Kết quả nghiên cứu cho thấy mô gan tụy của tôm bệnh bị hoại tử nghiêm trọng, thể hiện những dấu hiệu bệnh lý rất rõ ràng và đa dạng tùy vào giai đoạn và mức độ nặng nhẹ của bệnh. Sự hoại tử và biến dạng của tế bào và ống mô gan tụy có thể diễn ra ở từng vùng hoặc toàn bộ gan tụy.
KHOA HỌC KỸ THUẬT THÚ Y TẬP XXIII SỐ - 2016 BỆNH LÝ CỦA HỘI CHỨNG HOẠI TƯ GAN TỤY HOẠI TỬ Ở TÔM CHÂN TRẮNG (LITOPENAEUS VANNAMEI) NUÔI TẠI NINH THUẬN Nguyễn Thị Thùy Giang, Phạm Quốc Hùng Viện Nuôi trồng thủy sản, Trường Đại học Nha Trang TĨM TẮT Tơm chân trắng ni thương phẩm tỉnh Ninh Thuận bị hội chứng hoại tử gan tụy với dấu hiệu bất thường như: gan tụy teo nhỏ, chai cứng, màu sắc gan tụy đen tối nhợt nhạt, ruột rỗng, phân trắng… Tơm bị bệnh chết từ rải rác đến hàng loạt, điều gây tổn thất lớn cho người nuôi tôm Nghiên cứu mô bệnh học tiến hành 40 mẫu tôm bị bệnh 10 mẫu tôm khỏe thu từ ao nuôi tỉnh Ninh Thuận Kết nghiên cứu cho thấy mô gan tụy tôm bệnh bị hoại tử nghiêm trọng, thể dấu hiệu bệnh lý rõ ràng đa dạng tùy vào giai đoạn mức độ nặng nhẹ bệnh Sự hoại tử biến dạng tế bào ống mơ gan tụy diễn vùng toàn gan tụy Sự biến tế bào B R ống mô gan tụy đặc điểm điển hình ghi nhận Các tế bào biểu mơ gan tụy có tượng bong tróc rơi vào bên ống mơ gan Sự hoại tử biến tế bào biểu mô gan tụy để lại ống gan tụy trống rỗng biến dạng cấu trúc toàn gan tụy Đồng thời, quan sát thấy xâm nhập bao quanh tác tế bào máu vùng mô bị thương tổn ổ viêm Khơng tìm thấy biến đổi bất thường quan khác tơm Do đó, tổn thương nghiêm trọng tổ chức gan tụy tơm ngun nhân gây chết tơm Khơng phát thể vùi virus biểu mô gan tụy mẫu tôm bị bệnh Từ khóa: Mơ bệnh học, Tơm chân trắng, Hội chứng hoại tử gan tụy, Ninh Thuận Pathological features of hepatopancreas necrosis syndrome in farmed white-leg shrimp (Litopenaeus vannamei) in Ninh Thuan province Nguyen Thi Thuy Giang, Pham Quoc Hung SUMMARY The farmed white leg shrimp in Ninh Thuan province was died with the un-normal clinic signs such as: empty gut, anorexia, pale, white feces The shrimp mortality rate could be up to 100%, this caused the heavy loss for the shrimp farmers Histological study was conducted on 40 diseased and 10 healthy shrimps in order to identify the pathological signs The studied result showed that severe necrosis inside hepatopancreas was noted in all of the diseased shrimps with the clearly biological signs basing on the diseased stage and level The abnormalities of hepatopancreas such as: disappearance of the hepatic cells: type B, F and R, sloughing of the epithelial cells, gathering of the blood cells surrounding the lesions and inflammation areas were observed The abnormalities were not found in other organs of the diseased shrimps The serious lesions in hepatopancreas could be the cause of mortality Inclusion body was not found in the epithelial cells of hepatopancreas of the diseased shrimps Keywords: Histopathology, Litopenaeus vannamei, Hepatopancreatic necrosis syndrome, Ninh Thuan province I ĐẶT VẤN ĐỀ Hội chứng hoại tử gan tụy thường gây chết từ rải rác đến hàng loạt tôm chân trắng nuôi 78 thương phẩm Ninh Thuận, với dấu hiệu bệnh lý thể quan gan tụy tuyến tiêu hóa như: teo nhỏ, chai cứng, đen tối, nhợt nhạt, phù nề, mềm nhũn, ruột rỗng… KHOA HỌC KỸ THUẬT THÚ Y TẬP XXIII SỐ - 2016 Nghiên cứu thực nhằm tìm hiểu biểu hiện bệnh lý ở bên ngoài và biến đổi bệnh lý cấp độ tế bào mô tổ chức gan tụy tơm bị bệnh Kết nghiên cứu hỗ trợ việc xác định tác nhân gây bệnh, từ đó làm sở để tìm biện pháp ngăn ngừa phòng trị bệnh hiệu II VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Vật liệu Bằng phương pháp thu mẫu chọn lọc, 40 mẫu tôm chân trắng (25-30 con/mẫu) bị hội chứng gan tụy thu từ 40 ao bị bệnh Ninh Thuận với 10 mẫu tơm khỏe khơng có dấu hiệu bệnh gan tụy Khi thu mẫu, lựa chọn tơm bị bệnh có bộc lộ dấu hiệu bất thường: lờ đờ, màu sắc thể thay đổi, bỏ ăn, ruột rỗng, gan tụy biến đổi hình dạng màu sắc, sống 2-3 ml dung dịch Davidson (cồn 95%: 330 ml, formol 40%: 220 ml, acid acetic: 115 ml nước cất 335 ml) được tiêm vào phần đầu ngực của mỗi tôm, sau đó dùng dao cắt bỏ phần bụng, đưa phần đầu ngực vào cố định dung dịch Davidson (tỷ lệ 1/10 về thể tích) Sau 24-36 h, chuyển mẫu sang bảo quản bằng cồn etylic 70% dùng cho phân tích bằng phương pháp mơ bệnh học Các mẫu tơm khỏe (20 tôm/mẫu) chưa bộc lộ bệnh lý thu dùng cho phân tích đối chứng so sánh với mẫu bệnh 2.2 Phương pháp nghiên cứu mô bệnh học Phương pháp mô bệnh học ứng dụng cho động vật giáp xác giới thiệu Lightner, 1996 sử dụng nghiên cứu này để xác định biến đổi bệnh lý mô tế bào gan tụy của tôm bệnh So sánh bệnh lý với mô tôm khỏe biến đổi đặc trưng gan tụy tôm bị loại bệnh khác công bố nhiều tác giả (Lightner, 1996; Hasson et al., 2009; Lightner et al., 2012; Tran Loc et al., 2013; Flegel & Lo, 2014; Joshi et al., 2014 Nunan et al., 2014) Các bước tiến hành mơ tả hình Hình Quy trình làm tiêu mơ bệnh học III KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 3.1 Dấu hiệu chính của bệnh Hội chứng gan tụy hoại tử xuất phổ biến vùng nuôi tôm Ninh Thuận nguyên nhân gây thất thu cho nhiều hộ nuôi tôm địa phương vài năm gần Khi gặp vấn đề gan tụy, tôm chân trắng thường bộc lộ số dấu hiệu bất thường như: bắt mồi, bỏ ăn nên đường ruột khơng có đứt đoạn, tổ chức gan tụy chuyển màu trắng nhợt, khối gan tụy bị teo nhỏ, chai cứng hoại tử, tôm bệnh thường chết rải rác chết hàng loạt tùy theo ao (hình 2) Bệnh gặp nhiều tơm ni tháng đầu sau thả giống, nhiên có số ao xuất bệnh muộn hơn, xảy vào cuối tháng nuôi thứ 79 KHOA HỌC KỸ THUẬT THÚ Y TẬP XXIII SỐ - 2016 Ruột rỗng có thức ăn Gan tụy teo nhỏ, nhợt nhạt, dần sắc tố nâu vàng, chuyển mầu trắng Hình Hội chứng hoại tử gan tụy tôm chân trắng 3.2 Các biến đổi bệnh lý mô tế bào gan tụy Tổ chức gan tụy giữ vai trị quan trọng việc trì sống tơm chân trắng: tiêu hóa thức ăn để trì sống, giải độc để bảo vệ thể… Do vậy, thương tổn tổ chức này, virus, vi khuẩn, ký sinh trùng độc tố, ảnh hưởng tới sống cịn tơm Khi tơm chân trắng bị hội chứng gan tụy hoại tử, bệnh lý mô và tế bào thể hiện rõ rệt ở tổ chức gan tụy của tôm bệnh 3.2.1 Mô học tổ chức gan tụy tơm he bình thường Biểu mơ gan tụy bình thường cắt ngang Tổ chức gan tụy tơm he nằm phần đầu ngực, có hình dạng dâu tây chiếm thể tích đáng kể phần đầu Ở trạng thái bình thường, tổ chức gan tụy tơm he có màu nâu vàng Gan tụy tạo nên biểu mơ dạng hình ống mô liên kết nối ống gan lại tạo nên chặt chẽ tổ chức gan tụy Biểu mơ hình ống tổ chức gan tụy tạo nên bới số loại tế bào: tế bào B có chức tiết men tiêu hóa, tế bào R có chức dự trữ, tế bào F có chức chuyển tiếp tế bào E tập trung đầu mút biểu mô dạng ống (Flegel, 2006) (Hình 3) Biểu mơ gan tụy bình thường cắt dọc Hình Cấu trúc mơ tế bào gan tụy tơm chân trắng bình thường 3.2.2 Bệnh lý mô và tế bào ở gan tụy của tôm bị hội chứng gan tụy 100% mẫu tôm bị hội chứng gan tụy (40 80 mẫu) thể bất thường mô tế bào tổ chức gan tụy Mô gan tụy tôm bị bệnh thể dấu hiệu bệnh lý rõ ràng KHOA HỌC KỸ THUẬT THÚ Y TẬP XXIII SỐ - 2016 đa dạng tùy vào giai đoạn mức độ nặng nhẹ bệnh Các dạng biến đổi bệnh lý mô tế bào gan tụy quan sát mơ tả hình 4-8 Trong bệnh lý thể nghiêm trọng ở các biểu mơ hình ớng gan tụy, tổ chức khác như: mang, dày, ruột, quan lympho, cơ… bất thường Điều chứng tỏ rằng, thương tổn nặng nề gan tụy nguyên nhân gây chết cho tôm Sự hoại tử quan gan tụy đặc điểm bệnh lý quan trọng tìm thấy Hoại tử xảy đầu mút vài biểu mơ hình ống, có bong tróc tế bào, biến tế bào B F, khơng có tế bào máu cơng (mũi tên trên) có cơng tế bào máu (mũi tên dưới) tất mẫu tôm bệnh thu Sự hoại tử quan sát thấy nhiều mức độ khác nhau: từ cục tồn quan Hình thể hiện hoại tử cục quan sát thấy vài vị trí gan tụy, các vùng gan tụy khác vẫn bình thường Tại vùng bị thương tổn, tế bào biểu mơ bị bong tróc, khơng tìm thấy loại tế bào F, B R; vài ống gan liền kề bị rỗng Có thể có khơng có công tế bào máu Một vài biểu mô hình ống khơng cịn cấu trúc tế bào tế bào máu bao quanh vị trí Hình Mô gan tụy bị hoại tử cục (H&E, 200x) Sự hoại tử nghiêm trọng tổ chức gan tụy với mức độ bệnh lý khác nhau: ống gan co nhỏ thể viêm teo; tế bào biểu mơ bị bong tróc hàng loạt rơi vào khoảng rỗng ống gan; tế bào biểu mơ ống gan biến mất, khơng cịn quan sát loại tế bào B, R F, để lại hàng loạt biểu mơ hình ống bị trống rỗng; có xâm nhập nhiều, nhiều tế bào máu, chiếm chỗ mô liên kết, bao vây xung quanh ống gan tụy bị hoại tử (hình 5, 6, 7, 8) Kết nghiên cứu biến đổi bệnh lý mô tế bào tổ chức gan tụy tôm chân trắng bị hội chứng hoại tử gan tụy, thể nhiều dạng biến đổi bệnh lý tất chúng cho thấy có liên quan tới vi khuẩn độc lực vi khuẩn Không phát thể vùi virus biểu mô gan tụy mẫu tơm Sự thối hóa hoại tử biểu mô gan tụy thể đa dạng, từ nhẹ đến nặng, từ hoại tử cục vài điểm (hình 4), tới tồn mặt cắt gan tụy (hình 5, 6, 8) 81 KHOA HỌC KỸ THUẬT THÚ Y TẬP XXIII SỐ - 2016 Khối gan tụy với biểu mơ hình ống bị hoại tử nghiêm trọng tạo thành ống rỗng, không quan sát thấy loại tế bào B, F R Các tế bào E có nhân bị phình to, khơng quan sát thấy phản ứng viêm (H&E) Lát cắt ngang khối gan tụy có biểu mơ hình ống bị rỗng, hoại tử nghiêm trọng (200x) Lát cắt ngang thể nhân tế bào E bị phì đại (400x) Lát cắt dọc khối gan tụy có biểu mơ hình ống bị rỗng, hoại tử nặng (200x) Hình Mơ gan tụy bị hoại tử nghiêm trọng Ở mẫu tôm bệnh nặng, biểu mơ hình ống gan tụy bị hoại tử nghiêm trọng, làm biến cấu trúc bình thường tổ chức này, làm tế bào biểu mơ bị bong tróc khỏi thành ống gan, nặng tạo thành biểu mơ hình ống bị rỗng (hình 6) Các biểu mơ hình ống gan tụy bị thối hóa nghiêm trọng diện rộng, gặp vùng khác gan tụy với số tế bào máu xâm nhập Các tế bào biểu mơ bị thối hóa, bong tróc rơi vào vùng rỗng biểu mơ hình ống gan tụy Hình Sự thối hóa bong tróc tế bào biểu mơ gan tụy Quan sát thấy có xâm nhập bao vây tế bào máu ổ viêm, thể phản 82 ứng miễn dịch tơm với xâm nhập tác nhân bên ngồi (hình 8) KHOA HỌC KỸ THUẬT THÚ Y TẬP XXIII SỐ - 2016 Sự biến tế bào B, R F, với xâm nhập chiếm chỗ nhiều tế bào máu vào vùng mơ liên kết, bao vây biểu mơ hình ống (H &E; trái: 200x & phải: 400x) Hình Sự xâm nhập bao quanh tế bào máu gan tụy tôm Phản ứng viêm xâm nhập dày đặc tế bào máu vào mô liên kết bao quanh ống biểu mô gan tụy thể bệnh lý cảm nhiễm tác nhân vi khuẩn Sự biến tế bào B R ống mô gan tụy đặc điểm ghi nhận Các tế bào biểu mơ gan tụy có tượng bong tróc rơi vào bên ống mô gan Sự hoại tử biến dạng tế bào ống mô gan tụy quan sát cục tồn gan tụy Ngồi ra, cịn quan sát thấy hình thành tế bào dạng sợi bao quanh ổ viêm, xem giai đoạn cuối phản ứng viêm Sự hoại tử biến tế bào biểu mô gan tụy để lại ống gan tụy rỗng biến dạng cấu trúc toàn thể quan gan tụy Sự tổn thương nghiêm trọng tổ chức mô tế bào quan gan tụy chắn ảnh hưởng đến chức hoạt động quan nói riêng tồn thể tơm nói chung Đặc điểm biến đổi bệnh lý xảy 40 mẫu tôm chân trắng bị hoại tử gan tụy thu ao nuôi Ninh Thuận tương tự báo cáo nhiều tác giả ngồi nước cơng bố gần dịch bệnh hoại tử gan tụy cấp hay hội chứng chết sớm EMS/AHPNS tôm he nuôi châu Á (Lightner et al., 2012, Loc Tran et al., 2013, Joshi et al., 2012) Các loại tế bào biểu mơ hình ống gan tụy bị hoại tử, khơng cịn quan sát thấy loại tế bào B, F R Nhiều lớp tế bào máu bao vây ống gan bị hoại tử rỗng, tạo nên ổ viêm Có xâm nhập tế bào vi khuẩn vùng viêm Ngồi ra, cịn quan sát thấy hình thành tế bào dạng sợi bao quanh ổ viêm, xem giai đoạn cuối phản ứng viêm Hình Sự hình thành ổ viêm gan tụy tơm 83 KHOA HỌC KỸ THUẬT THÚ Y TẬP XXIII SỐ - 2016 IV KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT Ý KIẾN Tôm chân trắng nuôi ao tỉnh Ninh Thuận bị hội chứng gan tụy hoại tử với dấu hiệu bệnh thường bắt gặp như: gan tụy teo nhỏ, nhợt nhạt chuyển màu trắng đục, ruột khơng có có thức ăn, tơm bỏ ăn bắt mồi, vào bờ rớt đáy, chết từ rải rác tới hàng loạt Kết nghiên cứu xác định bệnh lý rõ ràng tổ chức gan tụy, quan khác ở tôm bệnh lại khơng có biểu bất thường Những biến đổi bệnh lý mô tế bào tổ chức gan tụy ghi nhận như: hoại tử từ cục đến diện rộng mô gan tụy, tế bào biểu mô bị hoại tử bị bong tróc làm cho ống gan bị trống rỗng teo nhỏ, nhiều trường hợp loại tế bào B, R F biến mất, tế bào máu xâm nhập, chiếm chỗ bao vây xung quanh ống gan hoại tử Các tổn thương nghiêm trọng gan tụy ngun nhân gây chết cho tôm bị bệnh này Những biến đổi bệnh lý thể tổ chức gan tụy cho thấy vi khuẩn độc tố vi khuẩn có liên quan tới hội chứng hoại tử gan tụy tôm chân trắng nuôi Ninh Thuận Do vậy, cần tiếp tục nghiên cứu để xác định xác tác nhân gây bệnh, độc lực tác nhân giải pháp phòng trị bệnh hiệu Lời cảm ơn Xin chân thành cảm ơn Sở KH&CN Tỉnh Ninh Thuận hỗ trợ kinh phí để thực nghiên cứu TÀI LIỆU THAM KHẢO Flegel, TW (2006) Detection of major penaeid shrimp viruses in Asia, a historical perspective with emphasis on Thailand Aquaculture, 258, - 33 Flegel, T W., & Lo, C.-F (2014) Announcement regarding free release of primers 84 for specific detection of bacterial isolates that cause acute hepatopancreatic necrosis disease (ahpnd) doi: http://www.enaca.org/ modules/news/article.php?article_id=2015 Hasson, K W., Wyld, E M., Fan, Y., Lingsweiller, S W., Weaver, S J., Cheng, J., & Varner, P W (2009) Streptococcosis in farmed litopenaeus vannamei: A new emerging bacterial disease of penaeid shrimp Dis Aquat Organ, 86(2), 93-106 doi: 10.3354/ dao020132 Joshi, J., Srisala, J., Sakaew, W., Prachumwat, A., Sritunyalucksana, K., Flegel, T W., & Thitamadee, S (2014) Identification of bacterial agent (s) for acute hepatopancreatic necrosis syndrome, a new emerging shrimp Suranaree J Sci Technol doi: http://ird.sut ac.th/e-journal/ Journal/pdf/140283.pdf Lightner, D V (1996) A handbook of shrimp pathology and diagnostic procedures for diseases of cultured penaeid shrimp: World Aquaculture Society Lightner, D V., Redman, R M., Pantoja, C R., Noble, B I., & Tran, L (2012) Early mortality syndrome affects shrimp in Asia Global Aquaculture Advocate Magazine, 40 Nunan, L., Lightner, D., Pantoja, C., & Gomez-Jimenez, S (2014) Detection of acute hepatopancreatic necrosis disease (ahpnd) in Mexico Dis Aquat Organ, 111(1), 81-86 doi: 10.3354/dao02776 Tran, L., Nunan, L., Redman, R M., Mohney, L L., Pantoja, C R., Fitzsimmons, K., & Lightner, D V (2013) Determination of the infectious nature of the agent of acute hepatopancreatic necrosis syndrome affecting penaeid shrimp Dis Aquat Organ, 105, 45-55 Nhận ngày 26-10-2015 Phản biện ngày 20-11-2015 ... đổi bệnh lý xảy 40 mẫu tôm chân trắng bị hoại tử gan tụy thu ao nuôi Ninh Thuận tư? ?ng tự báo cáo nhiều tác giả nước công bố gần dịch bệnh hoại tử gan tụy cấp hay hội chứng chết sớm EMS/AHPNS tôm. .. xung quanh ống gan tụy bị hoại tử (hình 5, 6, 7, 8) Kết nghiên cứu biến đổi bệnh lý mô tế bào tổ chức gan tụy tôm chân trắng bị hội chứng hoại tử gan tụy, thể nhiều dạng biến đổi bệnh lý tất chúng... rỗng có thức ăn Gan tụy teo nhỏ, nhợt nhạt, dần sắc tố nâu vàng, chuyển mầu trắng Hình Hội chứng hoại tử gan tụy tôm chân trắng 3.2 Các biến đổi bệnh lý mô tế bào gan tụy Tổ chức gan tụy giữ vai