Luận văn thạc sĩ nghiên cứu hóa học và nhận dạng một số nhóm chất có trong cây chó đẻ răng cưa

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM NGÔ ĐỨC TRỌNG NGHIÊN CỨU HỐ HỌC VÀ NHẬN DẠNG MỘT SỐ NHĨM CHẤT CĨ TRONG CÂY CHÓ ĐẺ RĂNG CƯA (PHYLLANTHUS URINARIA L., EUPHORBIACEAE) LUẬN V ĂN THẠ C SĨ HOÁ HỌC THÁI NGUYÊN - 2008 ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM - NGÔ ĐỨC TRỌNG NGHIÊN CỨU HOÁ HỌC VÀ NHẬN DẠNG MỘT SỐ NHÓM CHẤT CÓ TRONG CÂY CHÓ ĐẺ RĂNG CƯA (PHYLLANTHUS URINARIA L., EUPHORBIACEAE) Chuyên ngành : Hoá hữu Mã số : 60.44.27 LUẬN V ĂN THẠ C SĨ HOÁ HỌC Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS PHẠM VĂN THỈNH THÁI NGUYÊN - 2008 LỜI CẢM ƠN Tôi xin chân thành bày tỏ lịng cảm ơn sâu sắc tới PGS.TS Phạm Văn Thỉnh - Người thầy tận tình hướng dẫn, động viên giúp đỡ tơi suốt trình học tập, nghiên cứu thực luận văn Tôi xin chân trân trọng cảm ơn TS Nguyễn Quyết Tiến, TS Phạm Thị Hồng Minh, Th.S Vũ Anh Tuấn, Th.S Hứa Văn Thao người thầy động viên giúp đỡ bước trình nghiên cứu thực luận văn Xin chân thành cảm ơn phòng hoạt chất sinh học trường Đại học Y Thái Nguyên sở sản xuất kinh doanh thuốc thành phẩm Bác sĩ Hoàng Sầm, phịng nghiên cứu cấu trúc - Viện Hóa học tận tình giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi để tơi hồn thành kế hoạch nghiên cứu Nhân dịp này, xin chân trọng cảm ơn Ban Giám hiệu, Ban lãnh đạo Khoa Hóa, Khoa Sau đại học - Trường Đại học Sư phạm Thái Nguyên tạo điều kiện thuận lợi cho hoàn thành luận văn Thái Nguyên, tháng năm 2008 Tác giả Ngô Đức Trọng LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tôi, số liệu, kết nêu luận án trung thực chưa cơng bố cơng trình khác Tác giả NGÔ ĐỨC TRỌNG DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT DÙNG TRONG LUẬN VĂN SKLM : Sắc kí lớp mỏng UV : Ultraviolet spectrocopy MS : Mass Spectroscopy EI-MS : Electron Impact Mass Spectroscopy LC-MS : Liqud chromatography - Mass Spectroscopy FT-IR : Fourier Transform Infrared Spectroscopy NMR : Nuclear Magnetic Resonance : 1H-Nuclear Magnetic Resonance H-NMR 13 : 13C- Nuclear Magnetic Resonance DEPT : Distortionless Enhancement by Polarisation Transfer COSY : Correlated Spectroscopy HSQC : Heteronuclear Spectroscopy- Quantum Coherence HMBC : Heteronuclear multiple - Bond Correlation HIV : Human Immunodeficiency Virus đvC : Đơn vị Cacbon C-NMR DANH MỤC CÁC BẢNG Trang Bảng 2.1: Khối lƣợng chất tổng số đƣợc chiết phân đoạn chó đẻ cƣa (Phyllanthus urinaria L)………………………… ……….26 Bảng 2.2: Phát nhóm chất chó đẻ cƣa…………………27 Bảng 2.3: Kết thử hoạt tính sinh học dịch chiết thơ từ chó đẻ cƣa (Phyllanthus urinaria L)………………… ……………… … 29 Bảng 2.4: Số liệu phổ 13C-NMR (CDCl3, 125Mhz) chất PH-1 chó đẻ cƣa (Phyllanthus urinaria L)………………… ……… ….30 Bảng 2.5: Phổ 1H-NMR 13C-NMR chất PE-3………… ……………….32 Bảng 3.1: Số liệu phổ 13 C-NMR (CDCl3, 125Mhz) PH-1 chó đẻ cƣa (Phyllanthus urinaria L) phổ  -sitosterol [15]….… 40 Bảng 3.2: Số liệu phổ NMR PE-1 số liệu phổ NMR phần mềm ACD/NMR 5-hidroxymetylfufural 44 Bảng 3.3: Số liệu phổ NMR PE-2 số liệu phổ NMR phần mềm ACD/NMR axit gallic 48 Bảng 3.4: Số liệu phổ NMR PE-3 số liệu phổ phần mềm ACD/NMR chất kampherol 52 DANH MỤC CÁC HÌNH Trang Hình 1.1: Cây chó đẻ cƣa (Phyllanthus urinaria L, Euphorbiaceae Hình 2.1: Đƣờng kính vùng ức chế xung quanh giếng thạch (mm) theo phƣơng phƣơng pháp khuyếch tán thạch 28 Hình 3.1: Phổ FT-IR -sitosterol (PH-1) .36 Hình 3.2: Phổ 1H-NMR -sitosterol (PH-1) 37 Hình 3.3: Phổ 13C-NMR ATP  -sitosterol (PH-1) 38 Hình 3.4: Phổ 1H-NMR-DMSO PE-1 42 Hình 3.5: Phổ 13C-NMR-DMSO PE-1 43 Hình 3.6: Phổ 1H-NMR-DMSO PE-2 46 Hình 3.7: Phổ 13C-NMR-DMSO PE-2 47 Hình 3.8: Phổ 1H-NMR-AcetoneD6 PE-3 50 Hình 3.9: Phổ 13C-NMR-AcetoneD6 PE-3 51 DANH MỤC CÁC SƠ ĐỒ Sơ đồ 2.1: Quy trình ngâm chiết mẫu 26 MỤC LỤC Lời cảm ơn Lời cam đoan Danh mục chữ viết tắt dùng luận văn Danh mục bảng Danh mục hình sơ đồ MỞ ĐẦU CHƢƠNG I TỔNG QUAN 1.1 Mô tả thực vật 1.2 Tác dụng sinh học chi Phyllanthus 1.2.1 Một số công dụng chi Phyllanthus 1.2.2 Một số tác dụng dƣợc lý chi Phyllanthus .5 1.3 Tình hình nghiên cứu hố học thực vật chi Phyllanthus 1.3.1 Một số đại diện nhóm tecpenoit 1.3.2 Một số đại diện khung axit 1.3.3 Một số đại diện Lignan .9 1.3.4 Một số đại diện khung flavonoit 11 1.3.5 Một số hợp chất phenolic khác 12 1.3.6 Một số hợp chất nhóm ankaloit .15 1.4 Tình hình nghiên cứu hóa học loài Phyllanthus urinaria L 16 CHƢƠNG II THỰC NGHIỆM 23 2.1 Đối tƣợng phƣơng pháp nghiên cứu 23 2.1.1 Thu mẫu cây, xác định tên khoa học phƣơng pháp xử lý mẫu 23 2.1.2 Phƣơng pháp phân lập hợp chất từ dịch chiết 23 2.1.3 Phƣơng pháp khảo sát xác định cấu trúc hoá học hợp chất 24 2.2 Dụng cụ, hoá chất thiết bị nghiên cứu 24 2.2.1 Dụng cụ hoá chất 24 2.2.2 Thiết bị nghiên cứu 25 2.3 Các dịch chiết từ chó đẻ cƣa (Phyllanthus urinaria L) 25 2.3.1 Các dịch chiết .25 2.3.2 Khảo sát định tính dịch chiết 27 2.3.3 Thử hoạt tính sinh học 27 2.4 Phân lập, tinh chế chất từ 29 2.4.1 Dịch chiết n-hexan 29 2.4.2 Dịch chiết etylaxetat (PE) .31 2.4.2.1 Chất PE-1 31 2.4.2.2 Chất PE-2 31 2.4.2.3 Chất PE-3 32 CHƢƠNG III THẢO LUẬN KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 34 3.1 Nguyên tắc chung 34 3.2 Xác định định tính nhóm chất thiên nhiên 34 3.3 Phân lập nhận dạng hợp chất 35 3.3.1 -sitosterol (PH-1) .35 3.3.2 5-Hydroxymetylfufural (PE-1) .41 3.3.3 Axit gallic (PE-2) 45 3.3.4 Kampherol (PE-3) 49 3.4 Thử hoạt tính sinh học 53 KẾT LUẬN 55 DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH ĐÃ CƠNG BỐ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN VĂN .56 TÀI LIỆU THAM KHẢO 57 PHỤ LỤC .62 MỞ ĐẦU Từ xưa đến nay, thuốc dân gian đóng vai trị quan trọng đời sống hàng ngày người Từ trước có đời thuốc tây, nhiều loài cỏ tự nhiên sử dụng dân gian để chữa bệnh có hiệu Rất nhiều loại bệnh tật chữa khỏi nhờ thảo dược Ngày hợp chất tự nhiên phân lập từ cỏ ứng dụng rộng rãi nhiều ngành công nghiệp, nông nghiệp, chúng dùng để sản xuất thuốc chữa bệnh, thuốc bảo vệ thực vật, làm nguyên liệu cho ngành công nghiệp thực phẩm mỹ phẩm v.v Mặc dù công nghệ tổng hợp hoá dược ngày phát triển mạnh mẽ, tạo biệt dược khác sử dụng công tác phịng, chữa bệnh Điều góp phần làm tăng tuổi thọ người, song nhu cầu sử dụng cỏ để làm thuốc ngày tăng lên, khoa học đại soi sáng, chúng có chứa biệt dược khó tổng hợp Mặt khác việc dùng thuốc nam không gây tác dụng phụ Có nhiều mơn khoa học nghiên cứu thuốc đời Việc nghiên cứu thuốc giúp cho hiểu rõ thành phần cấu trúc hóa học, hoạt tính sinh học, tác dụng dược lí thuốc Trên sở nghiên cứu tạo chất có hoạt tính sinh học cao mong muốn để làm thuốc chữa bệnh Cây chó đẻ cưa thuốc sử dụng từ lâu giới Việt Nam Trong Y học dân tộc nhân dân dùng làm thuốc để chữa nhiều loại bệnh như: đau viêm họng, đinh râu, mụn nhọt, viêm da lở ngứa, sản hậu ứ huyết đau bụng, trẻ em tưa lưỡi, chàm má, bệnh viêm gan,… có hiệu Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 87 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 88 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 89 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 90 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 91 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 92 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 93 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 94 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 95 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 96 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 97 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 98 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 99 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 100 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 101 TRƯỜNG ĐH Y KHOA TN CỘNG HOÀ XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM BỘ MÔN VI SINH Độc lập - Tự - Hạnh phúc KẾT QUẢ KIỂM TRA DƢỢC TÍNH KHÁNG KHUẨN CỦA DƢỢC LIỆU Ngày kiểm tra: 19/05/2008 Kết quả: Đƣờng kính vùng ức chế xung quanh giếng thạch (mm) Dƣợc liệu Staphylococcus aureus E.coli Salmonella typhi cặn EtOAc 34 23 40 (Trọng) cặn nƣớc 29 18 32 (Trọng) - Kết luận: Các dịch chiết thơ có hoạt tính với vi sinh vật kiểm định Cụ thể là: - - Dịch chiết nước dịch chiết etylaxetat chó đẻ cưa có hoạt tính mạnh với khuẩn Staphylococcusauresu (Tụ cầu vàng), E.coli (Thực khuẩn đường ruột) Salmonella typhi (Thương hàn) - Dịch chiết nước có hoạt tính mạnh so với dịch chiết etylaxetat - Dịch chiết nước có hoạt tính mạnh với khuẩn Salmonella typhi (Thương hàn) Thái Nguyên, ngày 20 tháng 05 năm 2008 Phó trƣởng mơn Vi sinh Ts Nguyễn Đăng Trung Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn ... Nam Chúng tơi chọn chó đẻ cưa (Phyllanthus urinaria L.) làm đối tượng nghiên cứu cho cơng trình nghiên cứu Tên đề tài là: ? ?Nghiên cứu hóa học nhận dạng số nhóm chất có chó đẻ cưa (Phyllanthus urinaria... nghiên cứu, nước ta có cơng trình nghiên cứu thành phần hóa học dược lí học chó đẻ cưa Với mục đích nghiên cứu tìm hiểu thành phần hóa học hợp chất có hoạt tính sinh học chó đẻ cưa, góp phần làm...ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM - NGÔ ĐỨC TRỌNG NGHIÊN CỨU HỐ HỌC VÀ NHẬN DẠNG MỘT SỐ NHĨM CHẤT CÓ TRONG CÂY CHÓ ĐẺ RĂNG CƯA (PHYLLANTHUS URINARIA