Nghiên cứu xây dựng phương pháp định lượng berberin trong chế phẩm bằng phương pháp hplc

ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM KHOA HÓA BÙI THANH XUÂN ĐỀ TÀI: NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG PHƢƠNG PHÁP ĐỊNH LƢỢNG BERBERIN TRONG CHẾ PHẨM BẰNG PHƢƠNG PHÁP HPLC KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP CỬ NHÂN KHOA HỌC ĐÀ NẴNG, THÁNG - 2014 ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM KHOA HÓA ĐỀ TÀI: NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG PHƢƠNG PHÁP ĐỊNH LƢỢNG BERBERIN TRONG CHẾ PHẨM BẰNG PHƢƠNG PHÁP HPLC KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP CỬ NHÂN KHOA HỌC Sinh viên thực hiện: Bùi Thanh Xuân Lớp 10 CHD Giáo viên hƣớng dẫn: ThS Ds Phạm Văn Vƣợng ĐÀ NẴNG, THÁNG - 2014 LỜI CẢM ƠN Trong suốt thời gian học tập nghiên cứu, nhận động viên, giúp đỡ tạo điều kiện tốt từ thầy cô, gia đình bạn bè để tơi hồn thành khóa luận tốt nghiệp Tôi xin gửi tới tất người lời cảm ơn chân thành Với lòng biết ơn sâu sắc, xin gửi lời cảm ơn Ths.DS.Phạm Văn Vượng tận tình hướng dẫn, bảo động viên suốt thời gian học tập nghiên cứu hồn thành khóa luận Tơi xin chân thành cảm ơn thầy cô giáo giảng dạy mơn, thầy cơng tác phịng thí nghiệm khoa hóa trường Đại học Sư Phạm – Đại học Đà Nẵng anh chị kĩ thuật viên công ty CP MTV Dược TW3 giúp đỡ tạo điều kiện thời gian làm đề tài khóa luận Bước đầu làm quen với nghiên cứu khoa học, khóa luận khơng tránh khỏi thiếu sót, tơi mong nhận góp ý, bổ sung thầy bạn để khóa luận hồn thiện Cuối tơi xin chúc thầy bạn sức khỏe, hạnh phúc thành công sống Tôi xin chân thành cảm ơn! Đà nẵng, ngày tháng năm 2014 Sinh viên Bùi Thanh Xuân DANH MỤC HÌNH Hình 1.1: Sắc ký đồ chất thông số đặc trưng 11 Hình 1.2: Sơ đồ khối tổng quát hệ thống hplc 15 Hình 1.2: Sơ đồ khối tổng quát hệ thống hplc 15 Hình 3.1 Điều kiện sắc kí theo DĐ Nhật 96 20 Hình 3.2.Khảo sát tốc độ dòng 0,7ml/phút, cột C18 nhiệt độ 400 C 20 Hình 3.3.Tốc độ dịng 1ml/phút, nhiệt độ cột 400C, cột C18 21 Hình 3.4 Tốc độ dịng 1ml/phút, nhiệt độ cột 400C, cột C8 21 Hình 3.5 Phổ hấp thụ UV-Vis Berberin 22 Hình 3.6 Khảo sát khoảng tuyến tính berberin 24 Hình 3.10 Đun cạn dịch chiết 26 Hình 3.8 Bộ chiết hồi lư u cách thủy 26 Hình 3.7.Viên nén sau đem sấy 26 Hình 3.9.Dịch chiết lần methanol 26 Hình 3.11 Dịch chiết lần nước nóng 27 Hình 3.13 Dung dịch thử Berberin 27 Hình 3.12.Cắn thu sau đun cách thủy 27 DANH MỤC BẢNG Bảng 3.1.Khảo sát độ ổn định hệ thống sắc kí 23 Bảng 3.2: Khảo sát khoảng tuyến tính nồng độ diện tích pic Berberin 24 Bảng 3.3: Kết định lượng berbrin lô berberin lưu hành trường phương pháp HPLC 28 DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT DĐ : Dược điển DĐVN I : Dược điển Việt Nam I DĐVN III : Dược điển Việt Nam III HPLC : High performmance liquid chromatography – Sắc kí lỏng hiệu cao PA : Tinh khiết phân tích PTL PTL : Phân tử lượng TW : Trung ương UV-VIS : Ultraviolet – Visible MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ CHƢƠNG I: TỔNG QUAN 1.1 VÀI NÉT VỀ BERBERIN: 1.1.1 Cấu trúc: 1.1.2 Nguồn gốc: 1.1.3 Tính chất: 1.1.4 Tác dụng dƣợc lý: 1.1.5 Chỉ định: [9][12][21] 1.1.6 Chống định: [21] 1.1.7 Dạng thuốc hàm lƣợng: [11] 1.2 MỘT SỐ PHƢƠNG PHÁP ĐÃ ĐƢỢC ÁP DỤNG ĐỂ CHIẾT XUẤT BERBERIN TỪ VIÊN NÉN 1.2.1 Phƣơng pháp chiết lạnh 1.2.2 Phƣơng pháp chiết nóng 1.2.3 Phƣơng pháp chiết theo DĐ Trung Quốc 97 [20] 1.3 MỘT SỐ PHƢƠNG PHÁP ĐỊNH LƢỢNG BERBERIN 1.3.1 Phƣơng pháp thể tích: [5] [13] 1.3.2 Phƣơng pháp đo UV-VIS 1.3.3 Phƣơng pháp cân [5] 1.3.4 Phƣơng pháp HPLC 1.4 TỔNG QUAN PHƢƠNG PHÁP HPLC 10 1.4.1 Nguyên tắc: 10 1.4.2 Cơ sở lý thuyết: 10 1.4.3 Các thơng số đặc trƣng q trình sắc ký: 11 1.4.3.1 Hệ số dung lƣợng k’ 11 1.4.3.2 Độ chọn lọc  (selectivity - factor) 12 1.4.3.3 Số đĩa lý thuyết N: 12 1.4.3.4 Độ phân giải (resolution) 12 1.4.3.5 Hệ số bất đối AF: 13 1.4.4 Nguyên tắc cấu tạo hệ thống HPLC [4],[8] 13 1.4.5 Cách đánh giá pic [7] 15 CHƢƠNG II: NGUYÊN VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 16 2.1 NGUYÊN VẬT VIỆU 16 2.1.1 Đối tƣợng nghiên cứu: 16 2.1.2 Hóa chất, dụng cụ thiết bị nghiên cứu: 16 2.1.2.1 Hóa chất: 16 2.1.2.2 Thiết bị dụng cụ: 16 2.2 P hƣơng pháp nghiên cứu: 17 2.2.1 Xây dựng phƣơng pháp định lƣợng Berberin HPLC 17 2.2.2 Định lƣợng Berberin chế phẩm phƣơng pháp HPLC 17 2.2.2.1 Quy trình tiến hành: 17 2.2.2.2 Xử lý số liệu 18 CHƢƠNG III: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 19 3.1 KẾT QUẢ XÂY DỰNG PHƢƠNG PHÁP ĐỊNH LƢỢNG BERBERIN BẰNG PHƢƠNG PHÁP HPLC 19 3.1.1 Kết khảo sát điều kiện sắc ký để định lƣợng Berberin 19 3.1.1.1 Chọn cột tốc độ dòng 19 3.1.1.2 Chọn bƣớc sóng thích hợp 21 3.1.2 Kết xây dựng đƣờng chuẩn 22 3.1.2.1 Kết khảo sát độ ổn định hệ thống sắc kí 22 3.1.2.2 Kết khảo sát khoảng tuyến tính nồng độ diện tích pic berberin 23 3.2 KẾT QUẢ ĐỊNH LƢỢNG BERBERIN TRONG VIÊN NÉN BERBERIN CỦA CÔNG TY DƢỢC HÀ TĨNH 25 3.2.1 Kết xây dựng phƣơng pháp chiết hoạt chất Berberin từ viên nén 25 3.2.1.1 Sơ đồ chiết xuất Berberin 25 3.2.1.2 Mô tả 26 3.2.2 Kết định lƣợng Berberin chế phẩm viên nén Berberin công ty Dƣợc Hà Tĩnh 28 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 29 TÀI LIỆU THAM KHẢO ĐẶT VẤN ĐỀ Berberin alcaloid thực vật thuộc nhóm isoquinolin có 150 lồi thuộc nhiều họ thực vật khác Việt Nam Berberin chủ yếu thân rễ vàng đắng với tỷ lệ 1,5 -3% [1] Nhiều tác dụng sinh học alcaloid protoberberin (berberin, palmatin, jatrorrhizin) dẫn chất nghiên cứu, nhiên có berberin sử dụng lâm sàng để điều trị rối loạn tiêu hóa Berberin biết đến với tác dụng bật kìm khuẩn tả tiêu diệt E.coli, điều trị bệnh lỵ Thuốc sử dụng phổ biến giá thành thấp an tồn, khơng ảnh hưởng tới phát triển bình thường vi khuẩn có ích ruột Vì berberin ý phát triển nhiều nước Hiện thị trường có dạng bào chế Berberin như: viên nén, viên bao… Vì vấn đề kiểm tra chất lượng nguyên liệu làm thuốc thành phẩm quan trọng Tại Việt Nam có nhiều phương pháp định lượng Berberin phương pháp kĩ thuật sắc kí lỏng hiệu cao HPLC phương pháp áp dụng phổ biến Do tơi lựa chọn đề tài “ Nghiên cứu xây dựng phƣơng pháp định lƣợng Berberin chế phẩm phƣơng pháp HPLC ” với mục tiêu sau: Xây dựng phương pháp định lượng Berberin kĩ thuật HPLC Định lượng Berberin từ chế phẩm phương pháp HPLC xây dựng * Nội dung nghiên cứu: - Lựa chọn điều kiện sắc ký phù hợp cho phương pháp định lượng HPLC - Từ qui trình xây dựng xác định hàm lượng berberin từ chế phẩm CHƢƠNG I: TỔNG QUAN 1.1 VÀI NÉT VỀ BERBERIN: 1.1.1 Cấu trúc: Beberin alcaloid thực vật thuộc nhóm isoquinolin có khung protoberberin [1] Isoquinolin cịn gọi benzo [c] pyridin hay 2- benzamin hợp chất hữu dị vòng thơm heterocyclic [22] Cấu trúc isoquinolin Công thức cấu tạo: Công thức phân tử: C20H18NO4+ PTL: 336.36 Tên khoa học : 5,6 dihydro – 8,9 – dimethoxy –1,3 – dioxa – azoniaindeno (5,6 - a) anthracen [6] 1.1.2 Nguồn gốc: Berberin thường có rễ, thân rễ, thân, vỏ thuộc chi Berberis, Hydrastis candensis, Coptis chinensis [22] Berberin có nhiều thân rễ vàng đắng với tỷ lệ 1,5-3%, berberin chiếm 82% so với alcaloid toàn phần [9] CHƢƠNG III: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 3.1 KẾT QUẢ XÂY DỰNG PHƢƠNG PHÁP ĐỊNH LƢỢNG BERBERIN BẰNG PHƢƠNG PHÁP HPLC 3.1.1 Kết khảo sát điều kiện sắc ký để định lƣợng Berberin 3.1.1.1 Chọn cột tốc độ dòng - Dung dịch chuẩn: cân pha dung dịch chuẩn hỗn hợp chứa khoảng 0,05mg berberin clorid ml acetonitril- H2O (1:1) Lọc qua giấy lọc 0,45 µm Tiến hành sắc kí dung dịch chuẩn với điều kiện sau: -Điều kiện sắc kí ghi DĐVN IV + Cột C18 + Detector UV, bước sóng phát 345 nm + Pha động : Hòa tan 3,4g kali đihrophotphat, 1,7g natri laurysulfat 1000 ml hỗn hợp dung môi nước – acetonitril (1:1) + Tốc độ dòng : ml/phút + Thể tích tiêm: 10 + Nhiệt độ phân tích : 40oC - Điều kiện sắc kí ghi DĐ Nhật 96 + Cột sắc kí: cột thép khơng ghỉ đường kính 4-6 mm nhồi hạt silicagel octadecylan hóa có đường kính 5-10 µm + Detector UV, bước sóng phát 345 nm + Pha động : Hòa tan 3,4g kali đihrophotphat, 1,7g natri laurysulfat 1000 ml hỗn hợp dung môi nước – acetonitril (1:1) + Tốc độ dịng : ml/phút + Thể tích tiêm: 10 + Nhiệt độ phân tích : 45oC Bằng thực nghiệm, cho thấy sắc kí đồ dung dịch chuẩn triển khai với điều kiện sắc kí DĐ Nhật 96 (Hình 3.1), hình dạng pic cịn bị dãn Trong đó, sắc kí đồ dung dịch phân tích triển khai theo điều kiện ghi 19 DĐVN IV (hình 3.3) hình dạng pic rõ ràng chưa đạt yêu cầu, tiếp tục tiến hành khảo sát cách thay đổi vài thơng số điều kiện sắc kí nhiệt dộ cột 400C, tốc dộ dịng 0,7ml/phút (Hình 3.2) 1ml/phút, thay đổi cột C18 sang cột C8 (Hình 3.4) nhằm chọn điều kiện nhiệt độ tốc độ dịng thích hợp để đảm bảo phát berberin rút ngắn tối đa thời gian phân tích Qua kết thực nghiệm, cho thấy với cột C8, tốc độ dòng 1ml/phút nhiệt độ cột 400C (Hình 3.4) kết pic tốt, pic nhọn đối xứng, thời gian lưu ngắn (tR berberin khoảng 9,4 phút), thời gian phân tích mẫu khoảng 15 phút Kết đo được trình bày hình Hình 3.1 Điều kiện sắc kí theo DĐ Nhật 96 Hình 3.2.Khảo sát tốc độ dòng 0,7ml/phút, cột C18 nhiệt độ 400 C 20 Hình 3.3.Tốc độ dịng 1ml/phút, nhiệt độ cột 400C, cột C18 Hình 3.4 Tốc độ dịng 1ml/phút, nhiệt độ cột 400C, cột C8 3.1.1.2 Chọn bƣớc sóng thích hợp Để xác định bước sóng thích hợp phát berberin, tiến hành đo phổ UV-VIS dung dịch berberin chuẩn nồng độ 0,01 mg/ml pha động nêu mục 3.1.1.1 dải sóng từ 200-500 nm, cốc đo dày 1cm, mẫu trắng pha động Kết đo cho thấy bước sóng có cực đại hấp thụ cao 345,6 nm (Hình 7) Mặt khác việc chọn bước sóng phân tích cần ưu tiên chọn bước sóng độ hấp thụ riêng chất cần nghiên cứu lớn Do vậy, bước sóng chọn sử dụng phương pháp 345 nm 21 Hình 3.5 Phổ hấp thụ UV-Vis Berberin Để khẳng định thêm, tiến hành phân tích mẫu máy HPLC kết nối với detector phần mềm xử lý phổ để chọn bước sóng tối ưu cho việc phát berberin Qua khảo sát, kết nhận thấy bước sóng 345nm, pic berberin phát rõ, độ phân giải pic cao, pic nhọn đối xứng Từ kết thu được, chương trình sắc kí chọn để định lượng berberin viên nén sau: - Cột C8 - Detector UV, bước sóng phát 345 nm - Pha động : Hòa tan 3,4g kali đihrophotphat, 1,7g natri laurysulfat 1000 ml hỗn hợp dung mơi nước – acetonitril (1:1) - Tốc độ dịng : ml/phút - Thể tích tiêm: 10 - Nhiệt độ phân tích : 40oC 3.1.2 Kết xây dựng đƣờng chuẩn 3.1.2.1 Kết khảo sát độ ổn định hệ thống sắc kí Pha mẫu chuẩn có chứa 0,05mg berberin clorid/1ml hỗn hợp dung môi acetonitril : H2O (1:1) Tiêm lần mẫu chuẩn vào hệ thống sắc kí lỏng hiệu cao tiến hành sắc kí với điều kiện lựa chọn Ghi diện tích pic thu Độ ổn 22 định hệ thống sắc kí biểu thị sai số tương đối (RSD %) lần tiêm mẫu chuẩn Bảng 3.1.Khảo sát độ ổn định hệ thống sắc kí BERBERIN STT Diện tích pic Thời gian lưu 969 9.425 971 9.427 975 9.420 970 9.433 974 9.431 Số liệu thống kê S = 972 SD = 2.588 RSD = 0.266 % Kết trình bày cho thấy sai số tương đối thu với berberin nhỏ 2% Điều chứng tỏ hệ thống sắc kí sử dụng phù hợp đảm bảo ổn định cho việc phân tích định lượng berberin 3.1.2.2 Kết khảo sát khoảng tuyến tính nồng độ diện tích pic berberin Để khảo sát khoảng tuyến tính, tơi tiến hành pha dãy dung dịch chuẩn berberin clorid có nồng độ biến thiên khoảng 0,03- 0,08 mg/ml hỗn hợp dung môi acetonitril : H2O (1:1) Tiêm 10µl dung dịch vào hệ thống sắc kí HPLC Giá trị diện tích pic đo tương ứng với nồng độ berberin clorid 23 trình bày bảng dồ thị biểu diễn phụ thuộc tuyến tính diện tích pic nồng độ berberin clorid ghi ( hình 3.6) Hình 3.6 Khảo sát khoảng tuyến tính berberin Bảng 3.2: Khảo sát khoảng tuyến tính nồng độ diện tích pic Berberin Hoạt chất Dung dịch Nồng độ (mg/ml) Berberin Diện tích clorid pic 0,03 0,04 0,05 0,06 0,07 0,08 612,57 787,96 969,47 1299,95 1382,47 1598,45 Phương trình hồi quy: y = 19867x + 0.7996 Hệ số tương quan: r = 0,9989 Kết thu bảng 3.2 hình 3.6 cho thấy, khoảng nồng độ berberin clorid từ 0,03-0,08 mg/ml, diện tích pic đáp ứng thu sắc kí đồ berberin tỷ lệ thuận với nồng độ biểu diễn phương trình hồi quy với hệ số tương quan tuyến tính tương ứng r = 0,9989 Trên sở đó, nồng độ 24 0,05mg berberin clorid/ml hỗn hợp acetonitril : H2O (1:1) lựa chọn phương pháp định lượng 3.2 KẾT QUẢ ĐỊNH LƢỢNG BERBERIN TRONG VIÊN NÉN BERBERIN CỦA CÔNG TY DƢỢC HÀ TĨNH Để định lượng hoạt chất chế phẩm, điều quan trọng phải chiết kiệt hoạt chất cần định lượng làm dịch chiết 3.2.1 Kết xây dựng phƣơng pháp chiết hoạt chất Berberin từ viên nén 3.2.1.1 Sơ đồ chiết xuất Berberin Xử lý mẫu Nghiền thành bột mịn Cân xác lượng bộtĐun hồi lưu cách thủy lần x 25ml với hỗn hợp dung môi methanol-acid hydroclorid (100:1) Dịch chiết Bã dược liệu Bay cách thủy Cắn Chiết nước nóng lần x 15 ml Dịch chiết Bay cách thủy Cắn Lọc qua màng Dịch chiết lọc 0,45 µm Dung dịch thử Hòa tan acetonitril vđ 100 ml 25 acetonitril 3.2.1.2 Mơ tả Lấy 20 viên hồn, sấy 60oC Để nguội bình hút ẩm để ngồi nhiệt độ phịng 10 phút (Hình 3.7) Cân xác định khối lượng trung bình viên Tán thành bột mịn.Cân xác lượng bột viên nghiền mịn tương đương với khoảng viên vào bình nón nút mài 100ml Chiết lần (Hình 3.9), lần dùng 25ml hỗn hợp dung môi methanol-acid hydrocloric (100:1) cách đun hồi lưu cách thủy (Hình 3.8) 30 phút Gộp dịch chiết, làm bay cách thủy tới cạn (Hình 3.10) Cắn chiết tiếp nước nóng lần, lần dùng 15 ml (Hình 3.11) Lọc gộp dịch chiết, làm bay cách thủy tới cạn (Hình 3.12) Cắn hịa tan chuyển vào bình định mức 100ml acetonitril-H2O (1:1), thêm acetonitril-H2O (1:1) đến vạch, lắc đều, lọc qua giấy lọc cỡ 0,45µm, thu dunng dịch thử (Hình 3.13) Hình 3.7.Viên nén sau đem sấy Hình 3.8 Bộ chiết hồi lư u cách thủy Hình 3.10 Đun cạn dịch chiết Hình 3.9.Dịch chiết lần methanol 26 Hình 3.11 Dịch chiết lần nước nóng Hình 3.13 Dung dịch thử Hình 3.12.Cắn thu sau đun Berberin cách thủy Qua tài liệu tham khảo kết khảo sát phương pháp chiết xuất berberin viên nén, rút số nhận xét sau: + Trong điều kiện chiết hồi lưu cách thủy sử dụng dung môi khác ethanol, methanol, methanol-acid hydrocloric (100:1) dung mơi methanol-acid hydrocloric (100:1) chiết nhiều hoạt chất + Việc đưa thêm HCl vào dung mơi chiết chuyển tồn lượng Berberin dạng base dạng muối khác mẫu nghiên cứu thành dạng muối clorid dễ tan methanol chiết kiệt berberin mẫu nghiên cứu + Do tính chất đặc biệt berberin dù dạng muối clorid hay dạng base dễ tan nước nóng nên tơi lợi dụng tính chất để tinh chế dịch chiết, đảm bảo thu dịch chiết đủ để tiến hành định lượng HPLC Như vậy, sử dụng phương pháp chiết xuất ta giải vấn đề khó khăn việc áp dụng phương pháp phân tích định lượng 27 chế phẩm đơng dược làm để chiết kiệt hoạt chất cần nghiên cứu chế phẩm đông dược với dịch chiết thu đủ 3.2.2 Kết định lƣợng Berberin chế phẩm viên nén Berberin công ty Dƣợc Hà Tĩnh Tiến hành định lượng berberin lô Berberin viên nén cơng ty CP Dược Hà Tĩnh có số kiểm sốt 600013 251413 Mỗi lơ định lượng lần, kết thực nghiệm ghi bảng 3.3 Bảng 3.3: Kết định lượng berbrin lô berberin lưu hành trường phương pháp HPLC Số lơ Lơ 600013 Lơ 251413 Diện tích Lượng mẫu Hàm lượng Hiệu suất pic thử (mg) (mg/viên) (%) Mẫu 1009 138 4,98 99,6 Mẫu 1002 139 4,91 98,2 Mẫu 970 137 4,83 96,6 Mẫu 976 136 4,86 97,2 Trung bình 989 138 4,89 97,9 Tên mẫu Diện tích pic chuẩn: S = 972 Hàm lượng chuẩn: 99,7% Lượng cân chuẩn: 0,049 (mg) KLTB viên: 135,6 mg Kết bảng cho thấy hàm lượng berberin so với hàm lượng ghi nhãn đạt 97,7% 28 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận: Qua thời gian làm thực nghiệm, khóa luận đạt kết sau:  Xây dựng phương pháp định lượng Berberin kĩ thuật HPLC - Điều kiện sắc kí: + Cột C8 + Detector UV, bước sóng phát 345 nm + Pha động : Hòa tan 3,4g kali đihrophotphat, 1,7g natri laurysulfat 1000 ml hỗn hợp dung môi nước – acetonitril (1:1) + Tốc độ dịng : ml/phút + Thể tích tiêm: 10 + Nhiệt độ phân tích : 40oC - Lập đường chuẩn Berberin với nồng độ để định lượng 0,05mg Berberin clorid /ml hỗn hợp acetonitril : H2O (1:1)  Áp dụng phương pháp định lượng Berberin kĩ thuật HPLC xây dựng để định lượng Berberin chế phẩm - Hàm lượng viên nén Berberin công ty dược Hà tĩnh so với hàm lượng ghi nhãn đạt 97,7% Kiến nghị: Phương pháp HPLC phương pháp phân tích đại, cho kết phân tích nhanh xác, áp dụng phương pháp HPLC để định lượng dược phẩm nói chung Berberin nói riêng 29 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng việt: [1] Bộ môn Dược liệu (1998), Bài giảng dược liệu, Trường ĐH Dược Hà Nội, tập 2, tr 89-91 [2] Trần Tử An, Trịnh Văn Quì, Bùi Xuân Đồng, Chu Thị Lộc (1997), Các phương pháp kiểm nghiệm thuốc độc chất học - Tài liệu học tập sau dại học, Trường ĐH Dược Hà Nội, tr21-31 [3] Trần Tử An(2000) Giáo trình chiết xuất – Tài liệu sau đại học, Trường ĐH Dược Hà Nội [4] Bộ mơn Hóa phân tích (2004), Kiểm nghiệm thuốc, Trường ĐH Dược Hà Nội, tr.69-79, 83-98 [5] Bộ Y tế (1994) Dược điển Việt Nam II, Nhà xuất Y học, tập 3, tr.71-74 [6] Bộ Y tế (2002) Dược điển Việt Nam III, Nhà xuất Y học Hà Nội, tr 33-35, 178-179 phụ lục ( PL- 75-76) [7] Nguyễn Minh Đức (2006), Sắc kí lỏng hiệu cao số ứng dụng vào nghiên cứu, kiểm nghiệm dược phẩm, dược liệu hợp chất thiên nhiên, Nhà xuất y học thành phố Hồ Chí Minh, tr 138, 148-149 [8] Phạm Gia Huệ, Trần Tử An (1998), Hóa phân tích, Trường ĐH Dược Hà Nội, tập 2,tr.55-98 [9] Đỗ Tất Lợi (1999), Những thuốc vị thuốc Việt Nam, Xuất lần thứ VIII- Nhà xuất y học, tr.195 [10] Dược điển Việt Nam I, tập (1974), Nhà xuất Y học , tr.307-308 [11] DS.Phạm Thiệp- DS Vũ Ngọc Thúy (tái lần thứ 13), Thuốc biệt dược cách sử dụng, Nhà xuất Y học, tr.106 [12] Nguyễn Thị Phương Thảo (2002), Nghiên cứu định tính định lượng đồng thời Berberin palmatin thân rễ hoàng liên chế phẩm Hương liên hoàng phương pháp HPLC, luận văn thạc sĩ dược học, trường đại học dược Hà Nội, tr.45 Tiếng Anh: [13] Martindal 34(2005), volume II, p.1659 [14] Pharmcopoeia of the people’s republic of China (2005), volume III, p.94-96 [15] The Korean Pharmcopoeia 8th edition (2002), p.81-82 [16] Lu,P., Zheng, J.H.,Guo,D.A., Lu, K.K (1998), “Callus inducement and contend detemination of berberine and jatrorrhizine in Coptis chinesis ”, Yaowu Fenxi Zazhi, pp 101-104 [17] Wang, S.D, Song, B.S (2000) Determination of berberin in decoted liquid from Shensu granules with water by revesed-phase liquid chromatography Sepu, p.261262 [18] Encyclopedia of chemical technology 2nd edition Vol.20, pp.79 [19] Wu,P.E.;Zhou,L.(1998),“Quantitative determination of berberinenin Wanying capsules by TLC-flourimetry”, Yaowu Fenxi Zazhi, 18(4), PP.243-245 [20] The Japannese Pharmcopoeia thirteenth edition Vol.2 (1996), pp.228 767 [21] Pharmcopoeia of the people’s republic of China (1997), volume II, pp.62 ĐẠI HỌC SƢ PHẠM TRƢỜNG ĐHSP KHOA HĨA CỘNG HỊA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập – Tự – Hạnh phúc - NHIỆM VỤ KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP Họ tên sinh viên: BÙI THANH XUÂN Lớp: 10 CHD Tên đề tài: Nghiên cứu xây dựng phương pháp định lượng Berberin chế phẩm phương pháp HPLC Nguyên liệu, dụng cụ thiết bị: - Nguyên liệu: Chế phẩm viên nén berbenrin 5mg công ty CP Dược Hà Tĩnh, với công thức cho viên 5mg Dụng cụ: Nồi cách thủy, bình định mức loại: 20,0 ml; 25,0 ml; 100,0 ml - ., cốc có mỏ: loại 100; 200; 500,pipet xác, pipet thường, đũa thủy tinh, bơm tiêm, lọ đựng mẫu, màng lọc 0,45m Thiết bị: Máy lắc siêu âm, máy sắc ký lỏng hiệu cao, cân phân tích độ - xác 0,1 mg, máy cất nước lần Nội dung nghiên cứu: Lựa chọn điều kiện sắc ký phù hợp cho phương pháp định lượng - HPLC Từ qui trình xây dựng xác định hàm lượng berberin từ chế phẩm Giáo viên hƣớng dẫn: Ths.Ds Phạm Văn Vượng Ngày giao đề bài: 01/10/2013 Ngày hoàn thành: 30/03/2014 Chủ nhiệm Khoa Giáo viên hướng dẫn ( Ký ghi rõ họ tên) ( Ký ghi rõ họ tên) Sinh viên hoàn thành nộp báo cáo cho khoa ngày 23 tháng 05 năm 2014 Kết điểm đánh giá: Ngày…tháng…năm 2014 CHỦ TỊCH HỘI ĐỒNG ( Ký ghi rõ họ tên) ... chế phẩm phƣơng pháp HPLC ” với mục tiêu sau: Xây dựng phương pháp định lượng Berberin kĩ thuật HPLC Định lượng Berberin từ chế phẩm phương pháp HPLC xây dựng * Nội dung nghiên cứu: - Lựa chọn... nhiều phương pháp định lượng Berberin phương pháp kĩ thuật sắc kí lỏng hiệu cao HPLC phương pháp áp dụng phổ biến Do tơi lựa chọn đề tài “ Nghiên cứu xây dựng phƣơng pháp định lƣợng Berberin chế phẩm. .. chuẩn Berberin với nồng độ để định lượng 0,05mg Berberin clorid /ml hỗn hợp acetonitril : H2O (1:1)  Áp dụng phương pháp định lượng Berberin kĩ thuật HPLC xây dựng để định lượng Berberin chế phẩm