THÔNG TIN TÀI LIỆU
ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM NÔNG LỆ THÙY NGHIÊN CỨU THU THẬP VÀ LƢU TRỮ NGUỒN GEN CÂY THẤT DIỆP NHẤT CHI HOA (PARIS POLYPHYLLA SM.) Chuyên ngành: Di truyền học Mã số: 60.42.01.21 LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC Ngƣời hƣớng dẫn khoa học: TS VŨ THỊ THU THỦY THÁI NGUYÊN - 2016 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan số liệu kết nghiên cứu luận văn trung thực chưa sử dụng để bảo vệ cho học vị Tác giả NÔNG LỆ THÙY i LỜI CẢM ƠN Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc tới TS Vũ Thị Thu Thủy tận tình hướng dẫn, bảo tạo điều kiện giúp đỡ để tơi hồn thành cơng trình nghiên cứu Tơi xin chân thành cảm ơn GS.TS Chu Hồng Mậu, Ban lãnh đạo Trường Đại học sư phạm Thái Nguyên, Ban chủ nhiệm khoa Sinh học thầy cô giáo, cán Khoa, giúp đỡ tận tình TS Nguyễn Thị Thu Ngà, KTV Trần Thị Hồng giúp tơi hồn thành cơng trình nghiên cứu Tôi xin trân trọng cảm ơn hỗ trợ kinh phí đề tài NCKH cấp Bộ có mã số - - - Sinh họ - ủ trì Tơi xin cảm ơn động viên gia đình, bạn bè suốt thời gian học tập hoàn thành luận văn Tác giả NÔNG LỆ THÙY ii MỤC LỤC Trang Trang bìa phụ Lời cam đoan i Lời cảm ơn ii Mục lục iii Danh mục bảng v MỞ ĐẦU 1 Đặt vấn đề Mục tiêu nghiên cứu Nội dung nghiên cứu .2 Chƣơng TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Đặc điểm chung Thất diệp chi hoa 1.1.1 Nguồn gốc phân loại 1.1.2 Đặc điểm nông sinh học 1.1.3 Thành phần hóa học cơng dụng 1.1.4 Một số thuốc sử dụng Thất diệp chi hoa .7 1.2 Một số phương pháp định danh thực vật 1.3 Một số phương phương pháp lưu trữ bảo tồn giống trồng 10 1.3.1 Bảo tồn nội vi( in – situ) 11 1.3.2 Bảo tồn ngoại vi (Ex – situ) 12 1.3.3 Bảo tồn giống kỹ thuật nuôi cấy in vitro .13 1.3.3.1 Cơ sở lý luận phương pháp bảo quản nhân giống in vitro .13 1.3.3.2 Ứng dụng kỹ thuật nuôi cấy in vitro 15 1.3.3.3 Các đường hướng nhân giống in vitro 18 Chƣơng VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 22 2.1 Vật liệu nghiên cứu 22 2.1.1 Vật liệu 22 iii 2.1.2 Hóa chất, thiết bị 22 2.2 Phương pháp nghiên cứu 23 2.2.1 Phương pháp thu thập mẫu 23 Thu thập mẫu Thất diệp chi hoa tự nhiên, mô tả chụp ảnh 23 2.2.2 Phương pháp bảo tồn Thất diệp chi hoa Thái Nguyên 23 2.2.3 Phương pháp phân lập gen rpoC1 23 2.2.4 Phương pháp nuôi cấy in vitro 24 2.2.5 Phương pháp xử lí số liệu 26 2.3 Địa điểm tiến hành thí nghiệm 26 Chƣơng KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 27 3.1 Kết thu thập mẫu Thất diệp chi hoa số tỉnh miền núi phía Bắc Việt Nam 27 3.1.1 Đặc điểm mẫu Thất diệp chi hoa thu thập huyện Bình GiaLạng Sơn 27 3.1.2 Đặc điểm mẫu Thất diệp chi hoa thu thập huyện Quản BạHà Giang 29 3.1.3 Đặc điểm mẫu Thất diệp chi hoa thu thập huyện Sa Pa- Lào Cai 30 3.2 Kết phân tích gen rpoC1 Thất diệp chi hoa 32 3.3 Kết nghiên cứu bảo tồn Thất diệp chi hoa trồng tỉnh Thái Nguyên34 3.4 Kết bảo tồn Thất diệp chi hoa in vitro 37 3.4.1 Kết khử trùng mẫu 37 3.4.2 Kết thăm dị mơi trường nảy mầm phát sinh hình thái mẫu nghiên cứu .42 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 46 TÀI LIỆU THAM KHẢO 47 iv NHỮNG CHỮ VIẾT TẮT 2,4D 2,4 Dichlorphenoxyacetic acid Cs Cộng CT Cơng thức ĐHST Điều hịa sinh trưởng IBA Indole-3-buttyric acid BAP 6-Benzylaminopurine IAA Indole - - acetic - acid MS Murashige and Skoog NAA 1-Naphthalene acetic acid GA3 Gibberellic acid DNA Deoxyribonucleic acid RNA Ribonucleic acid iv DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 3.1 Mẫu thu huyện Bình Gia - Lạng Sơn 27 Bảng 3.2 Số lượng mẫu Thất diệp chi hoa thu Hà Giang 29 Bảng 3.3 Số lượng mẫu Thất diệp chi hoa thu Sa Pa 31 Bảng 3.4 Tên loài mã số trình tự gen rpoC1 33 Bảng 3.5 Ảnh hưởng giá thể tới tỉ lệ sống Thất diệp chi hoa 35 Bảng 3.6 Đặc điểm sinh trưởng Thất diệp chi hoa phòng sinh trưởng Thái Nguyên 36 Bảng 3.7 Kết khử trùng hạt Thất diệp chi hoa 38 Bảng 3.8 Kết khử trùng Thất diệp chi hoa 40 Bảng 3.9 Kết khử trùng củ Thất diệp chi hoa 41 Bảng 3.10 Ảnh hưởng chất ĐHST đến hệ số nảy mầm củ 44 v DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Hình thái Bảy hoa Hình 3.1 Cây Thất diệp chi hoa Hồng Phong - Bình Gia - Lạng Sơn 28 Hình 3.2 Mẫu Thất diệp chi hoa xã Hội Hoan, huyện Bình Gia 28 Hình 3.3 Mẫu củ thu Quản Bạ - Hà Giang .29 Hình 3.4 Quả hạt Thất diệp chi hoa thu Hà Giang 30 Hình 3.5 Cây Thất diệp chi hoa Sa Pa .31 Hình 3.6 Cây Thất diệp chi hoa phòng sinh trưởng in vitro Thái Nguyên .37 Hình 3.7 Kết điện di sản phẩm nhân gen rpoC1 32 rpo ất diệp chi hoa 34 ệt Nam .34 Hình 3.9 Mẫu hạt Thất diệp chi hoa cấy môi trường MS 39 Hình 3.10 Mẫu khử trùng củ Thất diệp chi hoa 42 Hình 3.11 Ảnh hưởng chất ĐHST đến phát sinh hình thái mơ .43 Hình 3.12 Mẫu từ củ Thất diệp chi hoa mơi trường MS có bổ sung thêm chất kích thích sinh trưởng 44 Hình 3.13 Mẫu củ bật chồi có bổ sung BAP 0,5mg/l + Than hoạt tính 45 Hình 3.14 Mẫu củ bật chồi bổ sung BAP 0.5mg/l 45 vi MỞ ĐẦU Đặt vấn đề Thất diệp chi hoa có tên khoa học Paris polyphylla Sm., hay gọi Bảy hoa, độc cước liên, thiết đăng đài, chi hoa đầu, tảo hưu, thảo hà xà…[9] Chi Paris gồm 27 loài phân bố rộng khắp Châu Âu Châu Á tập trung nhiều Trung Quốc Chi Paris gồm lồi từ 03lá đến 11 Lồi Paris Polyphylla có 13 giống [52] Tại Việt Nam, Thất diệp chi hoa phát vùng núi Cúc Phương (Ninh Bình), Sapa (Lào Cai), Đà Bắc (Hịa Bình), Hà Giang, Lạng Sơn, Lai Châu… Cây Thất diệp chi hoa Pectelot phát vào năm 1934 Sapa với nhiều loài khác [9] Theo y học cổ truyền, Thất diệp chi hoa có tác dụng nhiệt, giải độc, trị rắn cắn, trị viêm tuyến vú, trị sốt rét, trị ho lâu ngày [9] Trong năm gần đây, Thất diệp chi hoa cịn phát có tác dụng diệt khuẩn, kháng viêm mạnh, ức chế virus, tăng cường chức tuyến thượng thận, an thần, trấn tĩnh, chống ho Đặc biệt, có tác dụng ức chế tế bào ung thư phổi ung thư dày, kéo dài tuổi thọ cho người bệnh [11], [42], [43], [46] Với nhiều tác dụng chống lại bệnh nên Thất diệp chi hoa đối tượng thu mua khai thác với số lượng lớn Bên cạnh đó, nạn phá rừng làm nương rẫy dẫn đến giảm khả tái sinh phân bố Thất diệp chi hoa tự nhiên bị thu hẹp Theo phân hạng độ góc bảo tồn, Thất diệp chi hoa xếp hạng EN A1 c,d, cấp đánh giá mức (R) Cây khuyến cáo khai thác, sử dụng hợp lí cần thiết phải lưu giữ bảo vệ nguồn gen [6] Việc lưu giữ bảo tồn giống trồng thực nhiều cách khác như: bảo tồn chỗ, bảo tồn chuyển chỗ bảo tồn in vitro Công tác tái sinh nhân giống vơ tính Thất diệp chi hoa thực số tỉnh miền núi phía bắc Việt Nam như: Hà Giang, Sơn La, Lai Châu Tuy nhiên, kết tái sinh chưa mong muốn Trên sở tiến hành đề tài “Nghiên cứu thu thập lƣu trữ nguồn gen Thất diệp chi hoa (Paris polyphylla Sm.) nhằm bảo tồn nguồn gen phục vụ cho công tác phục tráng giống sau Mục tiêu nghiên cứu Thu thập số Thất diệp chi hoa số miên núi phía Bắc Việt Nam Bước đầu sử dụng kỹ thuật sinh học phân tử nghiên cứu định loại mẫu Thất diệp chi hoa Lưu trữ số mẫu cấy Thất diệp chi hoa phịng sinh trưởng ni cấy in vitro Nội dung nghiên cứu Nghiên cứu đặc điểm thu thập mẫu Thất diệp chi hoa số địa phương miền núi phía Bắc Việt Nam Phân lập xác định trình tự nucleotit gen rpoC1 Nghiên cứu số tiêu sinh lý, sinh trưởng Thất diệp chi hoa phòng sinh trưởng in vitro phịng cơng nghệ tế bào trường Đại học sư phạm Thái Nguyên Nghiên cứu bảo tồn Thất diệp chi hoa kỹ thuật nuôi cấy in vitro Bảng số liệu 3.10 cho ta thấy, thu 02 mẫu nuôi cấy mơi trường có bổ sung BAP nồng độ 0,5mg/l bật chồi, nhiên qua quan sát tơi nhận thấy mẫu có bổ sung thêm than hoạt tính củ chồi phát triển nhanh mẫu khơng có bổ sung than hoạt tính, tính từ thời điểm bật chồi 30 ngày mẫu có bổ sung than hoạt tính có chiều cao 7cm, mẫu khơng có than hoạt tính đạt chiều cao chồi 1,5cm, lại 05 mẫu MS làm đối chứng khơng nhận thấy có thay đổi So với thí phương pháp nghiệm sử dụng chất kích thích sinh trưởng mảnh lá, hạt, hay củ lát mỏng nhận thấy có biệu sống, phương pháp thí nghiệm ni cấy thân củ mơi trường MS có bổ sung BAP nồng độ 0,5mg/l bổ sung than hoạt hoạt tính hiệu Hình 3.13 Mẫu củ bật chồi có bổ sung BAP 0,5mg/l + Than hoạt tính Hình 3.14 Mẫu củ bật chồi bổ sung BAP 0.5mg/l 45 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ KẾT LUẬN Cây Thất diệp chi hoa có mặt tỉnh Lạng Sơn, Hà Giang Lào Cai Việt Nam có dạng dị thảo từ hai đến tám Cây Thất diệp chi hoa nhân giống vơ tính Thái Ngun giá thể hỗn hợp đất cát theo tỷ lệ 1:1, điều kiện nhiệt độ 25oC ± 2, độ ẩm 50% - 70% Hạt trưởng thành Thất diệp chi hoa khử trùng hỗn hợp HCl javen với tỉ lệ : 20ml 16 giờ, thu 90% mẫu sạch; Lá khử trùng javen 7% 15 phút thu 65% mẫu sạch; Củ khử trùng hỗn hợp javen 70% phút + HgCl 0.1% phút thu 60% mẫu Môi trường nuôi cấy thân củ gồm MS + BAP 0,5mg/l + than hoạt tính thu 02 mẫu bật chồi ống nghiệm Sử dụng cặp mồi đặc hiệu rpoC1-1f/rpoC1-3r khuếch đại thành công gen rpoC1 từ DNA Thất diệp chi hoa Gen rpoC1 có kích thước 558 nucleotide Trình tự nucleotit gen rpoC1của Thất diệp cho hoa có mối quan hệ gần gũi với loài Paris verticillata voucher (độ tương đồng 99% ) ĐỀ NGHỊ Tiếp tục nhân giống vơ tính Thất diệp chi hoa nhằm lưu giữ phát triển nguồn gen thuốc quý Tiếp tục nghiên cứu giám định mẫu Thất diệp chi hoa thu thập loài khác Thất diệp chi hoa 46 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu Tiếng Việt Nguyễn Thị Lý Anh, Đinh Thị Phịng (2007), Cơng nghệ ni cấy mơ, NXB Nơng nghiệp Hà Nội Lê Trần Chấn, Trần Ngọc Ninh, Trần Thị Thúy Vân (2013), “Đa dạng sinh học giải pháp bảo, phát triền bền vững vùng núi đá vôi tỉnh Hà Giang”, Hội thảo khoa học diễn đàn đầu tư Vì Hà Giang phát triển, 115-120 Lê Thị Kim Đào, Lê Thị Hạnh, Huỳnh Xuân Trường, Đỗ Thị Thu Hiền, Đoàn Minh Hải (2002), “Nghiên cứu thử nghiệm nhân số trồng rừng phương pháp nuôi cấy mô (bạch đàn E urophylla, hồng, giổi xanh, trầm hương)”, Trung tâm ứng dụng tiến khoa học kỹ thuật Bình Định, Báo cáo tổng kết khoa học kỹ thuật dự án SXTN KC.04DA9, 9-11 Lê Hồng Giang Nguyễn Bảo Toàn (2011), “Sự hình thành mơ sẹo, phơi Mỏ quạ in vitro (Dischidia Raflesiana Wall)”, Tạp chí Khoa học, Trường Đại học Cần Thơ, 20a 61-67 Mai Thị Phương Hoa, Đỗ Tiến Vinh (2012), “Thực hành nuôi cấy mơ tế bào thực vật”, Tạp trí Khoa học Trường Đại học Nguyễn Tất Thành, 2-13 Lê Thị Thanh Hương, Trần Thị Ngọc Anh, Nguyễn Thị Ngọc Yến, Nguyễn Trung Thành, Nguyễn Nghĩa Thìn (2012), “Thực trạng loài thuốc quý tỉnh Thái Nguyên”, Tạp chí Khoa học Đại học Quốc gia Hà Nội, Khoa học Tự nhiên Cơng nghệ, 28:173-194 Hồng Thị Kim Hồng (2011), nghiên cứu khả tái sinh chồi cụm chồi nuôi cấy in vitro Hà thủ đỏ (Polygonum multiflorunb.), Tạp chí khoa học, Đại học Huế, 64(1), 23-32 Dương Công Kiên (2002), Nuôi cấy mô thực vật, NXB Đại Học Quốc Gia Tp Hồ Chí Minh 47 Đỗ Tất Lợi (2014), Những thuốc vị thuốc Việt Nam, NXB Hồng Đức 10 Mai Xuân Lương, Nguyễn Văn Kết (1994), “Ứng dụng nuôi cấy mô nhân giống cẩm chướng”, Tạp chí khoa học, Đại học tổng hợp Đà Lạt, 7-11 11 Phan Lê, Lê Quý Ngưu, Tú Văn Lương (2002), Cây thuốc phịng trị ung thư, NXB Thuận Hóa, Huế 12 Trần Đình Long (1996), Chiến lược bảo tồn sử dụng nguồn tài nguyên di truyền trồng Việt Nam, Tài nguyên di truyền thực vật Việt Nam, NXB Nông nghiệp Hà Nội, 54-61 13 Nội Vũ Triệu Mân (1986), Bệnh virus hại khoai tây, NXB khoa học Hà 14 Trần Văn Minh, Bùi Thị Tường Thu (2007), “Ứng dụng công nghệ tế bào thực vật bảo tồn nguồn gen lát hoa Côn Đảo (Chukrasia taburais A Juss)”, Hội nghị Khoa học Công nghệ - Viện Sinh học Nhiệt Đới, 367371 15 Nguyễn Thị Quỳnh (2005), “Nghiên cứu ảnh hưởng yếu tố môi trường lên tăng trưởng số thân gỗ nhiệt đới cận nhiệt đới điều kiện nuôi cấy in vitro”, Hội nghị tổng kết NCCB KHTN khu vực phía Nam, NXB Khoa học Kỹ thuật Hà Nội, 42 - 44 16 Mai Thị Tân (1993), “Phục tráng giống khoai tây Thường Tín phương pháp ni cấy đỉnh sinh trưởng”, Kết nghiên cứu khoa học khoa trồng trọt, Trường Đại học Nông Nghiệp 1, NXB Hà Nội, Tr 90 - 94 17 Nguyễn Thị Tần (2013), “Cây dược liệu - lợi để người dân vùng cao Lào Cai nghèo”, Tạp chí kinh tế kỹ thuật Lào Cai:24: 455 18 Hoàng Minh Tấn, Vũ Quang Sáng, Nguyễn Kim Thanh, (2004), Sinh lý thực vật, NXB Đại học Sư phạm Hà Nội 19 Nguyễn Quang Thạch, Đào Huy Chiên, Đỗ Thị Bích Nga (2010), Kết nghiên cứu nhân giống khoai môn sọ phương pháp in vitro, Kết nghiên cứu khoa học công nghệ 2006 - 2010, Viện Khoa học Nông nghiệp Việt Nam, NXB Nông nghiệp Hà Nội, 573 - 580 20 Đức Đoàn Thị Ái Thuyền, Nguyễn Thị Quỳnh, Trần Văn Minh, Nguyễn 48 Hùng (1993) “Nhân Giống chuối phương pháp cấy mơ”, NXB Nơng nghiệp, TP Hồ Chí Minh 21 Trung tâm nghiên cứu Tài nguyên Môi trường Đại học Quốc gia Hà Nội, Viện Sinh thái Tài nguyên sinh vật - Trung tâm Khoa học tự nhiên Công nghệ Quốc gia (2001-2005), Danh lục lồi thực vật Việt Nam, tập 1-3, NXB Nơng nghiệp, Hà Nội 22 Nguyễn Văn Uyển (1985), Ứng dụng nuôi cấy mô tế bào thực vật công tác chọn giống trồng, NXB TP Hồ Chí Minh 23 Đỗ Năng Vịnh (2002), Công nghệ sinh học trồng, NXB Nông Nghiệp Hà Nội 24 Viện Khoa học Công Nghệ Việt Nam, Sách đỏ Việt Nam, 2007 25 Viện dược liệu (2003), “Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam”, tập 26 NXB Khoa học Kỹ thuật Hà Nội, 182-184 Vũ Văn Vụ (1992), Sinh lý thực vật ứng dụng, NXB Giáo dục Tài liệu nƣớc 27 Bammi, R.K., Randhava, G.S (1975), Dioscorea Improvement Project - Status Report IJHR Bangalore 28 Bhojwani S.S (1980), factors affecting in vitro stage of micropropagation Plant physiol., 65: 90 29 Chaturvedi, H.C., Sinha, M (1979), Mass propagation of Dioscorea floribunda by tissue culture Ext Bull No NBRI Lucknow India 30 Do,H.D.K., Kim,J.S., Kim,J.H.(2014), “Paris verticillata voucher KWU02222 plastid, complete genome”, Genome Biol Evol (7), 1699-1706 31 Doyle JJ, JL Doyle (1987), A rapid DNA isolation procedure for small quantities of fresh leaf tissue Phytochem Bull 19: 11-15 32 Deng, D., Lauren, D.R., Cooney, J.M., Jensen, D.J., Wurms, K.V., Upritchard, J.E., Cannon, R.D., Wang, M.Z., Li, M.Z (2008), Antifungal saponins from Paris polyphylla Smith Planta Med 24(11): 1397-1402 49 33 Devkota, K.P (2005), “Bioprospecting studies on Sarcococca hookeriana Bail, Sonchus wightianus DC, Paris polyphylla Smith and related Medicinal Herbs of Nepal”, Ph D Thesis, HEJResearch Institute of Chemistry, International Centre for Chemical Science, University of Karachi Pakistan, Karachi 75,270 34 Ford C.S, Ayres K.L, Toomey (2009), Selection of candidate coding DNA barcoding regions for use on DNA plants Botanical Journal of the Linnean Society, 159 (1): - 11 35 Haberlandt, G (1902) Kulturversuche mit isolierten Pflanzenzellen Sitzungsber Akad Wiss Wien Math.-Naturwiss Kl., Abt J 111, 69 - 92 36 Jun, Z (1989), “Some bioactive substances from plants of West china”, Pure & Appl Chem, 61(3), 457 - 460 37 Kim M Wilson, Mark A Schembri, Peter D Baker, Christopher P Saint, (2000), ”Molecular characterization of the toxic cyanobacterium cylindrospermopsis raciborskii and design of a SpeciesSpecific PCR”, Applied and Environmental Microbiology, 66 (1) 332 - 338 38 Kumar M.H., Dhiman V., Choudhary R., Chikara A (2014), Anticancer activity of hydroalcoholic extracts from Paris polyphylla rhizomes against human A549 lung cancer cell lines using MMT assay, IRJP, 5(4): 290 - 294 39 Lee KH, Kwon KR, Kang Wm, Jeon EM, Jang JH (2010), ”Identification and analysis of the chloroplast rpoC1 gene differentially expressed in wild giseng” , J Pharmacopuncture, 15(2): 20-3 40 Lee M.S., Yuet-Wa J.C., Kong S.K., Yu B., EngChoon V.O., Nai- Ching H.W., Wai T.M., Fung K.P (2005), Effects of polyphyllin D, a steroidal saponin in Paris polyphylla, in growth inhibition of human breast cancer cells and in xenograft, Cancer Bio Ther., 4(11): 1248-1254 41 Li P K., Yi X L., Tolga E., Else D., He S Y., Yang Z., Cheng Q X., Chao L., Thomas E., Bai P M (2012), “Polyhydroxylated Steroidal Glycosides from Paris polyphylla”, Journal of Natural Products, 75, 1201-1205 50 42 Li F.R., Jiao P., Yao S.T., Sang H., Qin S.C., Zhang W., Zhang Y.B., Gao L.L (2012), Paris polyphylla Smith extract induces apoptosis and activates cancer suppressor gene connexin26 expression, Asian Pac J Cancer Prev, 13(1): 205-209 43 Limasset cad Cornel (1949), Recherche du virus de la masoïque du tabac (Marmor tabaci Holmes) dans les méristèmes des plantes infectées, C.R Acad Sci Paris 228 1888-1890 44 Murashige T (1980) Plant Growth, Substances & Commercial uses of tissues verlarg, Berlin, Heidelberg, Newyork, 642-677 45 Murashige T, Skoog F (1962), A revised medium for rapid growth on bio - assays with tabaco tissue culture Physiol Plantar 15: 473-477 46 Murashige, T., Serpa, M., Jones, J.B (1974), Clonal multiplication of Gerbera Through tissue culture Hortcience, 9, 175-180 47 Morel, Martin (1952), Guerison de pomes de terre attains d’une maladie a virus C.R Acad Sci: 235, 1324 - 1325 48 Staritsky, G (1970), Tissue culture of the oil palm (Elaeis guineensis Jacq) as a tool for its vegetative propagation, Euphytica, 288 292 49 Vijayan K, Tsoul C H (2010) DNA barcoding in plant: taxonomy in a new perspective, Curent Science, 99 (11): 1530-1538 50 Wang Qiang (2005): Acta Botanica of nanging pharmaceutical University in press, Journal of Chinese Pharmaceutical, 14(3), 1.762.180 51 Yan, L.L., Zhang, Y.J., Gao, W.J., Man, S.L., Wang, L (2009), In vitro anticancer activity of steroid saponins of Paris polyphylla var yunnanensis Exp Oncol., 31(1): 27-32 Trang Website 52 https://vi.wikipedia.org 53 ww.langson.gov.vn/binhgia/ /DE%20AN%20NTM%20BINH %20GIA 54 http://duan600.vn/huyen-ngheo/Huyen-Quan-Ba-Ha-Giang-28/ 51 55 http://trungtamhoclieuthainguyen.com/chi-tiet/danh-gia-da-dang- sinh-hoc-thuc-vat-dac-huu-va-quy-hiem-tai-vuon-quoc-gia-hoang-lienhuyen-sa-pa-tinh-lao-cai-38747.html 56 http://timtailieu.vn/tai-lieu/phan-loai-sinh-hoc-phan-tu-32678/ 57 http://text.123doc.org/document/2575722-dai-cuong-ve-phan-loai- hoc-thuc-vat.htm 58 59 http://www botanyvn.com/default.asp http://www.baithuocquy.com/suc-khoe/bai-thuoc-tu-cay-that-diep- nhat-chi-mai/d3277 60 http://www.zhongyao.org.cn/zy/tp/gj/201102/246087.html 61 https://websrv1.ctu.edu.vn/coursewares/supham/phanloaitv/ch1.htm 62 http://www.vnbiobarcode.org/publication?id=27 63 http://www.bvtvhcm.gov.vn/handbook.php?id=13&cid=1 64 http://www.ncbi.nlm.nih.gov 52 ... có hoa A Hình 3.5 Cây Thất diệp chi hoa Sa Pa (A Cây Thất diệp chi hoa xã Bản Khoang B Cây Thất diệp chi hoa trung tâm bảo tồn vườn quốc gia Hồng Liên) Qua thực địa tìm kiếm Thất diệp chi hoa. .. thu thập lƣu trữ nguồn gen Thất diệp chi hoa (Paris polyphylla Sm. ) nhằm bảo tồn nguồn gen phục vụ cho công tác phục tráng giống sau Mục tiêu nghiên cứu Thu thập số Thất diệp chi hoa số miên núi... dụng kỹ thu? ??t sinh học phân tử nghiên cứu định loại mẫu Thất diệp chi hoa Lưu trữ số mẫu cấy Thất diệp chi hoa phịng sinh trưởng ni cấy in vitro Nội dung nghiên cứu Nghiên cứu đặc điểm thu thập
Ngày đăng: 09/06/2021, 06:46
Xem thêm: