Mục tiêu của đề tài là nghiên cứu phát triển và xây dựng các phương pháp định lượng một số thành phần hóa học chính có trong dược liệu Hà thủ ô đỏ Việt Nam. Đánh giá hàm lượng các thành phần hóa học chính trong các mẫu dược liệu Hà thủ ô đỏ trồng tại các vùng khác nhau ở Việt Nam và một số sản phẩm chứa Hà thủ ô đỏ trên thị trường.
Trang 1ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI
TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN
NGUYỄN THỊ HÀ LY
NGHIÊN CỨU PHÂN TÍCH VÀ ĐÁNH GIÁ MỘT
SỐ THÀNH PHẦN HÓA HỌC CHÍNH TRONG DƯỢC LIỆU VÀ SẢN PHẨM CHỨA HÀ THỦ Ô
ĐỎ (FALLOPIA MULTIFLORA (THUNB.)
HARALDSON) TẠI VIỆT NAM
CHUYÊN NGÀNH: Hóa Phân tích
MÃ SỐ: 62440118
DỰ THẢO TÓM TẮT LUẬN ÁN TIẾN SĨ HÓA HỌC
HÀ NỘI - 2019
Trang 2Công trình đƣợc hoàn thành tại: Khoa Hoá Phân tích – Tiêu chuẩn, Viện
Luận Án sẽ được bảo vệ trước Hội đồng cấp Đại học Quốc gia chấm Luận án tiến sĩ họp tại Vào hồi…… giờ…… ngày…… Tháng…… năm 20
Có thể tìm hiểu luận án tại:
- Thư viện Quốc Gia Việt Nam
- Trung tâm Thông tin - Thư viện, Đại học Quốc gia Hà Nội
Trang 31
MỞ ĐẦU
1 Tính cấp thiết của Luận án
Hà thủ ô đỏ là một trong những vị thuốc quí của Việt Nam Theo Y học
cổ truyền, Hà thủ ô đỏ có nhiều tác dụng quý như bổ huyết, điều hoà khí huyết, bổ gan thận, mạnh gân cốt, nhuận tràng Y học hiện đại còn chứng minh Hà thủ ô đỏ
có tác dụng làm giảm lượng đường trong máu, có tác dụng tốt đối với các trường hợp suy nhược thần kinh và bệnh về thần kinh, làm tăng hoạt động của tim, làm tăng sự co bóp của ruột, có tác dụng chống viêm Do đó, Hà thủ ô đỏ được sử dụng rộng rãi để làm thuốc phục vụ đời sống con người từ xưa đến nay Tuy nhiên, hiện nay trên thị trường, vị thuốc quý này đang bị giả mạo bằng một số loại rễ củ như:
Hà thủ ô trắng, Củ nâu, Củ cọc hoặc tình trạng người sử dụng mua phải dược liệu
“rác” đã bị chiết hết các hoạt chất, gây ảnh hưởng đến sức khoẻ người bệnh và quyền lợi người tiêu dùng Vì vậy, việc nghiên cứu đánh giá chất lượng và tiêu chuẩn hoá chất lượng dược liệu Hà thủ ô đỏ là vấn đề hết sức cần thiết
Ở Việt Nam, chuyên luận Hà thủ ô đỏ trong Dược Điển Việt Nam V (2018) quy định hàm lượng chất chiết được trong etanol 30% và hàm lượng anthraquinon dạng dẫn xuất (tính theo emodin và physicon) Qua khảo sát một số mẫu cho kết quả hầu hết các mẫu dược liệu Hà thủ ô đỏ Việt Nam đều không đạt theo yêu cầu của DĐVN V, nguyên nhân có thể do chất lượng thực của mẫu Hà thủ
ô đỏ Việt Nam kém, hoặc do chỉ tiêu quy định và phương pháp đánh giá trong DĐVN V chưa phù hợp Vì vậy, cần thiết thực hiện nghiên cứu về phân tích thành phần hóa học trên đối tượng Hà thủ ô đỏ trồng tại Việt Nam, từ đó xây dựng được tiêu chí định lượng phù hợp đối với dược liệu Hà thủ ô đỏ trồng tại Việt Nam, giúp cho công tác kiểm soát chất lượng dược liệu Hà thủ ô đỏ ở Việt Nam chặt chẽ hơn
2 Mục tiêu chính của Luận án
- Nghiên cứu phát triển và xây dựng các phương pháp định lượng một số thành phần hóa học chính có trong dược liệu Hà thủ ô đỏ Việt Nam
- Đánh giá hàm lượng các thành phần hóa học chính trong các mẫu dược liệu Hà thủ ô đỏ trồng tại các vùng khác nhau ở Việt Nam và một số sản phẩm chứa Hà thủ ô đỏ trên thị trường
3 Nội dung nghiên cứu:
- Phát triển phương pháp HPLC-UV phân tích định lượng
2,3,5,4′-tetrahydroxystilben-2-O-β-D-glucosid, emodin và physcion trong dược liệu Hà thủ
ô đỏ thành phương pháp chuẩn tham chiếu (sử dụng phổ MS/MS đánh giá độ đặc hiệu của phương pháp)
- Xây dựng mới phương pháp phân tích định lượng thành phần hóa học chính có trong dược liệu Hà thủ ô đỏ Việt Nam bằng một số kỹ thuật sắc ký: TLC-scanner Densitometry, HPLC-FLD (có so sánh với phương pháp chuẩn tham chiếu)
- Phân tích đánh giá hàm lượng hoạt chất trong các mẫu dược liệu và một
số sản phẩm chứa Hà thủ ô đỏ trên thị trường
Trang 42
- Sơ bộ phân loại nguồn gốc mẫu dược liệu Hà thủ ô đỏ dựa trên thành phần hoá học kết hợp các phương pháp thống kê
4 Những đóng góp mới của Luận án
- Nghiên cứu đầu tiên ở Việt Nam về xây dựng phương pháp scanner Densitometry phân tích định lượng THSG, emodin (EM) và physcion (PS) trong Hà thủ ô đỏ
TLC Nghiên cứu đầu tiên ở Việt Nam về xây dựng phương pháp và HPLCTLC
HPLC-FLD phân tích định lượng 5 chất 2,3,5,4′-tetrahydroxystilben-2-O-β-D-glucosid (THSG), resveratrol (RES), piceid (PC), emodin (EM) và physcion (PS) trong Hà thủ ô đỏ
- Nghiên cứu đã bước đầu phân loại được nguồn gốc dược liệu Hà thủ ô
đỏ dựa trên thành phần hoá học
5 Cấu trúc của luận án
Luận án gồm 4 chương, 59 bảng, 22 hình, 7 sơ đồ cùng các phụ lục, 85 tài liệu tham khảo Luận án gồm 134 trang, gồm các phần chính: Đặt vấn đề (2 trang); Tổng quan (28 trang); Nguyên vật liệu, trang thiết bị và phương pháp nghiên cứu (18 trang); Kết quả nghiên cứu và bàn luận (83 trang); Kết luận và Kiến nghị (3 trang)
NỘI DUNG CHÍNH CỦA LUẬN ÁN CHƯƠNG 1 TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan về Hà thủ ô đỏ
1.1.1 Cây Hà thủ ô đỏ
Hà thủ ô đỏ có tên khoa học là Fallopia multiflora (Thunb.) Haraldson,
thuộc họ Rau răm (Polygonaceae), bộ Cẩm chướng (Caryophyllales) Hà thủ ô đỏ
là cây dây leo, sống nhiều năm, thân thảo, mềm và nhẵn, leo quấn vào cây khác
Bộ phận dùng chính là rễ củ của cây màu nâu, hình trụ tròn, hoặc có thể dùng thân
lá (Dạ giao đằng)
1.1.2 Dược liệu Hà thủ ô đỏ
Dược liệu Hà thủ ô đỏ (Radix Fallopia multiflora) là phần rễ củ phơi hay
sấy khô của cây Hà thủ ô đỏ
1.1.3 Thành phần hóa học trong dược liệu Hà thủ ô đỏ
Hà thủ ô đỏ chứa khoảng 1,7% anthraquinon (emodin, chrysophanol, rhein, physcion,…); 1,1% protid, 45,2% tinh bột, 3,1% lipid, 4,5% chất vô cơ, 26,4% các chất tan trong nước, lecitin, rhaponticin (rhapontin, ponticin), 2,3,5,4’-
tetrahydroxytiben-2-O-β-D-glucosid (THSG) Hàm lượng các hoạt chất thay đổi rõ rệt sau khi chế biến Lúc chưa chế, HTO chứa 7,68% tanin, 0,25% dẫn chất anthraquinon tự do, 0,8058% dẫn chất anthraquinon toàn phần Sau khi chế, còn 3,82% tanin, 0,1127% dẫn chất anthraquinon tự do và 0,2496% dẫn chất anthraquinon toàn phần Stilben và anthraquinon là hai nhóm chất đặc trưng cho
Hà thủ ô đỏ, được các nghiên cứu trên thế giới cũng như trong nước quan tâm, đặc biệt là được Dược điển một số nước dùng làm chất đối chiếu trong kiểm tra, đánh giá chất lượng dược liệu Hà thủ ô đỏ
Trang 53
1.1.4 Công dụng của dược liệu Hà thủ ô đỏ
Trong Y học cổ truyền, Hà thủ ô đỏ có vị đắng chát, hơi ngọt, tính bình;
có tác dụng bổ huyết giữ tinh, điều hoà khí huyết, bổ gan thận, mạnh gân xương, nhuận tràng
Trong y học hiện đại, Hà thủ ô đỏ có tác dụng giảm lượng đường trong máu, chống viêm, lợi tiểu, điều kinh, hạ sốt, kích thích tiêu hóa, làm tăng hoạt động của tim, làm tăng sự co bóp của ruột
1.2 Các phương pháp phân tích định lượng thành phần hóa học trong Hà thủ
ô đỏ
1.2.1 Các phương pháp phân tích trong Dược điển
Một số Dược điển trên thế giới có qui định chuyên luận dược liệu Hà thủ
ô đỏ như DĐTQ, DĐHK, DĐ Mỹ Trong khi DĐTQ (2015) và DĐ Mỹ đều qui định sử dụng phương pháp HPLC-UV để định lượng THSG, anthraquinon dạng dẫn xuất trong các mẫu Hà thủ ô đỏ, thì DĐHK chỉ qui định hàm lượng THSG Mức hàm lượng qui định đối với các chỉ tiêu này trong từng Dược điển cũng khác nhau Ở Việt Nam, DĐVN V (2018), chuyên luận Hà thủ ô đỏ đã được bổ sung chỉ tiêu định lượng anthraquinon dạng kết hợp (tính theo EM, PS) bằng phương pháp HPLC-UV
1.2.2 Các nghiên cứu khác xác định thành phần hóa học trong Hà thủ ô đỏ 1.2.2.1 HPLC-UV
HPLC-UV là phương pháp phổ biến, được áp dụng nhiều nhất trong phân tích đánh giá chất lượng dược liệu nói chung, dược liệu Hà thủ ô đỏ nói riêng Rất nhiều nghiên cứu trên thế giới đã áp dụng kỹ thuật này trong xây dựng phương pháp định tính, định lượng và đánh giá chất lượng dược liệu Hà thủ ô đỏ
1.2.2.2 HPLC-FLD
HPLC-FLD có phạm vi ứng dụng hẹp hơn HPLC-UV bởi một số it chất
có khả năng phát huỳnh quang Với Hà thủ ô đỏ, cả 2 nhóm chất chính là anthraquinon và stilben đều có khả năng phát huỳnh quang Tuy nhiên, trên thế giới cũng như tại Việt Nam, chưa có nhiều nghiên cứu ứng dụng HPLC-FLD trong phân tích các hợp chất stilben trong đối tượng dược liệu Hà thủ ô đỏ
1.2.2.3 LC-MS/MS
LC-MS/MS là phương pháp phân tích có độ chính xác cao Bên cạnh ý nghĩa trong phân tích định lượng, LC-MS/MS còn cung cấp các thông tin về dữ liệu phổ khối của các tín hiệu chất phân tích, từ đó đánh giá về độ tinh khiết pic và
dự đoán được cấu trúc hóa học của một tín hiệu chất phân tích Với đối tượng Hà thủ ô đỏ, có nhiều nghiên cứu áp dụng LC-MS/MS hoặc LC-MS về phân tích thành phần hóa học, đánh giá chất lượng dược liệu và phân tích xác định chất chỉ điểm trong đánh giá về nguồn gốc mẫu
1.2.2.4 TLC-scanner Densitometry
TLC là một trong những phương pháp được sử dụng nhiều trong kiểm nghiệm dược liệu, được dùng trong các chỉ tiêu định tính và có mặt trong hầu hết các chuyên luận dược liệu trong Dược điển các nước Trên thế giới cũng như tại
Trang 64
Việt Nam, chưa có nghiên cứu nào công bố về định lượng các hợp chất này trong dược liệu Hà thủ ô đỏ bằng TLC-scanner Một số nghiên cứu trên thế giới đã áp dụng kỹ thuật TLC-scanner trong định lượng anthraquinon nhưng trong các đối tượng khác
CHƯƠNG 2 NGUYÊN VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Nguyên vật liệu nghiên cứu
2.1.1 Dược liệu Hà thủ ô đỏ
Dược liệu Hà thủ ô đỏ Radix Fallopia multiflora dùng cho các thí nghiệm
khảo sát là mẫu dược liệu đối chiếu của Viện Dược liệu
Một số mẫu Hà thủ ô đỏ được thu hái ở các vùng khác nhau ở Việt Nam Mẫu được lấy là bộ phận rễ củ của cây Hà thủ ô đỏ, rửa sạch, thái lát mỏng, phơi, sấy ở 60oC đến khô và bảo quản trong túi nilon kín
2.1.2 Mẫu sản phẩm từ Hà thủ ô đỏ
Đối tượng sản phẩm đầu tiên được lựa chọn đánh giá chất lượng là Hà thủ
ô đỏ chế Ngoài ra, một số sản phẩm khác từ Hà thủ ô đỏ như sản phẩm viên nang
Hà thủ ô của Công ty Cổ phần Dược phẩm TRAPHACO, kí hiệu là T-HTO-TPC
và mẫu trà Hà thủ ô đỏ của Tuấn Anh, kí hiệu Trà-HTO-TA
2.2 Phương pháp nghiên cứu
2.2.1 Phát triển và xây dựng phương pháp phân tích định lượng
Bước 1: Tối ưu hóa hệ thống phân tích sắc ký: tiến hành khảo sát các thông số: bước sóng, dung môi, chương trình rửa giải, nhiệt độ cột, thể tích mẫu tiêm,… Bước 2: Xác nhận giá trị sử dụng của phương pháp phân tích:
- Tính chọn lọc, đặc hiệu và độ tinh khiết pic: trong nghiên cứu này sử dụng phổ MS để xác định độ tinh khiết pic
- Xác định KTT, dựng đường chuẩn và đánh giá đường chuẩn:
- Tính thích hợp của hệ thống
- Độ lặp lại trong ngày và khác ngày
- Giới hạn phát hiện và giới hạn định lượng của phương pháp:
- Độ đúng (hiệu suất thu hồi)
- Ước lượng độ không đảm bảo đo (ĐKĐBĐ)
2.2.2 Phương pháp xây dựng qui trình xử lý mẫu
2.2.2.1 Dung môi chiết xuất
- MeOH, EtOH và hỗn hợp của chúng với nước (tỷ lệ từ 0%-100%)
2.2.2.2 Phương pháp chiết xuất
- Chiết siêu âm và chiết hồi lưu
2.2.2.3 Nhiệt độ chiết
2.2.2.4 Tỷ lệ thể tích dung môi chiết/dược liệu:
- Khoảng khảo sát từ 20/1 (ml/gam) đến 150/1 (ml/gam)
2.2.2.5 Thời gian chiết và số lần chiết
- Khảo sát chiết 1 lần hoặc 2 lần với thời gian chiết khác nhau
Trang 75
CHƯƠNG 3 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 3.1 Nghiên cứu xác định hàm lượng một số thành phần hóa học chính có trong dược liệu Hà thủ ô đỏ Việt Nam bằng HPLC-UV
3.1.1 Phát triển phương pháp HPLC-UV định lượng một số thành phần hóa học chính có trong dược liệu Hà thủ ô đỏ Việt Nam
3.1.1.1 Khảo sát lựa chọn điều kiện tách trên hệ sắc ký HPLC
Khảo sát bước sóng phân tích định lượng
Quét phổ UV-VIS của các dung dịch chuẩn THSG, EM và PS Từ đó xác định được các giá trị λmax và Abs tương ứng với từng λmax của mỗi chất Tính toán
được hệ số ԑ (hay logԑ) Kết hợp một số tài liệu, lựa chọn bước sóng 320 nm để
định lượng THSG và 254 nn để định lượng EM, PS
Khảo sát thành phần pha động và chương trình rửa giải
Khảo sát một số loại pha động gồm: MeOH/nước, ACN/nước, ACN/axit formic 0,5% với các chương trình rửa giải khác nhau Từ kết quả thu được, lựa chọn hệ dung môi rửa giải là ACN và axit formic 0,5%, với 2 chương trình dung môi rửa giải khác nhau để phân tích riêng đối với THSG, EM và PS:
+ Đối với EM và PS, sử dụng chương trình rửa giải gồm ACN/axit formic 0,5% (80/20, v/v), tốc độ rửa giải là 1 ml/phút
+ Đối với THSG, sử dụng chương trình rửa giải như Bảng 3.1, tốc độ rửa giải 1 ml/phút
Bảng 3.1 Chương trình dung môi rửa giải
axit formic có pH=3, tương ứng với nồng độ axit formic là 0,5%
Khảo sát nhiệt độ lò cột
Nhiệt độ không ảnh hưởng đáng kể đến hiệu quả tách sắc ký trên cột Từ
đó, lựa chọn được nhiệt độ lò cột cho quá trình phân tích sắc ký là nhiệt độ phòng (khoảng 250C-350C)
Khảo sát ảnh hưởng của thể tích mẫu tiêm vào cột
Thể tích mẫu tiêm vào cột ảnh hưởng rõ rệt đến kết quả phân tích Nếu lượng mẫu tiêm vào cột lớn hơn 20 μl thì pic của THSG, EM và PS không đối xứng tốt dẫn đến sai số Vì vậy lựa chọn thể tích mẫu tiêm vào cột là 10 μl
Từ các kết quả khảo sát trên, lựa chọn được điều kiện tối ưu cho quá trình phân tích các thành phần THSG, EM và PS trong dược liệu Hà thủ ô đỏ
Trang 8+ Nhiệt độ: nhiệt độ thường (250C-350C)
+ Thể tích mẫu tiêm vào cột: 10 µl
+ Hệ dung môi pha động: ACN (ACN) – axit formic 0,5%
+ Chương trình rửa giải: 0-22 phút (16%ACN); 22-45 phút (16-34%ACN); 45-60 (34-38%ACN)
Điều kiện HPLC-UV tối ưu phân tích EM và PS:
+ Cột: C18 (250 x 4,6 mm; 5 µm)
+ Detector UV: 254 nm
+ Tốc độ dòng: 1 ml/phút
+ Nhiệt độ: nhiệt độ thường (250C-350C)
+ Thể tích mẫu tiêm vào cột: 10 µl
+ Hệ dung môi pha động: ACN (ACN) – axit formic 0,5%, tỷ lệ 80 – 20 (v/v)
Hình 3.1 SKĐ HPLC-UV phân tích THSG, EM và PS tối ưu
(a-phân tích THSG: 1-THSG; 2,3-các mẫu Hà thủ ô đỏ;
b-phân tích EM và PS: 1-PS; 2-EM; 3-Hà thủ ô đỏ)
3.1.1.2 Xây dựng các phương trình đường chuẩn
Các giá trị Pvalue thu được đều lớn hơn 0,05, chứng phương pháp xây dựng được không mắc sai số hệ thống (cả sai số hệ thống biến đổi và sai số hệ thống
không đổi) Từ đó, xác định CDL và CDQ của đường chuẩn
Bảng 3.2 Khoảng tuyến tính và đường chuẩn THSG, EM và PS
Trang 97
3.1.2 Nghiên cứu phương pháp xử lý mẫu dược liệu Hà thủ ô đỏ
Bảng 3.3 Ảnh hưởng của dung môi chiết đối với THSG, EM và PS
CDL: giới hạn phát hiện của đường chuẩn, CDQ: giới hạn định lượng của đường chuẩn
Đối với THSG, nên sử dụng dung môi chiết là EtOH 50% (hoặc MeOH 50%) Căn cứ vào tính độc hại của hai loại dung môi, lựa chọn dung môi chiết EtOH 50% làm dung môi chiết xuất cho các nghiên cứu tiếp theo
Đối với EM và PS, lựa chọn dung môi chiết là MeOH 100%
3.1.2.1 Khảo sát phương pháp chiết siêu âm
Khảo sát nhiệt độ chiết siêu âm: khi chiết siêu âm tại 4 nhiệt độ khác nhau (250C, 300C, 400C, 500C) thì hiệu suất chiết gần như không đổi Chọn chiết siêu âm tại nhiệt độ phòng (250C – 300C) cho khảo sát tiếp theo
Khảo sát thời gian chiết siêu âm (15 phút – 6 giờ): thời gian chiết kiệt với
EM là 3 giờ, PS là 2 giờ và THSG là trên 6 giờ Với thời gian chiết lâu như vậy sẽ gây tốn kém thời gian và chi phí phân tích, vì vậy tiến hành khảo sát một phương pháp chiết xuất khác có thể chiết kiệt hơn trong khoảng thời gian ngắn hơn Trong điều kiện phòng thí nghiệm, lựa chọn khảo sát phương pháp chiết hồi lưu
3.1.2.2 Khảo sát phương pháp chiết hồi lưu
Nhiệt độ chiết hồi lưu: là nhiệt độ sôi của dung môi chiết: 850C với EtOH50% và 700C với MeOH
Khảo sát tỷ lệ dung môi chiết/dược liệu: chọn tỷ lệ dung môi chiết/dược
liệu (ml/gam) 100/1 đối với THSG, tỷ lệ 50/1 đối với EM, PS
Khảo sát ảnh hưởng của thời gian chiết và số lần chiết: ứng với điều kiện chiết hồi lưu 1 lần trong 1 giờ, hàm lượng THSG, EM, PS trong dịch chiết
là gần như đạt cực đại, nên lựa chọn điều kiện này cho quá trình xử lý mẫu dược liệu Hà thủ ô đỏ
Trang 108
3.1.2.3 Đề xuất qui trình xử lý mẫu Hà thủ ô đỏ
Sơ đồ 3.1 Phương pháp xử lý mẫu Hà thủ ô
đỏ cho phân tích định lượng THSG
Sơ đồ 3.2 Phương pháp xử lý mẫu Hà thủ ô
đỏ cho phân tích định lượng EM và PS
3.1.3 Xác nhận giá trị sử dụng của phương pháp phân tích THSG, EM và PS bằng HPLC-UV
3.1.3.1 Độ đặc hiệu (tính chọn lọc)
Hình 3.2 SKĐ HPLC-UV đánh giá tính
đặc hiệu đối với THSG
(1-mẫu dung môi EtOH 50%; 2-THSG; 3-Hà thủ
ô đỏ chế; 4-dược liệu Hà thủ ô đỏ)
Hình 3.3 SKĐ HPLC-UV đánh giá tính đặc hiệu đối với EM và PS
(1-mẫu dung môi MeOH, 2-hỗn hợp EM và PS, 3-dược liệu Hà thủ ô đỏ, 4-Hà thủ ô đỏ chế)
Kết quả thu được chứng tỏ phương pháp phân tích và hệ thống lựa
chọn có tính đặc hiệu cao
3.1.3.2 Tính thích hợp của hệ thống: Các giá trị %RSDr đối với THSG, EM và
PS nhỏ hơn 2%, chứng tỏ hệ thống đáp ứng yêu cầu phân tích định lượng THSG trong điều kiện thí nghiệm như đã nêu
THSG, EM và PS đều nhỏ hơn 3%, chứng tỏ phương pháp phân tích có độ chụm đạt yêu cầu đối với THSG, EM và PS
Trang 119
3.1.3.4 Giới hạn phát hiện, giới hạn định lượng của phương pháp (MDL, MQL)
Bảng 3.4 MDL và MQL đối với THSG, EM và PS bằng HPLC-UV
3.1.3.5 Độ đúng (hiệu suất thu hồi): Hiệu suất thu hồi trung bình đối với
THSG, EM và PS nằm trong khoảng cho 95% -105% Chứng tỏ phương pháp phân tích xây dựng được có độ chính xác cao, có thể dùng để phân tích định
lượng THSG, EM, PS trong Hà thủ ô đỏ
3.1.3.6 Ước lượng ĐKĐBĐ: ĐKĐBĐ ước lượng được đối với THSG, EM và
PS lần lượt là 0,01%, 0,015 mg/g và 0,016 mg/g
3.1.4 Qui trình phân tích định lượng THSG, EM và PS trong dược liệu Hà thủ ô đỏ bằng phương pháp HPLC-UV
Sơ đồ 3.3 Qui trình phân tích định lượng
THSG trong HTOĐ bằng HPLC-UV
Sơ đồ 3.4 Qui trình phân tích định lượng
EM, PS trong HTOĐ bằng HPLC-UV
3.1.5 Kết luận về phương pháp HPLC-UV phát triển được:
- Dung môi chiết là EtOH 50%: DĐVN V và DĐTQ dùng EtOH 100%, kết quả k/s thì hiệu suất chiết đối với EtOH 50% cao gấp 2,8 lần so với EtOH
100% => dùng EtOH 50% làm dung môi chiết tối ưu hơn