Xây dựng tiêu chuẩn cho dược liệu chó đẻ thân xanh

ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG CỘNG HOÀ XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM TRƯỜNG ĐHSP Độc lập - Tự - Hạnh phúc ******************* KHOA HÓA ********** NHIỆM VỤ KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP Họ tên sinh viên: Trần Thị Thủy Tiên Lớp : 09 CHD Tên đề tài: Xây dựng tiêu chuẩn cho dược liệu Chó đẻ thân xanh (Phyllanthus amarus Schum et Thonn) Dụng cụ, thiết bị hóa chất 2.1 Dụng cụ, thiết bị Bộ chiết soxhlet, máy đo sắc kí khí kết hợp với khối phổ (GC-MS) (Trung tâm kỹ thuật đo lường chất lượng II, số 2, Ngơ Quyền, Đà Nẵng), tủ sấy, lị nung, cân phân tích, cốc thuỷ tinh, bình tam giác, ống nghiệm, bếp điện, bếp cách thuỷ, cốc sứ, loại pipet, bình định mức, bình hút ẩm, giấy lọc,… 2.2 Hóa chất - Hóa chất hữu cơ: Ethanol 96%, chloroform, methanol - Hóa chất vơ cơ: acid sulfuric 10% (TT), amoni hydroxyd 10% , acid hydrocloric (TT) bột magnesi, dung dịch gelatin 1% (TT), dung dịch sắt (III) clorid 5% (TT)… Nội dung nghiên cứu 3.1 Nghiên cứu lí thuyết Tổng quan tài liệu đặc điểm hình thái thực vật, thành phần hố học, ứng dụng chó đẻ thân xanh, trao đổi kinh nghiệm với thầy, cô bạn 3.2 Nghiên cứu thực nghiệm  Phương pháp lấy mẫu: Tồn Chó đẻ thân xanh sau thu hái về, tiến hành loại tạp sơ Rửa thật nước, để nước, cắt khúc dài khoảng cm sau phơi khô nghiền thành bột mịn  Phương pháp trọng lượng để xác định độ ẩm, hàm lượng tro, định lượng chó đẻ thân xanh  Chiết phương pháp soxhlet với dung môi ethanol 96%  Xác định thành phần hợp chất dịch chiết ethanol từ chó đẻ thân xanh phương pháp sắc kí khí ghép khối phổ (GC-MS)  Các phương pháp thử nghiệm hoạt tính sinh học  Các phương pháp phân tích sơ thành phần hóa thực vật  Các phương pháp định tính số nhóm chất có Chó đẻ thân xanh Giáo viên hướng dẫn: ThS Đỗ Thị Thúy Vân Ngày giao đề tài: 10/4/2012 Ngày hoàn thành: 20/5/2013 Chủ nhiệm khoa PGS.TS Lê Tự Hải Giáo viên hướng dẫn ThS Đỗ Thị Thúy Vân Sinh viên hoàn thành nộp báo cáo cho Khoa ngày tháng năm 2013 Kết điểm đánh giá: Ngày tháng năm 2013 CHỦ TỊCH HỘI ĐỒNG (Ký ghi rõ họ tên) ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM KHOA HÓA  TRẦN THỊ THỦY TIÊN Tên đề tài: XÂY DỰNG TIÊU CHUẨN CHO DƯỢC LIỆU CHÓ ĐẺ THÂN XANH (Phyllanthus amarus Schum et Thonn) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP CỬ NHÂN HÓA DƯỢC Đà Nẵng – 2013 ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM KHOA HÓA  Tên đề tài: XÂY DỰNG TIÊU CHUẨN CHO DƯỢC LIỆU CHÓ ĐẺ THÂN XANH (Phyllanthus amarus Schum et Thonn) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP CỬ NHÂN HÓA DƯỢC Sinh viên thực : Trần Thị Thủy Tiên Lớp : 09CHD Giáo viên hướng dẫn : ThS Đỗ Thị Thúy Vân Đà Nẵng – 2013 DANH MỤC BẢNG Bảng Tên bảng Trang Bảng 3.1 Thành phần hóa học cắn chiết chó đẻ thân xanh 29 Bảng 3.2 Kết thử hoạt tính kháng sinh 32 Bảng 3.3 Kết thử hoạt tính độc tế bào 32 Bảng 3.4 Kết khảo sát độ ẩm 36 Bảng 3.5 Kết khảo sát hàm lượng tro 36 Bảng 3.6 Kết khảo sát hàm lượng chất chiết dược liệu 37 DANH MỤC HÌNH Hình Tên hình Trang Hình 1.1 Hình ảnh chó đẻ thân xanh Hình 1.2 Hình ảnh hoa, chó đẻ thân xanh Hình 1.3 Hình ảnh chó đẻ trịn Hình 2.1 Bột chó đẻ thân xanh 16 Hình 2.2 Bộ dụng cụ chiết soxhlet 18 Hình 3.1 Sắc kí đồ biểu thị thành phần hóa học cắn chiết chó đẻ thân xanh 29 Hình 3.2 Định tính flavonoid 33 Hình 3.3 Định tính poliphenol 33 Hình 3.4 Định tính tanin 34 Hình 3.5 Định tính ankaloid 34 Hình 3.6 Sắc kí đồ lớp mỏng 35 MỞ ĐẦU Lí chọn đề tài Từ xư đến nay, thuốc dân gian đóng vai trị quan trọng đời sống hàng ngày người Từ trước có đời thuốc tây, nhiều lồi cỏ tự nhiên sử dụng dân gian để chữa bệnh có hiệu Rất nhiều loại bệnh tật chữa khỏi nhờ thảo dược Theo cách đánh giá WHO, Việt Nam không nước có bề dày truyền thống phát triển y học cổ truyền từ hàng nghìn năm nay, mà thực nước có tiềm y học cổ truyền đạt thành công ban đầu vấn đề kết hợp y học cổ truyền với y học đại Những thành tựu góp phần tích cực việc giảm nhẹ chi phí y tế, nâng cao hiệu điều trị số bệnh mạn tính Tuy nhiên theo thống kê Cục Quản Lý Dược Việt Nam, thuốc từ dược liệu chiếm khoảng 30% tổng số thuốc đăng ký nước, 90% nguyên liệu sản xuất thuốc nước phải nhập Vì thế, chắn khơng tránh khỏi việc làm giả, làm nhái nguyên liệu dược liệu Điều ảnh hưởng nghiêm trọng đến sức khỏe người sử dụng, gây lòng tin người sử dụng chế phẩm cỏ từ dược liệu Vì vậy, để phát huy tiềm nguồn dược liệu đáp ứng u cầu chăm sóc sức khỏe nhân dân địi hỏi quan chức cần có giải pháp hiệu Một số vấn đề xây dựng tiêu chuẩn cho dược liệu Đây yêu cầu cấp bách nhà nghiên cứu dược liệu Để sử dụng dược liệu làm ngun liệu thuốc địi hỏi người ta phải xây dựng tiêu chuẩn chất lượng, đồng thời xây dựng phương pháp thử để đánh giá tiêu chuẩn Chó đẻ thân xanh, dược liệu quý có tác dụng chữa trị nhiều bệnh vàng da, rối loạn tiêu hóa, sốt, đau mắt, tác dụng sát khuẩn, lợi tiểu, phù, đái tháo đường, đặc biệt với khả khôi phục chức gan trường hợp suy giảm chức gan sử dụng nhiều bia rượu cần phải có tiêu chuẩn chất lượng cụ thể trước dùng làm thuốc Vì thế, vấn đề“ Xây dựng tiêu chuẩn cho dược liệu Chó đẻ thân xanh” vấn đề cấp thiết Trong phạm vi khoá luận tốt nghiệp xin đề cập đến vấn đề có liên quan đến dược liệu Chó đẻ thân xanh tổng quan thực vật học, thành phần hóa học, tác dụng dược lý, đề nghị tiêu chuẩn kiểm nghiệm Mục đích nghiên cứu - Xác định thành phần hố học hoạt tính sinh học dịch chiết Chó đẻ thân xanh - Xây dựng tiêu chuẩn cho dược liệu Chó đẻ thân xanh Đối tượng phạm vi nghiên cứu Tồn Chó đẻ thân xanh thu hái xã Hòa Khương, huyện Hòa Vang, thành phố Đà Nẵng dịch chiết ethanol từ chó đẻ thân xanh phương pháp chiết soxhlet Các phương pháp nghiên cứu + Nghiên cứu lý thuyết: Phương pháp nghiên cứu hợp chất tự nhiên, tổng quan tài liệu đặc điểm hình thái thực vật, thành phần hoá học, ứng dụng Chó đẻ thân xanh + Các phương pháp nghiên cứu thực nghiệm:  Phương pháp lấy mẫu: Toàn Chó đẻ thân xanh sau thu hái về, tiến hành loại tạp sơ Rửa thật nước, để nước, cắt khúc dài khoảng cm sau phơi khơ nghiền thành bột mịn  Phương pháp trọng lượng để xác định độ ẩm, hàm lượng tro, định lượng chó đẻ thân xanh  Chiết phương pháp soxhlet với dung môi ethanol 96%  Xác định thành phần hợp chất dịch chiết ethanol từ chó đẻ thân xanh phương pháp sắc kí khí ghép khối phổ (GC-MS)  Các phương pháp thử nghiệm hoạt tính sinh học  Các phương pháp phân tích sơ thành phần hóa thực vật  Các phương pháp định tính số nhóm chất có Chó đẻ thân xanh Bố cục đề tài Đề tài gồm có 44 trang có bảng 11 hình Phần mở đầu (3 trang), kết luận kiến nghị (1 trang), tài liệu tham khảo (2 trang) phần phụ lục Nội dung đề tài chia làm chương: Chương 1- Tổng quan (12 trang) Chương 2- Những nghiên cứu thực nghiệm (13 trang) Chương 3- Kết bàn luận (13 trang) CHƯƠNG - TỔNG QUAN 1.1 Giới thiệu chó đẻ thân xanh [2], [5], [6], [9], [10] 1.1.1 Sơ lược nguồn gốc chó đẻ thân xanh giới thực vật [9], [10] 10 Chó đẻ thân xanh (Phyllanthus amarus Schum et Thonn) thuộc họ thầu dầu (Euphorbiaceae), theo nghiên cứu họ có khoảng 300 chi, có 200 Mỹ, 100 châu Phi, 70 từ Madagascar lại Châu Á Châu Úc (Webster, 1994) Nhiều lồi họ có nguồn gốc từ Bắc, Trung Nam Mỹ (Unander et al, 1995) Việc phân loại loài chi dựa hình thái phân bố địa lí Cây chó đẻ thân xanh phân loại dựa loài P Abnormis, loài đặc hữu vùng biển Texas Florida miền Nam Hoa Kỳ Do đó, nhiều khả P amarus có nguồn gốc khu vực Ca-ri-bê thuộc miền Nam nước Mỹ lây lan khắp vùng nhiệt đới (Webster, 1957) [9] Mặt khác có nghiên cứu cho khơng tìm thấy nguồn gốc địa lý xác lồi Lồi có nguồn gốc từ vùng nhệt đới châu Mỹ (Cabieses năm 1993; Morton, 1981; Tirimana,1987), Philippines Ấn Độ (Cabieses, năm 1993, Chevallier, 2000)[10] 1.1.2 Cây chó đẻ thân xanh [2], [5], [6], [9], [10] 1.1.2.1 Tên gọi [2], [5], [6], [9], [10] Chó đẻ thân xanh hay gọi Diệp hạ châu đắng [2], [5] Tên khoa học là: Phyllanthus amarus Schum et Thonn, thuộc họ thầu dầu (Euphorbiaceae) họ có khoảng 300 chi với 6500 loài [2], [6], [9], [10] Tên khác: Ở nhiều nước giới chó đẻ thân xanh gọi với nhiều tên khác như: [9], [10] - Bhoomyaamalakee, Taamalakee Bhoodhatree (tên tiếng Phạn vùng Ayurveda thuộc Ấn Độ) - Black catnip, Carry me seed, Child pick-a-black (Anh) - Poudre de plomb (Pháp) - Yerba magica (Tây Ban Nha) - Chanca piedra, djari-bita (Mỹ) - Prakphle (Capuchia) Theo y sư Tuệ Tĩnh “ đơng dược thần thảo tịng thư” có tên “chó đẻ” vùng nơng thơn, chó sau đẻ xong thường vườn tìm diệp hạ châu 38 Bảng 3.2 Kết thử hoạt tính kháng sinh Như mẫu thử khơng có hoạt tính kháng chủng vi sinh vật kiểm định nồng độ nhỏ 128 mg/ml 3.2.2 Thử hoạt tính độc tế bào Kết thử hoạt tính độc tế bào trình bày bảng 3.3 Bảng 3.3 Kết thử hoạt tính độc tế bào 39 Mẫu thử cắn chiết thu từ chó đẻ thân xanh có hoạt tính gây độc tế bào dòng Hep với giá trị IC50 113,23 μg/ml 3.3 Kết thực số tiêu kiểm nghiệm để xây dựng tiêu chuẩn dược liệu Chó đẻ thân xanh 3.3.1 Kết định tính 3.3.1.1 Định tính flavonoid poliphenol Lấy g bột dược liệu, thêm 50 ml ethanol 90% (TT), lắc đều, đun hồi lưu cách thủy 30 phút Lọc Cơ dịch lọc cịn khoảng 40 ml, chia thành phần Phần 1: Chia vào ống nghiệm - Ống 1: Làm ống đối chiếu - Ống 2: Thêm – giọt acid hydrocloric (TT) bột magnesi (TT),đặt cách thủy vài phút Dung dịch chuyển từ màu vàng sang màu hồng (xem hình 3.2) Hình 3.2 Định tính flavonoid (1): Mẫu đối chiếu (2): Mẫu sau thêm Mg/HCl Như dịch chiết Chó đẻ thân xanh có nhóm flavonoid Phần 2: Chia vào ống nghiệm - Ống 1: Làm ống đối chiếu - Ống 2: Thêm – giọt dung dịch sắt (III) clorid 5% (TT) Xuất màu xanh thẫm (xem hình 3.3) Như dịch chiết Chó đẻ thân xanh có nhóm poliphenol Hình 3.3 Định tính poliphenol (1): Mẫu đối chiếu (2): Mẫu sau thêm dd FeCl 40 3.3.1.2 Định tính tanin Lấy g bột dược liệu, thêm ml nước, đun sôi vài phút lọc Lấy 2ml dịch lọc nguội thêm – giọt dung dịch gelatin 1% (TT) Xuất tủa bơng trắng (xem hình 3.4) Hình 3.4 Định tính tanin Như dịch chiết Chó đẻ thân xanh có nhóm tanin 3.2.1.3 Định tính ankaloit - Phương pháp thử: Lấy g bột dược lệu cho vào bình nón có nút mài, thấm ẩm bột dược liệu dung dịch amoni hydroxyd 10% (TT),sau 15 phút thêm 10 ml cloroform (TT) Lắc khoảng 15 phút để qua đêm Lọc qua giấy lọc vào bình gạn,thêm ml dung dịch acid sulfuric 10% (TT), lắc – phút, gạn lấy lớp acid vào ống nghiệm để làm phản ứng sau cho kết sau (xem hình 3.4) + Ống 1: Làm ống đối chiếu + Ống 2: Thêm 2-3 giọt thuốc thử Mayer (TT), xuất tủa màu vàng + Ống 3: Thêm 2-3 giọt thuốc thử Dragendorff (TT), xuất tủa đỏ cam + Ống 4: Thêm 2-3 giọt thuốc thử Bouchardat (TT), xuất tuả nâu Như dịch chiết Chó đẻ thân xanh có nhóm ankaloid Hình 3.5 Định tính ankaloid (1): Mẫu đối chiếu (2): Mẫu sau cho thuốc thử Mayer (3): Mẫu sau cho thuốc thử Dragendorff (4): Mẫu sau cho thuốc thử Bouchardat - Phương pháp sắc ký lớp mỏng (Phụ lục 5.4) Sắc kí lớp mỏng (SKLM): 41 + Bản mỏng: Silica gel GF254 + Dung môi khai triển: cloroform – methanol (7:3) + Dung dịch thử: Lấy g bột dược liệu vào bình nón nút mài, thấm ẩm bột dược liệu dung dịch amoni hydroxyd 10% (TT) phút Lắc lần với cloroform (TT), lần 20 ml Gộp dịch chiết cloroform, lọc, bay cách thủy đến ml, dùng làm dung dịch thử Cách tiến hành: Chấm riêng biệt lên mỏng 20 µl dung dịch Sau triển khai sắc ký, lấy mỏng ra, để khô nhiệt độ phòng, phun thuốc thử Dragendorff (TT) Để khơ tự nhiên ngồi khơng khí Thu sắc kí đồ (xem hình 3.6) Hình 3.6 Sắc kí đồ lớp mỏng Lớp mỏng có vết: có giá trị Rf sau: 0,12 – 0,23 – 0,25 – 0,61 – 0.89 So với Rf mẫu chuẩn (0,13 – 0,21 – 0,27 – 0,58 – 0,93) [10] Nhận xét: Lớp mỏng có vết tách tương đối xa khơng có tượng trùng vết chứng tỏ dịch chiết Chó đẻ thân xanh khơng lẫn tạp chất chứng tỏ dịch chiết có nhóm ankaloit 3.3.2 Thử độ tinh khiết 3.3.2.1 Độ ẩm Độ ẩm xác định cách đo máy đo độ ẩm AMB50 công ty Cổ Phần Dược Phẩm Danapha Độ ẩm chung độ ẩm trung bình lần đo 42 Bảng 3.4 Kết khảo sát độ ẩm Lần đo Khối lượng bột (g) Độ ẩm (%) 2,000 5,060 2,009 5,040 2,007 5,060 2,000 5,050 2,008 5,040 Độ ẩm trung bình 5,050 Vậy độ ẩm trung bình 5,050% 3.3.2.2 Hàm lượng tro toàn phần Sử dụng phương pháp tro hóa mẫu.Lấy mẫu bột chó đẻ thân xanh, đem nung lò nung nhiệt độ 400 - 4500C Hàm lượng tro hàm lượng tro trung bình mẫu Bảng 3.5 Kết khảo sát hàm lượng tro STT m1 (g) m2 (g) m3 (g) % tro (%) 44,004 2,006 44,137 6,630 44,534 2,015 44,660 6,253 40,263 2,012 40,389 6,262 41,036 2,010 41,175 6,915 42,251 2,005 42,385 6,683 Hàm lượng tro trung bình 6,549 Vậy hàm lượng tro trung bình là: 6,549 % Căn vào tiêu chuẩn kiểm nghiệm dược liệu Chó đẻ thân xanh Dược điển Việt Nam IV độ ẩm: không 12%, hàm lượng tro: khơng q 20% độ ẩm hàm lượng tro Chó đẻ thân xanh thu hoạch xã Hòa Khương, huyện Hòa Vang, 43 thành phố Đà Nẵng phù hợp với tiêu chuẩn độ ẩm trung bình 5,05%, hàm lượng tro trung bình 6,549% 3.3.3 Định lượng Tiến hành theo phương pháp chiết nóng : Bột dược liệu sau cân, đun cách thủy sôi nhẹ hồi lưu với dung môi ethanol 96%, khối lượng cắn thu từ dich chiết sấy cân khối lượng Hàm lượng chất chiết dược liệu hàm lượng trung bình sau lần tiến hành: Bảng 3.6 Kết khảo sát hàm lượng chất chiết dược liệu Lần m1(g) m2(g) % hàm lượng (%) 3,986 0,377 9,458 4,098 0,447 10,908 3,983 0,374 9,390 Hàm lượng trung bình chất chiết 9,919 Như hàm lượng trung bình chất chiết dược liệu 9,919% Kết luận: Căn vào tiêu chuẩn kiểm nghiệm dược liệu Diệp hạ châu đắng Dược điển Việt Nam IV tiêu định lượng chất chiết dược liệu : khơng 7%, hàm lượng chất chiết Chó đẻ thân xanh thu hoạch xã Hòa Khương, huyện Hòa Vang, thành phố Đà Nẵng phù hợp với tiêu chuẩn hàm lượng chất chiết 9,919% 3.3.4 Kết phân tích sơ thành phần hóa thực vật Chó đẻ thân xanh 44 Kết định tính dịch chiết Nhóm hợp chất Thuốc thử Cách thực Dịch chiết Dịch chiết cồn nước Phản ứng Dịch dương tính chiết Khơng ether thủy phân Chất béo Nhỏ dd lên Vết giấy mờ Thuỷ phân Không thủy phân Kết định tính Thủy chung phân (+) Có (+) Có (++) Có (+++) Có Xanh Carotenoid H2 SO4 dương hay lục→Xanh dương Tinh dầu Bốc tới Có mùi cắn thơm Đỏ nâu-tím Triterpenoid tự Liebermann- lớp có Burchard màu xanh lục Alkaloid Coumarin T/thử chung alkaloid Kết tủa Phát quang Phát quang kiềm mạnh (±) (+) (++) (±) Có (-) (±) (-) Có (-) (-) Khơng có (-) Có Dd kiềm Anthraglycosid KOH 10% có màu (-) hồng tới đỏ Flavonoid Glycosid tim Mg/HCl đđ Thuốc thử vòng lacton T/thử đường 2-desoxy Anthocyanosid HCl Dd có màu (++) (++) (++) Hồng (-) (-) (-) Khơng có Màu xanh (-) (-) Khơng có Đỏ (+) (-) hồng tới đỏ (+) (-) Có 45 Proanthocyanidin KOH Xanh (+) (-) Có HCl/t0 Đỏ (-) (-) Khơng có (++) (-) Có Xanh rêu Tanin Dd FeCl3 hay xanh đen Đỏ nâu-tím Triterpenoid thủy Liebermann- lớp có phân Burchard màu xanh (++) (-) Có lục Saponin Tt Có vịng Liebermann tím nâu (++) (++) Có Tạo bọt (-) (+) Có Na2 CO3 Sủi bọt (±) (-) Nghi ngờ T/thử Tủa đỏ Fehling gạch (+++) (++) Có (-) Khơng có Lắc mạnh với dd nước Acid hữu Chất khử Hợp chất Pha loãng polyuronic với cồn 90% Tủa trắng-vàng nâu Đánh giá theo mức sau: (-) Khơng có (±) Nghi ngờ (+) Có (++) Có (+++) Có nhiều (++++) Có nhiều Ghi chú: Có thể có phản ứng khơng thực Khơng có mặt nhóm hợp chất dịch chiết 3.4 Xây dựng tiêu chuẩn dược liệu 3.4.1 Tiêu chuẩn đề nghị Căn vào nội dung trình bày trên, đề nghị tiêu chuẩn kiểm nghiệm dược liệu Chó đẻ thân xanh sau: 46 - Mơ tả Cây cao 40 - 80 cm, thân tròn, màu xanh, phân nhánh đều, nhiều Lá mọc so le xếp thành dãy xít trơng kép hình lơng chim Phiến hình bầu dục, dài từ – 10 mm, rộng – mm, màu xanh sẫm trên, màu xanh nhạt mặt Hoa đực hoa mọc kẽ lá, màu lục nhạt, khơng có cánh hoa Hoa đực có cuống ngắn 1- mm, đài 5, có tuyến mật, nhị 3, nhị dính Hoa có cuống dài hoa ực Q nang, nhẵn, hình cầu, đường kính 1,8 – mm, có đài tồn Chứa hạt hình tam giác, đường kính mm, hạt có sọc dọc lưng - Định tính: phần 2.5.1 - Độ ẩm: không 12% (phần 2.5.2.1 trên) - Tro tồn phần: khơng q 20% (phần 2.5.2.2 trên) - Định lượng: Hàm lượng chất chiết dược liệu: khơng 7% tính theo dược liệu khô (phần 2.5.3 trên) - Chế biến Thu hái quanh năm tốt vào mà hè Thu hái rửa sạch, dùng tươi cắt đoạn phơi khô, lấy ép thành bánh - Bảo quản: Để nơi khơ mát, tránh ẩm, mốc, mọt - Tính vị qui kinh: Vị đắng, tính mát Vào kinh phế thận - Cơng chủ trì: Tiêu độc, sát trùng, tán ứ, thông huyết , lợi tiểu Dùng tiểu tiện bí tắt, tắc sữa, kinh bế, mụn nhọt, lở ngứa da - Cách dùng, liều lượng: Ngày – 16 g, sắc uống Dùng ngoài: lấy tươi giã nát, đắp vào chỗ lở loét vết thương trùng cắn 3.4.2 Giải thích tiêu chuẩn Phần mơ tả thực vật, định tính, độ ẩm, định lượng, chế biến, bảo quản, tính vị, quy kinh, công chủ trị, cách dùng liều lượng giữ nguyên theo tiêu chuẩn Dược Điển Việt Nam IV Ngồi cịn bổ sung thêm số tiêu sau: Trong phần định lượng, định lượng phyllanthin hypophyllanthin phương pháp HPLC dựa vào phổ chuẩn chúng Ngoài ra, vấn đề dư lượng thuốc trừ sâu dược liệu vấn đề quan tâm nên xây dựng 47 tiêu chuẩn cho dược liệu cần bổ sung phần dư lượng thuốc trừ sâu dược liệu Đây tiêu quan trọng 48 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Qua nghiên cứu thực nghiệm, thu số kết sau: - Bằng phương pháp GC-MS định danh thành phần hóa học số hợp chất cắn chiết chó đẻ thân xanh: – Coumaranone(0,6%); 1,2,3Benzenetriol (0,81%); 4-((1E)-3-Hydroxy-1-propenyl)-2-methoxyphenol (0,57%); n-Hexadecanoic acid (2,70%); Phytol (0,31%); 9,12,15-Octadecatrienoic acid, (Z,Z,Z)-( 3,35%); Ethanone, 2- (1H-imidazo [4,5-b] pyridin -2-yl) -1- (4morpholyl)- (19,59%); Daphnoretin (1,07%); (3H) –Furanone, 3,4-bis (1,3benzodioxol -5- ylmethyl) dihydro-, (3R-trans)- (1,48%); – Hexacosene (1,65%); 5- Cholestene-3-ol, 24-methyl (0,36%); 1,19 – Eicosadiene (0,58%); Stigmasterol (0,96%); – Docosene (3,75%); Ursolic acid (0,28%) - Dịch chiết ethanol thu từ Chó đẻ thân xanh có hoạt tính gây độc tế bào ung thư gan hoạt tính kháng chủng vi sinh vật - Đã thực số tiêu kiểm nghiệm cho dược liệu Chó đẻ thân xanh theo Dược Điển Việt Nam IV đồng thời đưa số kiến nghị để xây dựng tiêu chuẩn cho dược liệu Chó đẻ thân xanh Bộ tiêu chuẩn xây dựng đầy đủ ứng với nhiều nguồn tài liệu tham khảo khác Tuy nhiên, tùy vào điều kiện kỹ thuật nơi mà giá trị thử nghiệm, phương pháp định tính, định lượng,…sẽ ln cập nhật, sửa đổi để phù hợp với phát triển khoa học kỹ thuật 49 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng việt [1] Đái Duy Ban (2008), Các hợp chất thiên nhiên có hoạt tính sinh học phịng chống số bệnh cho người vật nuôi, Nhà xuất Khoa học tự nhiên & công nghệ, Hà Nội [2] Võ Văn Chi (1999), Từ điển thuốc Việt Nam, Nhà xuất Y học [3] Nguyễn Văn Đàn (1985), Phương pháp nghiên cứu hóa học thuốc, Nhà xuất Y học, TP Hồ Chí Minh [4] Nguyễn Văn Đàn, Ngô Ngọc Khuyến (1999), Hợp chất thiên nhiên dùng làm thuốc, Nhà xuất Y học Hà Nội [5] Dược Điển Việt Nam IV (2009), Nhà xuất Hà Nội [6] Phan Văn Kiệm cộng , 2009 Nghiên cứu thành phần hóa học chó đẻ than xanh (phyllanthus amarus) Tạp chí Khoa học Cơng nghệ, số 3, trang 101105 [7] Trần Tứ Hiếu (2001), Hoá học phân tích, NXB Đại học quốc gia Hà Nội [8] Nguyễn Thạc Cát, Từ Vọng Nghi, Đào Hữu Vinh (1996), Cơ sở lý thuyết hóa học phân tích, Dùng cho sinh viên ngành hóa trường đại học, In lần thứ 3, Nhà xuất giáo dục Tiếng anh [9] Vishwavidyalaya, 2011 Phyllanthus amarus: Etnomedicinal uses, phytochemistry and pharmacology: A review Journal of Ethnopharmacology, 138: 286-313 [10] Vivian Esther Fernand, May 2003 Initial characterization of crude extracts from phyllanthus amarus schum and Thonn and Quassia Amara L using normal phase thin layer chromatography Master of science Louisiana State University and Agricultural and Mechanical College [11] Harikumar K B., Kuttan R., 2009 – Phyllanthus amarus Inhibits Cell Growth and Induces Apoptosis in Dalton’s Lymphoma Ascites Cell Through Activation of Caspase and Down Regulation of bcl-2 Integr Cancer Ther 50 [12] Huang R L., Y L., Ou J C., Chen C C., Hsu F., Chang C., 2003 – Screening of 25 compounds isolated from Phyllanthus specieal for anti-human hepatitis B virus in vitro, Phytother Res, 17: 449-453 51 MỤC LỤC MỞ ĐẦU Lí chọn đề tài Mục đích nghiên cứu Đối tượng phạm vi nghiên cứu Các phương pháp nghiên cứu Bố cục đề tài 8 CHƯƠNG - TỔNG QUAN 1.1 Giới thiệu chó đẻ thân xanh 1.1.1 Sơ lược nguồn gốc chó đẻ thân xanh giới thực vật 1.1.2 Cây chó đẻ thân xanh 10 1.2 Một số nghiên cứu thành phần hoá học chó đẻ thân xanh 13 1.2.1 Thành phần hóa học 13 1.2.2 Một số hoạt chất có hoạt tính sinh học cao chó đẻ thân xanh 14 1.3 Giá trị sử dụng chó đẻ thân xanh 15 1.3.1 Y dược dân gian 15 1.3.2 Các nghiên cứu dược học chó đẻ thân xanh 16 CHƯƠNG – NHỮNG NGHIÊN CỨU THỰC NGHIỆM 22 2.1 Nguyên liệu, dụng cụ, hoá chất 22 2.1.1 Thu gom nguyên liệu 22 2.1.2 Xử lí nguyên liệu 22 2.1.3 Thiết bị - dụng cụ hóa chất 22 2.2 Sơ đồ nghiên cứu 23 2.3 Xác định thành phần hợp chất từ chó đẻ thân xanh phương pháp GC-MS 23 2.3.1 Phương pháp chiết soxhlet 23 2.4 Thử hoạt tính sinh học 25 2.4.1 Hoạt tính kháng sinh 25 2.4.2 Hoạt tính độc tế bào 25 52 2.5 Xây dựng tiêu chuẩn cho dược liệu Chó đẻ thân xanh 25 2.5.1 Định tính 25 2.5.2 Thử tinh khiết 27 2.5.3 Định lượng 29 2.5.4 Phân tích sơ thành phần hóa thực vật 29 CHƯƠNG - KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 35 3.1 Kết thành phần số hợp chất dịch chiết Chó đẻ thân xanh 35 3.2 Thử hoạt tính sinh học cắn chiết thu từ Chó đẻ thân xanh 37 3.2.1 Thử hoạt tính kháng sinh 37 3.2.2 Thử hoạt tính độc tế bào 38 3.3 Kết thực số tiêu kiểm nghiệm để xây dựng tiêu chuẩn dược liệu Chó đẻ thân xanh 39 3.3.1 Kết định tính 39 3.3.2 Thử độ tinh khiết 41 3.3.3 Định lượng 43 3.3.4 Kết phân tích sơ thành phần hóa thực vật Chó đẻ thân xanh 43 3.4 Xây dựng tiêu chuẩn dược liệu 45 3.4.1 Tiêu chuẩn đề nghị 45 3.4.2 Giải thích tiêu chuẩn 46 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 48 TÀI LIỆU THAM KHẢO 49 ... thực số tiêu kiểm nghiệm cho dược liệu Chó đẻ thân xanh theo Dược Điển Việt Nam IV đồng thời đưa số kiến nghị để xây dựng tiêu chuẩn cho dược liệu Chó đẻ thân xanh Bộ tiêu chuẩn xây dựng đầy... hố học hoạt tính sinh học dịch chiết Chó đẻ thân xanh - Xây dựng tiêu chuẩn cho dược liệu Chó đẻ thân xanh Đối tượng phạm vi nghiên cứu Toàn Chó đẻ thân xanh thu hái xã Hòa Khương, huyện Hòa... đề xây dựng tiêu chuẩn cho dược liệu Đây yêu cầu cấp bách nhà nghiên cứu dược liệu Để sử dụng dược liệu làm ngun liệu thuốc địi hỏi người ta phải xây dựng tiêu chuẩn chất lượng, đồng thời xây dựng