Xác định đồng thời sibutramine và một số dẫn xuất trong thực phẩm bảo vệ sức khỏe hỗ trợ giảm cân bằng phương pháp LC MS MS​

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN DƢƠNG THỊ MAI HOA XÁC ĐỊNH ĐỒNG THỜI SIBUTRAMINE VÀ MỘT SỐ DẪN XUẤT TRONG THỰC PHẨM BẢO VỆ SỨC KHỎE HỖ TRỢ GIẢM CÂN BẰNG PHƢƠNG PHÁP LC-MS/MS LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Hà Nội – 2020 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN DƢƠNG THỊ MAI HOA XÁC ĐỊNH ĐỒNG THỜI SIBUTRAMINE VÀ MỘT SỐ DẪN XUẤT TRONG THỰC PHẨM BẢO VỆ SỨC KHỎE HỖ TRỢ GIẢM CÂN BẰNG PHƢƠNG PHÁP LC-MS/MS Chun ngành: Hóa Phân tích Mã số: 8440112.03 Cán hƣớng dẫn: PGS.TS Lê Thị Hồng Hảo PGS TS Phạm Thị Ngọc Mai Hà Nội - 2020 LỜI CẢM ƠN Đề tài đƣợc thực hoàn thành Viện Kiểm nghiệm an toàn vệ sinh thực phẩm quốc gia, 65 Phạm Thận Duật, Phƣờng Mai Dịch, Quận Cầu Giấy, Thành phố Hà Nội Với lòng biết ơn sâu sắc, em xin chân thành gửi lời cảm ơn PGS.TS Lê Thị Hồng Hảo, PGS.TS Phạm Thị Ngọc Mai giao đề tài, tận tình hƣớng dẫn giúp đỡ em trình thực đề tài Em xin chân thành cảm ơn thầy cô mơn Hóa phân tích, trƣờng Đại học Khoa học tự nhiên nhiệt tình dạy dỗ, cung cấp cho em kiến thức quan trọng, cần thiết bổ ích Đồng thời, em xin cảm ơn Ban lãnh đạo Viện Kiểm nghiệm an toàn vệ sinh thực phẩm quốc gia, ThS Cao Công Khánh, phụ trách khoa Nghiên cứu phát triển, đồng nghiệp Viện tạo điều kiện giúp đỡ em hoàn thành đề tài Cuối cùng, em xin gửi lời cảm ơn tới bố mẹ, gia đình ngƣời thân ln quan tâm, động viên em suốt thời gian qua Trong trình thực đề tài, trình độ lý luận nhƣ kinh nghiệm thực tế hạn chế nên đề tài khơng thể tránh khỏi thiếu sót, mong nhận đƣợc góp ý q thầy bạn đồng nghiệp Xin chân thành cảm ơn! MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ MỞ ĐẦU CHƢƠNG TỔNG QUAN 1.1 Giới thiệu sibutramine dẫn xuất sibutramine 1.1.1 Sibutramine 1.1.2 N-desmethyl sibutramine N-didesmethyl sibutramine 1.2 Tình trạng thừa cân, béo phì số biện pháp điều trị, phịng ngừa thừa cân, béo phì 1.2.1 Tình trạng thừa cân, béo phì 1.2.2 Một số biện pháp điều trị, phòng ngừa thừa cân, béo phì 1.3 Phƣơng pháp xác định SB, DSB DDSB 1.3.1 Một số kỹ thuật xử lý mẫu 1.3.2 Phƣơng pháp phân tích 13 CHƢƠNG ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 22 2.1 Đối tƣợng nghiên cứu 22 2.2 Nội dung nghiên cứu 22 2.2.1 Khảo sát điều kiện LC-MS/MS 22 2.2.2 Khảo sát dung mơi chiết, điều kiện chiết quy trình làm mẫu .22 2.2.3 Xác nhận giá trị sử dụng 23 2.2.4 Xác định hàm lƣợng sibutramine, desmethyl sibutramine didesmethyl sibutramine mẫu thực phẩm chức hỗ trợ giảm cân có mặt thị trƣờng 23 2.3 Thiết bị phân tích 23 2.4 Dụng cụ phân tích 24 2.5 Dung mơi, hóa chất 24 2.5.1 Dung môi 24 2.5.2 Chất chuẩn 24 2.5.3 Chuẩn bị dung dịch chuẩn 24 2.6 Phƣơng pháp nghiên cứu 25 2.6.1 Phƣơng pháp sắc ký lỏng khối phổ hai lần (LC-MS/MS) 25 2.6.2 Phƣơng pháp xử lý mẫu 27 2.6.3 Phƣơng pháp thẩm định 29 2.6.4 Phƣơng pháp lấy mẫu 30 2.6.5 Phƣơng pháp xử lý số liệu 30 CHƢƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 31 3.1 Kết khảo sát điều kiện LC-MS/MS xác định đồng thời SB, DSB DDSB TPBVSK hỗ trợ giảm cân 31 3.1.1 Điều kiện MS/MS 31 3.1.2 Khảo sát điều kiện LC 32 3.2 Khảo sát trình chuẩn bị mẫu 36 3.2.1 Khảo sát dung môi chiết 36 3.2.2 Khảo sát thời gian siêu âm số lần chiết 36 3.2.3 Khảo sát quy trình làm mẫu 40 3.2.4 Khảo sát khối lƣợng than hoạt tính 42 3.3 Thẩm định phƣơng pháp 45 3.3.1 Độ đặc hiệu 45 3.3.2 Giới hạn phát (LOD) giới hạn định lƣợng (LOQ) .47 3.3.3 Xây dựng đƣờng chuẩn 49 3.3.4 Độ lặp lại độ thu hồi 51 3.4 Phân tích mẫu thực tế 52 KẾT LUẬN 56 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC Phụ lục Các điều kiện MS/MS để phân tích SB, DSB DDSB Phụ lục Các thông số tối ƣu MS để phân tích SB, DSB DDSB Phụ lục Kết khảo sát số lần chiết Phụ lục Danh sách mẫu TPBVSK hỗ trợ giảm cân đƣợc DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT Viết tắt, ký hiệu Nghĩa tiến ACN Acetone ni DDSB Didesmethy DSB Desmethyl EtOH Ethanol MeOH Methanol HCl Acid chlorh KH2PO4 NH4OH Ammonium HPLC HPTLCUV LC Liquid chro LC-EISMS LC-MS hay HPLC MS LCMS/MS mass spectr spectromet LOD Limit of de LOQ Limit of qu GCB Graphitized RSD Relative sta S/N Signal to no SB Sibutramin SPE - Viết tắt, ký hiệu HLB SPE SCX TPBVSK UHPLC Nghĩa tiến balance exchange Health supp UV Vis chromatogr Ultra violet IS (V) Ion Spray V TEM o ( C) GS1 (psi) Temperatur Ion Source GS2 (psi) Ion Source EP (V) Entrance po CUR (psi) CAD (psi) Curtain Ga Collision G DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Sibutramine dẫn xuất sibutramine Bảng 1.2 Tổng hợp kết số kỹ thuật xử lý mẫu 12 Bảng 2.1 Quy trình làm mẫu 28 Bảng 3.1 Các điều kiện MS/MS phân tích SB, DSB, DDSB 31 Bảng 3.2 Các thông số tối ƣu MS để phân tích SB, DSB DDSB 32 Bảng 3.3 Chƣơng trình gradient dung mơi phân tích SB, DSB, DDSB 33 Bảng 3.4 Ảnh hƣởng pha động đến diện tích píc chất phân tích 34 Bảng 3.5 Chƣơng trình dung môi tối ƣu 34 Bảng 3.6 Kết hiệu suất thu hồi (H%) SB, DSB DDSB 36 Bảng 3.7 Hiệu suất thu hồi SB, DSB DSB sau làm 41 Bảng 3.8 Ảnh hƣởng lƣợng GCB đến hiệu suất thu hồi SB, DSB, DDSB .42 Bảng 3.9 Tỷ lệ ion sai số cho phép 45 Bảng 3.10 Khoảng đƣờng chuẩn độ chệch 50 Bảng 3.11 Độ lặp lại (RSD%) độ thu hồi (R%) SB, DSB DDSB mẫu 51 Bảng 3.12 Kết định lƣợng SB, DSB DDSB số mẫu TPBVSK .54 Maciej J Bogusz, Huda Hassan, Eid Al-Enazi, Zuhour Ibrahim, Mohammed Al-Tufail (2006), "Application of LC–ESI–MS–MS for detection of synthetic adulterants in herbal remedies", Journal of pharmaceutical and biomedical analysis, 41(2), pp 554-564 J Chen, W Lu, Q Zhang, X Jiang (2003), "Determination of the active metabolite of sibutramine by liquid chromatography-electrospray ionization tandem mass spectrometry", J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci, 785(2), pp 197-203 10 Y Chen, L Zhao, F Lu, Y Yu, Y Chai, Y Wu (2009), "Determination of synthetic drugs used to adulterate botanical dietary supplements using QTRAP LC-MS/MS", Food Additives and Contaminants, 26(5), pp 595-603 11 Marlus Chorilli, Rudy Bonfilio, Renata Chicarelli, Herida Salgado (2011), "Development and validation of an analytical method by RPHPLC for quantification of sibutramine hydrochloride in pharmaceutical capsules", Anal Methods, 3, pp 985-990 12 Li Ding, Xinyu Hao, Xin Huang, Shengqiang Zhang (2003), "Simultaneous determination of sibutramine and its N-desmethyl metabolites in human plasma by liquid chromatography–electrospray ionization–mass spectrometry: Method and clinical applications", Analytica chimica acta, 492(1-2), pp 241-248 13 FDA (2010),"The FDA August 2010 drugs safety update", Journal of Pharmaceutical Analysis, pp 152-155 14 Stanley D Glick, Renee E Haskew, Isabelle M Maisonneuve, Jeffrey N Carlson, Thomas P Jerussi (2000), "Enantioselective behavioral effects of sibutramine metabolites", European journal of pharmacology, 397(1), pp 93-102 15 Hayun Hayun, Baitha P Maggadani, Nurul Amalina (2016), "Determination of sibutramine adulterated in herbal slimming products using TLC densitometric method", Indonesian Journal of Pharmacy, 27(1), p 15 16 Ziqiang Huang, Song Xiao, Dan Luo, Bo Chen, Shouzhuo Yao (2008), "Simultaneous determination of sibutramine and N-di- desmethylsibutramine in dietary supplements for weight control by HPLC— ESI-MS", Journal of chromatographic science, 46(8), pp 707-711 17 Julia Jung, Maren Hermanns-Clausen, Wolfgang Weinmann (2006), "Anorectic sibutramine detected in a Chinese herbal drug for weight loss", Forensic science international, 161(2-3), pp 221-222 18 Tarita Kamardi, Irda Fidrianny, A Musadad (2016), "Development of analytical method for identification of sibutramine hydrochloride in traditional medicine using solid phase extraction: Highperformance liquid chromatography", Asian Journal of Pharmaceutical and Clinical Research, 9, pp 201-209 19 S Kanan, IA Abu-Yousef, C Gunasekar, N Abdo, S Narasimhan (2009), "Detection and quantification of synthetic drugs in herbal slimming formula", Eur J Sci Res, 34, pp 348-357 20 W Kang, K Bae, K Noh (2010), "Enantioselective determination of sibutramine and its active metabolites in human plasma", J Pharm Biomed Anal, 51(1), pp 264-267 21 Marjan Khazan, Mehdi Hedayati, Farzad Kobarfard, Sahar Askari, Fereidoun Azizi (2014), "Identification and determination of synthetic pharmaceuticals as adulterants in eight common herbal weight loss supplements", Iranian Red Crescent Medical Journal, 16(3), pp 17-21 22 S H Kim, J Lee, T Yoon, J Choi, D Choi, D Kim, S W Kwon (2009), "Simultaneous determination of anti-diabetes/anti-obesity drugs by LC/PDA, and targeted analysis of sibutramine analog in dietary supplements by LC/MS/MS", Biomed Chromatogr, 23(12), pp 1259-1265 23 Kuo-Chih Lai, Yi-Chu Liu, Mu-Chang Tseng, Yun-Lian Lin, Jer- Huei Lin (2007), "Isolation and identification of a sibutramine analogue in a healthy food for weight loss", Journal of Food and Drug Analysis, 15(1), pp.19-22 24 Jianhui Li, Zhaohui Zhang, Xin Liu, Hua Yan, Shen Han, Haiyan Zhang, Shan Zhang, Jia Cheng (2014), "Analysis of Fourteen betaAgonists in Weight-Reducing Dietary Supplements Using QuEChERS-Based Extraction Followed by High Resolution UHPLC-MS", Food Analytical Methods, 7, pp 25-28 25 Yang Li, Feng Xue, Yuan Wang, Yong Xue, Cheng-Jun Sun (2011), "Simultaneous determination of seven adulterants in slimming functional foods by high performance capillary electrophoresis", Chin J Anal Chem, 39, pp 1716-1720 26 Daniela F Maluf, Paulo V Farago, Sandra MW Barreira, Carlos F Pedroso, Roberto Pontarolo (2007), "Validation of an analytical method for determination of sibutramine hydrochloride monohydrate in capsules by UV-vis spectrophotometry", Latin American Journal of Pharmacy, 26(6), p 909 27 Caroline Mathon, Anita Ankli, Eike Reich, Stefan Bieri, Philippe Christen (2014), "Screening and determination of sibutramine in adulterated herbal slimming supplements by HPTLC-UV densitometry", Food Additives & Contaminants: Part A, 31(1), pp 15-20 28 Lung National Heart, and Blood Institute (1998), "Clinical Guidelines on the Identification, Evaluation, and Treatment of Overweight and Obesity in Adults", National Heart, Lung, and Blood Institute, 6, pp 2931 29 Lung National Heart, and Blood Institute (2013), "Managing Overweight and Obesity in Adults: Systematic Evidence Review from the Obesity Expert Panel", National Heart, Lung, and Blood Institute, 12, pp 3739 30 World Health Organization (2000), "Obesity: preventing and managing the global epidemic", World Health Organization, 4, pp 12-14 31 Panadda Phattanawasin, Uthai Sotanaphun, Tasamaporn Sukwattanasinit, Jariya Akkarawaranthorn, Sarunyaporn Kitchaiya (2012), "Quantitative determination of sibutramine in adulterated herbal slimming formulations by TLC-image analysis International, 219(1-3), pp 96-100 method", Forensic Science 32 Venkata Suresh Ponnuru, BR Challa, RamaRao Nadendla (2012), "Quantification of sibutramine and its two metabolites in human plasma by LC–ESI-MS/MS and its application in a bioequivalence study", Journal of pharmaceutical analysis, 2(4), pp 249-257 33 T Radhakrishna, Ch Lakshmi Narayana, D Sreenivas Rao, K Vyas, G Om Reddy (2000), "LC method for the determination of assay and purity of sibutramine hydrochloride and its enantiomers by chiral chromatography", Journal of pharmaceutical and biomedical analysis, 22(4), pp 627-639 34 Herve Rebiere, Pauline Guinot, Corinne Civade, P-A Bonnet, Alain Nicolas (2012), "Detection of hazardous weight-loss substances in adulterated slimming chromatography with formulations using ultra-high-pressure diode-array detection", Food liquid Additives & Contaminants: Part A, 29 (2), pp 161-171 35 S H Roh, Y P Kang, S Park, Y Huh, J Lee, J H Park, D Kim, S W Kwon (2011), "Determination of tadalafil and N-desmethylsibutramine in health and dietary supplements using ultra-performance liquid chromatography (UPLC) coupled with quadrupole-time-of-flight mass spectrometry (Q-TOF MS)", Food Addit Contam Part A Chem Anal Control Expo Risk Assess, 28(11), pp 1475-82 36 Sabina Strano‐Rossi, Cristiana Colamonici, Francesco Botrè (2007), "Detection of sibutramine administration: a gas chromatography/mass spectrometry study of the main urinary metabolites", Rapid Communications in Mass Spectrometry: An International Journal Devoted to the Rapid Dissemination of Up‐to‐the‐Minute Research in Mass Spectrometry, 21(2), pp 79-88 37 A Suthar, S Dubey, Sanjay Patel (2009), "A Validated Specific Reverse Phase Liquid Chromatographic Method for the estimation of Sibutramine Hydrochloride Monohydrate in bulk drug and capsule dosage forms", International Journal of ChemTech Research, 1, pp 57-59 38 Dan Wang, Ranru Man, Ming Shu, Huitao Liu, Yuan Gao, Feng Luan (2016), "Detection of sibutramine and phenolphthalein in functional foods using capillary electrophoresis", Analytical Methods, 8(3), pp 621626 39 H Wang, Y Wu, Y Zhao, W Sun, L Ding, B Guo, B Chen (2012), "Rapid screening of illicit additives in weight loss dietary supplements with desorption corona beam ionisation (DCBI) mass spectrometry", Food Additives & Contaminants: Part A, 29(8), pp 1194-1201 40 Juan Wang, Bo Chen, Shouzhuo Yao (2008), "Analysis of six synthetic adulterants in herbal weight-reducing dietary supplements by LC electrospray ionization-MS", Food additives and contaminants, 25(7), pp 822-830 41 Helena M Yano, Fernanda F Farias, Marcelo B Del Bianco, Luz M Trujillo (2013), "Determination of the sibutramine content of dietary supplements using LC-ESI-MS/MS", Latin American Journal of Pharmacy, 32(8), pp 1164-1169 42 Zhou Yu, Qiang Wei, Qingsheng Fan, Chunhua Wan (2010), "A simple and convenient method for simultaneous determination of four major species of illegal additives in slimming health food", Journal of liquid chromatography & related technologies, 33(4), pp 452-461 43 YP Yuen, CK Lai, WT Poon, SW Ng, Albert YW Chan, Tony WL Mak (2007), "Adulteration of over-the-counter slimming products with pharmaceutical analogues-an emerging threat", Hong Kong Medical Journal, 13(3), p 216 44 Peng Zou, Sharon Sze‐Yin Oh, Kin‐Har Kiang, Min‐Yong Low, Bosco Chen Bloodworth (2007), "Detection of sibutramine, its two metabolites and one analogue in a herbal product for weight loss by liquid chromatography triple quadrupole mass spectrometry and time‐of‐flight mass spectrometry", Rapid Communications in Mass Spectrometry: An International Journal Devoted to the Rapid Dissemination of Up‐to‐the‐Minute Research in Mass Spectrometry, 21( 4), pp 614-618 PHỤ LỤC Phụ lục Các điều kiện MS/MS để phân tích SB, DSB DDSB PL1 Bảng thông số điều kiện MS/MS phân tích SB, DSB DDSB Phụ lục Các thơng số tối ƣu MS để phân tích SB, DSB DDSB PL2 Bảng thông số tối ƣu MS thu đƣợc để phân tích SB, DSB DDSB Phụ lục Kết khảo sát số lần chiết PL3.1 Kết độ thu hồi SB sau lần chiết, lần chiết, lần chiết PL3.2 Kết độ thu hồi DSB sau lần chiết, lần chiết, lần chiết PL3.3 Kết độ thu hồi DDSB sau lần chiết, lần chiết, lần chiết Bảng PL 3.1 Độ thu hồi SB, DSB, DDSB viên nang cứng Số lần chiết Chiết lần Chiết lần Chiết lần Bảng PL3.2 Độ thu hồi SB, DSB, DDSB viên nang mềm Bảng PL4.3 Độ thu hồi SB, DSB, DDSB trà túi lọc Phụ lục Danh sách mẫu TPBVSK hỗ trợ giảm cân đƣợc STT 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 STT 23 24 25 26 27 28 29 30 Quy cách ... ? ?Xác định đồng thời sibutramine số dẫn xuất thực phẩm bảo vệ sức khỏe hỗ trợ giảm cân phương pháp LC- MS/ MS‖ đƣợc thực với mục tiêu nhƣ sau: Xây dựng thẩm định phƣơng pháp xác định đồng thời sibutramine. .. desmethyl sibutramine didesmethyl sibutramine thực phẩm bảo vệ sức khỏe hỗ trợ giảm cân LC- MS/ MS Ứng dụng phƣơng pháp để phát định lƣợng SB số dẫn xuất SB thực phẩm bảo vệ sức khỏe hỗ trợ giảm cân. .. HOA XÁC ĐỊNH ĐỒNG THỜI SIBUTRAMINE VÀ MỘT SỐ DẪN XUẤT TRONG THỰC PHẨM BẢO VỆ SỨC KHỎE HỖ TRỢ GIẢM CÂN BẰNG PHƢƠNG PHÁP LC- MS/ MS Chun ngành: Hóa Phân tích Mã số: 8440112.03 Cán hƣớng dẫn: PGS.TS