Tiểu luận dược sĩ (VI SINH) serratia mercescens

Mục lục Trang Chương I: Tổng quan tác nhân gây độc .2 Lịch sử phát 2 Phân loại .3 Đặc điểm 3.1 Đặc điểm chung .3 3.2 Đặc điểm sinh hoá Cấu trúc 4.1 Cấu trúc tế bào .4 4.2 Cấu trúc phân tử .4 Cơ chế gây bệnh Bệnh triệu chứng .5 Các biện pháp phòng xử lý bệnh Chương II: Các phương pháp xác định Các phương pháp truyền thống Các phương pháp đại .12 Chương III: Kết luận đề nghị 13 Tài liệu tham khảo S.mercescens Trang Lời mở đầu Thời gian gần đây, nhiều nước giới, từ Mỹ, Anh, Đức, Thụy Sĩ đến Trung Quốc, Thái Lan thấy cảnh báo lây nhiễm loại vi khuẩn kháng kháng sinh (MRSA methicilline-resistant staphylococcus aureus) dẫn đến tử vong bệnh viện Cho dù biện pháp vệ sinh đại áp dụng song số người chết nhiễm khuẩn bệnh viện ngày gia tăng Sự hoành hành chủng siêu vi khuẩn bệnh viện khiến giới y học đặc biệt quan tâm Chương I: Tổng quan tác nhân gây ngộ độc Lịch sử phát triển: Năm 1819, Bartolomeo Bizio, dược sĩ từ Padua, Italia, phát đặt tên Serratia mercescens ông xác định vi khuẩn nguyên nhân đổi màu máu kỳ diệu polenta Bizio Serratia tên danh dự nhà vật lý người Ý tên Serrati, người phát minh tàu nước, Bizio chọn marcescens (từ chữ Latin) sắc tố máu tìm thấy nhanh chóng biến Trước biết nhiều tên khác nhau: Chromobacterium prodigiosum, Gaughran et al Và 1823 Bizio đặt S marcescens Ban đầu xem vi khuẩn vô hại, thường sử dụng dấu ấn ngành sinh học dễ dàng nhận màu đỏ khuẩn lạc 1896 Mãi sau năm 1950, phủ Hoa Kỳ làm thử nghiệm với Serratia marcescens thấy ảnh hưởng bất lợi vi khuẩn gây Trong "Chiến dịch Sea Spray" Quân đội Hoa Kỳ đầy bóng bay với Serratia marcescens phát nổ chúng San Fransisco Marcescens Serratia lựa chọn dễ dàng theo dõi sản xuất sắc tố Mặc dù Serratia marcescens phân loại tác nhân gây bệnh người vào năm 1960, nhà khoa học cịn sử dụng loại vi khuẩn tốt vào năm 1970 S.mercescens Trang 2 Phân loại: Ngành: Proteobacteria Lớp: Gamma Proteobacteria Bộ: Enterobacteriales Họ: Enterobacteriaceae Chi: Serratia Lồi: Serratia marcescens Hình 1.1 S marcescens thạch XLD Đặc điểm: 3.1 Đặc điểm chung: Serratia giống trực khuẩn Gram âm, kỵ khí tùy nghi, thuộc họ Enterobacteriaceae Chủng phổ biến nhất, S marcescens, đồng thời mầm bệnh thường gây trường hợp nhiễm khuẩn bệnh viện 3.2 Đặc điểm sinh hóa: - Enzyme Catalase - Enzyme Gelatinease - Enzyme Esculinase - Enzyme Dnase S.mercescens Trang Cấu trúc: 4.1 Cấu trúc tế bào: Màng cấu trúc đặc trưng vi khuẩn G- ,di động, sinh bào tử Phát triển – 400C, nhiệt độ tối ưu 370C, pH khoảng -9 Có thành tế bào mỏng làm lớp peptidoglycan bao bọc lớp màng bên ngồi Các màng ngồi có lipopolysaccharides (LPS), loại đặc biệt phospholipid gồm axit béo gắn vào dimer phosphate glucosamine Một glucosamine gắn liền với polysaccharide cốt lõi mà mở rộng đến polysaccharides O Các màng phương tiện để điều tiết hấp thu chất dinh dưỡng loại trừ độc tố 4.2 Cấu trúc phân tử: Các gen chủng Serratia marcescens Db11 lập trình tự từ Viện Sanger với cộng tác Dr.Jonathan Ewbank Trung tâm d'Immunologie de Marseille Luminy Các gen hoàn thành bao gồm nhiễm sắc thể trịn đơn 5.113.802 bp có chứa hàm lượng G + C 59,51% Cơ chế gây bệnh: Enzyme Lactamase - Khi xâm nhập vào thể S.mercescens tiết loại enzyme Lactamase Đây loại enzyme có khả kháng sinh có cấu trúc vịng   Lactamse (đa phần S.mercescens Trang chủng loại kháng sinh cũ) Vì điều trị cần phải có phác đồ thật xác, dùng loại kháng sinh hệ có cấu trúc sai khác   Lactamse - Ngoại cịn có giúp sức enzyme Proteas Chính ezyme có nhiệm vụ phá huỷ cấu trúc ptotein đại thực bào hệ thống phòng nhiễm thể làm thể suy giảm sức đề kháng cộng với kháng kháng sinh enzyme Lactamase tạo nên khó khăn cơng tác điều trị phòng ngừa Bệnh triệu chứng: Serratia marcescens phổ biến Nó thường tìm thấy đất, nước, thực vật động vật Phương thức lây truyền vi sinh vật cách liên hệ trực tiếp, ống thơng Có nhiều bệnh có liên quan với Serratia marcescens: viêm phổi bệnh viện, nhiễm trùng huyết, viêm màng não áp xe não, nhiễm trùng đường tiết niệu, nhiễm trùng mắt….Sau bệnh đặc trưng Serratia marcescens gây 6.1 Viêm phổi bệnh viện: bệnh viêm phổi phát sau bệnh nhân nhập viện sau 48  Triệu chứng: sốt, ho, khạc đờm nhầy mủ, khó thở, hội chứng đông đặc Triệu chứng viêm phổi thường bị che lấp bệnh lí khác ví dụ như: nhiễm độc, dị ứng thuốc, xẹp phổi, nhồi máu phổi, suy hơ hấp, suy tim sung huyết, viêm khí phế quản Ngồi ra, viêm phổi hít sặc phải dịch dày khó phân biệt với viêm phổi vi khuẩn 6.2 Nhiễm trùng huyết:  Triệu chứng: thân nhiệt tăng, tim đập nhanh, thở nhanh Cộng thêm thơng số chứng tỏ có tình trạng giảm tưới máu quan rối loạn chức quan hay thay đổi trạng thái tinh thần: - PaO2 ≤ 75mm Hg ( khơng khí phịng ) - Tăng Lactate huyết - Thể tích nước tiểu < 30ml/h Ở trẻ em nước tiểu < 0,5ml/kg/h) Các biện pháp phịng xử lí bệnh: S.mercescens Trang 7.1 Các biện pháp phòng tránh: - Thực tốt vệ sinh bệnh viện - Vệ sinh dụng cụ y tế đặc biệt dụng cụ thao tác đặt ống thông - Hạn chế lây chéo từ nhân viên y tế qua bệnh nhân - Giảm tải phòng bệnh - Thực rửa tay sau thăm khám cho bệnh nhân 7.2 Điều trị: Có nhiều phương pháp điều trị khác Nhưng thông dụng dùng số loại kháng sinh liều cao để khống chế lấn át, tránh tượng kháng thuốc  Sau số loại kháng sinh dùng điều trị viêm phổi bệnh viện vi khuẩn gây ra: - Ceftriaxon - Aztreonam - Vancomycin - Ciprofloxacin IV - Clindamycin  Điều trị bệnh nhiễm trùng huyết: - Điều trị kháng sinh: Ampicilline, Aminoglycoside - Protein C hoạt hóa - Hồi sức bồi phụ dịch - Thuốc vận mạch trợ tim - Liệu pháp Insuline tích cực - Liệu pháp Corticosteroide - Liệu pháp thay chức thận lọc máu - Dinh dưỡng điều trị S.mercescens Trang Chương II: Các phương pháp xác định Phương pháp truyền thống ( phương pháp nuôi cấy ): _ Bước 1: Cân 25g mẫu, thêm vào 225 ml Buffer Pepton Water Đồng mẫu phút _ Bước 2: Cấy trang mẫu môi trường MacconKey Ủ nhiệt độ 370C vòng 24 _ Bước 3: Đọc kết quả: khuẩn lạc có hình dạng trịn, lồi, bóng, có màu sắc đỏ sắc tố Prodigiosin tạo thành Hình 2.1: Hình thái khuẩn lạc đặc trưng S.mercescens Phản ứng test sinh hố khẳng định S.mercescens: 2.1 Phản ứng dương tính với Esculine: Mục đích: Xác định khả thủy giải glucoside esculin thành esculetin glucose có diện muối mật Cơ sở sinh hóa: - Esculin hợp chất nhân tạo S.mercescens Trang - Esculetine phóng thích phản ứng với Fe2+ tạo thành phức hợp màu đen Hình 2.2: Phản ứng dương tính S.mercescens với Esculine 2.2 Phản ứng dương tính với thử nghiệm Catalase:  Cơ sở sinh hoá: Catalase diện VSV hiếu khí kỵ khí tùy ý catalase H2O     H2O + O2 (bọt khí) ( hydrogen peroxide)  Thực hiện: - VSV lấy từ mơi trường ni cấy - Đặt lên lam kính - Nhỏ H2O2 30% S.mercescens Trang - Quan sát sau -2 giây Phản ứng (+): có bọt khí xuất Phản ứng (-): khơng có bọt khí xuất Hình 2.3: Thử nghiệm dương tính S.mercescens với Catalase 2.3 Phản ứng thị màu biểu khả lên men:  Môi trường: Phenolred brothbase bổ sung 0.5 – % đường lactose  VSV sử dụng nguồn đường môi trường làm giảm pH  thay đổi màu chất thị phenolred  Phản ứng dương (+): môi trường chuyển vàng  Phản ứng âm (-): mơi trường có màu đỏ S.mercescens Trang Hình 2.4: Thử nghiệm dương tính S.mercescens với thử nghiệm lên men 2.4 Phản ứng dương tính với thử nghiệm Gelatine:  Cơ sở sinh hóa: Gelatine  Gelatinase    polypeptide + acid amin Gelatine môi trường dinh dưỡng  môi trường đông đặc VSV phân hủy gelatine môi trường lỏng  Môi trường sử dụng Nutrient Gelatine  Dạng ống nghiệm thạch sâu  Cấy vi sinh vật ủ nhiệt độ phòng  Đọc kết (+) môi trường tan chảy S.mercescens Trang 10 (-) mơi trường khơng tan chảy Hình 2.5: Thử nghiệm dương tính S.mercescens với Gelatine 2.5 Phản ứng dương tính với thử nghiệm Lipase:  Cơ sở sinh hoá: Lipase Lipit     thành mảnh nhỏ hơn, tạo thành quầng sang rõ ràng xung quanh vùng có Lipase S.mercescens Trang 11 Hình 2.6: Thử nghiệm dương tính S.mercescens với Lipase 2.6 Phản ứng dương tính với thử nghiệm Dnase:  Cơ sở sinh hóa: DNase DNA     mảnh nhỏ làm liên kết với Cation Methyl blue tạo thành quầng sáng nơi có vi sinh vật có DNase phát triển Hình 2.7: Thử nghiệm dương tính S.mercescens với DNase 2.7 Phản ứng âm tính với Indol:  Cơ sở sinh hóa: Cấy VSV vào mơi trường canh trypton Thuốc thử Kovac’s Đem ủ 370C 24 Phản ứng (+): Xuất vịng đỏ mơi trường Phản ứng (-): Khơng đổi màu S.mercescens Trang 12 Hình 2.8: Thử nghiệm dương tính giả S.mercescens với Indol Bảng tổng kết thử nghiệm sinh hóa: Stt S.mercescens Thử nghiệm sinh hóa Thử nghiệm Esculine Thử nghiệm Catalase Thử nghiệm lên men Thử nghiệm Gelatine Thử nghiệm Lipase Thử nghiệm Dnase Kết (+) (+) (+) (+) (+) (+) Trang 13 Thử nghiệm Indol Dương tính giả Bảng 2.1: Tổng kết thử nghiệm sinh hoá Phương pháp đại: Phương pháp PCR DNA đích tách mô tả chuẩn bị trực tiếp từ khuẩn lạc vi khuẩn Ba khuẩn lạc chọn từ môi trường dinh dưỡng cho vào 50  l nước cất vô trùng đun sôi 15 phút sau ly tâm phút 13.000vịng Các chất lơ lửng bề mặt chuyển đến ống nghiệm sử dụng nguồn gốc DNA đích, lưu trữ -20 ° C cần Chiết xuất DNA (0,1, g ) chất lỏng bề mặt (1, l ) phủ lên hỗn hợp phản ứng với dầu khoáng sản Các phản ứng hỗn hợp dầu trước chạy qua ánh sáng tia cực tím bước sóng ngắn 10 phút để ngăn gây nhiễm cho DNA Mồi dùng ERIC1 (5'-GTGAATCCCCAGGAGCT TACAT-3 ') ERIC2 (5'-AAGTAAGTGACTGGGGTGA GCG-3 ') (16) Phản ứng hỗn hợp (100  l khối lượng) có chứa U Taq polymerase, 10 mM Tris (pH 8,3), 50 mM KCl, 2,5 mM MgCl2, 0,01% (wt / vol) gelatin, 250 uM deoxynucleoside triphosphate, uM mồi đơn Khuếch đại thực PHC chu kỳ-3, với tất thực với nhiệt độ sau: 95°C phút để biến tính mẫu; 94°C phút, 26oC phút, 72°C phút, 40 chu kỳ 94°C 30s, 40°C 30s, 72°C phút, cuối cùng, 72oC 10 phút Những mẫu âm chuẩn bị, khơng có bổ sung mẫu DNA Sản phẩm khuếch đại (10  l) tách điện di gel agarose gel agarose 1,6% Tris-borat-EDTA ethidium bromide đệm chứa (1 PLG / ml), 30 V giờ, định hình UV transillumination Tất mẫu chuẩn bị kiểm tra ba lần Các mẫu PCR coi giống hệt sở số tương tự vị trí phù hợp tất hàng Sự khác biệt nhỏ cường độ hang mờ bỏ qua S.mercescens Trang 14 Hình 2.9: Kết điện di S.mercescens S.mercescens Trang 15 Chương III: Kết luận đề nghị Theo nhận định nhiều chuyên gia y tế, 1/3 số trường hợp nhiễm trùng mắc phải bệnh viện tránh tuân thủ nghiêm biện pháp thực hành chống nhiễm khuẩn đơn giản phòng ngừa phổ cập Phòng ngừa phổ cập hiểu biện pháp nhằm ngăn chặn lây truyền HIV, HBV, HCV tác nhân gây bệnh theo đường máu khác bệnh viện rửa tay sát khuẩn tay thường quy, thực tiêm an toàn, xử lý khử khuẩn dụng cụ y tế, vệ sinh môi trường bệnh viện, xử lý chất thải y tế mà đặc biệt vật sắc nhọn Thực tế cho thấy, qua hoạt động đạo thực điểm chống NKBV ngành y tế Hà Nội số bệnh viện, tỷ lệ bác sỹ tuân thủ vệ sinh bàn tay tăng lên đáng kể, từ giảm rõ rệt tỷ lệ NKBV Đơn cử BV Hà Đông, tỷ lệ NKBV giảm từ 14,8% (trước can thiệp) xuống 1,28% sau can thiệp; BV Đan Phượng, giảm từ 2,3% (trước can thiệp) xuống 0% sau can thiệp NKBV đem lại hậu lớn nên trách nhiệm phịng, chống khơng riêng bệnh nhân, nhân viên y tế mà xã hội, có ý thức thực việc đầu tư đầy đủ sở vật chất cho đơn vị y tế S.mercescens Trang 16 ... triển: Năm 1819, Bartolomeo Bizio, dược sĩ từ Padua, Italia, phát đặt tên Serratia mercescens ông xác định vi khuẩn nguyên nhân đổi màu máu kỳ diệu polenta Bizio Serratia tên danh dự nhà vật lý... tất hàng Sự khác biệt nhỏ cường độ hang mờ bỏ qua S .mercescens Trang 14 Hình 2.9: Kết điện di S .mercescens S .mercescens Trang 15 Chương III: Kết luận đề nghị Theo nhận định nhiều chuyên gia y tế,... Bộ: Enterobacteriales Họ: Enterobacteriaceae Chi: Serratia Lồi: Serratia marcescens Hình 1.1 S marcescens thạch XLD Đặc điểm: 3.1 Đặc điểm chung: Serratia giống trực khuẩn Gram âm, kỵ khí tùy nghi,