Nghiên cứu phân lập, tuyển chọn và tạo chế phẩm thô của vi sinh vật sinh enzyme phytase từ đất thuộc địa bàn huyện hòa vang thành phố đà nẵng

ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM KHOA SINH – MÔI TRƢỜNG LÊ TRẦN DIỆU LINH NGHIÊN CỨU PHÂN LẬP, TUYỂN CHỌN VÀ TẠO CHẾ PHẨM THÔ CỦA VI SINH VẬT SINH ENZYME PHYTASE TỪ ĐẤT THUỘC ĐỊA BÀN HUYỆN HÒA VANG – THÀNH PHỐ ĐÀ NẴNG Đà Nẵng - năm 2018 i LỜI CAM ĐOAN Tôi cam đoan đề tài: “Nghiên cứu phân lập, tuyển chọn tạo chế phẩm thô vi sinh vật sinh enzyme phytase từ đất thuộc địa bàn huyện Hòa Vang- thành phố Đà Nẵng” kết nghiên cứu riêng Các số liệu nghiên cứu, kết điều tra, kết phân tích trung thực, chƣa đƣợc cơng bố Các số liệu liên quan đƣợc trích dẫn có ghi nguồn gốc, công bố theo quy định Đà Nẵng, tháng 05 năm 2018 Lê Trần Diệu Linh ii LỜI CẢM ƠN Em xin trân trọng bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc đến PGS.TS Đỗ Thu Hà ngƣời ln quan tâm tận tình hƣớng dẫn, truyền đạt nhiều kiến thức, kinh nghiệm quý báu cho em q trình thực khóa luận Em xin chân thành cảm ơn thầy cô Khoa -Môi trƣờng - Đại học Sƣ PhạmĐại học Đà Nẵng quan tâm tạo điều kiện tốt giúp cho em hồn thành khóa luận Cuối cùng, em xin trân trọng gửi lời cảm ơn đến gia đình, bạn bè anh chị khóa ln nhiệt tình hỗ trợ, giúp đỡ động viên em suốt thời gian làm khóa luận Xin chân thành cảm ơn! Lê Trần Diệu Linh iii MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT v DANH MỤC HÌNH ẢNH vi DANH MỤC BẢNG viii MỞ ĐẦU 1 ĐẶT VẤN ĐỀ MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU Ý NGHĨA KHOA HỌC VÀ THỰC TIỄN CỦA ĐỀ TÀI CHƢƠNG I TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 AXIT PHYTIC VÀ PHYTATE 1.2 ENZYME PHYTASE 1.2.1 Nguốc gốc enzyme phytase 1.2.2 Đặc điểm enzyme phytase 1.2.3 Ứng dụng enzyme phytase 1.3 LÊN MEN XỐP 12 1.3.1 Khái niệm lên men xốp 12 1.3.2 Ƣu điểm nhƣợc điểm kỹ thuật lên men xốp 12 1.4 TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU ENZYME PHYTASE TRÊN THẾ GIỚI VÀ Ở VIỆT NAM 13 1.4.1 Tình hình nghiên cứu giới 13 1.4.2 Tình hình nghiên cứu Việt Nam 14 1.5 ĐỊNH DANH CÁC CHỦNG VI SINH VẬT BẰNG KỸ THUẬT SINH HỌC PHÂN TỬ 15 1.6 ĐẶC ĐIỂM TỰ NHIÊN KHU VỰC NGHIÊN CỨU 16 1.6.1 Địa hình đất đai 16 1.6.2 Đặc điểm khí hậu thổ nhƣỡng 16 CHƢƠNG II ĐỐI TƢỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 17 ĐỐI TƢỢNG NGHIÊN CỨU 17 2.1 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU 17 iv 2.2 ĐỊA ĐIỂM, THỜI GIAN VÀ PHẠM VI NGHIÊN CỨU 17 2.2.1 Địa điểm thu mẫu thực địa 17 2.2.2 Địa điểm phạm vi nghiên cứu thí nghiệm 17 2.2.3 Thời gian nghiên cứu 18 2.3 PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 18 2.3.1 Phƣơng pháp lấy mẫu xử lí mẫu đất 18 2.3.2 Phƣơng pháp phân lập vi sinh vật có khả sinh phytase ngoại bào 19 2.3.3 Phƣơng pháp xác định mật độ vi sinh vật (theo phƣơng pháp Koch) 20 2.3.4 Phƣơng pháp xác định hoạt độ enzyme phytase 21 2.3.5 Phƣơng pháp nghiên cứu đặc điểm nuôi cấy hình thái chủng tuyển chọn 23 2.3.6 Giữ giống VSV 24 2.3.7 Định danh vi sinh vật kỹ thuật sinh học phân tử 24 2.3.8 Phƣơng pháp tạo chế phẩm enzyme phytase 27 CHƢƠNG III KẾT QUẢ VÀ BIỆN LUẬN 32 3.1 PHÂN LẬP CÁC CHỦNG VI SINH VẬT SINH ENZYME PHYTASE 32 3.3 ĐẶC ĐIỂM HÌNH THÁI VÀ NI CẤY CỦA CÁC CHỦNG VI SINH VẬT SINH ENZYME PHYTASE TUYỂN CHỌN 38 3.4 ĐỊNH DANH CÁC CHỦNG VI SINH VẬT SINH ENZYME PHYTASE ĐƢỢC TUYỂN CHỌN 44 3.4.1 Nhân trình tự gen 18S rRNA mẫu nấm NM1 NM4 44 3.4.2 Giải trình tự lập phân loại 45 3.5 KHẢO SÁT MỘT SỐ ĐIỀU KIỆN MÔI TRƢỜNG ẢNH HƢỞNG ĐẾN KHẢ NĂNG SINH ENZYME PHYTASE TRONG QUÁ TRÌNH LÊN MEN XỐP 46 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 57 KẾT LUẬN 57 2.KIẾN NGHỊ 58 TÀI LIỆU THAM KHẢO 59 v DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT CFU : Colony Foming Unit (Đơn vị khuẩn lạc) CT : Công thức KL : Khuẩn lạc KLTB HSCC : Khối lƣợng trung bình : Hệ sợi chất HSKS : Hệ sợi khí sinh MT : Môi trƣờng NM : Nấm mốc STT : Số thứ tự TB : Trung bình TP : Thành phố VK : Vi khuẩn VSV : Vi sinh vật PSM : Phytase screening media vi DANH MỤC HÌNH ẢNH Số hiệu Tên hình hình Trang Hình 1.1 Cấu trúc inositol Hình 1.2 Muối phytate liên kết với ion kim loại protein Hình 1.3 Phản ứng xúc tác enzyme phytase Hình 2.1 Mối tƣơng quan nồng độ K2HPO4 với OD 23 Hình 2.2 Chu trình gia nhiệt chƣơng trình chạy PCR 25 Hình 2.3 Hình 3.1 Hình 3.2 Hình 3.3 Hình 3.4 Hình 3.5 Hình 3.6 Hình 3.7 Hình 3.8 Hình 3.9 Hình 3.10 Hình 3.11 Sơ đồ quy trình lên men xốp tạo chế phẩm enzyme phytase Một số chủng nấm mốc phân lập đƣợc môi trƣờng PSM Một số chủng vi khuẩn phân lập đƣợc môi trƣờng PSM Tỉ lệ % chủng vi khuẩn, nấm mốc có khả sinh phytase mạnh Hình ảnh phân giải acid phytate VK-1 VK-4 mơi trƣờng PSM Hình ảnh phân giải acid phytate NM-1 NM-4 môi trƣờng Khuẩn lạc hình thái tế bào vi khuẩn VK-1 Chủng nấm mốc NM-1trên môi trƣờng PDA Cơ quan sinh sản chủng nấm mốc NM-1 dƣới kính hiển vi Chủng nấm mốc NM-4 môi trƣờng quan sinh sản chủng nấm mốc NM-4 dƣới kính hiển vi Dịch ni cấy lỏng qua 120 nuôi cấy Thu dịch lỏng nuôi cấy chủng tuyển chọn qua thời gian nuôi cấy Kết phản ứng PCR nhân gen mã hóa18S rARN 28 35 35 37 38 38 39 41 42 43 44 44 vii mẫu NM1 Hình 3.12 Hình 3.13 Kết phản ứng PCR nhân gen mã hóa18S rARN mẫu NM4 Giản đồ phả hệ chủng nấm NM1, NM4 số chủng nấm khác 45 45 Hình 3.14 Giống cấp chủng VK-1 sau ngày nuôi cấy dịch thể 47 Hình 3.15 Sơ đồ quy trình lên men xốp chủng vi khuẩn VK-1 47 Hình 3.16 Hình3.17 Hình 3.18 Hình 3.19 Hình 3.20 Hình 3.21 Khảo chất thích hợp cho lên men xốp chế phẩm phytase thô Khảo sát chất thích hợp cho lên men xốp chủng vi khuẩn VK-1 Ảnh hƣởng nhiệt độ đến khả sinh enzyme phytase chủng VK-1 tuyển chọn Ảnh hƣởng thời gian đến trình sinh enzyme phytase mơi trƣờng xốp chủng VK-1 Bố trí thí nghiệm khảo sát ảnh hƣởng pH mơi trƣờng thích hợp Ảnh hƣởng pH đến khả sinh hoạt tính enzyme phytasecủa cung VK-1 48 49 51 53 54 55 viii DANH MỤC BẢNG Số hiệu Tên Bảng bảng Trang Bảng 1.1 Sự phân bố Phytate hạt số trồng Bảng 2.1 Tƣơng quan hàm lƣợng phốt vô OD 700 nm 22 Bảng 2.2 Thành phần phản ứng PCR 25 Bảng 2.3 Mã số trình tự 18S rARN số loài nấm mốc 27 Bảng 2.4 Bảng 2.5 Bảng 2.6 Bảng 2.7 Khảo sát ảnh hƣởng nguồn chất lên men đến hoạt tính enzyme chủng VSV tuyển chọn Bố trí thí nghiệm khảo sát ảnh hƣởng nhiệt độ đến khả sinh enzyme phytase chủng VSV tuyển chọn Khảo sát ảnh hƣởng thời gian đến q trình sinh enzyme phytase VSV mơi trƣờng bán rắn Khảo sát ảnh hƣởng pH môi trƣờng lên men đến hoạt tính enzyme chủng vi sinh vật tuyển chọn 29 29 30 31 Số chủng vi sinh vật sinh trƣởng môi trƣờng sàng lọc Bảng 3.1 đƣợc phân lập từ đất xã thuộc H.Hòa Vang -TP.Đà 33 Nẵng Khả sinh enzyme phytase số chủng nấm mốc Bảng 3.2 Bảng 3.3 vi khuẩn mơi trƣờng PSM có bổ sung CaCl2 Đặc điểm ni cấy hình thái chủng VK-2 sinh phytase mạnh 36 39 Bảng 3.4 Đặc điểm hình thái chủng nấm mốc NM-1, NM-4 40 Bảng 3.5 Hoạt độ enzyme chủng MN-1, MN-4 VK-2 qua 42 ix thời gian nuôi cấy dựa so sánh trình tự nucleotide gen mã hóa 18S rARN Kết ảnh hƣởng chất lên men đến khả hoạt Bảng 3.6 tính enzyme chủng VK-1 tuyển chọn 49 Ảnh hƣởng nhiệt độ đến khả sinh enzyme phytase Bảng 3.7 Bảng 3.8 Bảng 3.9 chủng VK-1 tuyển chọn Ảnh hƣởng thời gian đến trình sinh enzyme phytase sinh trƣởng VSV môi trƣờng bán rắn Ảnh hƣởng điều kiện pH đến khả sinh hoạt tính enzyme phytase 51 52 55 61 Tài liệu nƣớc [21] Baharak H., Giti E and Iraj N (2009), “Analysis of phytase producing bacteria (Pseudomonas sp.) from poultry faeces and optimization of this enzyme production”, African Journal of Biotechnology 8(17), pp 4229 – 4232 [22] Barrier-Guillot B., Casado P., Maupetit P., Jondreville C., and Gatel F., (1996), “Wheat phosphorus availability: 1-In vitro study; Factors affecting endogenous phytasic activity and phytic phosphorus content”, J Sci Food Agric, 70, pp 62 - 68 [23] Bergey D.H.; Noel R.K.; John G.H (1989), Bergey’s manual of sytematic bacteriology, Publisher: Baltimore, MD : Williams & Wilins [24] Bijender S., Satyenarayana T (2011), “Microbial phytases in phosphorus acquisition and plant grouth promotion”, Physool Mol Biol Plant, 17(2), pp 93 – 103 [25] Deliliers L.G., Servida G., Fracchiolla N.S., Ricci C., Borsotti C., Colombo G., et al (2002), “Effects of inositol hexaphosphate (IP6) on human normal and leukaemic hematopoietic cells”, British Journal of Haematology, 117, pp 577–587 [26] Eeckhout W and M de Paepe (1994), “Total phosphorus, phytate-phosphorus and phytase activity in plant feedstuffs”, Anim Feed Sci Tech 47, pp 19 29 [27] Elif D., Eren B., Alev U (2014), “Screening of phytate hydrolysis Bacillus sp isolated from soil and optimization of the certain nutritional and physical parameters on the production of phytase”, Türk Biyokimya Dergisi [Turkish Journal of Biochemistry–Turk J Biochem], 39(2), pp 206–214 [28] Findenegg G.R and Nelemans J.A (1993), “The effect of phytase on the availability of phosphorus from myo-inositol hexaphosphate (phytate) for maize roots”, Plant and Soil, 154, pp 189-196 [29] Hall BG Building phylogenetic trees from molecular data with MEGA Mol Biol Evol 2013 May; 30(5):1229-35 doi: 10.1093/molbev/mst012 62 [30] Iqbal T.H., Lewis K.O., & Cooper B.T (1994), “Phytase activity in the human and rat small intestine”, Gut, 35, pp 1233–1236 [31] Idris E.E., Makarewicz O., Farouk A., Rosner K., Greiner R., Bochow H., et al (2002), “Extracellular phytase activity of Bacillus amyloliquefaciens FZB45 contributes to its plant-growth promoting effect”, Microbiology, 148, pp 2097–2109 [32] Katsuhiko Ando (2002), “Identifibioication of Fungi Imperfecti”, Nite Biological Resource Center National Intitutle of technology and Evaluation, pp 13-25 [33] Konietzny U., & Greiner R (2003), “Phytic acid: Nutritional impact In B Caballero, L Trugo, & P Finglas (Eds.)”, Encyclopaedia of food science and nutrition, pp 4555–4563 [34] Kornegay E.T (1999), “Application of phytase for retention of nonphosphorus nutrients”, Proc MD Nutr Conf., 46, pp 83-103 [35] Kornegay E.T., Denbow D.M., Yi Z., and Ravindran V (1996), “Response of broilers to graded levels of microbial phytase added to maizesoybean-meal based diets containing three levels of non-phytate phosphorus”, Br J Nutr, 75, pp 839-852 [36] Kumar S, Stecher G, Tamura K MEGA7: Molecular Evolutionary Genetics Analysis Version 7.0 for Bigger Datasets Mol Biol Evol 2016 Jul;33(7):1870-4 doi: 10.1093/molbev/msw054 [37] Li F, Wang B, Wang L, Cao B Phylogenetic analyses on the diversity of Aspergillus fumigatus sensu lato based on five orthologous loci Mycopathologia 2014 Oct;178(3-4):163-76 doi: 10.1007/s11046-014-9790-0 [38] Loewus F (2002), Biosynthesis of phytate in food grains and seeds In N R Reddy & S K Sathe (Eds.), Food phytates (pp 53–61) Boca Raton, Florida, USA: CRC Press [39] Lopez H.W., Leenhardt F., Coudray C., & Rémésy C (2002), “Minerals and phytic acid interactions: Is it a real problem for human nutrition”, 63 International Journal of Food Science and Technology, 37, pp 727–739 [40] Maenz D.D and Classen H.L (1998), “Phytase activity in the small intestinal brush border membrane of the chicken”, Poult Sci, 77, pp 557-563 [41] Moushree P.R and Shilpi G (2014), Purification and characterization of phytase from two enteric bacteria isolated from cow dung, Proceedings of 5th International Conference on Environmental Aspects of Bangladesh [42] Oberleas D (1983), 'The role of phytate in zinc bioavailability and homeostasis In G E Inglett (Ed.), Nutritional bioavailability of zinc (pp 145–158) Washington, DC: American Chemical Society [43] Pradnya D.G., Kavita P.B., Jayant M.K (2013), “Effect of phytase from Aspergillus niger on plant growth and mineral assimilation in wheat (Triticumaestivum Linn.) and its potential for use as a soil amendment”, Journal of the Science of food and agriailture, 93(9), pp 2242-2247 [44] Prasad A.S., Miale A.Jr., Farid Z., Sandstead H.H., & Darbv W.J (1963), “Biochemical studies on dwarfism, hypogonadism and anemia”, Archives of Internal Medicine, 111, pp 407 [45] Robert A Samson at al (1984), Introduction Food- Borne Fungi, Institute of the Royal Netherlands Academy of Arts and Sciences [46] Ravindran V., Bryden W.L., and Kornegay E.T (1995), “Phytates: Occurrence, bioavailability, and implications in poultry nutrition”, Poult Avian Biol, 6, pp 125-143 [47] Sakamoto K.,VenkatramanG., & Shamsuddin A.M (1993), “Growth inhibition and differentiation of HT-29 cells in vitro by inositol hexaphosphate (phytic acid)”, Carcinogenesis, 14, pp 1815–1819 [48] Samson RA, Visagie CM, Houbraken J, Hong SB, Hubka V, Klaassen CH, Perrone G, Seifert KA, Susca A, Tanney JB, Varga J, Kocsubé S, Szigeti G, Yaguchi T, Frisvad JC Phylogeny, identification and nomenclature of the genus Aspergillus Stud 10.1016/j.simyco.2014.07.004 Mycol 2014 Jun;78:141-73 doi: 64 [49] Zhang YJ, Zhang S, Liu XZ, Wen HA, Wang M A simple method of genomic ADN extraction suitable for analysis of bulk fungal strains Lett Appl Microbiol 2010 Jul;51(1):114-8 doi: 10.1111/j.1472-765X.2010.02867.x PHỤ LỤC PHỤ LỤC 1: MỘT SỐ MÔI TRƢỜNG DINH DƢỠNG SỬ DỤNG TRONG NGHIÊN CỨU Môi trƣờng dịch thể LB (g/l): Pepton-10; NaCl- 5; pH 6,8± 0,2, Môi trƣờng thạch thƣờng LB (g/l): Pepton- 5, NaCl-5 ; Agar-20 Môi trƣờng Jorquera (2008) (g/l): Glucose- 10; Na-phytate- ; CaCl2- 2; NH4NO3- 5; KCl- 0,5; MgSO4.7H2O- 0,5; FeSO4- 0,01; MnSO4- 0,01; khử trùng lần cách 24h, lần 100ºC/15 phút Môi trƣờng sàng lọc chủng sinh phytase (PSM – phytase screening media) (g/l): Glucose- 10; Na-phytate- 4; CaCl2- 2; NH4NO3- 5; KCl- 0,5; MgSO4.7H2O- 0,5; FeSO4- 0,01; MnSO4- 0,01; Agar- 20, khử trùng lần cách 24h, lần 100ºC/15 phút Môi trƣờng nuôi xốp với chất ngô vỡ, gạo lức, bột đỗ tƣơng, cám, dung dịch làm ẩm môi trƣờng dịch thể Jorquera không bổ sung chất Na- phytate) PHỤ LỤC 2: MỘT SỐ HÌNH ẢNH KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU Hình ảnh chủng phân lập Hình Các chủng VSV phân lập từ đất môi trƣờng PSM Hình Một số chủng nấm mốc phân lập đƣợc Hình Một số chủng vi khuẩn phân lập đƣợc Hình Khuẩn lạc chủng VK-1 VK ni cấy mơi trƣờng LB Hình Chủng nấm mốc MN 1và MN môi trƣờng PDA sau ngày ni cấy Hình Hình ảnh phân giải chủng VSV tuyển chọn mơi trƣờng PSM Hình Các chủng VSV tuyển chọn môi trƣờng dịch thể PSM Hình Khảo sát điều kiện mơi trƣờng ảnh hƣởng đến trình lên men xốp chủng vi khuẩn VK-1 Hình Ly tâm mẫu chế phẩm đo mật độ quang TRÌNH TỰ GEN MÃ HĨA CHO 18S RRNA CỦA CÁC MẪU NM1 VÀ NM4 M4 EF652478.1 KX664376.1 AF272574.1 KP686456.1 M1 AY771607.1 AY771609.1 KU058587.1 KF830076.1 CTTGAATTCGTAGTCATATGCTTGTCTCAAAGATTAAGCCATGCATGTCTAAGTATAAAC AATTCGTAGTCATATGCTTGTCTCAAAGATTAAGCCATGCATGTCTAAGTATAAAC -GTCTAAGTATAAAC M4 EF652478.1 KX664376.1 AF272574.1 KP686456.1 M1 AY771607.1 AY771609.1 KU058587.1 KF830076.1 AACTTTGTACTGTGAAACTGCGAATGGCTCATTAAATCAGTTATAGTTTATTTGATGGTA AAATTTGTACTGTGAAACTGCGAATGGCTCATTAAATCAGTTATAGTTTATTTGATGGTA -AAATTTGTACTGTGAAACTGCGAATGGCTCATTAAATCAGTTATAGTTTATTTGATGTTA M4 EF652478.1 KX664376.1 AF272574.1 KP686456.1 M1 AY771607.1 AY771609.1 KU058587.1 KF830076.1 TCGTAGGTGACC -TTCCGTAGGGTGAACC CTTCCGTAGGTGAACC CCTTGCTACATGGATAACTGTGGTAATTCTAGAGCTAATACATGCAATCAAGCCCCGACT CCTTGCTACATGGATAACTGTGGTAATTCTAGAGCTAATACATGCAATCAAGCCCCGACT TACATGCAATCAAGCCCCGACT ACTTGCTACATGGATAACTGTGGTAATTCTAGAGCTAATACATGCAATCAAGCCCCGACT M4 EF652478.1 KX664376.1 AF272574.1 KP686456.1 M1 AY771607.1 AY771609.1 KU058587.1 KF830076.1 ATTAGCAAGTGCGGG-CCCTCTGGGTCCAACAGGCCCCGTGTCTAT AAGGATCATTACTGAGTGCGGG-CTGCCTTCGGGCGCCCAACCTCCCACCCGTGA TGCGGAAGGATCATTACCGAGTGAGGG -CCCTCTGGGTCCAACCTCCCACCCGTGTCT -AAGGATCATTACCGAGTGTAGGGTTCCTAGCGAGCCCAACCTCCCACCCGTGTTT TGCGGAAGGATCATTACCGAGTGTAGGGTTCCTAGCGAGCCCAACCTCCCACCCGTGTTT TGCGGAAGGATCATTACTGAGTGAGGG TCCCTCGGGGCCCAACCTCCCACCCGTGTAT TCCGGAAGGGGTGTATTTATTAGATAAAAAACCAACGCGGCTCGCCGCTCCCTTGGTGAT TCCGGAAGGGGTGTATTTATTAGATAAAAAACCAACGCGGCTCGCCGCTCCCTTGGTGAT TCTGGAAGGGGTGTATTTATTAGATAAAAAACCAACGCGGCTCGCCGCTCCCTTGGTGAT TCCGGGAGGGGTGTATTTATTAGATAAAAAACCAACGCGGCTCGCCGCTCCCTTGGTGAT *:: : :* : * * * M4 EF652478.1 KX664376.1 AF272574.1 KP686456.1 M1 AY771607.1 AY771609.1 KU058587.1 KF830076.1 -CTGTACCCTGTTGCTTCGGCG -CTACCTAACACTGTTGCTTCGGCGGGGAG ATCG TACCTTGTTGCTTCGGCGGGCCCGCCGTTTCGACG -GCCGCC ACTGTAACCTTAGTTGCTTCGGCGGGCCCGCCG TTTACG -GCCGCC ACTG-TACCTTAGTTGCTTCGGCGGGCCCGCCATTCGTG GCC ACCG TACCTTGTTGCTTCGGCGAGCCCACCCCCTTTT TCATAATAACTTCTCGAATCGCATGGCCTTGTGCCGGCGATGCTTCATTCAAATATCTGC TCATAATAACTTCTCGAATCGCATGGCCTTGTGCCGGCGATGCTTCATTCAAATATCTGC TCATAATAACTTCTCGAATCGCATGGCCTTGTGCCGGCGATGCTTCATTCAAATATCTGC TCATAATAACTTCTCGAATCGCATGGCCTTGTGCCGGCGATGCTTCATTCAAATATCTGC : : * *.:*** M4 -TGGCTACGGCCCGCCGAAGACTAACATTTCAACACTGTCTG EF652478.1 KX664376.1 AF272574.1 KP686456.1 M1 AY771607.1 AY771609.1 KU058587.1 KF830076.1 -CCCTCTCGGGGGCGAGCCGCCGGGGACTACTGAACTTCATGCCTGAG GGGGAGGCCTTGCGCCCCCGGGCCCGCGCCCGCCGAAGACCCCAACATGAACGCTGTTCT GGGGGG CATCAGCCCCCGGGCCCGCGCCCGCCGGAGACACCACGAACTCT GTCT GCCGGGGGCTCTCAGCCCCGGGCCCGCGCCCGCCGGAGACACCACGAACTCTG TCT TCTTAGGGGGGCACAGCGCTCGCCGGAGACACCAACGTGAACACTG-TCT CCTATCAACTTTCGATGGTAGGATAGAGGCCTACCATGGTTTCAACGGGTAACGGGGAAT CCTATCAACTTTCGATGGTAGGATAGAGGCCTACCATGGTTTCAACGGGTAACGGGGAAT CCTATCAACTTTCGATGGTAGGATAGAGGCCTACCATGGTTTCAACGGGTAACGGGGAAT CCTATCAACTTTCGATGGTAGGATAGAGGCCTACCATGGTTTCAACGGGTAACGGGGAAT * * * * : M4 EF652478.1 KX664376.1 AF272574.1 KP686456.1 M1 AY771607.1 AY771609.1 KU058587.1 KF830076.1 AAGTTTGCAGTCTGAGTTTTTAG-TTAAACAATAATTAAAACTTTCAACAACG AGTGATGCAGTCTGAG-TCTGAA-TATAAAATCAGTCAAAACTTTCAACAATG GAAAGTATGCAGTCTGAGTTGATT ATCGTAATCAGTTAAAACTTTCAACAACG GATCTAGTGAAGTCTGAGTTGATTGTATCGCAATCAGTTAAAACTTTCAACAATG GATCTAGTGAAGTCTGAGTTGATTGTATCGCAATCAGTTAAAACTTTCAACAATG GAAGTTTTGTCGTCTGAGTCGATTGTATCGCAATCAGTTAAAACTTTCAACAATG AAGGGTTCGATTCCGGAG-AGGGAGCCTGAGAAACGGCTACCACATCCAAGGAAGGCAGC AAGGGTTCGATTCCGGAG-AGGGAGCCTGAGAAACGGCTACCACATCCAAGGAAGGCAGC AAGGGTTCGATTCCGGAG-AGGGAGCCTGAGAAACGGCTACCACATCCAAGGAAGGCAGC AAGGGTTCGATTCCGGAG-AGGGAGCCTGAGAAACGGCTACCACATCCAAGGAAGGCAGC * * *** : : *: * **:* *** * * M4 EF652478.1 KX664376.1 AF272574.1 KP686456.1 M1 AY771607.1 AY771609.1 KU058587.1 KF830076.1 -GATCTCTTGGTTCCGGCAT -CGATGAAGA -GATCTCTTGGTTCCGGCAT -CGATGAAGA -GATCTCTTGGTTCCGGCAT -CGATGAAGA -GATCTCTTGGTTCCGGCAT -CGATGAAGA -GATCTCTTGGTTCCGGCAT -CGATGAAGA -GATCTCTTGGTTCCGGCAT -CGATGAAGA AGGCGCGCAAATTACCCAATCCCGACACGGGGAGGTAGTGACAATAAATAACAATATAGG AGGCGCGCAAATTACCCAATCCCGACACGGGGAGGTAGTGACAATAAATAACAATATAGG AGGCGCGCAAATTACCCAATCCCGACACGGGGAGGTAGTGACAATAAATAACAATATAGG AGGCGCGCAAATTACCCAATCCCGACACGGGGAGGTAGTGACAATAAATAACAATATAGG ** :* * ***.** *.**.:** M4 EF652478.1 KX664376.1 AF272574.1 KP686456.1 M1 AY771607.1 AY771609.1 KU058587.1 KF830076.1 ACGCAGCGAAATGCGATAATT AATGTGAATTGCAGAATTCAGTGAATCATCGAGTCTT ACGCAGCGAACTGCGATAAGT AATGTGAATTGCAGAATTCAGTGAATCATCGAGTCTT ACGCAGCGAAATGCGATAAGT AATGTGAATTGCAGAATTCAGTGAATCATCGAGTCTT ACGCAGCGAAATGCGATAACT AGTGTGAATTGCAGAATTCCGTGAATCATCGAGTCTT ACGCAGCGAAATGCGATAACT AGTGTGAATTGCAGAATTCCGTGAATCATCGAGTCTT ACGCAGCGAAATGCGATAATT AATGTGAATTGCAGAATTCAGTGAATCATCGAGTCTT GCTCTTTCGGGTCTTATAATTGGAATGAGTACAATTTAAATCCCTTAACGAGGAACAATT GCTCTTTCGGGTCTTATAATTGGAATGAGTACAATTTAAATCCCTTAACGAGGAACAATT GCTCTTTTGGGTCTTATAATTGGAATGAGTACAATTTAAATCCCTTAACGAGGAACAATT GCTCTTTCGGGTCTTATAATTGGAATGAGTACAATTTAAATCCCTTAACGAGGAACAATT * *: * **** * *.**:*:* : : **:** * ** * * :.** M4 EF652478.1 KX664376.1 AF272574.1 KP686456.1 M1 AY771607.1 AY771609.1 KU058587.1 KF830076.1 TGAACGCACATTG CGCCCCCTGGTATTCCG -GGG TGAACGCACATTG CGCCCCCTGGCATTCCG -GGG TGAACGCACATTG CGCCCCCTGGTATTCCG -GGG TGAACGCACATTG CGCCCCCTGGTATTCCG -GGG TGAACGCACATTG CGCCCCCTGGTATTCCG -GGG TGAACGCACATTG CACCCCCTGGTATTCCG -GGG GGAGGGCAAGTCTGGTGCCAGCAGCCGCGGTAATTCCAGCTCCAATAGCGTATATTAAAG GGAGGGCAAGTCTGGTGCCAGCAGCCGCGGTAATTCCAGCTCCAATAGCGTATATTAAAG GGAGGGCAAGTCTGGTGCCAGCAGCCGCGGTAATTCCAGCTCCAATAGCGTATATTAAAG GGAGGGCAAGTCTGGTGCCAGCAGCCGCGGTAATTCCAGCTCCAATAGCGTATATTAAAG ** *** * * ** * * ***** * M4 EF652478.1 KX664376.1 AF272574.1 KP686456.1 M1 GGCATGCCTGTCCGAGCGTCATTGCTGCCCT-CAAGCACGGCTTGTGTGTTGGGCTTCCG GGCATGCCTGTCCGAGCGTCATTGCTGCCCATCAAGCCCGGCTTGTGTGTTGGGTCGTCG GGCATGCCTGTCCGAGCGTCATTGCTGCCCTCAAG-CACGGCTTGTGTGTTGGGCCCCCG GGCATGCCTGTCCGAGCGTCATTGCTGCCCATCAAGCACGGCTTGTGTGTTGGGTCGTCG GGCATGCCTGTCCGAGCGTCATTGCTGCCCATCAAGCACGGCTTGTGTGTTGGGTCGTCG GGTATGCCTGTCCGAGCGTCATTGCTGCCCT-CAAGCACGGCTTGTGTGTTGGGTCGTCG AY771607.1 AY771609.1 KU058587.1 KF830076.1 TTGTTGCAGTTAAAAAGCTCGTAGTTGAACTTCAGACCTGGTCGGGCGGTCCGCTTAACG TTGTTGCAGTTAAAAAGCTCGTAGTTGAACTTCAGACCTGGTCGGGCGGTCCGCTTAACG TTGTTGCAGTTAAAAAGCTCGTAGTTGAACTTCAGACCTGGTCGGGGG-TCCGCCTCACG TTGTTGCAGTTAAAAAGCTCGTAGTTGAACTTCAGACCTGGTTGGGTGGTCCGCTTAACG :*** * * **.*:* ** *: * * ** * * * ** M4 EF652478.1 KX664376.1 AF272574.1 KP686456.1 M1 AY771607.1 AY771609.1 KU058587.1 KF830076.1 -ACCCTGGTAACGGGG ACGGGCCCAAAAGGCAGTGG -TCCCC CCCGGGGG ACGGGCCCGAAAGGCAGCGG -TCCCCCTCTCCCGGGGGACGGGCCCGAAAGGCAGCGG -TCCCCTCTCCGGGGGGGACGGGCCCCAAAGGCAGCGG -TCCCCTCTCCGGGGGGGACGGGCCCCAAAGGCAGCGG -TCCCC CCCGGGGGACGGGCCCGAAAGGCAGCGG GCGTGTACTGTCTGACTGGGCCTTACCTCTTGGTGAGCCGGCGTGCCCTTTATTGGTGTG GCGTGTACTGTCTGACTGGGCCTTACCTCTTGGTGAGCCGGCGTGCCCTTTATTGGTGTG GTGTGTACTGTCTGACTGGGCCTTACCTCTTGGTGAGCCGGCGTGCCCTTTATTGGTGTG GCGAGTACTGTCTGACTGGGCCTTACCTCTTGGTGAGCCGGCGTGCCCTTTACTG-GGTG :.** * ** **** ::* * M4 EF652478.1 KX664376.1 AF272574.1 KP686456.1 M1 AY771607.1 AY771609.1 KU058587.1 KF830076.1 CGGCACCATGTCTGGTCCTCGAGCGTATGGGGCTGT -CGGCACCGTGTCCGGTCCTCGAGCGTATGGGGCTTT -CGGCACCGCGTCCGGTCCTCGAGCGTATGGGGCTTT -CGGCACCGCGTCCGATCCTCGAGCGTATGGGGCTTT -CGGCACCGCGTCCGATCCTCGAGCGTATGGGGCTTT -CGGCTCCGCAACCGGTCCTCGAGCGTATGGGGCTTT -CGTCGGGGAACCAGGACTTTTACCTTGAGAAAATTAGAGTGTTCAAAGCAGGCTTATGCT CGTCGGGGAACCAGGACTTTTACCTTGAGAAAATTAGAGTGTTCAAAGCAGGCCTATGCC CGTCGGGGAACCAGGACTTTTACCTTGAGAAAATTAGAGTGTTCAAAGCAGGCTTATGCC CGTCGGGGAACCAGGACTTTTACCTTGAGAAAATTAGAGTGTTCAAAGCAGGCCTATGCC ** * * *.:* * * * *.:* * : M4 EF652478.1 KX664376.1 AF272574.1 KP686456.1 M1 AY771607.1 AY771609.1 KU058587.1 KF830076.1 CGAATACATTAGCATGGAATAATAAAATAGGACGTGCGGTTCTATTTTGTTGGTTTCTAG CGAATACATTAGCATGGAATAATAGAATAGGACGTGCGGTTCTATTTTGTTGGTTTCTAG CGAATACATTAGCATGGAATAATAAAATAGGACGTGTGGTTCTATTTTGTTGGTTTCTAG CGAATACATTAGCATGGAATAATAAAATAGGACGTGCGGTTCTATTTTGTTGGTTTCTAG M4 EF652478.1 KX664376.1 AF272574.1 KP686456.1 M1 AY771607.1 AY771609.1 KU058587.1 KF830076.1 -GTCACCCG CTCCCG-TAGGTCCAGCTGG CAGCTAGCCTCG CAA -GTCACCCG CTCGATTTAGGGCCGGCCGG GCGCCAGCCGACGTCCA -GTCACCTG CTCTGT AGGCCCGGCCGG CGCCAGCCGACACCCAA -GTCACCCG CTCTGT AGGCCCGGCCGG CGCTTGCCGAACGCAAA -GTCACCCG CTCTGT AGGCCCGGCCGG CGCTTGCCGAACGCAAA -GTCACTATTGTACCTTGTTGCTTCGGCGGG CCCGCCAGCGTTGCTGG AATCGCCGTAATGATTAATAGGGATAGTTGGGGGCATTGGTATTGAGTCGCTAGAGGTGA AGTCGCCGTAATGATTAATAGGGATAGTTGGGGGCATTGGTATTGAGTCGCTAGAGGTGA AGTCGCCGTAATGATTAATAGGGATAGTTGGGGGCATTGGTATTGAGTCGCTAGAGGTGA AGTCGCCGTAATGATTAATAGGGATAGTTGGGGGCATTGGTATTGAGTCGCTAGAGGTGA **.* :* * ** M4 EF652478.1 KX664376.1 AF272574.1 KP686456.1 M1 AY771607.1 AY771609.1 KU058587.1 KF830076.1 CCAATCTTTAACCAGG TTGACCTCGGATCCGGTAGGGATACCCATG-AACTTAAGCAT ACCATTTTTCTTCAGG TTGACCTCGGATCAGGTAGGGATACCCGCTGAACTTAAGCAT CTTTATTTTTCTAAGG TTGACCTCGGATCAGGTAGGGATACCCGCTGAACTTAAGCAT ACAACCATTCTTTCCAGGTTGACCTCGGATCAGGTAGGGATACCCGCTGAACTTAAGCAT TCAATCTTTTTCCAGG TTGACCTCGGATCAGGTAGGGTTCCCCGCTGAACTTAAGCAT CCGCCGGGGGGCGACT -CGCCCCCGGGCCCG TGCCCGCCGGAGACCCCAACATG AATTCTTGGATTGACTCAAGACCAACTACTGCGAAAGCATTTGCCAAGGATGTTTTCATT AATTCTTGGATTGACTCAAGACCGACTATTGCGAAAGCATTTGCCAAGGATGTTTTCATT AATTCTTGGATTGACTCAAGACCAACTACTGCGAAAGCATTTGCCAAGGATGTTTTCATT AATTCTTGGATTGACTCAAGACCAACTATTGCGAAAGCATTTGCCAAGGATGTTTTCATT * * * ** * :: : M4 EF652478.1 KX664376.1 AF272574.1 KP686456.1 M1 AY771607.1 AY771609.1 KU058587.1 KF830076.1 ATCAATAAGCGGAGGAAAAGAAACCAACAGGGATTG -C ATCAATAAGCGGAGGAAAAGAAACCAACCGGGATTG -C ATCAATAAGCGGAGGAAAAGAAACCAACAGGGATTG -C ATCAATAAGCGGAGGAAAAGAAACCAACCGGGATTG -C ATCAATAAGCGGAGGAAGA AACCCTGTTCTGAAAGCTTGCAGTCTG AATCAAGAACGAAGGTTAGGGGATCGAAAACGATCAGATACCGTTGTAGTCTTAACAGTA AATCAAGAACGAAGGTTAGGGGATCGAAAACGATCAGATACCGTTGTAGTCTTAACAGTA AATCAAGAACGAAGGTTAGGGGATCGAAAACGATCAGATACCGTTGTAGTCTTAACAGTA AATCAAGAACGAAGGTTAGGGGATCGAAAACGATCAGATACCGTTGTAGTCTTAACAGTA *: :.: * * M4 EF652478.1 KX664376.1 AF272574.1 KP686456.1 M1 AY771607.1 AY771609.1 KU058587.1 KF830076.1 CTCT-TAACGGCGAGTGAAGCG -GGAGCTCAAATTTGAAATCTGGCTCCTTCGGGGTC CCCAGTAACGGCGAGTGAAGCGGCAAGAGCTCAAATTTGAAATCTGGCCCCTCCGGGGTC CTCAGTAACGGCGAGTGAAGCGGCAAGAGCTCAAATTTGAAAGCTGGCCCCTTCGGGGTC CTCAGTAACGGCGAGTGAAGCGGCAAGAGCTCAAATTTGAAAGCTGGCTCCTTCGGGGTC -TCATTACCG -AGTGTAGGGTTCCTAGCGAGCCCAACCTCCCAC -AGTGTGATTCTTTGCAATCAGTTAAAACTTTCAAC AACTATGCCGACTAGGGATCGGGCGACCTCAAATATTATGTATCGCTCGGCACCTTACGA AACTATGCCGACTAGGGATCGGGCGACCTCAAATATGATGTATCGCTCGGCACCTTACGA AACTATGCCGACTAGGGATCGGGCGATCTCAATAATTATGTGTCGCTCGGCACCTTACGA AACTATGCCGACTAGGGATCGGGCGACCTCAATTATGATGTGTCGCTCGGCACCTTACGA : : : * : M4 EF652478.1 KX664376.1 AF272574.1 KP686456.1 M1 AY771607.1 AY771609.1 KU058587.1 KF830076.1 CGAGTTGTAATTTGTAGAGGATGCTTCGGGTGCGGCCCCCG CGAGTTGTAATTTGCAGAGGATGCTTCGGGTGCGGCCCCTG CGCGTTGTAATTTGCAGAGGATGCTTCGGGTGCAGCCCCCG CGCATTGTAATTTGCAGAGGATGCTTCGGGTGCGGCCCCTG CCGTGTTTACTGTACCTTAGTTGCTTCGGCG GGCCGCCA AATGGATCTCTTGGTTCCGGCATCGATGAAGAACGCAGCGA GAAATCAAAGTCTTTGGGTTCTGGGGGGAGTATGGTCGCAAGGCTGAAACTTAAAGGAAT GAAATCAAAGTCTTTGGGTTCTGGGGGGAGTATGGTCGCAAGGCTGAAACTTAAAGGAAT GAAATCAAAGTCTTTGGGTTCTGGGGGGAGTATGGTCGCAAGGCTGAAACTTAAAGGAAT GAAATCAAAGTCTTTGGGTTCTGGGGGGAGTATGGTCGCAAGGCTGAAACTTAAAGGAAT : * : * * * M4 EF652478.1 KX664376.1 AF272574.1 KP686456.1 M1 AY771607.1 AY771609.1 KU058587.1 KF830076.1 -TCTAAGTGCTCTGGAACGG -AATGGAGAGGGTGAAAATCCCGTCTGGGATGGG -TCTAAGTGCCCTGGAACGGGCCGTCAGAGAGGGTGAGAATCCCGTCTTGGGCAGG -TCTAAGTGCCCTGGAACGGGCCGTCATAGAGGGTGAGAATCCCGTCTGGGACGGG -TCTAAGTGCCCTGGAACGGGCCGTCAGAGAGGGTGAGAATCCCGTCTGGGATGGG -TTCGTGGCCGCCG -GGGGCTCTCAGCCCCG -AATGCGATAACTAATGTGAATTGCAGAATTCAGTGAATCATCGAGTCTTTGAACG TGACGGAAGGGCACCACCAGGTGTGGAGCCTGCGGCTTAATTTGACTCAACACGGGGAAA TGACGGAAGGGCACCACCAGGTGTGGAGCCTGCGGCTTAATTTGACTCAACACGGGGAAA G-ACGGAAGGGCACCACCAGGTGTGGAGCCTGCGGCTTAATTTGACTCAACACGGGGAAA TGACGGAAGGGCACCACCAGGTGTGGAGCCTGCGGCTTAATTTGACTCAACACGGGGAAA * : : : M4 EF652478.1 KX664376.1 AF272574.1 KP686456.1 M1 AY771607.1 AY771609.1 KU058587.1 KF830076.1 GTGTCCGCGTCCA -TGTGAAGCTCCTTCGA CGAGCCAG GTGCCCGTGCCCG -TGTGAAGCTCCTTCGA CGAGTCGA GTGTCTGCGTCCG -TGTGAAGCTCCTTCGA CGAGTCGA GTGTCCGCGCCCG -TGTGAAGCTCCTTCGA CGAGTCGA -GGCCCGCGCCCG -CCGGAGACACCACGAA CTCTGTCT CACATTGCGCCCC -CTGGTATTCCGGGGGG CATGCCTG CTCACCAGGTCCAGACATAACTAGGATTGACAGATTGATAGCTCTTTCATGATTTTATGG CTCACCAGGTCCAGACATAACTAGGATTGACAGATTGATAGCTCTTTCATGATTTTATGG CTCACCAGGTCCAGACATAACTAGGATTGACAGATTGATAGCTCTTTCATGATTTTATGG CTCACCAGGTCCAGACATAACTAGGATTGACAGATTGATAGCTCTTTCATGATTTTATGG * ** : * M4 EF652478.1 KX664376.1 AF272574.1 -TTGTTTGGGAATGCAGCTCTAAATGGGTGGTAAATTTCATCT AAAGCTAAATACT GTTGTTTGGGAATGCAGCTCTAAATGGGTGGTAAATTTCATCT AAAGCTAAATACC GTTGTTTGGGAATGCAGCTCTAAATGGGTGGTAAATTTCATCT AAAGCTAAATACT GTTGTTTGGGAATGCAGCTCTAAATGGGTGGTAAATTTCATCT AAAGCTAAATACT KP686456.1 M1 AY771607.1 AY771609.1 KU058587.1 KF830076.1 GATCTAGTGAAAG -TCTGAGTTGATTGTATCCATCGTTT AAAACTTTCAACA TCCGAGCGTCATTGCTGCCCTCAAG -CCCGGCT TGTGTGTTGGGCC GTGGTGGTGCATGGCCGTTCTTAGTTGGTGGAGTGATTTGTCTGGTTAATTCCGATAACG GTGGTGGTGCATGGCCGTTCTTAGTTGGTGGAGTGATTTGTCTGGTTAATTCCGATAACG GTGGTGGTGCATGGCCGTTCTTAGTTGGTGGAGTGATTTGTCTGGTTAATTCCGATAACG GTGGTGGTGCATGGCCGTTCTTAGTTGGTGGAGTGATTTGTCTGGTTAATTCCGATAACG : *: ** * * :.: : * M4 EF652478.1 KX664376.1 AF272574.1 KP686456.1 M1 AY771607.1 AY771609.1 KU058587.1 KF830076.1 GGCCGGAGACCG-ATAGCGCACAAGTAGAGTGATCGAAAGATGAAAAGCA -GGCCGGAGACCG-ATAGCGCACAAGTAGAGTGATCGAAAGATGAAAAGCA -GGCCGGAGACCG-ATAGCGCACAAGTAGAGTGATCGAAAGATGAAAAGCA -GGCCGGAGACCG-ATAGCGCACAAGTAGAGTGATCGAAAGATGAAAAGCA -ATGGATCTCTTGGTTCGGCATCATGAAGAAGCAGCGAAATGCGATAACTA -CTCGTCCCCCGG -CTCCCGGGGGACGGGCCCGAAAGGCAGCGGCGG -AACGAGACCTTAACCTGCTAAATAGCCAGGCTGGCTTCTGCTAGTCGCCGGCTTCTTAGA AACGAGACCTTAACCTGCTAAATAGCCAGGCCGGCTTTTGCTGGTCGCCGGCTTCTTAGA AACGAGACCTTAACCTGCTAAATAGCCAGGCTGGCTTTTGCTGGTCGCCGGCTTCTTAGA AACGAGACCTTAACCTGCTAAATAGCCAGGCCGGCTTTCGCTGGTCGCCGGCTTCTTAGA * * : M4 EF652478.1 KX664376.1 AF272574.1 KP686456.1 M1 AY771607.1 AY771609.1 KU058587.1 KF830076.1 CTTTGAAAAGG -CCAAAGCGCACGTGAAATTGTTGAA CTTTGAAAAGAGAGTTAAACAGCACGTGAAATTGTTGAAAGGGAAGCGCTTG CTTTGAAAAGAGAGTTAAACAGCACGTGAAATTGTTGAAAGGGAAGCGTTTG CTTTGAAAAGAGAGTTAAAAAGCACGTGAAATTGTTGAAAGGGAAGCGCTTG GTGTGAAATTGCGAATTCTGAAATCATCAGTCTTTGAAAG -CACCGCGTCCGGTCCTCGAGCGTATGGGGCTTCGTCTTCCG GGGACTGTCAGTGTCTAACTGACGGAAGTTTGAGGCAATAACAGGTCTGTGATGCCCTTA GGGACTGTCAGCGTCTAGCTGACGGAAGTTTGAGGCAATAACAGGTCTGTGATGCCCTTA GGGACTGTCAGCGTCTAGCTGACGGAAGTTTGAGGCAATAACAGGTCTGTGATGCCCTTA GGGACTGTCAGCGTCTAGCTGACGGAAGTTTGAGGCAATAACAGGTCTGTGATGCCCTTA : * : : : : : M4 EF652478.1 KX664376.1 AF272574.1 KP686456.1 M1 AY771607.1 AY771609.1 KU058587.1 KF830076.1 -CGACCAGACTCGGCCTCGGGGTTCAGCCAGCATTCGTGCTGGTGTACTTCCCCGGGGCCG CGACCAGACTCGCCCGCGGGGTTCAGCCGGCATTCGTGCCGGTGTACTTCCCCGTGGGCG CGACCAGACTCGCCTCCAGGGTTCAGCCGGCATTCGTGCCGGTGTACTTCCCTGGGGGCG CCATTGGCCC CTCCGTAGGCCC GATGTTCTGGGCCGCACGCGCGCTACACTGACAGAGCCAGCGAGTTTTTTTCCTTGGCCG GATGTTCTGGGCCGCACGCGCGCTACACTGACAGAGCCAGCGAGTTTTTCACCTTGGCCG GATGTTCTGGGCCGCACGCGCGCTACACTGACAGATCCAGCGAGTTTTTCACCTTGGCCG GATGTTCTGGGCCGCACGCGCGCTACACTGACAGAGCCAGCGAGTTTTTTTCCTTGACCG M4 EF652478.1 KX664376.1 AF272574.1 KP686456.1 M1cc AY771607.1 AY771609.1 KU058587.1 KF830076.1 -GGCCAGCG TCGGTTCGGGCGGCCGGTCAAAGGCCCCAGGAATGT GGCCAGCG TCGGTTTGGGCGGCCGGTCAAAGGCCCTCGGAATGT GGCCAGCG TCGGTTTGGGCGGCCGGTCAAAGGCTCCCGGAATGT CTGGTATG TCGGGGGGAATGCTCGCTCCAGCGCCATTG -C GGCCGGCG CCCG -GAAGGTCTGGGTAATCTTGTGAAACTCTGTCGTGCTGGGGATAGAGCATTGCAATTATTG GAAGGTCTGGGTAATCTTGTGAAACTCTGTCGTGCTGGGGATAGAGCATTGCAATTATTG GAAGGTCTGGGTAATCTTGTGAAACTCTGTCGTGCTGGGGATAGAGCATTGCAATTATTG GAAGGTCTGGGTAATCTTGTGAAACTCTGTCGTGCTGGGGATAGAGCATTGCAATTATTG M4 EF652478.1 KX664376.1 AF272574.1 KP686456.1 M1 AY771607.1 AY771609.1 KU058587.1 -ATCGTCCTCCGGGACGTCTTATAGCCTGGGG TGCAATGCGGCCAGCCTGG ATCACCTCTCGGGGTGTCTTATAGCCGAGGG TGCAATGCGGCCTGCCTGG AGTGCCCTCCGGGGCACCTTATAGCCGGGAG TGCAATGCGGCCAGCCTGG TGCCTCATCCCAACCTGTGTGTGTGGGGGGG CGCTCCCCCTCTCTCCCG -CCGACGCATTTATTTGCAACTTGT TTTTTTCCAGGTGACCTCG CTCTTCAACGAGGAATACCTAGTAAGCGTGAGTCATCAGCTCGCGTTGATTACGTCCCTG CTCTTCAACGAGGAATACCTAGTAAGCGTGAGTCATCAGCTCGCGTTGATTACGTCCCTG CTCTTCAACGAGGAATACCTAGTAAGCGTGAGTCATCAGCTCGCGTTGATTACGTCCCTG KF830076.1 CTCTTCAACGAGGAATACCTAGTAAGCGTGAGTCATCAGCTCGCGTTGATTACGTCCCTG M4 EF652478.1 KX664376.1 AF272574.1 KP686456.1 M1 AY771607.1 AY771609.1 KU058587.1 KF830076.1 -ACCGAGGAACGCGCT TCGGCACGGACGCTGGCGTAATGGTTGCAAACGACC ACCGAGGAACGCGCT TCGGCTCGA -ACCGAGGAACGCGCT TCGGCACGGACGCTGGCATAATGGTTGCAAACGACC -GGGGAAGGGGCC CCAACACAAGGGCGGCCGCG GATCAGGTACGATAC CAAG CCCTTTGTACACACCGCCCGTC-CTACTACCGATTGAATGGCTTAGTGAGGTCTCCGGAT CCCTTTGTACACACCGCCCGTCGCTACTACCGATTGAATGGCTTAGTGAGGTCTCCGGAT CCCTTTGTACACACCGCCCGTCGCTACTACCGATTGAATGGCTTAGTGAGGTCTCCGGAT CCCTTTGTACACACCGCCCGTCGCTACTACCGATTGAATGGCTTAGTGAGGTCTCCGGAT M4 EF652478.1 KX664376.1 AF272574.1 KP686456.1 M1 AY771607.1 AY771609.1 KU058587.1 KF830076.1 TGGCTTTGGGGAGCC TGGCTTTGGGGAGCCGGCGACGGCATCCTATTGCTGAGAAGCTGATCAAACTTGGTCATT TGGCTTTGGGGAGCCGGCAACGGCACCCTATTGCTGAGAAGCTGATCAAACTTGGTCATT TGGCTTTGGGGAGCCGGCAACGGCACCCTATTGCTGAGAAGCTGATCAAACTTGGTCATT M4 EF652478.1 KX664376.1 AF272574.1 KP686456.1 M1 AY771607.1 AY771609.1 KU058587.1 KF830076.1 -TAGAGGAAGTAAAAGTCGTAACAAGGTTTCCGTAGTGAACCTGCGGAACC TAGAGGAAGTAAAAGTCGTAACAAGGTTTCCGTAGGT TAGAGGAAGTAAAAGTCGTAACAAGGTTTCCGTAGGTGAACCTGC - PHỤ LỤC 3: MỘT SỐ HÌNH ẢNH NƠI LẤY MẪU ... ? ?Nghiên cứu phân lập, tuyển chọn tạo chế phẩm thô vi sinh vật sinh enzyme phytase từ đất thuộc địa bàn huyện Hòa Vang- thành phố Đà Nẵng? ?? nhằm tìm kiếm lồi vi sinh vật có khả sinh enzyme phytase. .. đề tài: ? ?Nghiên cứu phân lập, tuyển chọn tạo chế phẩm thô vi sinh vật sinh enzyme phytase từ đất thuộc địa bàn huyện Hòa Vang- thành phố Đà Nẵng? ?? kết nghiên cứu riêng Các số liệu nghiên cứu, kết... dụng chế phẩm enzyme nông nghiệp MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU Nghiên cứu phân lập, tuyển chọn chủng vi sinh vật sinh enzyme phytase ngoại bào mạnh từ đất số xã thuộc huyện Hòa Vang- thành phố Đà Nẵng,