) XÁC ĐỊNH MƠI TRƯỜNG LÊN MEN TỐI ƯU CHO Q TRÌNH SINH TỔNG HỢP PECTIN METHYLESTERASE TỪ ASPERGILLUS NIGER SỬ DỤNG CƠ CHẤT BÃ TÁO TA VÀ VỎ CAM SÀNH

TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ VIỆN NGHIÊN CỨU VÀ PHÁT TRIỂN CÔNG NGHỆ SINH HỌC BÁO CÁO NGHIỆM THU ĐỀ TÀI CẤP TRƯỜNG (Nghiên cứu sinh thực hiện) XÁC ĐỊNH MƠI TRƯỜNG LÊN MEN TỐI ƯU CHO Q TRÌNH SINH TỔNG HỢP PECTIN METHYLESTERASE TỪ ASPERGILLUS NIGER SỬ DỤNG CƠ CHẤT BÃ TÁO TA VÀ VỎ CAM SÀNH Mã số: NCST 2010 - 03 Chủ nhiệm đề tài Ths Trần Thanh Trúc Cần Thơ, tháng 12/2010 Báo cáo đề tài NCKH cấp Trường 2010 TÊN ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU KHOA HỌC CẤP TRƯỜNG XÁC ĐỊNH MÔI TRƯỜNG LÊN MEN TỐI ƯU CHO QUÁ TRÌNH SINH TỔNG HỢP PECTIN METHYLESTERASE TỪ ASPERGILLUS NIGER SỬ DỤNG CƠ CHẤT BÃ TÁO TA VÀ VỎ CAM SÀNH Mã số: NCST 2010 - 03 Thời gian thực hiện: từ tháng 04.2010 đến 12.2010 Cán hướng dẫn PGs Ts Nguyễn Văn Mười Ts Nguyễn Văn Thành Cán phối hợp nghiên cứu Nguyễn Ngọc Huỳnh Trân Vương Tố Trinh Ngày ……tháng…… năm 2010 Ngày……tháng…… năm 2010 Chủ nhiệm đề tài Chủ tịch hội đồng nghiệm thu Trần Thanh Trúc Trần Nhân Dũng Ngày……tháng…… năm 2010 Cơ quan chủ trì Trường Đại học Cần Thơ Trang i Báo cáo đề tài NCKH cấp Trường 2010 MỤC LỤC MỤC LỤC ii DANH MỤC BẢNG iv DANH MỤC HÌNH .v DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT .vi TÓM TẮT vii ABSTRACT viii CHƯƠNG ĐẶT VẤN ĐỀ .1 1.1 Tính cấp thiết đề tài .1 1.2 Mục tiêu nghiên cứu .1 CHƯƠNG 2.1 LƯỢC KHẢO TÀI LIỆU Pectin methylesterase 2.1.1 Khái quát chung 2.1.2 Một số đặc tính PME 2.1.3 Một số ứng dụng PME công nghệ thực phẩm 2.2 Thu nhận enzyme PME 2.2.1 Nguồn thu nhận PME 2.2.2 Vai trị chất quá trình lên men sinh enzyme PME .7 2.2.3 Ảnh hưởng điều kiện nuôi cấy đến hiệu sinh tổng hợp PME9 2.3 Các kết nghiên cứu có liên quan 13 CHƯƠNG 3.1 PHƯƠNG PHÁP VÀ PHƯƠNG TIỆN NGHIÊN CỨU .15 Phương tiện nghiên cứu 15 3.1.1 Địa điểm, thời gian 15 3.1.2 Đối tượng nghiên cứu 15 3.1.3 Thiết bị, hoá chất 15 3.1.4 Môi trường nuôi cấy 16 3.2 Phương pháp thí nghiệm 17 3.2.1 Phương pháp phân tích và đo đạc các chỉ tiêu 17 Trường Đại học Cần Thơ Trang ii Báo cáo đề tài NCKH cấp Trường 2010 3.2.2 Phương pháp bố trí thí nghiệm 17 3.2.3 Phương pháp thu thập và xử lý số liệu 23 CHƯƠNG KẾT QUẢ THẢO LUẬN 24 4.1 Ảnh hưởng thành phần khoáng bổ sung riêng lẻ đến khả sinh pectin methylesterase từ Aspergillus niger So2 24 4.2 Ảnh hưởng thành phần khoáng bổ sung kết hợp đến khả sinh pectin methylesterase từ Aspergillus niger So2 28 4.3 Ảnh hưởng nguồn nitrogen bổ sung đến khả sinh pectin methylesterase từ Aspergillus niger So2 .29 4.4 Ảnh hưởng việc bổ sung vỏ bưởi khơ đến quá trình sinh tổng hợp PME từ A.niger So2 .32 CHƯƠNG KẾT LUẬN – KIẾN NGHỊ .35 5.1 Kết luận .35 5.2 Kiến nghị .35 TÀI LIỆU THAM KHẢO .36 PHỤ LỤC CÁC PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH ix (i) Phương pháp phân tích pectin ix (ii) Phương pháp trích ly PME .x (iii) Phương pháp xác định hoạt tính PME (theo Crelier et al, 1995; trích dẫn Duvetter, 2007) x (iv) Cách chuẩn bị dung dịch đệm citrate - phosphate (pH 2,2 - 8,0) xi PHỤ LỤC KẾT QUẢ THỐNG KÊ xii Thí nghiệm 1: Ảnh hưởng thành phần khoáng bổ sung riêng lẻ đến khả sinh pectin methylesterase từ Aspergillus niger xii Thí nghiệm 2: Ảnh hưởng thành phần khoáng bổ sung kết hợp đến khả sinh pectin methylesterase từ Aspergillus niger xv Ảnh hưởng nguồn nitrogen bổ sung đến khả sinh pectin methylesterase từ Aspergillus niger .xvi Ảnh hưởng việc bổ sung vỏ bưởi khơ đến quá trình sinh tổng hợp PME từ A.niger xx Trường Đại học Cần Thơ Trang iii Báo cáo đề tài NCKH cấp Trường 2010 CHƯƠNG DANH MỤC BẢNG Bảng 1: Hiệu xử lý nước táo và nước vải chế phẩm enzyme pectinase Bảng Phương pháp phân tích và đo đạc chỉ tiêu nghiên cứu 17 Bảng 3: Ảnh hưởng của việc bổ sung ZnCl2 và NaCl đến thay đổi hoạt tính PME từ A.niger So2 .24 Bảng 4: Tác động của thành phần khoáng MgCl2, CaCl2 và KCl đến thay đổi hoạt tính PME từ A.niger So2 26 Bảng 5: Ảnh hưởng của việc bổ sung kết hợp loại khoáng đến hoạt tính PME 28 Bảng 6: Ảnh hưởng của nguồn nitrogen bổ sung tỷ lệ sử dụng khác đến hoạt tính PME từ trình lên men A.niger So2 30 Bảng 7: Ảnh hưởng của việc bổ sung vỏ bưởi đến hoạt tính PME từ trình sinh tổng hợp A.niger So2 33 Bảng 8: Kết tổng hợp thành phần môi trường lên men tối ưu cho sinh tổng hợp PME của A.niger 33 Bảng PL1: Cách chuẩn bị dung dịch đệm citrate - phosphate (pH 2,2 - 8,0) .xi Trường Đại học Cần Thơ Trang iv Báo cáo đề tài NCKH cấp Trường 2010 DANH MỤC HÌNH Hình 1: Sơ đồ thủy phân pectin của PME Hình 2: Sơ đồ bố trí thí nghiệm tổng quát 18 Hình 3: Đồ thị biểu diễn mức độ thay đổi hoạt tính enzyme PME tác dụng của thành phần khoáng bổ sung NaCl và ZnCl2 25 Trường Đại học Cần Thơ Trang v Báo cáo đề tài NCKH cấp Trường 2010 DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT A.awamori Aspergillus awamori A.niger Aspergillus niger DE Degree of esterification (Độ ester hóa pectin) HG Homogalacturonan PME Pectin methylesterase So2 Chủng nấm mốc phân lập từ cam soàn U Đơn vị đo hoạt tính enzyme Trường Đại học Cần Thơ Trang vi Báo cáo đề tài NCKH cấp Trường 2010 TÓM TẮT Đề tài thực hiện với mục tiêu xác định điều kiện mơi trường tối ưu cho quá trình sinh tổng hợp enzyme pectin methylesterase (PME, EC 3.1.1.11) từ Aspergillus niger chất bã táo ta và vỏ cam sành đạt hiệu cao Thông qua nghiên cứu, tác động các thành phần khoáng và nitrogen bổ sung đến quá trình sinh tổng hợp PME từ Aspergillus niger So2 xác định Đồng thời, ảnh hưởng việc bổ sung vỏ bưởi đến hiệu sinh tổng hợp PME từ Aspergillus niger So2 khảo sát Kết nghiên cứu cho thấy lên men Aspergillus niger sinh enzyme pectin methylesterase môi trường bã táo ta và vỏ cam với tỉ lệ 70:30 (%, w/w), hàm lượng khoáng bổ sung thích hợp là 0,5% MgCl và 1,5% CaCl2, kết hợp với 0,1% urea từ nguồn dinh dưỡng bổ sung cho hiệu cải thiện đáng kể hoạt tính PME Đồng thời, việc bổ sung 5% vỏ bưởi khô làm gia tăng lượng pectin môi trường lên men, điều chỉnh độ DE chất và tạo điều kiện thích hợp cho sự sinh tổng hợp PME đạt hiệu cao nhất với hoạt tính PME thu là 40,0 ± 1,0 U/mL, tăng gấp lần so với giá trị PME thu nhận ban đầu Điểm đề tài là việc sử dụng phụ phẩm nông nghiệp giàu pectin sẵn có địa phương (bã táo ta khơ, vỏ cam tươi và vỏ bưởi khô) làm chất lên men sinh tổng hợp enzyme cho hiệu kinh tế và đáp ứng yêu cầu về môi trường Đồng thời, việc kết hợp vỏ cam, bã táo và vỏ bưởi với tỉ lệ nhất định, thay sử dụng riêng lẻ cho thấy hiệu cải thiện hoạt tính enzyme PME rõ rệt Quá trình ni cấy sử dụng nấm mốc Aspergillus niger từ phân lập và tuyển chọn từ cam soàn (Citrus sinensis) điều kiện phòng thí nghiệm Trường Đại học Cần Thơ Trang vii Báo cáo đề tài NCKH cấp Trường 2010 ABSTRACT In production of fungal pectin esterase in solid state fermentation, control of medium composition is an important key for improved the activity of enzyme The objective of this investigation was to determine optimized parameters of medium composition for PME biosynthesis in solid state fermentation by Aspergillus niger So2 Based on this objective, effects of different nutrition source with various concentrations in fermentation medium to production PME were studied In this study, a mixture of 70: 30 (%, w/w) of apple pomace and orange peels were used as a main substrate for SSF The substrate was diluted by phosphate/citrate buffer (pH 3.5) to obtained 60% moisturea content of medium The result showed that, the addition of 1,5% CaCl2, 0.5% MgCl2 combined with 0.1% urea from nutritional supplements were improved efficiency PME activity Also, the addition of 5% dried grapefruit peel to increase the amount of pectin in the fermentation environment, adjust the DE of the substrate were a suitable condition for the biosynthesis of PME After the incubation period of 96 h, activity of PME from Aspergillus niger can be obtained the value of 40.0 ± 1.0 U/mL Overall, the addition of essential nutrition source can get times higher PME activity than the control Using agro waste as substrate for fermentation processing is the important information of this study In addition, the combination of apple pomace, orange peels and grapefruit peels with suitable ratio can obtained the higher maximum yield The experiment were also affirmed that, Aspergillus niger So2 from sweet orange (Citrus sinensis) was found as a best strain for PME productivity Trường Đại học Cần Thơ Trang viii Báo cáo đề tài NCKH cấp Trường 2010 CHƯƠNG ĐẶT VẤN ĐỀ 2.1 Tính cấp thiết đề tài Việc ly trích và ứng dụng PME vào trình chế biến thực phẩm phát triển rộng rãi nhiều quốc gia (Duvetter, 2006), nhiên khả sử dụng của enzyme này chưa quan tâm Việt Nam Hiện khơng có PME thương mại sản xuất nước ta, việc nhập PME ly trích và tinh chế nước ngoài thường có giá cao Điều này làm ảnh hưởng không nhỏ đến việc phát triển khả ứng dụng của enzyme PME vào trình chế biến thực phẩm Chính thế, nghiên cứu ly trích PME điều kiện hiện tại Việt Nam là việc cần thiết, cần quan tâm Nghiên cứu trước của nhóm tác giả đề tài cho thấy hiệu của việc sử dụng bã táo ta khô và vỏ cam làm chất cho trình sinh tổng hợp PME từ A.niger Tuy nhiên, hiệu lên men thấp so sánh với số khảo sát thực hiện giới (Joshi et al., 2006) Chính thế, cần có biện pháp thích hợp để gia tăng hiệu của trình sinh tổng hợp enzyme PME Bên cạnh việc sử dụng chất cảm ứng thích hợp (phụ phẩm giàu pectin có độ ester hóa cao) và điều khiển nguồn nấm mốc sử dụng, hiệu của trình sinh tổng hợp enzyme PME gia tăng cách cải thiện mơi trường lên men – bổ sung nguồn khống và vi chất dinh dưỡng (Nguyễn Đức Lượng, 2004; Rao, 2005; Joshi et al., 2006) Đây chính là sở cho việc nghiên cứu cải thiện hoạt tính PME từ Aspergillus niger thực hiện 2.2 Mục tiêu nghiên cứu Đề tài thực hiện với mục tiêu xác định điều kiện mơi trường tối ưu cho q trình sinh tổng hợp PME từ Aspergillus niger chất bã táo ta và vỏ cam sành đạt hiệu cao Trường Đại học Cần Thơ Trang Báo cáo đề tài NCKH cấp Trường 2010 Markovic O and R Kohn (1984), Mode of pectin deesterification by Trichoderma reesei pectinesterase, Experientia 40, pp 842–843 Martin N , S.R De Souza, R Da Silva, E Gomes (2004) Pectinase production by fungal strains in solid-state fermentation using agro-industrial bioproduct, braz Arch Biol Technol 47, 813-819 Nari, J., Noat, G and Ricard, J (1991), “Pectin methylesterase, metal ions and plant cell-wall extension Hydrolysis of pectin by plant cell-wall pectin methylesterase”, Biochemical Journal, 279, 343-350 Patil S R and A Dayanand (2006), Production of pectinase from deseeded sun flower head by Aspergillus niger in submerged and solid-state conditions, Bioresource Technology 97, pp 2054-2058 Polizeli M L T., J.A Jorge, H.F Terenzi (1991), Pectinase production by Neurospora crassa: purification and biochemical characterization of extracellular polygalacturonase activity, J Gen Microbiol 137, 1815-1823 Pressey, R and Woods, F M (1992), Purification and properties of two pectinesterases from tomatoes, Phytochemistry, 31, 1139-1142 Rao S D V and S B Maini (1999), Manufacturea of pectins from mango peels, Beverage and Food world 17, pp 7-18 Reignault P., M Mercier, G Bompeix and M Boccara (1994), Pectinmethylesterase from Botrytis cinerea: physiological, biochemical and imminochemical studies, Microbiology Journal 140, pp 3249-3255 Rexova-Benkova, L and Markovic, O (1976), Pectin enzymes Advances in Carbohydrate Chemistry and Biochemistry, 33: 323-385 Sajjaanantakul T and L.A Pitifer (1991, Pectinesterase In: The Chemistry and Technology of Pectin, R.H Walter, (Editor), Academic Press, San Diego, CA, p 135 – 145 Schmitz, T (2002) A process for the preparation and purification of the enzyme pectin methyl esterase WO 03/000876 Seymour G B., Y Lasslett and G A Tucker (1991), Differential effects of pectolytic enzymes on tomato polyuronides in vivo and in vitro, Phytochemistry 26, pp 3137-3139 Silva D., Tokuioshi K., Martins E.S, Da Silva R., Gomes E (2003) Production of pectinase by solid-state fermentation with Penicillium viridicatum RFC Process Biochemistry 40, 2885-2889 Solis-Pereyra S., E Favela-Torres, G Viniegra-Gonzalez, M GuterrezRojas (1993), Effects of different carbon sources on the synthesis of pectinase by A.niger in submerged and solid statefermentations, Applied Microbiology and Biotechnology 39, pp 36-41 Taragano, V M and A M R Pilosof (1997), Application of Doehlert designs for water, pH and fermentation time optimization for A.niger pectinolytic activities production in solid-state and submerged fermentation, Enzyme Microb Technol 25, pp 414- 419 Trường Đại học Cần Thơ Trang 37 Báo cáo đề tài NCKH cấp Trường 2010 Tran Thanh Truc, Le Thi Ngoc Hieu, Nguyen Van Muoi (2009), Effect of different fermentation medium to Aspergillus niger pectinmethylesterase production, Internal proceedings in 14th ASEAN Food Conference, 21-23 Octorber, Brunnei Darussalaam Willats, W G T., McCartney, L., Mackie, W and Knox, J P (2001), Pectin: cell biology and prospects for functional analysis, Plant Molecular Biology, 47, 9-27 Yook-yung Kim, Quing Teng and L Wicker (2005), Action pattern of Valencia orange PME deesterification of high methoxyl pectin and characterization of modified pectins, Carbohydrate Research, 340(17), pp 2620-2629 Trường Đại học Cần Thơ Trang 38 Báo cáo đề tài NCKH cấp Trường 2010 Trường Đại học Cần Thơ Trang viii Báo cáo đề tài NCKH cấp Trường 2010 CHƯƠNG TÍCH PHỤ LỤC CÁC PHƯƠNG PHÁP PHÂN (i) Phương pháp phân tích pectin Ngun tắc Trong mơi trường kiềm lỗng, pectin hịa tan giải phóng nhóm methoxyl thành rượu methylic và acid pectic tự Acid pectic tự mơi trường có mặt acid acetic kết hợp với CaCl thành dạng muối kết tủa Calcium pectate Từ hàm lượng muối kết tủa tính hàm lượng pectin có mẫu phân tích Hóa chất - Dung dịch NaOH 0,1N - Dung dịch CH3COOH 0,1N - CaCl2 1N - Dung dịch AgNO3 1% Tiến hành Lấy 20 mL dịch cho vào bình tam giác 250ml, cho thêm 100 mL NaOH 0,1N, để hỗn hợp cho pectin bị xà phịng hóa hoàn toàn thành acid pectic Sau đó, thêm vào 50 ml dung dịch acid acetic 0,1 N và để yên phút, thêm 50 mL NaCl N để Sau đun sơi phút lọc qua giấy lọc sấy khô đến trọng lượng không đổi, rửa kết tủa Calcium pectate nước cất nóng khơng cịn ion Cl- (thử nước rửa với dung dịch nitrate bạc 1%) Sau rửa xong, đặt giấy lọc có kết tủa vào cốc, cân và sấy 1050C đến khối lượng không đổi Kết Hàm lượng pectin dịch đươc tính theo công thức sau: Pectin= Trong đó: m1 0,92 1000 , g/l V m1 - khối lượng cặn pectate calci thu được, g; 0,92 - hệ số chuyển từ calci pectate sang pectin; V - số ml dịch lấy mang phân tích Trường Đại học Cần Thơ Trang ix Báo cáo đề tài NCKH cấp Trường 2010 (ii) Phương pháp trích ly PME Để trích ly enzyme huyền phù sau lên men, bổ sung dung dịch đệm citrate/phosphate (pH 4,5) với tỉ lệ 20 mL cho trung bình g bình Tiến hành khuấy gián đoạn huyền phù khoảng (10 phút khuấy lần) Sau lọc hỗn hợp giấy lọc, dịch trích sau lọc xem là chiết xuất enzyme (iii) Phương pháp xác định hoạt tính PME (theo Crelier et al, 1995; trích dẫn Duvetter, 2007) Nguyên tắc: Phương pháp dựa sở thủy phân dung dịch pectin enzyme PME Hoạt tính PME xác định cách đo lường lượng acid galacturonic giải phóng đơn vị thời gian nhiệt độ và pH khơng đổi Hóa chất - Pectin 3,5 g/L (Pectin táo DE 75%, Sigma) dung dịch NaCl 0,12 M Cân khối lượng pectin và NaCl cần thiết Trộn đều NaCl và pectin (để tránh pectin vón cục), rắc từ từ hỗn hợp vào cốc nước cất đun nóng sẵn đồng thời khuấy đều máy khuấy từ Để yên nhiệt độ phòng để pectin trương nở và hịa tan, sau để khoảng 12 nhiệt độ - 0C Sau dung dịch làm nóng đến 200C và chuyển vào bình định mức có dung tích thích hợp và định mức tới vạch ngấn nước cất, lắc đều và lọc qua hai lớp vải màn có bơng Bảo quản dung dịch nhận tủ lạnh thời gian ngày - Dung dịch NaOH 0,01 N Tiến hành: Chuẩn bị cốc thủy tinh nhỏ Lấy 30 mL dung dịch pectin pha sẵn cho vào cốc, điều chỉnh pH dung dịch pectin đến 4,5 dung dịch NaOH 0,01 N Sau bổ sung 250 µL dung dịch enzyme vào cốc, cốc lại bổ sung 250 µL dung dịch enzyme bị vơ hoạt (100 0C, 30 phút) làm mẫu đối chứng Trong suốt trình enzyme thủy phân pectin, pH dung dịch đuợc giữ không đổi (pH 4,5 nhiệt độ 30±10C) cách bổ sung NaOH 0,01 N Kết quả: Hoạt tính PME là số mili đương lượng của ester thủy phân phút 1g enzyme Trường Đại học Cần Thơ Trang x Báo cáo đề tài NCKH cấp Trường 2010 (iv) Cách chuẩn bị dung dịch đệm citrate - phosphate (pH 2,2 - 8,0) Dung dịch đệm citrate phosphate chuẩn bị cách sử dụng tỉ lệ thể tích khác của dung dịch NaH2PO4 0,2 M và acid citric 0,1 M Bảng mô tả thể tích của dung dịch phosphate và citric sử dụng để chuẩn bị 20 mL dung dịch đệm pH thay đổi từ 2,2 đến 8,0 Bảng PL1: Cách chuẩn bị dung dịch đệm citrate - phosphate (pH 2,2 - 8,0) pH 2,2 2,4 2,6 2,8 3,0 3,2 3,4 3,6 3,8 4,0 4,2 4,4 4,6 4,8 5,0 5,2 5,4 5,6 5,8 6,0 6,2 6,4 6,6 6,8 7,0 7,2 7,4 7,6 7,8 8,0 Trường Đại học Cần Thơ Na2HPO4 0,2M (mL) 0,4 1,24 2,18 3,17 4,11 4,94 5,7 6,44 7,1 7,71 8,28 8,82 9,35 9,86 10,3 10,72 11,15 11,6 12,09 12,63 13,22 13,85 14,55 15,45 16,47 17,39 18,17 18,73 19,15 19,45 Acid citric 0,1M (mL) 19,6 18,76 17,82 16,83 15,89 15,06 14,3 13,56 12,9 12,29 11,72 11,18 10,65 10,14 9,7 9,28 8,85 8,4 7,91 7,37 6,78 6,15 5,45 4,55 3,53 2,61 1,83 1,27 0,85 0,55 Trang xi Báo cáo đề tài NCKH cấp Trường 2010 PHỤ LỤC KẾT QUẢ THỐNG KÊ Thí nghiệm 1: Ảnh hưởng thành phần khoáng bổ sung riêng lẻ đến khả sinh pectin methylesterase từ Aspergillus niger ANOVA Table for NaCl by Ham luong_% Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 51.9179 12.9795 16.72 0.0002 Within groups 7.76366 10 0.776366 Total (Corr.) 59.6816 14 Table of Means for NaCl by Ham luong_% with 95.0 percent LSD intervals -Stnd error Ham luong_% Count Mean (pooled s) Lower limit Upper limit -0 20.9733 0.508713 20.1718 21.7748 0.5 17.6962 0.508713 16.8948 18.4977 20.7946 0.508713 19.9931 21.5961 1.5 21.3903 0.508713 20.5888 22.1918 16.9217 0.508713 16.1202 17.7232 -Total 15 19.5552 Multiple Range Tests for NaCl by Ham luong_% -Method: 95.0 percent LSD Ham luong_% Count Mean Homogeneous Groups -2 16.9217 X 0.5 17.6962 X 20.7946 X 20.9733 X 1.5 21.3903 X -Contrast Difference +/- Limits -0 - 0.5 *3.27708 1.60299 - 0.17875 1.60299 - 1.5 -0.416973 1.60299 - *4.05167 1.60299 0.5 - *-3.09833 1.60299 0.5 - 1.5 *-3.69406 1.60299 0.5 - 0.774583 1.60299 - 1.5 -0.595723 1.60299 - *3.87292 1.60299 1.5 - *4.46864 1.60299 -* denotes a statistically significant difference Trường Đại học Cần Thơ Trang xii Báo cáo đề tài NCKH cấp Trường 2010 ANOVA Table for ZnCl2 by Ham luong_% Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 77.9959 19.499 17.41 0.0002 Within groups 11.2029 10 1.12029 Total (Corr.) 89.1988 14 Table of Means for ZnCl2 by Ham luong_% with 95.0 percent LSD intervals -Stnd error Ham luong_% Count Mean (pooled s) Lower limit Upper limit -0 20.9733 0.611089 20.0105 21.9361 0.5 17.7558 0.611089 16.793 18.7186 19.9008 0.611089 18.938 20.8636 1.5 15.015 0.611089 14.0522 15.9778 15.8492 0.611089 14.8864 16.812 -Total 15 17.8988 Multiple Range Tests for ZnCl2 by Ham luong_% -Method: 95.0 percent LSD Ham luong_% Count Mean Homogeneous Groups -1.5 15.015 X 15.8492 XX 0.5 17.7558 X 19.9008 X 20.9733 X -Contrast Difference +/- Limits -0 - 0.5 *3.2175 1.92558 - 1.0725 1.92558 - 1.5 *5.95833 1.92558 - *5.12417 1.92558 0.5 - *-2.145 1.92558 0.5 - 1.5 *2.74083 1.92558 0.5 - 1.90667 1.92558 - 1.5 *4.88583 1.92558 - *4.05167 1.92558 1.5 - -0.834167 1.92558 -* denotes a statistically significant difference Trường Đại học Cần Thơ Trang xiii Báo cáo đề tài NCKH cấp Trường 2010 Khoáng hoạt hóa ANOVA Table for Hoat tinh PME by TP va ty le khoang Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 97.3081 13 7.48524 9.77 0.0000 Within groups 19.1534 25 0.766135 Total (Corr.) 116.461 38 Table of Means for Hoat tinh PME by TP va ty le khoang with 95.0 percent LSD intervals -Stnd error Level Count Mean (pooled s) Lower limit Upper limit -Ca - 0,5 22.06 0.50535 21.3241 22.7959 Ca - 1,5 25.1333 0.50535 24.3974 25.8693 Ca - 2,0 22.64 0.50535 21.9041 23.3759 Ca- 1,0 23.5433 0.50535 22.8074 24.2793 DC 20.9733 0.50535 20.2374 21.7093 K - 0,5 20.0133 0.50535 19.2774 20.7493 K-1,0 21.7833 0.50535 21.0474 22.5193 K-1,5 25.0467 0.50535 24.3107 25.7826 K-2,0 21.4167 0.50535 20.6807 22.1526 Mg - 0,25 21.8833 0.50535 21.1474 22.6193 Mg-0,5 25.14 0.50535 24.4041 25.8759 Mg-0,75 23.47 0.50535 22.7341 24.2059 Mg-1,0 22.945 0.618925 22.0436 23.8464 Mg1,0 22.86 0.875292 21.5853 24.1347 -Total 39 22.7708 Multiple Range Tests for Hoat tinh PME by TP va ty le khoang -Method: 95.0 percent LSD Level Count Mean Homogeneous Groups -K - 0,5 20.0133 X DC 20.9733 XX K-2,0 21.4167 XXX K-1,0 21.7833 XX Mg - 0,25 21.8833 XX Ca - 0,5 22.06 XXX Ca - 2,0 22.64 XXX Mg1,0 22.86 XXXX Mg-1,0 22.945 XXX Mg-0,75 23.47 XX Ca- 1,0 23.5433 X K-1,5 25.0467 X Ca - 1,5 25.1333 X Trường Đại học Cần Thơ Trang xiv Báo cáo đề tài NCKH cấp Trường 2010 Thí nghiệm 2: Ảnh hưởng thành phần khoáng bổ sung kết hợp đến khả sinh pectin methylesterase từ Aspergillus niger Trường Đại học Cần Thơ Trang xv Báo cáo đề tài NCKH cấp Trường 2010 Ảnh hưởng nguồn nitrogen bổ sung đến khả sinh pectin methylesterase từ Aspergillus niger ANOVA Table for PME by Nguon Nitrogen Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 155.746 Within groups 23.7863 15 35 10.383 15.28 0.0000 0.67961 Total (Corr.) 179.532 50 Table of Means for PME by Nitrogen with 95.0 percent LSD intervals -Stnd error Nitrogen Count Mean (pooled s) Lower limit Upper limit -(NH4)2SO4 0.0 32.6667 0.475959 31.9834 33.3499 (NH4)2SO4 0.1 34.0 0.336553 33.5169 34.4831 (NH4)2SO4 0.2 31.3333 0.475959 30.6501 32.0166 DC 30.0867 0.475959 29.4034 30.7699 NH4H2PO4 0.05 31.0267 0.475959 30.3434 31.7099 NH4H2PO4 0.1 32.7633 0.475959 32.0801 33.4466 NH4H2PO4 0.15 31.7133 0.475959 31.0301 32.3966 NH4H2PO4 0.2 31.3067 0.475959 30.6234 31.9899 Pepton 0.05 30.3333 0.475959 29.6501 31.0166 Pepton 0.1 35.3333 0.475959 34.6501 36.0166 Pepton 0.15 32.6667 0.475959 31.9834 33.3499 Pepton 0.2 30.6667 0.475959 29.9834 31.3499 Urea 0.05 32.3833 0.475959 31.7001 33.0666 Urea 0.1 36.9267 0.475959 36.2434 37.6099 Urea 0.15 32.92 0.475959 32.2368 33.6032 Urea 0.2 32.6667 0.475959 31.9834 33.3499 -Total 51 32.5173 Multiple Range Tests for Hoat tinh PME by Nguon nitrogen -Method: 95.0 percent LSD Nguon nitrogen Count Mean Homogeneous Groups -DC 30.0867 X Pepton 0.05 30.3333 X Pepton 0.2 30.6667 XX NH4H2PO4 0.05 31.0267 XXX NH4H2PO4 0.2 31.3067 XXXX (NH4)2SO4 0.2 31.3333 XXXX NH4H2PO4 0.15 31.7133 XXXX Urea 0.05 32.3833 XXX (NH4)2SO4 0.0 32.6667 XX Pepton 0.15 32.6667 XX Urea 0.2 32.6667 XX Trường Đại học Cần Thơ Trang xvi Báo cáo đề tài NCKH cấp Trường 2010 NH4H2PO4 0.1 32.7633 X Urea 0.15 32.92 XX (NH4)2SO4 0.1 34.0 X Pepton 0.1 35.3333 Urea 0.1 36.9267 X X -Contrast Difference +/- Limits -(NH4)2SO4 0.0 - (NH4)2SO4 0.1 *-1.33333 1.18341 (NH4)2SO4 0.0 - (NH4)2SO4 0.2 1.33333 1.36648 (NH4)2SO4 0.0 - DC *2.58 1.36648 (NH4)2SO4 0.0 - NH4H2PO4 0.05 *1.64 1.36648 (NH4)2SO4 0.0 - NH4H2PO4 0.1 -0.0966667 1.36648 (NH4)2SO4 0.0 - NH4H2PO4 0.15 0.953333 1.36648 (NH4)2SO4 0.0 - NH4H2PO4 0.2 1.36 1.36648 (NH4)2SO4 0.0 - Pepton 0.05 *2.33333 1.36648 (NH4)2SO4 0.0 - Pepton 0.1 *-2.66667 1.36648 (NH4)2SO4 0.0 - Pepton 0.15 (NH4)2SO4 0.0 - Pepton 0.2 (NH4)2SO4 0.0 - Urea 0.05 (NH4)2SO4 0.0 - Urea 0.1 0.0 1.36648 *2.0 1.36648 0.283333 *-4.26 1.36648 1.36648 (NH4)2SO4 0.0 - Urea 0.15 -0.253333 1.36648 (NH4)2SO4 0.0 - Urea 0.2 0.0 1.36648 (NH4)2SO4 0.1 - (NH4)2SO4 0.2 *2.66667 1.18341 (NH4)2SO4 0.1 - DC *3.91333 1.18341 (NH4)2SO4 0.1 - NH4H2PO4 0.05 *2.97333 1.18341 (NH4)2SO4 0.1 - NH4H2PO4 0.1 *1.23667 1.18341 (NH4)2SO4 0.1 - NH4H2PO4 0.15 *2.28667 1.18341 (NH4)2SO4 0.1 - NH4H2PO4 0.2 *2.69333 1.18341 (NH4)2SO4 0.1 - Pepton 0.05 *3.66667 1.18341 (NH4)2SO4 0.1 - Pepton 0.1 *-1.33333 1.18341 (NH4)2SO4 0.1 - Pepton 0.15 *1.33333 1.18341 (NH4)2SO4 0.1 - Pepton 0.2 *3.33333 1.18341 (NH4)2SO4 0.1 - Urea 0.05 *1.61667 1.18341 (NH4)2SO4 0.1 - Urea 0.1 *-2.92667 1.18341 (NH4)2SO4 0.1 - Urea 0.15 (NH4)2SO4 0.1 - Urea 0.2 (NH4)2SO4 0.2 - DC (NH4)2SO4 0.2 - NH4H2PO4 0.05 1.08 1.18341 *1.33333 1.18341 1.24667 1.36648 0.306667 1.36648 (NH4)2SO4 0.2 - NH4H2PO4 0.1 *-1.43 1.36648 (NH4)2SO4 0.2 - NH4H2PO4 0.15 -0.38 1.36648 (NH4)2SO4 0.2 - NH4H2PO4 0.2 0.0266667 1.36648 (NH4)2SO4 0.2 - Pepton 0.05 1.0 1.36648 Trường Đại học Cần Thơ Trang xvii Báo cáo đề tài NCKH cấp Trường 2010 (NH4)2SO4 0.2 - Pepton 0.1 *-4.0 1.36648 (NH4)2SO4 0.2 - Pepton 0.15 -1.33333 1.36648 (NH4)2SO4 0.2 - Pepton 0.2 0.666667 1.36648 (NH4)2SO4 0.2 - Urea 0.05 -1.05 1.36648 (NH4)2SO4 0.2 - Urea 0.1 *-5.59333 1.36648 (NH4)2SO4 0.2 - Urea 0.15 *-1.58667 1.36648 (NH4)2SO4 0.2 - Urea 0.2 -1.33333 1.36648 DC - NH4H2PO4 0.05 -0.94 1.36648 DC - NH4H2PO4 0.1 *-2.67667 1.36648 DC - NH4H2PO4 0.15 *-1.62667 1.36648 DC - NH4H2PO4 0.2 -1.22 1.36648 DC - Pepton 0.05 -0.246667 1.36648 DC - Pepton 0.1 *-5.24667 1.36648 DC - Pepton 0.15 *-2.58 1.36648 DC - Pepton 0.2 -0.58 1.36648 DC - Urea 0.05 *-2.29667 1.36648 DC - Urea 0.1 *-6.84 1.36648 DC - Urea 0.15 *-2.83333 1.36648 DC - Urea 0.2 *-2.58 1.36648 NH4H2PO4 0.05 - NH4H2PO4 0.1 *-1.73667 1.36648 NH4H2PO4 0.05 - NH4H2PO4 0.15 -0.686667 1.36648 NH4H2PO4 0.05 - NH4H2PO4 0.2 -0.28 1.36648 NH4H2PO4 0.05 - Pepton 0.05 0.693333 1.36648 NH4H2PO4 0.05 - Pepton 0.1 *-4.30667 1.36648 NH4H2PO4 0.05 - Pepton 0.15 *-1.64 1.36648 NH4H2PO4 0.05 - Pepton 0.2 0.36 1.36648 NH4H2PO4 0.05 - Urea 0.05 -1.35667 1.36648 NH4H2PO4 0.05 - Urea 0.1 *-5.9 1.36648 NH4H2PO4 0.05 - Urea 0.15 *-1.89333 1.36648 NH4H2PO4 0.05 - Urea 0.2 *-1.64 1.36648 1.05 1.36648 NH4H2PO4 0.1 - NH4H2PO4 0.15 NH4H2PO4 0.1 - NH4H2PO4 0.2 *1.45667 1.36648 NH4H2PO4 0.1 - Pepton 0.05 *2.43 1.36648 NH4H2PO4 0.1 - Pepton 0.1 *-2.57 1.36648 NH4H2PO4 0.1 - Pepton 0.15 NH4H2PO4 0.1 - Pepton 0.2 NH4H2PO4 0.1 - Urea 0.05 NH4H2PO4 0.1 - Urea 0.1 0.0966667 *2.09667 0.38 *-4.16333 1.36648 1.36648 1.36648 1.36648 NH4H2PO4 0.1 - Urea 0.15 -0.156667 1.36648 NH4H2PO4 0.1 - Urea 0.2 0.0966667 1.36648 NH4H2PO4 0.15 - NH4H2PO4 0.2 0.406667 1.36648 NH4H2PO4 0.15 - Pepton 0.05 *1.38 1.36648 NH4H2PO4 0.15 - Pepton 0.1 *-3.62 1.36648 NH4H2PO4 0.15 - Pepton 0.15 -0.953333 1.36648 NH4H2PO4 0.15 - Pepton 0.2 1.04667 1.36648 -0.67 1.36648 NH4H2PO4 0.15 - Urea 0.05 NH4H2PO4 0.15 - Urea 0.1 Trường Đại học Cần Thơ *-5.21333 1.36648 Trang xviii Báo cáo đề tài NCKH cấp Trường 2010 NH4H2PO4 0.15 - Urea 0.15 -1.20667 1.36648 NH4H2PO4 0.15 - Urea 0.2 -0.953333 1.36648 NH4H2PO4 0.2 - Pepton 0.05 0.973333 1.36648 NH4H2PO4 0.2 - Pepton 0.1 *-4.02667 1.36648 NH4H2PO4 0.2 - Pepton 0.15 -1.36 1.36648 NH4H2PO4 0.2 - Pepton 0.2 0.64 1.36648 NH4H2PO4 0.2 - Urea 0.05 -1.07667 1.36648 NH4H2PO4 0.2 - Urea 0.1 *-5.62 1.36648 NH4H2PO4 0.2 - Urea 0.15 *-1.61333 1.36648 NH4H2PO4 0.2 - Urea 0.2 -1.36 1.36648 Pepton 0.05 - Pepton 0.1 *-5.0 1.36648 Pepton 0.05 - Pepton 0.15 *-2.33333 1.36648 Pepton 0.05 - Pepton 0.2 -0.333333 1.36648 Pepton 0.05 - Urea 0.05 *-2.05 1.36648 Pepton 0.05 - Urea 0.1 *-6.59333 1.36648 Pepton 0.05 - Urea 0.15 *-2.58667 1.36648 Pepton 0.05 - Urea 0.2 *-2.33333 1.36648 Pepton 0.1 - Pepton 0.15 *2.66667 1.36648 Pepton 0.1 - Pepton 0.2 *4.66667 1.36648 Pepton 0.1 - Urea 0.05 *2.95 1.36648 Pepton 0.1 - Urea 0.1 *-1.59333 1.36648 Pepton 0.1 - Urea 0.15 *2.41333 1.36648 Pepton 0.1 - Urea 0.2 *2.66667 1.36648 Pepton 0.15 - Pepton 0.2 *2.0 1.36648 Pepton 0.15 - Urea 0.05 Pepton 0.15 - Urea 0.1 0.283333 *-4.26 1.36648 1.36648 Pepton 0.15 - Urea 0.15 -0.253333 1.36648 Pepton 0.15 - Urea 0.2 0.0 1.36648 Pepton 0.2 - Urea 0.05 *-1.71667 1.36648 Pepton 0.2 - Urea 0.1 *-6.26 1.36648 Pepton 0.2 - Urea 0.15 *-2.25333 1.36648 Pepton 0.2 - Urea 0.2 *-2.0 1.36648 Urea 0.05 - Urea 0.1 *-4.54333 1.36648 Urea 0.05 - Urea 0.15 -0.536667 1.36648 Urea 0.05 - Urea 0.2 -0.283333 1.36648 Urea 0.1 - Urea 0.15 *4.00667 1.36648 Urea 0.1 - Urea 0.2 *4.26 1.36648 Urea 0.15 - Urea 0.2 0.253333 1.36648 -* denotes a statistically significant difference Trường Đại học Cần Thơ Trang xix Báo cáo đề tài NCKH cấp Trường 2010 Ảnh hưởng việc bổ sung vỏ bưởi khơ đến quá trình sinh tổng hợp PME từ A.niger ANOVA Table for Hoat tinh PME by Ty le vo buoi bo sung Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 273.733 68.4333 68.43 0.0000 Within groups 10.0 10 1.0 Total (Corr.) 283.733 14 Table of Means for Hoat tinh PME by Ty le vo buoi bo sung with 95.0 percent LSD intervals -Stnd error Level Count Mean (pooled s) Lower limit Upper limit -10 28.3333 0.57735 27.4237 29.243 2.5 38.0 0.57735 37.0904 38.9096 40.0 0.57735 39.0904 40.9096 7.5 39.6667 0.57735 38.757 40.5763 DC 36.6667 0.57735 35.757 37.5763 -Total 15 36.5333 Multiple Range Tests for Hoat tinh PME by Ty le vo buoi bo sung -Method: 95.0 percent LSD Level Count Mean Homogeneous Groups -10 28.3333 X DC 36.6667 X 2.5 38.0 XX 7.5 39.6667 XX 40.0 X -Contrast Difference +/- Limits -10 - 2.5 *-9.66667 1.81927 10 - *-11.6667 1.81927 10 - 7.5 *-11.3333 1.81927 10 - DC *-8.33333 1.81927 2.5 - *-2.0 1.81927 2.5 - 7.5 -1.66667 1.81927 2.5 - DC 1.33333 1.81927 - 7.5 0.333333 1.81927 - DC *3.33333 1.81927 7.5 - DC *3.0 1.81927 -* denotes a statistically significant difference Trường Đại học Cần Thơ Trang xx