Nhìn chung: - Ưu điểm: Độ nhạy cao cho tín hiệu mạnh, thời gian phơi sáng ngắn - Nhược điểm: Có hại cho sức khỏe con người, đòi hỏi nhiều biện pháp an toàn tốn kém trong thao tác và xử l[r]
(1)CÁC LOẠI MẪU DÒ VÀ PHƯƠNG PHÁP ĐÁNH DẤU Thuyết trình Nhóm 1a – DSI1091 Nguyễn Thị Thu Thủy Nguyễn Thành Trung (2) NỘI DUNG TRÌNH BÀY Một vài khái niệm Tác nhân đánh dấu Các phương pháp đánh dấu (3) MỘT VÀI KHÁI NIỆM • Mẫu dò là trình tự nucleotide xác định và đánh dấu để dễ nhận biết Mẫu dò có đặc tính: • Tính chuyên biệt • Tính nhạy • Phóng xạ là tượng số hạt nhân nguyên tử không bền tự biến đổi và phát các xạ hạt nhân (tia phóng xạ) • Thời gian phơi sáng là thời gian phát xạ chất phóng xạ lên phim để ghi ảnh (4) TÁC NHÂN ĐÁNH DẤU 1) Đánh dấu các đồng vị phóng xạ • Các chất đồng vị phóng xạ thường dùng để đánh dấu: 32P, 35S, 3H (5) • Ưu và nhược điểm các chất đồng vị phóng xạ 32 Ưu điểm P Tín hiệu nhận rõ, thời gian phơi sáng ngắn - Không sử dụng nhiều lần Nhược điểm - Tín hiệu nhận không tinh 35 S H Sử dụng Tín hiệu nhiều tinh lần thời gian dài Giảm độ Thời gian nhạy các phơi sáng phân tích dài (6) • Việc phát các phân tử lai (gen-mẫu dò) tiến hành nhờ kỹ thuật phóng xạ tự ghi (Autoradiography) (7) Nhìn chung: - Ưu điểm: Độ nhạy cao cho tín hiệu mạnh, thời gian phơi sáng ngắn - Nhược điểm: Có hại cho sức khỏe người, đòi hỏi nhiều biện pháp an toàn tốn kém thao tác và xử lý, không thể dùng thời gian dài (8) 2) Đánh dấu phương pháp hóa học • Giúp khắc phục các nhược điểm việc đánh dấu đồng vị phóng xạ độ nhạy lại kém • Các hệ thống đánh dấu hóa học thông dụng: • Hệ thống sử dụng avidine (hay streptavidine) • Hệ thống dựa trên phát quang sinh học (9) Hệ thống sử dụng avidine (hay streptavidine) • (hình) (10) Hệ thống dựa trên phát quang sinh học •(hình) 10 (11) CÁC PHƯƠNG PHÁP ĐÁNH DẤU • 1) Phương pháp nick-translation • 2) Phương pháp random priming (thiết lập mồi ngẫu nhiên) • 3) Phương pháp đánh dấu các oligonucleotide • 4) Phương pháp tạo mẫu dò RNA (riboprobe) 11 (12) Phương pháp nicktranslati on 12 (13) Phương pháp Random priming 13 (14) Phương pháp Random priming 14 (15) Phương pháp đánh dấu các oligonucleotide • (hình) 15 (16) Tổng hợp mẫu dò RNA 16 (17) Tổng hợp mẫu dò RNA 17 (18) CẢM ƠN THẦY VÀ CÁC BẠN ĐÃ LẮNG NGHE BÀI THUYẾT TRÌNH Do u want an apple? 18 (19)