Báo cáo đề tài khoa học và công nghệ cấp trường: Nghiên cứu xây dựng quy trình chiết & khảo sát hoạt tính kháng khuẩn của cao lá ổi non trồng tại xã Suối Nghệ, huyện Châu Đức, tỉnh Bà Rịa – Vũng Tàu

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÀ RỊA – VŨNG TÀU  BÁO CÁO ĐỀ TÀI KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ CẤP TRƯỜNG NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG QUY TRÌNH CHIẾT & KHẢO SÁT HOẠT TÍNH KHÁNG KHUẨN CỦA CAO LÁ ỔI NON TRỒNG TẠI XÃ SUỐI NGHỆ, HUYỆN CHÂU ĐỨC, TỈNH BÀ RỊA – VŨNG TÀU Chủ nhiệm: Nguyễn Thị Song Anh Hướng dẫn khoa học: Th.S Nguyễn Quang Thái Bà Rịa – Vũng Tàu, tháng 09 năm 2019 Chủ nhiệm: Nguyễn Thị Song Anh Hướng dẫn khoa học: Th.S Nguyễn Quang Thái Chủ nhiệm: Nguyễn Thị Song Anh Hướng dẫn khoa học: Th.S Nguyễn Quang Thái Trường Đại Học Bà Rịa – Vũng Tàu Báo cáo đề tài khoa học công nghệ cấp trường MỤC LỤC DANH MỤC BẢNG DANH MỤC HÌNH ẢNH, BIỂU ĐỒ, SƠ ĐỒ DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT LỜI MỞ ĐẦU CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN LÝ THUYẾT 1.1 Giới thiệu ổi .7 1.1.1 Nguồn gốc phân bố .7 1.1.2 Đặc điểm thực vật ổi 1.1.3 Thành phần hóa học .10 1.1.4 Thành phần dinh dưỡng 11 1.1.5 Các hợp chất có hoạt tính sinh học ổi non 11 1.2 Ứng dụng ổi 15 1.2.1 Các nghiên cứu dược học ổi 15 1.2.2 Một số vị thuốc dân gian sử dụng ổi 17 1.3 Giới thiệu số vi khuẩn 18 1.3.1 Nhóm vi khuẩn Gram dương (Gr+) .18 1.3.2 Nhóm vi khuẩn Gram âm (Gr-) 21 1.4 Một số báo nghiên cứu khoa học ổi 26 1.4.1 Bài báo nghiên cứu khoa học nước 26 1.4.2 Bài báo nghiên cứu khoa học nước 28 1.5 Các phương pháp kỹ thuật 29 1.5.1 Phương pháp phân tích khối lượng 29 1.5.2 Một số phương pháp chiết .30 1.5.3 Phương pháp thử hoạt tính ức chế vi khuẩn bằng phương pháp khuếch tán đĩa thạch 32 1.5.4 2.1 Phương pháp sắc ký khí ghép khối phổ (GC/MS) 33 Đối tượng, dụng cụ thiết bị hóa chất, phương pháp nghiên cứu .34 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 34 2.1.2 Dụng cụ - thiết bị hóa chất 34 2.1.3 Vi khuẩn thí nghiệm 35 2.1.4 Các phương pháp nghiên cứu 35 Chủ nhiệm: Nguyễn Thị Song Anh Hướng dẫn khoa học: Th.S Nguyễn Quang Thái Trường Đại Học Bà Rịa – Vũng Tàu Báo cáo đề tài khoa học công nghệ cấp trường 2.2 Xử lý nguyên liệu 36 2.3 Đề xuất quy trình chiết cao từ ổi non 36 2.3.1 Quy trình chiết cao từ ổi non 36 2.3.2 Thuyết minh quy trình 37 2.4 Đề xuất mơ hình chưng cất thực nghiệm phịng thí nghiệm .38 2.5 Các phương pháp xác định số tiêu hóa lý 38 2.5.1 Xác định độ ẩm 38 2.5.2 Xác định hàm lượng tro bằng phương pháp tro hóa mẫu 39 2.6 Khảo sát điều kiện chiết .39 2.6.1 Khảo sát tỷ lệ nguyên liệu/dung môi .40 2.6.2 Khảo sát thời gian chiết 40 2.7 Khảo sát yếu tố nhiệt độ ảnh hưởng đến dịch chiết ổi 41 2.8 Tính hiệu suất chiết xuất cao thô 41 2.9 Định tính Flavonoid 41 2.10 Xác định thành phần hóa học cao ổi non phương pháp GC/MS 41 2.11 Thử hoạt tính kháng khuẩn phương pháp đo đường kính vòng kháng khuẩn 41 2.11.1 Chuẩn độ đục 41 2.11.2 Chuẩn bị chủng vi sinh vật thử nghiệm 42 2.11.3 Chuẩn bị nồng độ chất thử .42 2.11.4 Tiến hành thí nghiệm .42 2.11.5 Đọc kết ghi nhận đường kính vịng vô khuẩn 42 3.1 Kết xác dịnh số tiêu hóa lý ổi non 43 3.1.1 Độ ẩm .43 3.1.2 Hàm lượng tro 43 3.2 Kết khảo sát điều kiện chiết ổi non 44 3.2.1 Kết khảo sát tỷ lệ nguyên liệu/dung môi 44 3.2.2 Khảo sát thời gian chiết 45 3.3 Kết tính hiệu suất cao thơ 47 3.4 Kết khảo sát yếu tố nhiệt độ ảnh hưởng đến dịch chiết ổi non 47 3.5 Kết định tính Flavonoid 48 3.6 Kết định danh thành phần hóa học dịch chiết ổi non .49 Chủ nhiệm: Nguyễn Thị Song Anh Hướng dẫn khoa học: Th.S Nguyễn Quang Thái Trường Đại Học Bà Rịa – Vũng Tàu Báo cáo đề tài khoa học công nghệ cấp trường 3.7 Kết thử hoạt tính kháng khuẩn phương pháp đo đường kính vòng kháng khuẩn 57 CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 60 4.1 Kết luận .60 4.2 Kiến nghị .60 TÀI LIỆU THAM KHẢO .61 Chủ nhiệm: Nguyễn Thị Song Anh Hướng dẫn khoa học: Th.S Nguyễn Quang Thái Trường Đại Học Bà Rịa – Vũng Tàu Báo cáo đề tài khoa học công nghệ cấp trường DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Thành phần dinh dưỡng 100g ổi 11 Bảng 1.2 Màu sắc mật độ quang dịch chiết ngâm dung môi khác 28 Bảng 2.1 Bảng dụng cụ 34 Bảng 2.2 Bảng thiết bị 35 Bảng 2.3 Bảng khảo sát điều kiện chiết .39 Bảng 3.1 Kết khảo sát độ ẩm 43 Bảng 3.2 Kết khảo sát độ ẩm 44 Bảng 3.3 Kết khảo sát tỷ lệ nguyên liệu/dung môi 45 Bảng 3.4 Kết khảo sát thời gian chiết 46 Bảng 3.5 Kết màu sắc dịch chiết bảo quản nhiệt độ khác 48 Bảng 3.6 Thành phần hóa học hợp chất có cao ổi non 52 Bảng 3.7 So sánh thành phần hóa học có cao ổi non TP.Vũng Tàu & TP Đà Nẵng 56 Bảng 3.8 Đường kính vịng kháng khuẩn cao ổi non (mm) 57 Chủ nhiệm: Nguyễn Thị Song Anh Hướng dẫn khoa học: Th.S.Nguyễn Quang Thái Trường Đại Học Bà Rịa – Vũng Tàu Báo cáo đề tài khoa học công nghệ cấp trường DANH MỤC HÌNH ẢNH, BIỂU ĐỒ, SƠ ĐỒ Hình 1.1 Cây ổi .7 Hình 1.2 Thân ổi Hình 1.3 Bộ rễ ổi Hình 1.4 Lá ổi Hình 1.5 Hoa ổi Hình 1.6 Quả & hạt ổi 10 Hình 1.7 Staphylococcus aureus kính vi điện tử 20,000x 20 Hình 1.8 Khuẩn lạc B cereus đĩa thạch máu cừu 21 Hình 1.9 Ni cấy vi khuẩn Pseudomonas aeruginosa đĩa thạch Xylo Lysine Sodium Deoxycholate (XLD) 23 Hình 1.10 Hình ảnh Salmonella spp kính hiển vi điện tử quét SEM .25 Hình 1.11 Ảnh vi điện tử nhiệt độ thấp nhóm vi khuẩn E.coli, phóng đại 10.000 lần 26 Hình 1.12 Cân phân tích 29 Hình 1.13 Mơ hình soxhlet 32 Hình 1.15 Hệ thống GC/MS 33 Hình 2.1 Lá ổi non 34 Hình 2.2 Lá ổi sấy khô sau xay nhỏ 0.5 – 1cm 36 Hình 2.3 Mơ hình chiết cao ổi non phịng thí nghiệm 38 Hình 2.4 Hình ảnh minh họa đo đường kính vịng vơ khuẩn .42 Hình 3.1 Mẫu sau xác định độ ẩm 43 Hình 3.2 Mẫu sau hóa tro 44 Hình 3 Dịch chiết nồng độ khác 44 Hình 3.4 Dịch chiết chiết thời gian khác 46 Hình 3.5 Màu sắc dịch chiết trước sau bảo quản to khác 47 Hình 3.6 Kết định tính bằng dung dịch FeCl3 .48 Hình 3.7 Kết định tính bằng amoniac 49 Hình 3.8 Mẫu cao ổi non đem phân tích 49 Hình 3.9 Khối phổ GC/MS thời gian lưu – 10 50 Hình 3.10 Khối phổ GC/MS thời gian lưu 10 – 12.6 50 Chủ nhiệm: Nguyễn Thị Song Anh Hướng dẫn khoa học: Th.S.Nguyễn Quang Thái Trường Đại Học Bà Rịa – Vũng Tàu Báo cáo đề tài khoa học công nghệ cấp trường Hình 3.11 Khối phổ GC/MS thời gian lưu 12.6 – 14 51 Hình 3.12 Khối phổ GC/MS thời gian lưu 14 – 18 .51 Hình 3.13 Khả kháng Salmonella spp cao ổi non .58 Hình 3.14 Khả kháng Bacilus cereus cao ổi non 58 Hình 3.15 Khả kháng E.Coli cao ổi non 58 Hình 3.16 Khả kháng Staphylococcus aureus cao ổi non 58 Hình 3.17 Khả kháng Pseudomonas aeruginosa cao ổi non 59 Biểu đồ 3.1 Biểu diễn kết khảo sát tỷ lệ nguyên liệu/dung môi tối ưu 45 Biểu đồ 3.2 Biểu diễn kết khảo sát tỷ lệ thời gian tối ưu 46 Sơ đồ 2.1 Quy trình đề xuất chiết cao từ ổi non .37 Hình Thời gian lưu – 10 63 Hình Thời gian lưu 10 – 12.6 63 Hình Thời gian lưu 12.6 – 14 64 Hình Thời gian lưu 14 – 18 .64 Hình Kết khảo sát dịch chiết ổi non bằng dung mơi n – hexan .65 Hình Kết khảo sát dịch chiết ổi non bằng dung mơi chloroform 65 Hình Kết khảo sát dịch chiết ổi non bằng dung môi etyl acetat 65 Hình Kết khảo sát dịch chiết ổi non bằng dung môi cồn 96 66 Hình Phổ đồ GC/MS 66 Hình 10 Kết định danh hợp chất cao ổi non .67 Chủ nhiệm: Nguyễn Thị Song Anh Hướng dẫn khoa học: Th.S.Nguyễn Quang Thái Trường Đại Học Bà Rịa – Vũng Tàu Báo cáo đề tài khoa học công nghệ cấp trường DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT Viết tắt Tiếng Anh Tiếng Việt GC/MS Gas Chromatography/ Mass Spectrometry Sắc ký khí ghép khối phổ UV – VIS Ultraviolet – Visible Spectroscopy Máy đo quang phổ DMSO Dimethyl Sulfoxide Một hợp chất hữu lưu huỳnh MHA Muller Hinton Agar Môi trường MHB Muller Hinton Broth Môi trường TSB Môi trường dinh dưỡng Tryptic Soy Broth Môi trường dinh dưỡng cao thịt MP peptone CFU Chủ nhiệm: Nguyễn Thị Song Anh Colony Forting Unit Đơn vị hình thành khuẩn lạc Hướng dẫn khoa học: Th.S.Nguyễn Quang Thái Trường Đại Học Bà Rịa – Vũng Tàu Báo cáo đề tài khoa học công nghệ cấp trường LỜI MỞ ĐẦU Lý chọn đề tài [1] Việc nghiên cứu hợp chất tách từ nguồn dược liệu thiên nhiên có độ an tồn cao, vừa đạt hiệu tốt điều trị, trở thành đề tài quan tâm Nhiều cơng trình nghiên cứu tiến hành với thực liệu dùng phổ biến thuốc dân gian như: gừng, tỏi, hành, nghệ… Bên cạnh đó, Ổi (Psidium gaujava L) loại quen thuộc đời sống người dân nước ta, đặt biệt vùng nông thôn trồng để lấy ăn, chế biến làm nước giải khát, làm mứt ổi Ngoài phận ổi có búp non, non, vỏ rễ vỏ thân vị thuốc mà y học nhân gian sử dụng để điều trị bệnh rối loạn tiêu hóa, hơ hấp viêm ruột cấp mạn, kiết lị, tiêu chảy… Người Ấn Độ sử dụng hay vỏ Ổi điều trị bệnh tiêu chảy, viêm họng, nôn mửa… Ở Brazil, Ổi xem chất làm se niêm mạc lợi tiểu Nhận thấy ứng dụng to lớn ổi công nghệ thực phẩm, dược phẩm nên thực đề tài: “Nghiên cứu xây dựng quy trình chiết & khảo sát hoạt tính kháng khuẩn cao ổi non trồng xã Suối Nghệ, huyện Châu Đức, tỉnh Bà Rịa – Vũng Tàu” Mục đích nghiên cứu - Xây dựng quy trình chiết hợp chất hóa học ổi non - Xác định thành phần hoá học, cấu trúc hợp chất hóa học cao ổi non - Thử hoạt tính kháng khuẩn có cao ổi non Đối tượng phạm vi nghiên cứu Lá ổi non xã Suối Nghệ, huyện Châu Đức, tỉnh Bà Rịa – Vũng Tàu dịch chiết ổi non chiết bằng phương pháp chiết soxhlet Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài - Ý nghĩa thực tiễn: Giải thích cách khoa học kinh nghiệm dân gian, thuận tiện cho việc ứng dụng - Ý nghĩa khoa học: Cung cấp thêm thông tin ổi non số tiêu hóa lý, khảo sát thành phần hóa học cấu tạo số hợp chất có ổi non, khả kháng khuẩn ứng dụng ổi non Cấu trúc báo cáo gồm chương Chương 1: Tổng quan lý thuyết Chủ nhiệm: Nguyễn Thị Song Anh Hướng dẫn khoa học: Th.S.Nguyễn Quang Thái ... đề tài: ? ?Nghiên cứu xây dựng quy trình chiết & khảo sát hoạt tính kháng khuẩn cao ổi non trồng xã Suối Nghệ, huyện Châu Đức, tỉnh Bà Rịa – Vũng Tàu? ?? Mục đích nghiên cứu - Xây dựng quy trình chiết. .. hóa học ổi non - Xác định thành phần hố học, cấu trúc hợp chất hóa học cao ổi non - Thử hoạt tính kháng khuẩn có cao ổi non Đối tượng phạm vi nghiên cứu Lá ổi non xã Suối Nghệ, huyện Châu Đức, tỉnh. .. dẫn khoa học: Th.S Nguyễn Quang Thái Trường Đại Học Bà Rịa – Vũng Tàu Báo cáo đề tài khoa học công nghệ cấp trường 2.2 Xử lý nguyên liệu 36 2.3 Đề xuất quy trình chiết cao từ ổi non