Đang tải... (xem toàn văn)
- Khi 1ml thuốc thử được đun nóng với 5 giọt chất mẫu trong một cốc nước đang sôi, một dấu hiệu tích cực đối với monosacarit có chứa nhóm ceton là sự chuyển màu của dung dịch từ vàng ca[r]
(1)Một số thuốc thử hóa học thơng dụng
Một số thuốc thử hóa học thơng dụng, hướng dẫn cách thử, phương pháp để phân tích định tính và định lượng Mời q thầy bạn tham khảo.
Thuốc thử Barfoed: Thuốc thử trông giống thuốc thử Benedict khác chút Dung dịch chuẩn bị cách hòa tan 70g Đồng acetat monohydrat với 9ml axít acetic băng nước sau đưa vào bình định mức 1lít thêm nước vạch định mức, dung dịch sử dụng thời hạn năm
Khi 1ml dung dịch thuốc thử đun nóng với giọt chất mẫu, kết dương tính monosacarit hình thành kết tủa đỏ gạch tồn vịng phút Cịn disacarit nhìn chung khơng thấy phản ứng xảy sau 10 phút đun nóng với thuốc thử Kết tủa khơng đóng váng thử với thuốc thử Benedict
Với dung dịch thơ tiến hành sau: trước hết hịa tan 100g Na2CO3 173g Natri Citrat dihydrat 850ml nước, khuấy cho từ từ dung dịch 17.3 g Đồng sulfat 100ml nước Sau thêm hỗn hợp vào bình định mức 1lít thêm nước đến vạch định, thuốc thử sử dụng lâu dài
Trong 600ml nước nóng hịa tan chất sau: - 200g Natri citrat (C6H5Na3O7)
- 75g Natri cabonat - 125g Kali thiocynat Trong 100ml nước hòa tan - 18g CuSO4.5H2O
Khi dung dịch nguội trộn chúng với khuấy sau thêm 5ml dung dịch Kali
(2)Khi 1ml dung dịch thuốc thử đun nóng với giọt chất mẫu cốc nước, dấu hiệu tích cực kiểm tra có mặt đường khử hình thành kết tủa phút Khoảng biến màu từ xanh vàng chuyển qua màu cam sau màu đỏ gạch tùy thuộc vào hàm lượng đường khử có chất mẫu; với mẫu chứa 1% glucose màu kết tủa thường đỏ gạch
Thuốc thử Bial: Hòa tan g orcinol (C7H8O2) 500 mL axít HCl đậm đặc, thêm 2,5
ml dung dịch feric clorua hexahydrat 10% hòa tan hỗn hợp thành 1lít với nước lúc HCl xấp xỉ 6M Thuốc thử bền vòng vài tuần, chưa thử để lâu hơn, bạn thử xem Thuốc thử Bial pha chế theo cách cổ điển chuẩn bị 1lít HCl đậm đặc khơng pha lỗng với nước Dung dịch phản ứng nhanh (30-60 giây) bền so với thuốc thử pha chế phương pháp nêu HCl đậm đặc vấn đề nan giải Và bạn dùng HCl 4M phản ứng tốt chậm cho màu yếu
Khi 1ml dd thc thử đun nóng với giọt chất mẫu cốc nước dấu hiệu tích cực với pentose(phân tử đường chứa cacbon) sử đổi màu dung dịch từ xanh sang xanh da trời chốc lát
Thuốc thử Biuret: Thêm 300ml dung dịch NaOH 10% thể tích vào 500ml dung dịch
chứa 0.3% đồng sulfat pentahydrat 1.2% Kali Tartrat (C4H4K2O6) khuấy pha loãng thành 1lít dung dịch Sau để dung dịch chỗ tối để tránh thuốc thử bị biến tính
- Thuốc thử dùng phân tích định tính định lượng Trong phản ứng tiêu biểu phần thể tích mẫu trộn với phần thể tích thuốc thử; tỉ số tối giản phụ thuộc vào nồng độ tối đa protein mà bạn muốn phát Sự xuất protein cho màu tìm với bước sóng hấp thụ khoảng 550-555nm, thường đọc 540nm
Thuốc thử Bradford: Hòa tan 100mg Coomassie Blue G-250 (C41H44N3NaO6S2)
(3)Thuốc thử cần lọc lần, thấy chưa hài lòng bạn lọc đến lần thấy kết tủa xuất duc dịch Thuốc thử Bradford có bán thị trường với cấu trúc tương đối bền Tơi nghe số người nói cơng thức Sigma dùng 40ml metanol 4% 120ml photphoric axít 10% Tơi thử khơng thấy tốt phương pháp cổ điển Người ta nói dung dịch bền dùng năm không thấy vấn đề
- Để định lượng protein trộn 0.25ml mẫu với 2.5 ml thuốc thử Bradford Sau phút đo phổ hấp thụ 595nm Một điểm bất lợi thuốc thử cho khoảng trắng dài làm ảnh hưởng đến kết đọc phổ số thuốc thử dính chặt với cuvét Một điểm bất lợi khác thuốc thử nhạy với dung dịch tẩy rửa dụng cụ thủy tinh không rửa lại có nghĩa bạn nghiên cứu khả hòa tan màng protien chất tẩy rửa
Thuốc thử DNSA: Thuốc thử dùng để phát nhóm khử cuối mạch hydrocarbon
và hữu dụng nhiều thí nghiệm Thành phần 1% 3,5-dinitrosalicylic Axít (DNSA), 30% Natri Kali Tartrat 0.4M NaOH Thuốc thử bền sau vài năm cất trữ có vài đen xuất dung dịch, cũ sử dụng tốt
Trong phản ứng tiêu biểu, thể tích mẫu thuốc thử đun nóng cốc nước sơi khoảng 10 phút Sau để nguội pha lỗng với 10 phần thể tích nước đo phổ hấp thụ thu bước sóng 540nm Tơi thường dùng khoảng 0.4 ml mẫu DNSA sau đun nóng hịa tan với 4ml nước, thu hỗn hợp vừa đủ để chạy phổ hấp thụ Khi khơng có nhóm khử xuất màu thu màu vàng khoảng hấp thụ từ 0.03-0.05, dấu hiệu tích cực màu đỏ tạo thành với khoảng hấp thụ 1.0
Thuốc thử Lowry:
(4)hai thuốc thử A B bền thời gian tương đối dài thấy thuốc thử B xuất kết tủa có nghĩa nhắc tơi cho thêm NaOH
- Thuốc thử 2: Hịa tan thuốc thử Folin-Ciocalteu phenol thương mại với lượng nước thể tích , thuốc thử bền vài tuần
Để định lượng protein trộn 0.25ml dung dịch chứa protein với 2.5 ml thuốc thử Lowry Sau 10 phút thêm 0.25ml thuốc thử Lowry lắc Sau 30 phút đo phổ hấp thụ 750nm.(Nếu bạn dùng Spectronic 20 với ống photo thông thường 750nm dài, 600nm cho kết hấp thụ thấp chấp nhận được.)
Thc thử Seliwanoff: Hịa tan 1g resorcinol (C7H8O2) 300ml HCl đậm đặc sau
pha lỗng thành 1lít (lúc HCl xấp xỉ 4M) Thuốc thử cất năm
- Khi 1ml thuốc thử đun nóng với giọt chất mẫu cốc nước sôi, dấu hiệu tích cực monosacarit có chứa nhóm ceton chuyển màu dung dịch từ vàng cam sang đỏ vòng phút Trong số tài liệu khác nói màu mơ kết âm tính Màu sắc thí nghiệm kết phụ thuộc vào nồng độ chất mẫu, vài loại đường glucose khơng biến màu chí sau mười phút thuốc thử