Phân tích đột biến mất đoạn 4977 bp của DNA ty thể ở bệnh nhân ung thư đại trực tràng

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN KHOA SINH HỌC Hoàng Thị Thùy Dung PHÂN TÍCH ĐỘT BIẾN MẤT ĐOẠN 4977 bp CỦ A DNA TY THỂ Ở BỆNH NHÂN UNG THƢ ĐẠI TRỰC TRÀNG Ngành: Sinh học thực nghiệm Mã số: 60 42 30 LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC NGƢỜI HƢỚNG DẪN KHOA HỌC: PGS TS Trịnh Hồng Thái Hà Nội Năm 2012 BẢNG KÝ HIỆU VÀ CÁC CHỮ VIẾT TẤT Viết tắt Viết đầy đủ mtDNA Mitochondrial DNA (AND ty thể) MT ND MitochondrialNADH dehydrogenase MTCYTb MitochondrialCytochrome b MTCO MitochondrialCytochrome c oxidase MTATP MitochondrialATP synthase CPEO Chronic progressive external ophthalmoplegia KSS Kearn–Sayre syndrome DHPLC Denaturing high performance liquid chromatography (Sắc ký lỏng biến tình hiệu cao) EDTA Ethylene Diamine Tetraacetic Acid MRI Magnetic resonance imaging (Chụp cộng hƣởng từ) PBS Phosphate buffered saline (Dung dịch đệm phosphate) PCR Polymerase chain Reaction (Phản ứng chuỗi trùng hợp) PET Positron emission tomography (Chụp cắt lớp phát xạ positron) RFLP Restriction Fragment Length Polymorphism (Đa hính độ dài đoạn cắt giới hạn) SDS Sodium dodecyl sulfate SNP Single nucleotide polymorphism (Đa hính nucleotide đơn) SSCP Single strand conformation polymorphism (Đa hính cấu hính sợi đơn) TBE Tris borate EDTA TNM Tumor Node  Metastasis DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 13 gen mã hóa cho protein tham gia chuỗi hơ hấp tế bào [7] Bảng Các gen mã hóa cho 22 tRNA genome ty thể [7] Bảng Hệ thống phân loại TNM ung thƣ đại trực tràng Bảng Thống kê mẫu sử dụng Bảng Các hóa chất đƣợc sử dụng nghiên cứu Bảng Các thiết bị đƣợc sử dụng nghiên cứu Bảng Các cặp mồi đƣợc sử dụng phản ứng PCR Bảng Thành phần phản ứng PCR với thể tích phản ứng 12,5 l Bảng 91 Thành phần phản ứng ủ enzyme với thể tích 30 µl Bảng 10 Dải nồng độ gel agarose dùng phân tách acid Nucleic Bảng 11 Sự phân tách DNA gel polyacrylamide khơng biến tính Bảng 12 Thống kê mẫu tách chiết DNA của bênh ̣ nhân ung thƣ đa ̣i trƣ ̣c tràng theo đặc điểm bệnh học lâm sàng Bảng 13 Tỷ lệ phần trăm đột biến đoạn 4977 bp mtDNA bệnh nhân ung thƣ đại trực tràng theo vị trí mơ Bảng 14 Thống kê tỷ lệ đột biến đoạn 4977 bp mtDNA bệnh nhân ung thƣ đại trực tràng theo đặc điểm lâm sàng Bảng 15 Thống kê mức độ heteroplasmy xảy mtDNA DANH MỤC CÁC HÌNH Hình Cấu tạo bào quan ty thể Hình Sơ đồ cấu tạo mtDNA người Hình Các bệnh liên quan đến rối loạn ty thể Hình Một số bệnh ung thư liên quan đến đột biến ty thể Hình Hình ảnh đại trực tràng Hình Các giai đoạn phát triển ung thư đại trực tràng Hình Đột biến đoạn 4977 bp mtDNA Hình Minh họa bắt cặp hai cặp mồi 49771 49772 khuôn mtDNA bị đột biến đoạn 4977 bp Hình Minh họa cắt enzyme HaeIII sản phẩm PCR đột biến đoạn 4977 bp Hình 10 Hình ảnh điện di DNA t tách chiết từ mô bệnh nhân ung thư đại trực tràng Hình 11 Ảnh điện di kiểm tra sản phẩm phản ứng PCR mtDNA mẫu u lân cận u Hình 12 Ảnh kết điện di sản phẩm PCR có đối chứng âm mtDNA Hình 13 Ảnh điện di kiểm tra sản phẩm PCR trường hợp có đột biến đoạn 4977 bp mtDNA Hình 14 Ảnh kết xử lý sản phẩm PCR sử dụng cặp mồi 4977–2 với enzyme giới hạn Hình 15 Phần mềm đọc kết giải trình tự bioedit so sánh trình tự mẫu với Hình 16 Biểu đồ thể tỷ lệ phần trăm đột biến đoạn 4977 bp mtDNA bệnh nhân ung thư đại trực tràng theo vị trí mơ Hình 17 Biểu đồ thể tỷ lệ heteroplasmy xảy mtDNA MỤC LỤC MỞ ĐẦU CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 DNA TY THỂ 1.1.1 Cấu trúc genome ty thể 1.1.2 Cơ chế di truyền hệ gen ty thể .7 1.1.3 Các rối loạn ty thể [4,53] 1.2 ĐỘT BIẾN DNA TY THỂ (MT DNA)  CHỈ THỊ SINH HỌC TIỀM NĂNG TRONG UNG THƢ 1.2.1 Các đột biến mtDNA .9 1.2.2 Mối liên hệ đột biến mtDNA với bệnh ung thƣ .11 1.2.3 Mối liên quan đột biến đoạn mtDNA với bệnh ung thƣ thị sinh học tiềm ung thƣ 14 1.3 UNG THƢ ĐẠI TRỰC TRÀNG VÀ MỐI LIÊN HỆ VỚI ĐỘT BIẾN MẤT ĐOẠN 4977 BP XẢY RA TRONG DNA TY THỂ 17 1.3.1 Ung thƣ đại trực tràng 17 1.3.2 Mối liên hệ đột biến đoạn 4977 bp xảy mtDNA ung thƣ đại trực tràng 23 1.3.3 Các phƣơng pháp nghiên cứu biến đổi gen ung thƣ .24 1.3.4 Tính hính nghiên cứu đột biến mtDNA Việt Nam 29 CHƢƠNG 2: NGUYÊN LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP 30 2.1 NGUYÊN LIỆU 30 2.1.1 Đối tƣợng nghiên cứu 30 2.1.2 Hóa chất 31 2.1.3 Thiết bị 31 2.2 PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 32 2.2.1 Tách chiết DNA tổng số từ mô .32 2.2.2 Khuếch đại đột biến đoạn 4977 bp mtDNA PCR 33 2.2.3 Xử lý sản phẩm PCR khuếch đại đột biến đoạn 4977 bp mtDNA enzyme HaeIII .37 2.2.4 Quy trính tinh sản phẩm PCR sƣ̉ du ̣ng kit QIAQUICK gel extraction 38 2.2.5 Điện di kiểm tra sản phẩm PCR gel .39 2.2.6 Phƣơng pháp giải trính tự 40 2.2.7 Tình tốn thống kê 41 CHƢƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 42 3.1 ĐẶC ĐIỂM BỆNH HỌC LÂM SÀNG CỦA CÁC BỆNH NHÂN UNG THƢ ĐẠI TRỰC TRÀNG TRONG NGHIÊN CỨU .42 3.2 KẾT QUẢ TÁCH CHIẾT DNA TỔNG SỐ TỪ MẪU MÔ UNG THƢ ĐẠI TRỰC TRÀNG 43 3.3 KẾT QUẢ KHUẾCH ĐẠI ĐỘT BIẾN MẤT ĐOẠN 4977 bp CỦ A DNA TY THỂ BẰNG KỸ THUẬT PCR 44 3.4 KẾT QUẢ XỬ LÝ SẢN PHẨM PCR SỬ DỤNG CẶP MỒI 4977–2 BẰNG ENZYME GIỚI HẠN .47 3.5 KẾT QUẢ GIẢI TRÌNH TỰ SẢN PHẨM PCR CỦA ĐỘT BIẾN MẤT ĐOẠN 4977 bp CỦA mtDNA 49 3.6 PHÂN TÍCH MỚI LIÊN QUAN GIƢ̃ A ĐỢT BIẾN MẤT ĐOẠN 4977 bp CỦ A DNA TY THỂ VÀ CÁC ĐẶC ĐIỂM BỆNH HỌC LÂM SÀNG CỦA BÊNH UNG THƢ ĐẠI TRỰC TRÀNG .51 3.6.1 Khảo sát đột biến đoạn 4977 bp mtDNA bệnh nhân ung thƣ đại trực tràng theo vị trì mơ 51 3.6.2 Khảo sát đột biến đoạn 4977 bp mtDNA bệnh nhân ung thƣ đại trực tràng theo đặc điểm lâm sàng khác 52 3.7 THỐNG KÊ MỨC ĐỘ HETEROPLASMY XẢY RA TRONG DNA TY THỂ 54 KẾT LUẬN 58 KIẾN NGHỊ 59 TÀI LIỆU THAM KHẢO 60 PHỤ LỤC I Phụ lục Danh sách bê ̣nh nhân ung thƣ đa ̣i trƣ̣c tràng với các đă ̣c điể m bê ̣nh ho ̣c lâm sàng đƣơ ̣c sƣ̉ du ̣ng nghiên cƣ́u i Phụ lục Các dạng đột biến mtDNA loại ung thƣ liên quan x Luận văn thạc sĩ Hoàng Thị Thùy Dung MỞ ĐẦU Ty thể (mitochondria) bào quan phổ biến tế bào nhân chuẩn có lớp màng kép hệ gene riêng Ty thể đƣợc coi trung tâm lượng tế bào ví nơi chuyển hóa chất hữu thành lƣợng tế bào sử dụng đƣợc ATP Ngồi ra, ty thể cịn đóng vai trị quan trọng nhiều q trính chuyển hóa khác nhƣ: Apoptosis, tổn thƣơng tế bào thần kinh thoát chất trung gian glutamate, tăng sinh tế bào, điều hịa trạng thái oxi hóa khử tế bào, tổng hợp nhân heme, tổng hợp steroid, tạo nhiệt giúp giữ ấm cho [12,36] Hệ gen ty thể có chứa hàng trăm đến hàng nghín DNA ty thể (mtDNA), chúng có cấu trúc mạch vịng, kìch thƣớc khoảng 15000 – 17000 bp, chứa 37 gen mã hóa cho protein chuỗi hơ hấp, tRNA rRNA Tuy nhiên, ty thể dễ bị tổn thƣơng, có tỷ lệ đột biến cao so với DNA nhân ví lý sau: (1) Ty thể có chứa hệ gen độc lập với gen nhân, kìch thƣớc bé (2) Do vắng mặt protein histone, chế bảo vệ sửa chữa DNA mức độ đơn giản (3) Hệ gen ty thể gần vị trì phát sinh gốc tự (ROS – Reactive Oxygen species) Đây nguyên nhân chình gây nên rối loạn mtDNA gây nên nhiều bệnh khác [18] Các bệnh rối loạn mtDNA đa dạng phát sinh đột biến gen nhân mtDNA, liên quan đến rối loạn trính tổng hợp protein hay đơn đột biến làm thay đổi nucleotide Các rối loạn ảnh hƣởng đến nhiều quan thể với mức độ biểu khác xảy lứa tuổi [17] Trong vài năm trở lại đây, rối loạn ty thể liên quan đến đột biến mtDNA đƣợc xem mục tiêu nghiên cứu di truyền học y học Đặc biệt, hƣớng nghiên cứu sử dụng mtDNA nhƣ thị sinh học cho bệnh chuyển hóa gặp, lão hóa, xác định đặc tình di truyền quần thể sử dụng dấu chuẩn di truyền mẹ [1] Cho đến nay, Trên 150 bệnh rối loạn mtDNA đƣợc thống kê nhƣ: Bệnh thần kinh thị giác di truyền Leber, Bệnh thần kinh- cơ, suy gan, viêm não, liệt mắt tăng tiến mạn tình, đái tháo đƣờng câm Đại học Khoa học Tự nhiên K19 Sinh học Luận văn thạc sĩ Hồng Thị Thùy Dung điếc…Cịn nhiều bệnh nghi ngờ có liên quan đến rối loạn mtDNA đƣợc nhà khoa học nghiên cứu [17] Đặc biệt nghiên cứu đột biến mtDNA mối liên quan đến bệnh ung thƣ [8,9] Với nhiều cơng trính khoa học đƣợc công bố khoảng hai thập niên qua chứng tỏ đột biến đoạn 4977 bp loại đột biến thƣờng gặp hệ gen ty thể có vai trị định ung thƣ [10] Trên sở khác số DNA ty thể tế bào ung thƣ tế bào bính thƣờng, tiến hành định lƣợng đột biến đoạn mtDNA khối u dịch thể Nhƣ vậy, đột biến đoạn xảy mtDNA thị sinh học tiềm năng, có tình ứng dụng cao chẩn đốn điều trị ung thƣ giai đoạn sớm [23,24] Trong khuôn khổ luận văn này, tiến hành đề tài nghiên cứu: “Phân tích đột biến đoạn 4977 bp của DNA ty th ể bệnh nhân ung thƣ đại trực tràng” với mục đìch:  Xác định đƣơ ̣c t ỷ lệ đột biến đoạn 4977 bp của mtDNA bệnh nhân ung thƣ đại trực tràng  Đánh giá mối liên quan giƣ̃a t ỷ lệ đột biến đoạn 4977 bp của mtDNA với đặc điểm lâm sàng bê ̣nh ung thƣ đ ại trực tràng ngƣời Việt Nam Đề tài đƣợc thực phòng Proteomics Sinh học cấu trúc thuộc Phịng nghiệm Trọng điểm Cơng nghệ Enzym Protein, Trƣờng Đại học Khoa học Tự nhiên, Đại học Quốc gia Hà Nội Đại học Khoa học Tự nhiên K19 Sinh học Luận văn thạc sĩ Hoàng Thị Thùy Dung Chƣơng 1: TỔNG QUAN 1.1 DNA TY THỂ Ty thể bào quan đƣợc tím thấy gần nhƣ tất tế bào có nhân, bao gồm thực vật, động vật, nấm sinh vật nguyên sinh (Hình 1) [36] Số lƣợng ty thể diện tế bào tùy thuộc vào nhu cầu chuyển hóa tế bào thay đổi từ ty thể lớn đến hàng ngàn ty thể khác Hình Cấu tạo bào quan ty thể [51] tế bào Cấu trúc ty thể: Ty thể đƣợc mô tả lần Altmann vào năm 1890 sau đó, cấu trúc siêu hiển vi ty thể đƣợc nghiên cứu chi tiết Palade (1952) Sjostrand (1953) [18] Đây bào quan có hính trịn hính trụ dài, có kìch thƣớc đƣờng kình 0,2-1 µm, chiều dài 2-5 µm Toàn cấu trúc ty thể đƣợc bao bọc hai lớp màng đƣợc cấu tạo protein lớp phospholipid kép Tuy nhiên, màng có đặc trƣng riêng khác Lớp màng bao trùm, tạo nên ranh giới ty thể, lớp màng tạo thành nếp gấp (mào - cristae) hƣớng vào tâm nơi khu trú enzyme hô hấp Các lớp màng chia ty thể thành hai khoang riêng biệt: khoang chứa chất (matrix) nằm bên ty thể khoang gian màng nằm hai lớp màng Chất tƣơng đối đậm đặc tím thấy sợi DNA, ribosome hạt nhỏ Ty thể mã hóa phần protein chúng chình máy di truyền riêng mính [18] Thành phần hóa học ty thể: protein chiếm khoảng 60 – 70% trọng lƣợng khô tồn dƣới hai dạng khác Một phần tham gia vào thành phần siêu cấu trúc ty thể, phần khác hòa tan matrix, lipid chiếm khoảng 25–30% trọng lƣợng khơ, chủ yếu phospholipid phần ìt cholesterol, ARN khoảng 0,5- Đại học Khoa học Tự nhiên K19 Sinh học 1059 m Hoàng Thị Q 51 1060 Nguyễn Thị T 1060 1061 46 Female Bùi Công H 71 Male Colon 54 Male Colon 2x6cm Lý Đức Hội 56 Male Rectu 3x3.5c m m Lê Thu P 63 Female 42 Female 57 Male A m Ninh Thị C 1073 Rectu 4x4.5c Female Nguyễn Duy Colon 48 1062 1064 Female m 1074 Ngũ Thanh H 1077 Phạm Văn T m 3x4cm Rectu 2.5x4c m m Colon 3.5x4c m 3.5x4c m Rectu 2.5x3c m m Rectu 2.5x2c rectum carcinoma Near Adeno- colon carcinoma Near Adeno- rectum carcinoma Near Adeno- rectum carcinoma Near Adeno- colon carcinoma Near Adeno- colon carcinoma 0.5- Near Adeno- 0.8 rectum carcinoma Near Adeno- colon carcinoma Near Adeno- rectum carcinoma Near Adeno- 11 0.5-1 4 ii T3N1M0 T2N0M0 + T2N0M0 T2N1M0 T3N1M0 T2N0M0 T2N0M0 + T2N0M0 + T2N0M0 Polyp 1077 m Hồ Viết C 50 Male 71 Female 57 Male 48 Male 57 Male 49 Male 74 Female 63 Vĩnh 75 1177 Nguyễn Thị T 1178 Dƣơng Văn T 1180 Cao Ngọc T 1181 Nguyễn Trung T 1182 Cao Xuân V 1028 Nghiêm Thị M 8276 Vũ Quang N 1667 Phạm Colon Rectu m m Adeno- m carcinoma 3x4cm 2.5x3c m m 11 4x6cm 2.5cm Colon 3x4cm Male Colon 4x5cm Male Rectu 4x6 Rectu m Rectu m 0.5-1 4x6cm m carcinoma 1x1.5c Rectu Rectu rectum Near Adeno- rectum carcinoma 0.5- Adeno- 0.8 carcinoma 0.5- Adeno- 1.2 carcinoma 0.5x0 Near Adeno- rectum carcinoma Near Adeno- rectum carcinoma Near Adeno- colon carcinoma 0.4 + T3N0M0 + T2N0M0 + T3N1M0 + T3N0M0 + T2N0M0 T2N0M0 Adeno- T2N1M0 carcinoma Adeno- iii T1N0M0 - T1N2M0 Poor B m carcinoma Colon 1675 Nguyễn Văn T 55 Male & Adeno- Rectu carcinoma - T2N1M0 + T1N0M0 + T1N1M0 - T2N1M0 + T1N2M0 + T2N0M0 Moderat e m Colon 1667 Đào Tiến L 51 Male & Rectu Adeno- 3x4 carcinoma m 1668 1689 1672 1671 8614 Trần Văn T 61 Male Chu Thị C 68 Female Lê Đính H 56 Male Trần Thị T 48 Female Lê Thị Y 55 Female Rectu m Rectu m m Colon carcinoma Adeno- 3x3.5 Colon Rectu Adeno- 2x2.5 carcinoma 2.5x3 2x3cm Near Adeno- colon carcinoma Adenocarcinoma 0.5-1 iv Near Adeno- T2N0M0 Moderat e Moderat e 8702 Lê Văn S 1020 Dƣơng Hƣờng Nguyễn Thị Sỹ V 31 Male 58 Female 73 Male Rectu m 4x5cm Rectu m 1.5 m Rectu 6x7cm 1-1.2 colon carcinoma Near Adeno- rectum carcinoma Near Adeno- rectum carcinoma Adenocarcinoma T3N1M0 + T2N0M0 + T3NM0 Viet-Duc Hospital 3822 3825 3905 3906 Đỗ Thị H Đinh V G Nguyễn Thị T Nguyễn Thị T 26 Female Colon 9x6 x6 cm 53 Male Rectum 4x3 80 Female Rectum 4x3 65 Female Colon 10x8x6 cm Signet ring cell T4N2M0 carcinoma Adeno- carcinoma Adenocarcinoma Adeno- carcinoma v T3 N T3 N T4 N Moderat e Moderat e Moderat e Moderat e 4101 4120 2903 3035 Nguyễn Thị X Đỗ Thị V Nguyễn Văn S Nguyễn Thị M Adeno- 53 Female Colon 6x4 cm 51 Female Rectum cm 71 Male Colon 6x8 cm 61 Female Rectum 5x4 cm carcinoma Adeno- Lê Thị M 80 Female Rectum 3x2 cm 3161 Đỗ Thị H 36 Female Rectum x3cm 95 Male Colon 63 Male Colon 5x3 cm 42 Male Rectum 3x2 cm 3372 3558 Nguyễn Viết Q Nguyễn Khắc Q Nguyễn Hữu Đ 4x5x3 cm T3 N carcinoma 3089 3352 T4 N Adenocarcinoma + Adeno- Adeno- T3 N carcinoma Adenocarcinoma + Adeno- Adeno- T3 N carcinoma Adenocarcinoma vi T4N0M1 T3 N carcinoma + e Moderat e T3N0M0 Well T3 N carcinoma Moderat Moderat e Moderat e Moderat e Well Moderat e T4N0M0 Well 3753 Hoàng Thị T X749 Nguyễn Thị Nhài X748 Nguyễn Thị X783 M 54 Female Colon 5x3 cm 64 Female Rectum 8x5 cm 59 Female Colon 7x6 cm Male Colon 3x4 cm Female Colon Male Colon Đào Công H 55 X782 Nguyễn Thị 60 T 4297 Phạm Văn T 43 Adeno- T2 N carcinoma Adeno- T4N0M0 carcinoma Adeno- carcinoma 3x3.5 Adeno- cm carcinoma Moderat e + T3N0M0 Well + T3N0M0 Adeno- 10x8 cm e T1N1M1 Well carcinoma Adeno- Moderat T3 N carcinoma Moderat e Moderat e Viet-Duc Hospital 4374 4463 4475 Đoàn Thị R Nguyễn Văn M 46 Female Rectum 53 Male Colon Female Rectum Nguyễn Thị G 76 Adeno- 6x4 cm T3 N carcinoma Adenocarcinoma Adeno- vii + + T4 N M0 T4 N Moderate Moderate Poor carcinoma 4539 Hoàng Đính X 79 Male Colon Trịnh Thị N 51 Female Colon 4603 Trần Văn V 46 Male Rectum 4620 Ngơ Thị H 35 Female Colon 4644 Hồng Hữu T 55 Male Rectum 51 Male Colon Nguyễn Văn N carcinoma Adeno- 4595 4779 Adeno- 3x1 cm carcinoma Adenocarcinoma Adenocarcinoma carcinoma 59 Female Colon 4841 Cà Thị V 68 Female Rectum 4942 Nguyễn Thị C 58 Female Colon 2x1 + Adenocarcinoma Adenocarcinoma Adeno- viii T3 N T4 N M0 + T3 N + T4 N Moderate T4 N carcinoma Adeno- Nguyễn Thị P + Adeno- 6x5 cm 4833 M0 + + T3 T3 N M0 + T3 N + T3 N Well Moderate carcinoma ix Phụ lục Các dạng đột biến mtDNA loại ung thƣ liên quan Bảng 1: Đột biến gen mã hóa tiểu phần phức hệ I hệ gen ty thể loại ung thư liên quan Vùng gen mã hóa Loại ung thƣ Mơ tả Ung thƣ bạch cầu, ung thƣ đại trực tràng, ung thƣ cổ tử cung, ung thƣ phổi, ung thƣ da, ung thƣ buồng trứng, khối u tuyến cận ND1 giáp tuyến, ung thƣ thận, khối u tuyến giáp, ung thƣ tế bào tuyến mang tai, ung thƣ đƣờng tiêu hóa, ung thƣ tiền liệt tuyến, ung thƣ vú Ung thƣ vú, ung thƣ cổ tử cung, ung thƣ phổi, ung thƣ da, ung ND2 thƣ miệng, khối u tuyến cận giáp, ung thƣ tuyến tụy, ung thƣ tiền liệt tuyến, ung thƣ thận, khối u tuyến giáp, ung thƣ đƣờng tiêu hóa, u thần kinh đệm Tổng cộng 116 đột biến đƣợc báo cáo, có 63 đột biến sai nghĩa, 42 đột biến câm, đột biến vô nghĩa, đột biến thêm đoạn đột biến đoạn Tổng cộng 92 đột biến đƣợc báo cáo, có 41 đột biến sai nghĩa, 48 đột biến câm, đột biến vô nghĩa, đột biến đoạn đột biến điểm A4769G, A4917G đƣợc tím thấy loại khối u x Ung thƣ bàng quang, ung thƣ cổ tử cung, ung thƣ đại trực tràng, Tổng cộng 26 đột biến đƣợc báo cáo, ND3 ung thƣ phổi, khối u tuyến giáp, khối u tuyến cận giáp, ung thƣ có 12 đột biến sai nghĩa, 13 đột biến câm đƣờng tiêu hóa, ung thƣ thận, ung thƣ miệng đột biến đoạn Ung thƣ cổ tử cung, ung thƣ đại trực tràng, ung thƣ phổi, khối u ND4L tuyến giáp, ung thƣ phổi, khối u não, ung thƣ da, ung thƣ buồng Tổng cộng 18 đột biến đƣợc báo cáo, trứng, khối u tuyến cận giáp, ung thƣ tiền liệt tuyến, ung thƣ có đột biến sai nghĩa 10 đột biến câm đƣờng tiêu hóa đƣờng tiêu hóa Ung thƣ bạch cầu, ung thƣ bàng quang, ung thƣ vú, ung thƣ cổ tử cung, khối u tuyến cận giáp, ung thƣ đại trực tràng, ung thƣ ND5 phổi, ung thƣ da, ung thƣ tuyến tụy, ung thƣ tiền liệt tuyến, ung thƣ thận, khối u tuyến giáp, ung thƣ thực quản, ung thƣ đƣờng tiêu hóa, u thần kinh đệm Tổng cộng 156 đột biến đƣợc báo cáo, có 63 đột biến sai nghĩa, 86 đột biến câm, đột biến vô nghĩa, đột biến thêm đoạn đột biến đoạn Ung thƣ bạch cầu, ung thƣ vú, ung thƣ cổ tử cung, khối u tuyến cận giáp, ung thƣ đại trực tràng, ung thƣ phổi, ung thƣ buồng Tổng cộng 33 đột biến đƣợc báo cáo, ND6 trứng, ung thƣ tuyến tụy, ung thƣ tiền liệt tuyến, khối u tuyến có 11 đột biến sai nghĩa, 20 đột biến câm giáp, ung thƣ thực quản, ung thƣ đƣờng tiêu hóa, u thần kinh đột biến đoạn đệm xi Bảng 2: Đột biến gen mã hóa tiểu phần phức hệ III, IV, V hệ gen ty thể loại ung thư liên quan Vùng gen mã hóa Loại ung thƣ Mơ tả Ung thƣ bạch cầu, ung thƣ bàng quang, khối u não, ung thƣ vú, ung thƣ đại trực tràng, ung thƣ phổi, ung thƣ buồng trứng, ung CYT b thƣ tuyến tụy, khối u tuyến cận giáp tuyến, khối u tuyến giáp, ung thƣ da, ung thƣ tiền liệt tuyến, ung thƣ đƣờng tiêu hóa, ung thƣ biểu mơ mũi – họng, khối u tế bào thần kinh đệm Ung thƣ vú, ung thƣ đại trực tràng, khối u não, ung thƣ phổi, ung COI thƣ da, ung thƣ tuyến tụy, khối u tuyến cận giáp tuyến, khối u tuyến giáp, ung thƣ tiền liệt tuyến, ung thƣ buồng trứng, ung thƣ đƣờng tiêu hóa, khối u tế bào thần kinh đệm, ung thƣ gan Ung thƣ đại trực tràng, ung thƣ vú, ung thƣ phổi, ung thƣ buồng COII trứng, khối u tuyến cận giáp tuyến, khối u tuyến giáp, ung thƣ da, ung thƣ tiền liệt tuyến, ung thƣ đƣờng tiêu hóa, ung thƣ bạch cầu xii Tổng cộng 93 đột biến đƣợc báo cáo, có 50 đột biến sai nghĩa, 38 đột biến câm, đột biến vô nghĩa đột biến đoạn Tổng cộng 86 đột biến đƣợc báo cáo, có 22 đột biến sai nghĩa, 62 đột biến câm đột biến thêm đoạn Tổng cộng 46 đột biến đƣợc báo cáo, có 12 đột biến sai nghĩa, 33 đột biến câm đột biến đoạn Khối u não, ung thƣ vú, ung thƣ đại trực tràng, ung thƣ phổi, ung Tổng cộng 54 đột biến đƣợc báo cáo, COIII thƣ buồng trứng, ung thƣ tuyến tụy, khối u tuyến cận giáp tuyến, có 24 đột biến sai nghĩa, 25 đột biến khối u tuyến giáp, ung thƣ da, ung thƣ đƣờng tiêu hóa, ung thƣ câm, đột biến vơ nghĩa, đột biến thêm đoạn đột biến đoạn miệng Ung thƣ vú, ung thƣ đại trực tràng, ung thƣ phổi, ung thƣ da, Tổng cộng 55 đột biến đƣợc báo cáo, ATPase khối u tuyến cận giáp tuyến, khối u tuyến giáp, ung thƣ dày, có 34 đột biến sai nghĩa, 20 đột biến ung thƣ bạch cầu câm đột biến vô nghĩa Ung thƣ vú, ung thƣ đại trực tràng, ung thƣ gan, ung thƣ tuyến ATPase tụy, khối u tuyến cận giáp tuyến, khối u tuyến giáp, ung thƣ tiền liệt tuyến, ung thƣ buồng trứng, ung thƣ đƣờng tiêu hóa xiii Tổng cộng đột biến đƣợc báo cáo, có đột biến sai nghĩa, đột biến câm Bảng 3: Đột biến vùng điểu khiển D – Loop Vùng Loại ung thƣ Mô tả Ung thƣ bạch cầu, ung thƣ bàng quang, ung thƣ Tổng cộng có 635 đột biến đƣợc báo cáo, bao gồm 510 vú, ung thƣ cổ tử cung, ung thƣ đại trực tràng, điểm đột biến, 56 đột biến đoạn (trong có đột ung thƣ niêm mạc tử cung, ung thƣ gan, ung thƣ biến đoạn kìch thƣớc 50 bp) 69 đột biến thêm phổi,khối u não, ung thƣ da, ung thƣ miệng, đoạn D – Loop khối u tuyến cận giáp, ung thƣ tiền liệt tuyến, Đột biến vị trì 310 đƣợc phát số ung thƣ thận, ung thƣ dày, ung thƣ tuyến loại bệnh ung thƣ A263G, C150T, C16223T, C16519T, giáp, ung thƣ buồng trứng, ung thƣ đƣờng tiêu G16390A, G207A, G94A, T146C, T152C, T16189C, hóa khối u 130, khối u tế bào thần kinh đệm, T195C, T204C, T72C đƣợc tím thấy loại khối u xƣơng ác tình, ung thƣ biểu mơ túi mật ung thƣ thuộc nhóm khác xiv Bảng 4: Đột biến gen mã hóa rRNA tRNA hệ gen ty thể Vùng Loại ung thƣ Mô tả Ung thƣ vú, ung thƣ đại trực tràng, ung thƣ gan, ung thƣ phổi, khối u não, ung thƣ buồng trứng, ung thƣ tuyến tụy, khối u tRNA tuyến cận giáp tuyến, khối u tuyến giáp, ung thƣ da, ung thƣ tiền liệt tuyến, ung thƣ đƣờng tiêu hóa, ung thƣ biểu mơ mũi – họng, ung thƣ bạch cầu, ung thƣ tế bào lympho đột biến điểm đột biến đoạn Đột biến điểm A3234G tRNA leu đƣợc tím thấy ung thƣ phổi, ung thƣ đại trực tràng, ung thƣ thận Các đột biến khác đƣợc tím thấy gen tRNA asp, tRNA thr tRNAphe Ung thƣ bạch cầu, ung thƣ đại trực tràng, ung thƣ niêm mạc tử 12s rRNA Tổng cộng có 56 đột biến đƣợc báo cáo bao gồm 54 cung, ung thƣ buồng trứng khối u tuyến cận giáp tuyến, khối u tuyến giáp, ung thƣ tiền liệt tuyến, ung thƣ đƣờng tiêu hóa, ung thƣ biểu mô mũi – họng, ung thƣ thận Tổng cộng có 53 đột biến đƣợc báo cáo, bao gồm 47 đột biến điểm, đột biến thêm đoạn đột biến đoạn Đột biến T710C đƣợc báo cáo ung thƣ đại trực tràng ung thƣ tuyến giáp xv Ung thƣ bàng quang, khối u não, ung thƣ đại trực tràng, ung thƣ 16s rRNA vú, ung thƣ niêm mạc tử cung, ung thƣ buồng trứng, khối u tuyến cận giáp tuyến, khối u tuyến giáp, ung thƣ tiền liệt tuyến, ung thƣ đƣờng tiêu hóa, ung thƣ bạch cầu, ung thƣ thận xvi Tổng cộng có 56 đột biến đƣợc báo cáo, bao gồm 52 đột biến điểm, đột biến thêm đoạn đột biến đoạn ... ĐẠI TRỰC TRÀNG .51 3.6.1 Khảo sát đột biến đoạn 4977 bp mtDNA bệnh nhân ung thƣ đại trực tràng theo vị trì mơ 51 3.6.2 Khảo sát đột biến đoạn 4977 bp mtDNA bệnh nhân ung thƣ đại trực tràng. .. cứu: ? ?Phân tích đột biến đoạn 4977 bp của DNA ty th ể bệnh nhân ung thƣ đại trực tràng? ?? với mục đìch:  Xác định đƣơ ̣c t ỷ lệ đột biến đoạn 4977 bp của mtDNA bệnh nhân ung thƣ đại trực tràng ... 1.3 UNG THƢ ĐẠI TRỰC TRÀNG VÀ MỐI LIÊN HỆ VỚI ĐỘT BIẾN MẤT ĐOẠN 4977 BP XẢY RA TRONG DNA TY THỂ 17 1.3.1 Ung thƣ đại trực tràng 17 1.3.2 Mối liên hệ đột biến đoạn 4977 bp xảy mtDNA ung