công bố cơng trình Mọi kết thu khơng chỉnh sửa, chép từ nghiên cứu khác Mọi trích dẫn luận văn ghi rõ nguồn gốc Tác giả Lê Hạnh Huyên Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ thông tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn ii LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành luận văn tơi xin bày tỏ lịng biết ơn chân thành tới: Ban Giám hiệu, phòng Đào tạo, trường Đại học Khoa học - Đại học Thái Nguyên Các thầy cô cán Khoa Công nghệ Sinh học tận tình dạy dỗ, truyền dạy kiến thức kinh nghiệm nghiên cứu khoa học cho năm qua Tôi xin chân thành cảm ơn thầy giáo Ts Nguyễn Thế Tùng cô giáo Ts Nguyễn Thị Hải Yến, người thầy định hướng nghiên cứu tận tình hướng dẫn, bảo cho suốt thời gian tơi thực hồn thành luận văn Trong suốt q trình thực đề tài, tơi nhận nhiều quan tâm giúp đỡ từ khoa Miễn dịch-Di truyền phân tử Bệnh viện Trung ƯơngThái Nguyên, gia đình, bạn bè, đồng nghiệp, người ln động viên, khích lệ, tạo cho tơi động lực niềm say mê nghiên cứu khoa học Tôi vô biết ơn tất tình cảm tốt đẹp mà người dành cho Thái Nguyên, tháng 11 năm 2019 Tác giả Lê Hạnh Huyên Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ thông tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn iii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN .ii MỤC LỤC .iii DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT v DANH MỤC BẢNG .vi DANH MỤC HÌNH vii MỞ ĐẦU CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU NGHIÊN CỨU 1.1 Tổng quan bệnh tăng tiểu cầu tiên phát .3 1.1.1 Giới thiệu bệnh tăng tiểu cầu tiên phát .3 1.1.2 Cơ chế bệnh tăng tiểu cầu tiên phát 1.1.3 Triệu chứng lâm sàng, cận lâm sàng bệnh tăng tiểu cầu tiên phát 1.1.4 Chẩn đoán tăng tiểu cầu tiên phát .10 1.2 Tổng quan nghiên cứu gene JAK2 V617F 12 1.2.1 Gene JAK2 12 1.2.2 Đột biến gene JAK2 13 CHƯƠNG VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 16 2.1 Vật liệu, hóa chất thiết bị nghiên cứu 16 2.1.1 Vật liệu 16 2.1.2 Hóa chất thiết bị nghiên cứu 16 2.2 Thời gian địa điểm nghiên cứu 17 2.3 Phương pháp xử lý số liệu 17 2.4 Phương pháp nghiên cứu 17 2.4.1 Thu thập mẫu nghiên cứu 17 2.4.2 Phân tích đặc điểm cận lâm sàng 18 2.4.3 Xét nghiệm phát đột biến gene JAK2 V617F 18 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 22 Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ thông tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn iv 3.1 Đặc điểm chung đối tượng nghiên cứu .22 3.2 Các số huyết học đối tượng nghiên cứu 23 3.4 Kết nghiên cứu tỉ lệ đột biến JAK2 V617F đặc điểm huyết học nhóm có khơng có đột biến JAK2 V617F .27 3.4.1 Kết tách chiết DNA tổng số Thực phản ứng AS-PCR kiểm tra đột biến JAK2 V617F từ mẫu máu bệnh nhân .27 3.4.2 Tỉ lệ đột biến JAK2 V617F đặc điểm huyết học nhóm có khơng có đột biến JAK2 V617F 28 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 34 PHỤ LỤC .42 Số hóa Trung tâm Học liệu Cơng nghệ thơng tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn v DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Từ viết tắt AS - PCR CEL CML CNL DNA ECC ET GH Hgb JKA2 LDH LH MCV MPN MPV NST PCR PLT PV RBC WBC WHO Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ thông tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn vi DANH MỤC BẢNG Bảng 3.1 Phân bố giới tính độ tuổi của đối tượng nghiên cứu 22 Bảng 3.2 Các số dòng tiểu cầu nhóm đối tượng nghiên cứu theo giới (X ± SD) 23 Bảng 3.3 Tần xuất đối tượng nghiên cứu theo mức số lượng tiểu cầu 23 Bảng 3.4 Chỉ số dịng hồng cầu nhóm đối tượng nghiên cứu theo giới (X ± SD) 24 Bảng 3.5 Một số số hồng cầu lưới máu ngoại vi nhóm đối tượng nghiên cứu theo giới (X ± SD) 24 Bảng 3.6 Tần xuất đối tượng nghiên cứu theo mức số hồng cầu lưới máu ngoại vi 25 Bảng 3.7 Số lượng tỉ lệ loại bạch cầu đối tượng nghiên cứu theo giới (X ± SD) 25 Bảng 3.8 Một số số hóa sinh nhóm đối tượng nghiên cứu theo giới (X ± SD) 26 Bảng 3.9 Các số dòng tiểu cầu nhóm đối tượng nghiên cứu theo nhóm có đột biến nhóm khơng có đột biến (X ± SD) 29 Bảng 3.10 Tần xuất nhóm nghiên cứu nhóm có đột biến khơng có đột biến theo mức số lượng tiểu cầu 29 Bảng 3.11 Các số dòng hồng cầu nhóm đối tượng nghiên cứu theo nhóm có đột biến khơng có đột biến (X ± SD) 30 Bảng 3.12 Một số số hồng cầu lưới máu ngoại vi đối tượng nghiên cứu theo nhóm có đột biến khơng có đột biến (X ± SD) 31 Bảng 3.13 Tần xuất đối tượng nghiên cứu nhóm có đột biến khơng có đột biến theo mức số hồng cầu lưới máu ngoại vi .31 Bảng 3.14 Số lượng tỉ lệ loại bạch cầu đối tượng nghiên cứu theo nhóm có đột biến khơng có đột biến (X ± SD) 32 Số hóa Trung tâm Học liệu Cơng nghệ thơng tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn vii DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Tiểu cầu máu ngoại vi Hình 1.2 Hình ảnh đột biến gene JAK2 V617F gây bệnh tăng sinh tủy Hình 1.3 Tiêu máu dàn bệnh nhân tăng tiểu cầu ngun phát Hình 1.4 Vị trí nhiễm sắc thể chứa gene JAK2 13 Hình 1.5 Đột biến gene liên quan đến bệnh tiểu cầu .14 Hình 3.1 Hình ảnh điện di kiểm tra sản phẩm AS-PCR xác định đột biến gene JAK2 V617F từ mẫu máu bệnh nhân 28 Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ thông tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn MỞ ĐẦU Hội chứng tăng sinh tủy (Myeloproliferative neoplasm - MPN) nhóm bệnh tủy xương phát triển riêng dòng tất dòng tế bào tạo tủy Theo Tổ chức Y tế giới (WHO) nhóm bao gồm bệnh: Bạch cầu mạn dòng tủy (CML), Bạch cầu mạn dòng Neutrophil (CNL), Bạch cầu mạn dòng Eosinophil (CEL), Đa hồng cầu nguyên phát (PV), Tăng tiểu cầu nguyên phát (ET), Xơ tủy vô tăng sinh tế bào Mast Tất có nguyên nhân từ tế bào máu gốc vạn sản sinh mức nhiều dòng tế bào, số bệnh thuộc nhóm chuyển thành bạch cầu cấp Các bệnh đa hồng cầu nguyên phát, Tăng tiểu cầu tiên phát xơ tủy vô chuyển dạng lẫn [4], [5] Bệnh nhân mắc bệnh tăng tiểu cầu tiên phát, số lượng tiểu cầu thường tăng từ 500 đến 1000 G/l Số lượng tiểu cầu tăng cao bệnh tăng tiểu cầu nguyên phát thường kèm theo tăng thêm một vài yếu tố nguy biến chứng Trên thực tế, số lượng tiểu cầu cao khơng thiết có dấu hiệu lâm sàng trường hợp mắc bệnh thường phát qua việc xét nghiệm công thức máu Tuy nhiên, cần khai thác rõ tiền sử để loại trừ khả mắc bệnh tăng tiểu cầu thứ phát Ngày nhờ tiến sinh học phân tử di truyền tế bào, bệnh tăng tiểu cầu tiên phát biết đến có liên quan đến đột biến gene JAK2 vị trí 617, Guanine (G) thay Thymine (T) kết Valine (V) thay Phenylalanine (P) Đột biến làm xáo trộn dẫn truyền qua trục gene JAKSTAT, làm sản sinh mức tế bào máu khơng kiểm sốt Nhóm bệnh có tiên lượng tốt, phương pháp điều trị kinh điển gồm thuốc Hydroxyurea, Busulfan, Interferon, Bipobroman kiểm soát bệnh kéo dài thời gian sống 10 Số hóa Trung tâm Học liệu Cơng nghệ thông tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn 34 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận Dựa kết nghiên cứu thu được, đưa số kết luận sau: Độ tuổi trung bình bệnh nhân đến khám ban đầu bệnh tăng tiểu cầu tiên phát 52,37 % ± 16,22%, nam mắc bệnh nhiều nữ (tỉ lệ 1,14) Phân tích số huyết học đối tượng nghiên cứu cho thấy: Chỉ số lượng tiểu cầu TB, thể tích trung bình tiểu cầu nam nữ khơng có khác biệt; Các số số lượng RBC, Hgb, MCH, MCV MCHC nam nữ nhóm đối tượng nghiên cứu khơng có khác biệt; Số lượng WBC nam nữ nhóm đối tượng nghiên cứu tương đương nhau, nhiên số lượng loại bạch cầu (LYM, EO, BASO) nam nữ có giá trị khơng tương đương Các số hóa sinh hàm lượng Albumin, Protein nam nữ nhóm đối tượng nghiên cứu tương đương nhau; hàm lượng Bilirubin toàn phần Bilirubin trực tiếp nam nữ khơng có giá trị tương đương Phân tích đột biến gene JAK2 V617F 19 bệnh nhân kết thu 14/19 dương tính với phản ứng AS - PCR (chiếm 73%) Phân tích đặc điểm huyết học nhóm có khơng có đột biến gene JAK2 V617F cho thấy: Tỉ lệ đối tượng có PLT từ 400 đến