Xây dựng quy trình phân tách đồng phân quang học salbutamol bằng phương pháp điện di mao quản 2017 hđ nckh

BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƢỢC TP HỒ CHÍ MINH BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ CẤP TRƢỜNG XÂY DỰNG QUY TRÌNH PHÂN TÁCH ĐỒNG PHÂN QUANG HỌC SALBUTAMOL BẰNG PHƢƠNG PHÁP ĐIỆN DI MAO QUẢN /2017/HĐ-NCKH Chủ nhiệm đề tài: ThS Nguyễn Thị Minh Phƣơng Tp Hồ Chí Minh 9-2018 BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƢỢC TP HỒ CHÍ MINH BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ CẤP TRƢỜNG XÂY DỰNG QUY TRÌNH PHÂN TÁCH ĐỒNG PHÂN QUANG HỌC SALBUTAMOL BẰNG PHƢƠNG PHÁP ĐIỆN DI MAO QUẢN /2017/HĐ-NCKH Chủ nhiệm đề tài (ký, họ tên) Tp Hồ Chí Minh, 9-2018 Danh sách thành viên tham gia nghiên cứu đề tài PGS.TS Nguyễn Đức Tuấn ThS Nguyễn Thị Minh Phƣơng Triệu Quốc Hùng MỤC LỤC MỞ ĐẦU TỔNG QUAN 2.1 SALBUTAMOL 2.2 CÁC NGHIÊN CỨU VỀ PHÂN TÁCH ĐỒNG PHÂN QUANG HỌC SALBUTAMOL ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 3.1 ĐỐI TƢỢNG – HÓA CHẤT – TRANG THIẾT BỊ 3.2 PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU KẾT QUẢ 16 4.1 KHẢO SÁT ĐIỀU KIỆN PHÂN TÁCH ĐỒNG PHÂN QUANG HỌC CỦA SALBUTAMOL BẰNG PHƢƠNG PHÁP ĐIỆN DI MAO QUẢN 16 4.1.1 Khảo sát dung dịch điện di 16 4.1.2 Khảo sát pH dung dịch điện ly 17 4.1.3 Khảo sát nồng dung dịch điện ly TRIS 18 4.1.4 Khảo sát tác nhân đối quang 19 4.1.5 Khảo sát hỗn hợp tác nhân đối quang 20 4.1.6 Khảo sát nồng độ hỗn hợp tác nhân đối quang 20 4.1.7 TỐI ƢU HÓA BẰNG PHẦN MỀM MODDE 5.0 22 4.2 THẨM ĐỊNH QUY TRÌNH PHÂN TÁCH ĐỒNG PHÂN SALBUTAMOL 24 4.2.1 Tính phù hợp hệ thống 25 4.2.2 Tính đặc hiệu 26 4.2.3 Tính tuyến tính 29 4.2.4 Độ lặp lại 31 4.2.5 Độ 32 4.3 -ỨNG DỤNG QUY TRÌNH ĐỂ XÁC ĐỊNH TẠP ĐỒNG PHÂN QUANG HỌC (ĐỒNG PHÂN DEXTROSALBUTAMOL) TRONG CHẾ PHẨM CHỨA LEVOSALBUTAMOL 34 KẾT LUẬN 35 TÀI LIỆU THAM KHẢO DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT Từ viết tắt Từ nguyên Nghĩa Tiếng Việt BGE Background Electrolyte Dung dịch điện ly CD Cyclodextrin Cyclodextrin CE Capillary Electrophoresis Điện di mao quản CM--CD Carboxymethyl--cyclodextrin CorrArea Corrected Area Diện tích pic đƣợc chuẩn hóa CZE Capillary Zone Electrophoresis Điện di mao quản vùng HP--CD Hydroxypropyl--cyclodextrin M--CD Methyl--cyclodextrin MC--CD Methoxycarbonyl--cyclodextrin Rs Resolution Độ phân giải RSD Relative Standard Deviation Độ lệch chuẩn tƣơng đối SD Standard Deviation Độ lệch chuẩn TB Trung bình tM Migration time Thời gian di chuyển DANH MỤC BẢNG Bảng 3.1 Đối tƣợng nghiên cứu Bảng 3.2 Chất chuẩn Bảng 3.3 Dung môi, hóa chất .7 Bảng 3.4 bảng pha loãng dung dịch đệm Bảng 3.5 Mã hóa yếu tố ảnh hƣởng .11 Bảng 3.6 Ma trận quy hoạch thực nghiệm 11 Bảng 4.1 Kết quy hoạch thực nghiệm 22 Bảng 4.2 Kết tối ƣu hóa từ phần mềm Modde 5.0 24 Bảng 4.3 Kết thực nghiệm kiểm tra kết tối ƣu hóa 24 Bảng 4.4 Kết khảo sát tính phù hợp hệ thống mẫu đối chiếu salbutamol levosalbutamol .25 Bảng 4.5 Kết khảo sát khoảng tuyến tính salbutamol 29 Bảng 4.6 Phƣơng trình hồi quy khoảng tuyến tính hai đồng phân salbutamol .30 Bảng 4.7 Kết khảo sát khoảng tuyến tính Levosalbutamol 30 Bảng 4.8 Phƣơng trình hồi quy khoảng tuyến tính Levosalbutamol 31 Bảng 4.9 Kết khảo sát độ lặp lại phƣơng pháp mẫu thử salbutamol levosalbutamol 31 Bảng 4.10 Kết khảo sát độ quy trình phân tích salbutamol 32 Bảng 4.11 Kết khảo sát độ quy trình phân tích Levosalbutamol 33 Bảng 4.12 Kết xác định tạp đồng phân dextrosalbutamol chế phẩm levosalbutamol .34 DANH MỤC HÌNH Hình 2.1Cơng thức cấu tạo salbutamol Hình 4.1 Điện di đồ dung dịch điện ly acetate 40 mM, pH 2,5 16 Hình 4.2 Điện di đồ dung dịch điện ly phosphate 40 mM, pH 2,5 16 Hình 4.3 Điện di đồ dung dịch điện ly tris 40 mM pH 2,5 17 Hình 4.4 Đồ thị thể mối tƣơng quan pH độ phân giải 18 Hình 4.5 Điện di đồ salbutamol 18 Hình 4.6 Đồ thị thệ tƣơng quan nồng độ dung dịch điện ly độ phân giải 19 Hình 4.7 Điện di đồ salbutamol với dung dịch điện ly trís nồng độ 20 mM – 50 mM .19 Hình 4.8 Điện di đồ đồ thị biểu diễn ảnh hƣởng tác nhân đối quang độ phân giải 19 Hình 4.9 Điện di đồ đồ thị biểu diễn ảnh hƣởng hỗn hợp tác nhân đối quang độ phân giải 20 Hình 4.10 Điện di đồ salbutamol với tác nhân đối quang M-β-CD + HP-β-CD nồng độ khác 21 Hình 4.11 Điện di đồ salbutamol với tác nhân đối quang M-β-CD + HP-β-CD nồng độ khác .21 Hình 4.12 Ảnh hƣởng nhân tố khảo sát đến độ phân giải đồng phân salbutamol .23 Hình 4.13 Điện di đồ mẫu trắng 26 Hình 4.14 Điện di đồ mẫu chuẩn salbutamol 26 Hình 4.15 Điện di đồ mẫu thử salbutamol 26 Hình 4.16 Điện di đồ mẫu thử thêm chuẩn salbutamol .26 Hình 4.17 Điện di đồ mẫu chuẩn salbutamol thêm chuẩn levosalbutamol 27 Hình 4.18 Phổ UV thời gian dịch chuyển pic levosalbutamol mẫu chuẩn mẫu thử salbutamol 27 Hình 4.19 Phổ UV thời gian dịch chuyển pic dextrosalbutamol mẫu chuẩn mẫu thử salbutamol 27 Hình 4.20 Điện di đồ mẫu chuẩn levosalbutamol 27 Hình 4.21 Điện di đồ mẫu thử levosalbutamol 28 Hình 4.22 Điện di đồ mẫu thử thêm chuẩn levosalbutamol 28 Hình 4.23 Phổ UV thời gian dịch chuyển pic levosalbutamol mẫu chuẩn mẫu thử levosalbutamol 28 Hình 4.24 Đƣờng biểu diễn tƣơng quan CorrArea đồng phân levosalbutamol với nồng độ 29 Hình 4.25 Đƣờng biểu diễn tƣơng quan CorrArea đồng phân dextrosalbutamol với nồng độ .29 Hình 4.26 Điện di đồ mẫu chuẩn salbutamol nồng độ 0,2 µg/ml .30 Hình 4.27 Đƣờng biểu diễn tƣơng quan diện tích pic đƣợc chuẩn hóa đồng phân levosalbutamol với nồng độ levosalbutamol .30 Hình 4.28 Điện di đồ mẫu chuẩn levosalbutamol nồng độ 0,1 µg/ml 31 THÔNG TIN KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU ĐỀ TÀI KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ CẤP TRƢỜNG Thơng tin chung: - Tên đề tài: Xây dựng quy trình phân tách đồng phân quang học salbutamol phƣơng pháp điện di mao quản - Mã số: - Chủ nhiệm đề tài: Nguyễn Thị Minh Phƣơng Điện thoại: 0909810668 Email: minhphuongvn80@yahoo.com - Đơn vị quản lý chuyên môn (Khoa, Tổ môn): Bộ môn PT-KN, khoa Dƣợc - Thời gian thực hiện: 10/2016 – 10/2017 Mục tiêu: Xây dựng quy trình phân tách đồng phân quang học salbutamol phƣơng pháp điện di mao quản Nội dung chính: - Khảo sát điều kiện tách đồng phân quang học salbutamol kỹ thuật điện di mao quản - Xây dựng, tối ƣu hóa đánh giá quy trình phân tách đồng phân quang học salbutamol - Ứng dụng quy trình để xác định tạp đồng phân quang học (đồng phân dextrosalbutamol) chế phẩm chứa levosalbutamol Kết đạt đƣợc (khoa học, đào tạo, kinh tế-xã hội, ứng dụng, ) - Quy trình phân tách đồng phân salbutamol phƣơng pháp điện di mao quản đƣợc xây dựng, sử dụng hệ điện ly phosphat – tris 40 mM pH 3; tác nhân đối quang methyl-β-CD 85 mg/ ml hydroxypropyl 54 mg/ml; điện 25 kV; nhiệt độ cột 25 oC; áp suất bơm mẫu 50 mbar; thời gian bơm mẫu 5s Kết thẩm định cho thấy quy trình phân tách có tính đặc hiệu; khoảng tuyến tính 0,5 – 250 µg/ml cho đồng phân; độ lặp lại đạt (RSD < %) độ với tỷ lệ phục hồi 95 - 105% - Bài báo cáo poster hội nghị ASEAN PharmNET 2015 Thái Lan 17 2,5 40 85 60 2,35 18 3,5 30 85 60 1,93 19 3,5 40 75 60 2,11 20 2,5 30 75 60 2,23 21 3,5 30 65 50 1,73 22 3,5 20 85 50 1,98 23 40 85 50 2,21 24 2,5 20 75 50 2,26 25 30 75 50 2,26 26 30 75 50 2,29 27 30 75 50 2,28 Từ kết thực nghiệm, sử dụng pần mềm MODDE 5.0 tac đƣợc: Hình 4.12 Ảnh hƣởng nhân tố khảo sát đến độ phân giải đồng phân salbutamol Kết phân tích cho thấy có ảnh hƣởng tích cực bậc đến độ phân giải Rs đồng phân salbutamol nồng độ tác nhân đối quang HP-β-CD (X4), tiếp đến nồng độ tác nhân đối quang M-β-CD (X3), hai nhân tố pH (X1) nồng độ đệm (X2) có ảnh hƣởng tiêu cực đến độ phân giải bậc hai nhân tố pH (X12) có ảnh hƣởng tiêu cực đến độ phân giải, tiếp đến nồng độ HP-β-CD (X42), pH nồng độ đệm (X1 X2) có ảnh hƣởng tích cực đến độ phân giải, nồng độ tác nhân đối 23 quang M-β-CD (X32), nồng độ đệm (X22), pH nồng độ tác nhân đối quang M-βCD (X1X3), pH nồng độ tác nhân đối quang HP-β-CD (X1X4), nồng độ tác nhân đối quang M-β-CD HP-β-CD (X3X4), nồng độ đệm nồng độ tác nhân đối quang M-β-CD (X2X3), nồng độ đệm nồng độ tác nhân đối quang HP-β-CD (X2X4) làm tăng độ phân giải khơng đáng kể Chạy trƣơng trình tối ƣu hóa phần mềm Modde 5.0 với kết thu đƣợc từ 27 thí nghiệm ta đƣợc điều kiện tối ƣu đƣợc thể bảng 4.10 Bảng 4.2 Kết tối ƣu hóa từ phần mềm Modde 5.0 Nồng độ đệm pH M-β-CD(mg) HP-β-CD(mg) Rs dự đoán 85 54 2,44 (mM) 3,0 40 Tiến hành thực nghiệm với điều kiện tối ƣu để kiểm chứng lại kết dự đoán phần mềm Modde 5.0 đƣa Bảng 4.3 Kết thực nghiệm kiểm tra kết tối ƣu hóa Rs dự đốn Rs thực nghiệm 1,44 2,45 1,44 2,47 1,44 2,47 Trung bình 2,46 Kết thực nghiệm tiến hành theo điều kiện dự đoán phần mềm tối ƣu hóa Modde 5.0 cho thấy độ phân giải trung bình đạt đƣợc 2.46 ( dự đoán phần mềm 2.44) Nhƣ vậy, khác biệt dự đoán phần mềm thực nghiệm khơng có ý nghĩa thống kê Có thể sử dụng điều kiện tối ƣu mà phần mềm đƣa đệm tris nồng độ 40 mM, pH 3,0, nồng độ tác nhân đối quang M-β-CD 85 mg, tác nhân đối quang HP-β-CD 54 mg 4.2 THẨM ĐỊNH QUY TRÌNH PHÂN TÁCH ĐỒNG PHÂN SALBUTAMOL Sau sử dụng phần mềm Modde 5.0 để tối ƣu hóa điều kiện phân tích đồng phân quang học salbutamol phƣơng pháp điện di mao quản, tìm điều 24 kiện phân tích tối ƣu là: - Cột mao quản silica nung chảy, chiều dài tổng cộng 50 cm, chiều dài hiệu 44 cm, đƣờng kính 50 µm - Dung dịch đệm: tris 40 mM, pH 3,0 - Điện thế: 20 kV, nhiệt độ cột phân tích 25oC - Bƣớc sóng phát hiện: 225 nm - Tiêm mẫu: 50 mbar x s - Tác nhân đối quang: hỗn hợp M-β-CD 85 mg HP-β-CD 54 mg Dùng điều kiện phân tích để đánh giá tính tƣơng thích hệ thống thẩm định quy trình định lƣợng 4.2.1 Tính phù hợp hệ thống Bảng 4.4 Kết khảo sát tính phù hợp hệ thống mẫu đối chiếu salbutamol levosalbutamol TM (phút) Salbutamol Levo Dextro 20,914 21,551 20,678 CorrArea Levo Salbutamol Levo RS Levo Dextro 20,412 2,1687 2,1856 2,2220 2,47 21,315 20,514 2,2349 2,1555 2,2493 2,54 20,714 21,354 20,674 2,1881 2,2017 2,1923 2,42 21,012 21,624 20,641 2,1400 2,1109 2,1569 2,45 20,562 21,215 20,465 2,1868 2,1322 2,1448 2,46 21,124 21,751 20,542 2,2086 2,1021 2,1576 2,51 TB 20,834 21,468 20,541 2,1878 2,1480 2,1872 2,47 SD 0,2168 0,2058 0,1008 0,0326 0,0402 0,042 RSD % 1,04 0,96 0,49 1,49 1,87 1,91 Nhận xét: RSD thời gian dịch chuyển (tM) diện tích pic đƣợc chuẩn hóa (CorrArea) nhỏ 2% Độ phân giải hai pic đồng phân mẫu racemic lớn 1.5 nên quy trình phân tích đồng phân quang học salbutamol phƣơng pháp điện di mao quản đạt tính phù hợp hệ thống 25 4.2.2 Tính đặc hiệu Hình 4.13 Điện di đồ mẫu trắng Hình 4.14 Điện di đồ mẫu chuẩn salbutamol Hình 4.15 Điện di đồ mẫu thử salbutamol Hình 4.16 Điện di đồ mẫu thử thêm chuẩn salbutamol 26 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Hình 4.17 Điện di đồ mẫu chuẩn salbutamol thêm chuẩn levosalbutamol Hình 4.18 Phổ UV thời gian dịch chuyển pic levosalbutamol mẫu chuẩn salbutamol (a), mẫu thử salbutamol (b) Hình 4.19 Phổ UV thời gian dịch chuyển pic dextrosalbutamol mẫu chuẩn salbutamol (a), mẫu thử salbutamol (b) Hình 4.20 Điện di đồ mẫu chuẩn levosalbutamol 27 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Hình 4.21 Điện di đồ mẫu thử levosalbutamol Hình 4.22 Điện di đồ mẫu thử thêm chuẩn levosalbutamol Hình 4.23 Phổ UV thời gian dịch chuyển pic levosalbutamol mẫu chuẩn levosalbutamol (a), mẫu thử levosalbutamol(b) Nhận xét: Dung dịch mẫu thử salbutamol xuất pic có thời gian lƣu tƣơng đƣơng với thời gian lƣu pic salbutamol mẫu chuẩn Mẫu trắng khơng có pic trùng với pic mẫu salbutamol chuẩn mẫu salbutamol thử, chiều cao diện tích pic tăng lên so với trƣớc thêm chuẩn salbutamol Phổ UV thời gian di chuyển píc salbutamol mẫu chuẩn mẫu thử giống Vậy quy trình định lƣợng salbutamol phƣơng pháp điện di mao quản đạt yêu cầu tính đặc hiệu quy trình kiểm nghiệm dƣợc phẩm 28 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 4.2.3 Tính tuyến tính Mỗi tƣơng quan diện tích pic đƣợc chuẩn hóa (CorrArea) nồng độ (µg/ml) đƣợc xây dụng nồng độ µg/ml, µg/ml, 25 µg/ml , 50µg/ml, 100 µg/ml, 500 µg/ml mẫu salbutamol 0,4 µg/ml, µg/ml, µg/ml , 50µg/ml, 100 µg/ml, 500 µg/ml mẫu levosalbutamol Kết đƣợc xử lý phần mềm MS-Excel trắc nghiệm thống kê (Fisher Student), kết đƣợc thể bảng 4.6 bảng 4.8 Bảng 4.5 Kết khảo sát khoảng tuyến tính salbutamol Nồng độ CorrArea CorrArea đồng phân (Levosalbutamol) (Dextrosalbutamol) (µg/ml) Lần Lần TB Lần Lần TB 0,5 0,0228 0,0219 0,0223 0,0223 0,0215 0,0219 2,5 0,0926 0,0954 0,0940 0,0896 0,0948 0,0922 12,5 0,5214 0,5330 0,5272 0,5287 0,5275 0,5281 25 1,0718 1,0832 1,0775 1,0812 1,0322 1,0567 50 2,2115 2,2182 2,2148 2,1991 2,2037 2,2014 250 10,3955 10,3398 10,3677 10,6523 10,3379 10,4951 Hình 4.24 Đƣờng biểu diễn tƣơng quan CorrArea levosalbutamol với nồng độ đồng phân Hình 4.25 Đƣờng biểu diễn tƣơng quan CorrArea đồng phân dextrosalbutamol với nồng độ Sử dụng trắc nghiệm t trắc nghiệm F xác định đƣợc: - Hệ số b ý nghĩa - Hệ số a có ý nghĩa - Phƣơng trình hồi quy hai đồng phân có tính tƣơng thích Nồng độ thấp salbutamol mà phát đƣợc pic đồng phân 29 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh khoảng 0,2 µg/ml Hình 4.26 Điện di đồ mẫu chuẩn salbutamol nồng độ 0,2 µg/ml Bảng 4.6 Phƣơng trình hồi quy khoảng tuyến tính hai đồng phân salbutamol Levosalbutamol Dextrosalbutamol Y = 0,0414x Y = 0,042x R2 = 0,9998 R2 = 0,9999 Phƣơng trình hồi quy Khoảng tuyến tính µg/ml - 500 µg/ml Giới hạn phát 0,2 µg/ml Bảng 4.7 Kết khảo sát khoảng tuyến tính Levosalbutamol Levosalbutamol CorArea (Levosalbutamol) (µg/ml) Lần Lần TB 0,4 0,0295 0,0312 0,0303 0,0648 0,0621 0,0635 0,2432 2,1693 2,1842 50 2,1991 4,7191 4,6707 100 4,6223 12,7119 12,9111 500 21,4579 21,6289 21,5434 Hình 4.27 Đƣờng biểu diễn tƣơng quan diện tích pic đƣợc chuẩn hóa đồng phân levosalbutamol với nồng độ levosalbutamol 30 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Sử dụng trắc nghiệm t trắc nghiệm F xác định đƣợc: - Hệ số b khơng có ý nghĩa - Hệ số a có ý nghĩa - Phƣơng trình hồi quy hai đồng phân có tính tƣơng thích Nồng độ thấp levosalbutamol mà phát đƣợc pic levosalbutamol khoản 0.1 µg/ml Hình 4.28 Điện di đồ mẫu chuẩn levosalbutamol nồng độ 0,1 µg/ml Bảng 4.8 Phƣơng trình hồi quy khoảng tuyến tính Levosalbutamol Phƣơng trình hồi quy Y = 0.043X Khoảng tuyến tính 0.4 – 500 µg/ml Giới hạn phát 0.1 µg/ml 4.2.4 Độ lặp lại Bảng 4.9 Kết khảo sát độ lặp lại phƣơng pháp mẫu thử salbutamol levosalbutamol TM (phút) Salbutamol Levo Dextro 20,594 21,214 20,421 CorrArea Levo Salbutamol Levo RS Levo Dextro 19,643 2,1470 2,1607 2,0979 2,48 21,154 19,688 2,1128 2,1766 2,1040 2,45 20,245 20,824 19,754 2,1810 2,0775 2,1217 2,52 20,754 21,314 19,841 2,0870 2,1481 2,1792 2,43 20,214 20,754 19,683 2,1867 2,0874 2,0952 2,54 31 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 20,412 21,015 19,687 2,1054 2,1597 2,0866 2,46 TB 20,440 21,046 19,716 2,1367 2,1350 2,1141 2,48 SD 0,2062 0,2224 0,0709 0,0414 0,0418 0,0340 RSD % 1,01 1,06 0,36 1,94 1,96 1,61 Nhận xét: RSD thời gian dịch chuyển (tM) diện tích pic đƣợc chuẩn hóa (CorrArea) nhỏ 2% Độ phân giải hai pic đồng phân mẫu racemic lớn 1.5 nên quy trình đạt độ lăp lại 4.2.5 Độ Kết khảo sát độ quy trình phân tích đồng phân salbutamol phƣơng pháp điện di mao quản đƣợc trình bày bảng 4.10 4.11 Bảng 4.10 Kết khảo sát độ quy trình phân tích salbutamol Tỷ lệ chất CorrArea chuẩn mẫu thử thêm vào (%) Lƣợng Hàm lƣợng đồng chất đối phân chiếu thêm vào tính theo mẫu đồng (g/ml) phân (g/ml) CorrArea Hàm Tỷ lệ lƣợng phục phục hồi hồi (g/ml) (%) Đồng phân Levosalbutamol 80 100 120 1,9870 47,9901 40 3,6608 40,4350 101,09 1,9870 47,9901 40 3,6225 39,5099 98,77 1,9870 47,9901 40 3,6633 40,4954 101,24 1,9870 47,9901 50 4,0636 50,1645 100,33 1,9870 47,9901 50 4,0179 49,0606 98,12 1,9870 47,9901 50 4,1108 51,3046 102,61 1,9870 47,9901 60 4,3979 58,2394 97,07 1,9870 47,9901 60 4,3886 58,0147 96,69 1,9870 47,9901 60 4,5298 61,4254 102,38 39,8284 99,57 Đồng phân Dextrosalbutamol 2,0093 47,8406 40 3,6821 32 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 80 100 120 2,0093 47,8406 40 3,6983 40,2142 100,54 2,0093 47,8406 40 3,7271 40,8999 102,25 2,0093 47,8406 50 4,2141 52,4951 104,99 2,0093 47,8406 50 4,0396 48,3404 96,68 2,0093 47,8406 50 4,1626 51,2689 102,54 2,0093 47,8406 60 4,4062 57,0689 95,11 2,0093 47,8406 60 4,5971 61,6142 102,69 2,0093 47,8406 60 4,6307 62,4142 104,02 Bảng 4.11 Kết khảo sát độ quy trình phân tích Levosalbutamol Tỷ lệ Lƣợng Hàm lƣợng chất đồng phân chất đối chiếu thêm mẫu vào thực tế (g/ml) (g/ml) chuẩn thêm vào CorrArea mẫu thử (%) 80 100 120 CorrArea Hàm Tỷ lệ lƣợng phục phục hồi hồi (g/ml) (%) 2,1285 49,4998 40 3,8571 40,2002 100,50 2,1285 49,4998 40 3,8011 38,8979 97,24 2,1285 49,4998 40 3,8658 40,4025 101,01 2,1285 49,4998 50 4,2826 50,0955 100,19 2,1285 49,4998 50 4,2398 49,1002 98,20 2,1285 49,4998 50 4,2612 49,5979 99,20 2,1285 49,4998 60 4,656 58,7793 97,97 2,1285 49,4998 60 4,7345 60,6049 101,01 2,1285 49,4998 60 4,6391 58,3862 97,31 Nhận xét: Kết cho thấy tỷ lệ phục hồi thực nghiệm nằm giới hạn cho phép 95-105 %, phƣơng pháp phân tích đồng phân salbutamol phƣơng pháp điện di mao quản đạt độ 33 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 4.3 -ỨNG DỤNG QUY TRÌNH ĐỂ XÁC ĐỊNH TẠP ĐỒNG PHÂN QUANG HỌC (ĐỒNG PHÂN DEXTROSALBUTAMOL) TRONG CHẾ PHẨM CHỨA LEVOSALBUTAMOL Bảng 4.12 Kết xác định tạp đồng phân dextrosalbutamol chế phẩm levosalbutamol CorrArea % tạp TB Xopenex Levo Dextro (pha dung dịch 16,9827 0,3181 1,87 tƣơng đƣơng 17,1866 0,3049 1,77 400 g/ml) 17,2319 0,2819 1,64 1,76 34 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh KẾT LUẬN Sau thời gian thực đề tài, thu thập đƣợc kết sau: - Quy trình phân tách đồng phân salbutamol phƣơng pháp điện di mao quản đƣợc xây dựng, sử dụng hệ điện ly phosphat – tris 40 mM pH 3; tác nhân đối quang methyl-β-CD 85 mg/ ml hydroxypropyl 54 mg/ml; điện 20 kV; nhiệt độ cột 25 oC; áp suất bơm mẫu 50 mbar; thời gian bơm mẫu 5s Kết thẩm định cho thấy quy trình phân tách có tính đặc hiệu; khoảng tuyến tính 0,5 – 250 µg/ml cho đồng phân; độ lặp lại đạt (RSD < %) độ với tỷ lệ phục hồi 95 - 105% 35 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh TÀI LIỆU THAM KHẢO Ameredes BT, Calhoun WJ (2009), “Levalbuterol versus albuterol”, Curr Allergy Asthma Rep, 9(5), 401-9 Cockcroft DW, Swystun VA (1997), “Effect of single doses of S-salbutamol, R-salbutamol, racemic salbutamol, and placebo on the airway response to methacholine”, Thorax, 52(10), 8458 Esquisabel A, Hernandez RM, Gascon AR, Igartua M, Calvo B, Pedraz JL (1997), “Determination of salbutamol enantiomers by high-performance capillary electrophoresis and its application to dissolution assays”, J Pharm Biomed Anal, 16(2), 357-366 Henderson WR Jr, Banerjee ER, Chi EY (2005), “Differential effects of (S)- and (R)enantiomers of albuterol in a mouse asthma model”, J Allergy Clin Immunol, 116(2), 332-340 ICH Harmonized Tripartite Guideline Text on Validation of analytical procedures; 1994 p.6-8 Jesus Vela, Enrique G Yanes, Apryll M Stalcup (2001), “Quantitative determination of clenbuterol, salbutamol and tulobuterol enantiomers by capillary electrophoresis”, Fresenius J Anal Chem, 369, 212-219 Maria G Matera, Luigino Calzetta, Paola Rogliani, Floriana Bardaro, Clive P Page, Mario Cazzola (2011), “Evaluation of the effects of the R- and Senantiomers of salbutamol on equine isolated bronch”, Pulmonary Pharmacology & Therapeutics, 24(2), 221-226 Rogan MM, Altria KD, Goodall Dm (1994), “Enantiomeric separation of salbutamol and related impurties using capillary electrophoresis”, electrophoresis, 15(6), 808-817 Shoulian Wei, Haifu Guo, Jin-Ming Lin (2006), “Chiral separation of salbutamol and bupivacaine by capillary electrophoresos using dual neutral cyclodextrins as selectors and its application to pharmaceutical preparations and rat blood samples assay”, Journal of Chromatography B, 832(1), 90-96 36 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 37 ... kiện tách đồng phân quang học salbutamol kỹ thuật điện di mao quản Xây dựng, tối ƣu hóa đánh giá quy trình phân tách đồng phân quang học salbutamol Ứng dụng quy trình để xác định tạp đồng phân quang. .. 10 /2017 Mục tiêu: Xây dựng quy trình phân tách đồng phân quang học salbutamol phƣơng pháp điện di mao quản Nội dung chính: - Khảo sát điều kiện tách đồng phân quang học salbutamol kỹ thuật điện. .. thuật điện di mao quản - Xây dựng, tối ƣu hóa đánh giá quy trình phân tách đồng phân quang học salbutamol - Ứng dụng quy trình để xác định tạp đồng phân quang học (đồng phân dextrosalbutamol)