Nghiên cứu điều kiện phân tích thuốc kháng sinh họ p lactam trong các mẫu sinh học và dược phẩm

Luận văn Thạc sĩ Trần Thị Dung ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN - TRẦN THỊ DUNG NGHIÊN CỨU ĐIỀU KIỆN PHÂN TÍCH THUỐC KHÁNG SINH HỌ β – LACTAM TRONG CÁC MẪU SINH HỌC VÀ DƯỢC PHẨM LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Hà Nội - 2011 Chuyên ngành Hoá Phân tích Luận văn Thạc sĩ Trần Thị Dung MỤC LỤC MỞ ĐẦU Chương Tổng quan 1.1 Giới thiệu chung chất kháng sinh .2 1.1.1 Lịch sử đời 1.1.2 Phân loại 1.1.3 Đánh giá tác dụng 1.2 Kháng sinh β – Lactam 1.2.1 Định nghĩa .3 1.2.2 Cấu trúc phân loại 1.2.3 Tính chất vật lý hóa học .7 1.2.4 Tác dụng 1.2.5 Điều chế 1.2.6 Tình hình sử dụng thuốc kháng sinh Việt Nam giới .9 1.3 Các phương pháp định lượng β – Lactam 11 1.3.1 Các phương pháp quang học 11 1.3.2 Các phương pháp điện hóa 12 1.3.3 Các phương pháp điện di mao quản 12 1.3.4 Sắc kí mỏng 13 1.3.5 Sắc kí lỏng hiệu cao (HPLC) 14 Chương Đối tượng phương pháp nghiên cứu 17 2.1 Đối tượng, mục tiêu nội dung nghiên cứu .17 2.1.1 Đối tượng mục tiêu nghiên cứu 17 2.1.2 Nội dung nghiên cứu .17 2.2 Phương pháp nghiên cứu – Phương pháp RP- HPLC 18 2.2.1 Nguyên tắc chung trang bị phương pháp HPLC 18 Chun ngành Hố Phân tích Luận văn Thạc sĩ Trần Thị Dung 2.2.2 Sắc ký hấp phụ pha ngược RP-HPLC 20 2.2.3 Detector huỳnh quang 22 2.2.4 Một số đại lượng đặc trưng HPLC 23 2.2.5 Phân tích định lượng HPLC 25 2.3 Kỹ thuật dẫn xuất hóa β- Lactam với thuốc thử NBD-F .26 2.4 Dụng cụ hóa chất .28 2.4.1 Máy móc dụng cụ .28 2.4.2 Hóa chất 28 Chương 3: Kết thảo luận 30 3.1 Khảo sát điều kiện tạo dẫn xuất β- Lactam thuốc thử NBD-F 30 3.1.1 Khảo sát nhiệt độ phản ứng dẫn xuất hóa .30 3.1.2 Khảo sát thời gian phản ứng dẫn xuất hóa 33 3.2 Khảo sát điều kiện chạy sắc ký .36 3.2.1 Chọn thể tích vịng mẫu (sample loop) 36 3.2.2 Chọn bước sóng detector 37 3.3 Chọn pha tĩnh 37 3.4 Chọn pha động .38 3.4.1 pH dung dịch đệm 38 3.4.2 Tỉ lệ thành phần pha động .40 3.4.3 Nồng độ đệm acetat pha động 44 3.4.4 Tốc độ pha động 47 3.5 Đánh giá phương pháp phân tích 50 3.5.1.Khảo sát khoảng tuyến tính lập đường chuẩn 50 3.5.2.Giới hạn phát (LOD) giới hạn định lượng (LOQ) .54 3.5.3 Độ đúng phép đo .55 3.5.4 Độ lặp lại phép đo 57 3.6 Phân tích mẫu thực 58 3.6.1 Phân tích mẫu dược phẩm .58 Chuyên ngành Hoá Phân tích Luận văn Thạc sĩ Trần Thị Dung 3.6.2 Phân tích mẫu sinh học 63 3.7 Kết số phương pháp khác xác định kháng sinh loại 68 3.8 Hướng phát triển đề tài 70 KẾT LUẬN 71 TÀI LIỆU THAM KHẢO 73 PHỤ LỤC .79 Chuyên ngành Hố Phân tích Luận văn Thạc sĩ Trần Thị Dung DANH MỤC BẢNG Tên bảng STT Trang Bảng 1.1 Phân loại cấu trúc số Penicillin Bảng 1.2 Phân loại cấu trúc số Cephalosporin Bảng 1.3 Hằng số axit kháng sinh nghiên cứu Bảng 3.1 Sự phụ thuộc Spíc vào nhiệt độ phản ứng 32 Bảng 3.2 Sự phụ thuộc Spíc vào thời gian phản ứng 35 Bảng 3.3 Sự phụ thuộc thời gian lưu chất vào pH pha động Bảng 3.4 Sự phụ thuộc k’ vào pH pha động Bảng 3.5 Sự phụ thuộc thời gian lưu vào tỉ lệ dung môi hữu đệm Bảng 3.6 Sự phụ thuộc thời gian lưu vào tỉ lệ ACN MeOH 38 39 41 43 10 Bảng 3.7 Sự phụ thuộc k’ vào tỉ lệ ACN MeOH 43 11 Bảng 3.8 Thời gian lưu chất phụ thuộc vào nồng độ đệm 44 12 Bảng 3.9 Diện tích píc chất phân tích nồng độ đệm khác 45 13 14 15 16 17 18 Bảng 3.10 Thời gian lưu chất phân tích phụ thuộc vào tốc độ pha động Bảng 3.11 Diện tích pic chất phân tích phụ thuộc vào tốc độ pha động Bảng 3.12 Sự phụ thuộc Spic vào nồng độ chất phân tích Bảng 3.13 Các giá trị Ftính, Fbảng phương trình đường chuẩn kháng sinh β - Lactam Bảng 3.14 Giới hạn phát giới hạn định lượng chất chuẩn kháng sinh β - Lactam Bảng 3.15 Độ đúng phép đo nồng độ chất 0,15ppm Chun ngành Hố Phân tích 47 47 51 53 55 56 Luận văn Thạc sĩ Trần Thị Dung 19 Bảng 3.16 Độ đúng phép đo nồng độ chất 0,40ppm 56 20 Bảng 3.17 Độ đúng phép đo nồng độ chất 0,80ppm 57 21 Bảng 3.18 Khảo sát độ lặp lại phép đo theo diện tích pic 58 22 Bảng 3.19 Thơng tin mẫu thuốc phân tích 59 23 24 Bảng 3.20 Kết độ thu hồi xác định β-Lactam theo phương pháp thêm chuẩn mẫu thuốc Bảng 3.21 Kết tính nồng độ Cx sai khác hàm lượng so với kết in nhãn thuốc 61 63 25 Bảng 3.22 Hiệu suất thu hồi mẫu nước tiểu 64 26 Bảng 3.23 Hiệu suất thu hồi mẫu máu 66 Chuyên ngành Hoá Phân tích Luận văn Thạc sĩ Trần Thị Dung MỞ ĐẦU Ngày nay, xã hội ngày phát triển vấn đề sức khỏe người ngày quan tâm, đặc biệt sản phẩm liên quan trực tiếp đến sức khỏe người Trong y học đại, β - Lactam thuốc kháng sinh tổng hợp quan trọng chữa bệnh người, thú y từ chúng giới thiệu vào thị trường vào năm 1938 loại kháng sinh dùng nhiều Nhờ thuốc kháng sinh mà y học loại bỏ dịch bệnh nguy hiểm dịch hạch, tả, thương hàn, điều trị hiệu nhiều bệnh gây vi khuẩn Nhưng, liều lượng cách dùng kháng sinh không dễ bị vi khuẩn nhờn thuốc, kháng thuốc, từ việc chữa trị khó khăn Ngồi ra, cịn gây lãng phí cho người bệnh có bệnh vi rút không chữa kháng sinh dùng kháng sinh, gây khó khăn cho việc chuẩn đoán bệnh ảnh hưởng tới sức khỏe người bệnh Đối với người cao tuổi , lươ ̣ng dư kháng sinh nư ớc tiểu nhiề u, gây bệnh thận Đồng thời, lươ ̣ng dư này thải môi trường sẽ gây lên những hâ ̣u quả vô cùng nghiêm tro ̣ng Vì vậy, kiểm sốt phân tích thuốc kháng sinh người bệnh biện pháp cần thiết để nâng cao hiệu sử dụng chúng Có nhiều phương pháp tách khác Trong đó, phương pháp tách sắc ký phương pháp tách chọn lọc có độ nhạy cao, lượng mẫu bơm ít, thời gian phân tích ngắn Tách xác định đồng thời kháng sinh β - Lactam phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) sử dụng detector huỳnh quang mẫu sinh học dược phẩm hướng nghiên cứu mới, với ưu điểm ngày áp dụng nhiều phịng thí nghiệm phân tích mẫu dịch vụ Trên sở đó, chúng tơi chọn đề tài là: “Nghiên cứu điều kiện phân tích thuốc kháng sinh họ β - Lactam mẫu sinh học dƣợc phẩm ” Chuyên ngành Hoá Phân tích Luận văn Thạc sĩ Trần Thị Dung CHƢƠNG TỔNG QUAN 1.1 Kháng sinh β - Lactam 1.1.1 Định nghĩa Là kháng sinh mà phân tử chứa vịng β-Lactam Gồm nhóm: penicillin, cephalosporin, monobactam, cacbapenem hai nhóm sử dụng phổ biến lớn penicillin cephalosporin Các penicillin thu từ môi trường nuôi cấy nấm Penicilium notatum Penicillium chryrogenum, bán tổng hợp từ axit 6-amino penicillanic (6APA) Các cephalosporin tự nhiên phân lập từ môi trường nuôi cấy nấm Cephalosporium acremonium bán tổng hợp từ axit 7-amino cephalosporinic (7ACA) xuất phát từ kháng sinh thiên nhiên [1] 1.1.2 Cấu trúc phân loại * Các penicillin Các penicillin có cấu trúc gồm vịng: vòng thiazolidin, vòng βLactam R CO S N H CH3 N CH3 O COOM Hình 1.1 Cơng thức cấu tạo kháng sinh penicillin Tên gọi chung công thức penicillin chưa có gốc R là: (2S,5R,6R 3,3-dimethyl-7-oxo-4-thia-1-azabicyclo[3.2.0]heptane-2-carboxylic acid Khi thay R gốc khác nhau, cacbon bất đối có cấu hình 2S, 5R, 6R ta có penicilin có độ bền, dược động học phổ kháng khuẩn khác Với M gốc cation thường là: K, Na, H Nhóm kháng sinh penicillin chia thành nhóm với hoạt tính khác [1] Chun ngành Hố Phân tích Luận văn Thạc sĩ Trần Thị Dung Bảng 1.1 Phân loại cấu trúc số penicillin Hoạt tính R Gồm Penicillin tự tự nhiên Nhóm penicillin Tên kháng sinh PenicillinG nhiên dẫn chất.Phổ CH2- (PENG) hẹp: vi khuẩn gram(+) Benzyl Benzathin Không kháng βlactamase Nhóm penicillin kháng penicilliiase CH3 C- Oxacillin (OXA) N O Là Penicillin bán 6-[(5-methyl-3-phenyl-1,2-oxazole-4- tổng hợp Phổ hẹp carbonyl)amino] Cl O N C- nhóm I Kháng penicilliiase, khơng tác động vào vịng β – Cloxacillin CH3 (CLO) Lactam 6-{[3-(2-chlorophenyl )-5-methyloxazole-4-carbonyl]amino} NH2NH2 Nhóm penicillin phổ rộng CH- Ampicillin Phổ rộng, tác dụng (AMP) 6-([(2R)-2-amino-2- khuẩn gram (+) (-) phenylacetyl]amino) Không kháng β- NH2NH2 Amoxicill CH- (AMO) lactamase penicilliiase HO 6-{[(2R)-2-amino-2-(4hydroxyphenyl)-acetyl]amino} Chuyên ngành Hoá Phân tích 10 Luận văn Thạc sĩ Trần Thị Dung * Các cephalosporin Các cephalosporin cấu trúc chung gồm vòng: vòng β-Lactam cạnh gắn với dị vòng cạnh, cacbon bất đối có cấu hình 6R, 7R Khác gốc R R2 S R1 CO N H N5 R3 O COOM Hình 1.2 Cơng thức cấu tạo kháng sinh cephalosporin Tên gọi chung cephalosporin chưa có gốc R là: (6R,7R) 8-oxo-5thia-1-azabicyclo[4.2.0]oct-2-ene-2-carboxylic acid Khi thay đổi gốc R, cacbon bất đối có cấu hình 6R, 7R cephalosporin có độ bền, tính kháng khuẩn dược động học khác Dựa vào khổ kháng khuẩn, chia cephalosporin thành hệ Các cephalosporin hệ trước tác dụng vi khuẩn gram dương mạnh hơn, gram âm yếu hệ sau [1] Bảng 1.2 Phân loại cấu trúc cephalosporin Kháng sinh I: tác mạnh dụng R1 Cephalexin CH- (CEP) gram (-) Cephapirin Không bền dễ bị β- Cephazolin lactamase phá SCH2- H -CH3 H -CH2-OCOCH3 N N N CH2N N hủy Chun ngành Hố Phân tích R3 NH2 vi khuẩn gram (+), yếu R2 11 N H -CH2 S CH3 Luận văn Thạc sĩ Trần Thị Dung Ưu nhược điểm phương pháp Ưu nhược điểm phương pháp - Xác định Điện di mao nhiều đối quản tượng khác - Chỉ số Điện hóa đối tượng điển hình - Chi phí khơng cao - Lượng mẫu - Phân tích nhiều chất phân tích nhỏ, lúc thao tác đơn - Giới hạn phát định lượng cao giản - Phân tích mẫu thực mẫu sinh học phức tạp, phải làm giàu - Thao tác đơn - Chỉ phân tích chấ t đơn lẻ giản, dễ làm - Giới hạn phát định lượng thấ p - Chi phí cao HPLC sử dụng detector uv-vis - Xác định nhiều đối tượng khác - Phân tích nhiều chấ t - Lượng mẫu lúc phân tích nhỏ, - Giới hạn phát định lượng thấ p thao tác phức phương pháp điện di tạp - Phân tích mẫu thực mẫu sinh học phức tạp, phải làm giàu - Chi phí cao HPLC - Xác định sử dụng detector nhiều đối huỳnh tượng khác quang - Phân tích chấ t lúc - Lượng mẫu - Giới hạn phát định lượng thấ p phân tích nhỏ, phương pháp điện di phương thao tác phức pháp HPLC sử dụng detector uv-vis tạp - Phân tích mẫu thực mẫu sinh học đơn giản khơng bị ảnh hưởng nhiều mẫu Chun ngành Hố Phân tích 75 Luận văn Thạc sĩ Trần Thị Dung 3.8 Hƣớng phát triển đề tài Trong luận văn này, điều kiện hạn chế nên xác định hàm lượng β - Lactam phương pháp HPLC sử dụng detector huỳnh quang Chúng tơi dẫn xuất hóa β - Lactam có nhóm amin bậc so sánh với phương pháp điện di mao quản, phương pháp điện hoá, phương pháp HPLC sử dụng detector uv-vis mẫu dược phẩm, mẫu nước tiểu Phương pháp cịn mở rộng phân tích dạng mẫu khác ví dụ như: mẫu thực phẩm, mẫu sữa,… mẫu môi trường như: nước thải bệnh viện, nước thải trại chăn nuôi gia súc Hay tìm kĩ tḥt dẫn xuất hóa β - Lactam khơng có nhóm amin bậc với thuốc thử NBD-F Vì vậy cần có nghiên cứu để phát triển phương pháp áp dụng vào thực tiễn Chun ngành Hố Phân tích 76 Luận văn Thạc sĩ Trần Thị Dung KẾT LUẬN Qua sở nghiên cứu điều kiện thực nghiệm, với mục đích ứng dụng phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao sử dung detector huỳnh quang để tách xác định kháng sinh CEP, CEF, AMP mẫu sinh học (mẫu nước tiểu, mẫu máu) dược phẩm, thu kết sau: Khảo sát chọn đƣợc thông số tối ƣu cho phản ứng dẫn xuất hóa q trình chạy sắc ký: Các điều kiện tối ưu phản ứng dẫn xuất hóa là: - Nhiệt độ phản ứng : 700C - Thời gian dẫn xuất hóa : 12 phút Điều kiện tối ưu để tách sắc ký dẫn xuất β - Lactam sau: - Pha tĩnh: Cột Supelcosil RP-C18 với kích thước hạt nhồi  m hãng Sulpenco-Autralia - Pha động: + pH = 5,0 + Tỷ lệ ACN/MeOH/đệm 25/25/50 + Nồng độ đệm 10mM + Tốc độ 1ml/phút + Chạy đẳng dòng + Thể tích mẫu 20  l + Detector huỳnh quang Bước sóng kích thích Ex=470nm, bước sóng phát xạ Em=530nm Chun ngành Hố Phân tích 77 Luận văn Thạc sĩ Trần Thị Dung Đánh giá phƣơng pháp phân tích: - Xây dựng đường chuẩn kháng sinh khoảng 0,05ppm đế n 2,00ppm, hệ số tương quan đường chuẩn R2 > 0,99 - Giới hạn phát LOD kháng sinh từ 0,009ppm đến 0,013ppm Giới hạn định lượng LOQ từ 0,029ppm đến 0,044ppm - Độ xác nồng độ 0,15ppm; 0,40ppm; 0,80ppm nằm khoảng 0,10% – 6,83 % - Hệ số biến động nồng độ 0,15ppm; 0,40ppm; 0,80ppm nằm khoảng 0,65% - 4,75% Phân tích hàm lƣợng kháng sinh mẫu thuốc, nƣớc tiểu mẫu máu Cách xử lí mẫu tiến hành đơn giản, khơng phải làm giàu, hiê ̣u suấ t thu hồ i là khá cao: - Với mẫu thuốc: hiệu suất thu hồi đạt từ 99,00% đến 106,00% - Với mẫu nước tiểu: hiệu suất thu hồi từ 96,00% tới 99,50% - Với mẫu máu: hiệu suất thu hồi 93,50% Chuyên ngành Hoá Phân tích 78 Luận văn Thạc sĩ Trần Thị Dung TÀI LIỆU THAM KHẢO TIẾNG VIỆT Bộ Y Tế (2007), Hóa dược, tập 2, NXB Y học, Hà Nội Bộ Y Tế (2002), Dược điển Việt Nam, xuất lần thứ 3, Nhà xuất Y học, Hà Nội Lê Thị Huyền Dương (2000), Tách phân tích đồng thời số chất quan trọng nhóm vitamin A phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao điện di mao quản, Luận án tiến sĩ, ĐH Quốc Gia Hà Nội Nguyễn Văn Đích (2005), "Không nên lạm dụng kháng sinh", Báo y học đời sống, số 27, pp 55-57 Trần Thị Thu Hằng (2009), Tách xác định β-Lactam đối tượng sinh học phương pháp điện di mao quản, luận văn thạc sĩ, ĐH Quốc gia Hà Nội Trần Tứ Hiếu, Từ Vọng Nghi, Nguyễn Văn Ri, Nguyễn Xuân Trung (2003), Hố học phân tích - Các phương pháp phân tích cơng cụ Phạm Ḷn (1998), Cơ sở lý thuyết phân tích sắc ký lỏng hiệu cao, ĐH Quốc gia Hà Nội Phạm Luận (2004), Giáo trình vấn đề sở kỹ thuật xử lý mẫu, trường ĐH KHTN – ĐHQG Hà Nội Ngọc Phương ( 2006), "Thảm họa lạm dụng kháng sinh cho trẻ", Báo laodong.com.vn, 10-10-2006 10 Nguyễn Văn Ri (2007), Các phương pháp tách sắc ký, chuyên đề cao học trường ĐH KHTN - ĐHQG Hà Nội 11 Tạ Thị Thảo (2005), Bài giảng chuyên đề thống kê hóa phân tích, ĐH Quốc gia Hà Nội 12 Lại Thị Thu Trang (2010), Nghiên cứu phương pháp sắc kí xác định thuốc kháng sinh họ β – Lactam, luận văn thạc sĩ, ĐH Quốc gia Hà Nội 13 Trường ĐH Dược Hà Nội (1999), Hóa Dược, Tài liệu lưu hành nội cho sinh viên trường ĐH Dược Hà Nội, NXB ĐH Dược Hà Nội Chuyên ngành Hoá Phân tích 79 Luận văn Thạc sĩ Trần Thị Dung TIẾNG ANH 14 Alison L Spongberg, Jason D Witter (2008), “ Pharmaceutical compounds in the wastewater process stream in Northwest Ohio”, science of the total environment 397 (2008), 148-157 15 Althea W McCormick (2003), " Geographic diversity and temporal trends of antimicrobial resistance in Streptococcus pneumoniae in the United States", Journal Nature medicine, 9, 424 – 430 16 Attila Gaspar, Melinda Andrasi, Szilvia Kardos (2002), “Application of capillary zone electrophoresis to the analysis and to a stability study of cephalosporins”, Journal of Chromatography B, 775(2), pp 239-246 17 A Fernandez-Gonzalez, R Badia and M.E.Diaz-Gar (2003), “Micellemediated spectrofluorinetric determination of ampicillin based on metal ioncatalysed hydrolysis”, Analytica Chimica Acta, 484(2), pp 239-246 18 Bilal Awadallah, Peter C Schmidt, Martin A Wahl (2002), “ Quantitation of the enantiomers in the parts per billion concentration range for in vitro drug absorption studies” , Journal of Chromatography A, 988 (2003)135 – 143 19 Biyang Deng, Aihong Shia, Linqiu Lia and Yanhui Kang (2008), "Pharmacokinetics of amoxicillin in human urine using online coupled capillary electrophoresis with electrogenerated chemiluminescence detection", Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, 48(4), 12491253 20 C Y W Yang, W.H Luo, E.B Hansen, j.p Freeman, H,C Thompson (1996), “Determination of amoxicillin in catfish and salmon tissues by liquidchromatography with precolumn formaldehyde”, Journal of AOAC International, 79(2), 389-396 21 C Y W Yang, W.H Luo, E.B Hansen, j.p Freeman, H,C Thompson (1996), "Rapid determination of ampicillin in bovine milk by liquid chromatography Chuyên ngành Hố Phân tích with fluorescence 80 detection", Journal of AOAC Luận văn Thạc sĩ Trần Thị Dung International, 80(1), 107-190 22 Dieter Adam (2002), “Global Antibiotic Resistance in S.pneumoniae” Journal of antimicrobial Chemotherap, 50 (Topic T1), 1-5 23 David Felmingham (2002), “Increasing prevalence of antimicrobial resistance among isolates of S pneumoniae from the PROTEKT surveillance study, and comparative in-vitro activity of the ketolide, telithromycin”, Journal of Antimicrobial Chemotherap, 50, suppl 1, 25-37 24 D Hurtaud, Deleeine B; Sanders P (1994), “Particle beam liquid chromatography-mas spectrometry method with negative ion chemical ionization for the confirmation of oxacillin, cloxacillin and dicloxacillin residues in bovine muscle”, Analyst, 199(12), 2731-2736 25 Daniela P Santos, Marcio F Bergamini and Maria Valnice B Zanoni (2008), “Voltammetric sensor for amoxicillin determination in human urine using polyglutamic acid/glutaraldehyde film”, Sensors and Actuators B: Chemical, 133(2), pp 398-403 26 D.P Raymond (2001), " Impact of a rotating empiric antibiotic schedule on infectious mortality in an intensive care unit", Journal of Critical Care Medicin, 29(6):1101-1108 27 Duoglas A Skoog., Donald M.West, James F.Holler (1996), Fundamentals of Analytical chemistry, 7th edition, Saunders College 28 E Benito-pena, A.I.Partal-Rodera, M.E.Leon-Gonzalez, M.C.Moreno-Bondi (2005), “Evaluation of mixed mode solid phase extraction cartridges for the preconcentration of beta-lactam antibiotics in wastewater using liquid chromatography with UV-DAD detection”, Analytical Chimica Acta, 556(2), 415-422 29 Elena Katz, Roy E Steen, Peter Schoenmarker, Neil Miller (1998), Hand book of HPLC, Marcel Dekker, New York 30 F Belal, M M El-Kerdawy, S M El-Ashry and D R El-Wasseef (2000), "Kinetic spectrophotometric determination of ampicillin and amoxicillin in Chuyên ngành Hố Phân tích 81 Luận văn Thạc sĩ Trần Thị Dung dosage forms", Il Farmaco, 55(11-12), pp 680-686 31 Jae-Hoon Song and ANSORP members (2004), “Macrolide resistance and genotypic characterization of Streptococcus pneumoniae in Asian countries: a study of the Asian Network for Surveillance of Resistant Pathogens (ANSORP)”, Journal of Antimicrobial Chemotherapy; 53, 457-463 32 J.M Cha, S Yang, K.H Carlson (2006), ,"Trace determination of β-lactam antibiotics in surface water and urban wastewater using liquid chromatography combined with electrospray tandem mass spectrometry", Journal of Chromatography A, 1115(1-2), 46-57 33 J.O.Boison, and Keng, L.J.Y (1998), “Multiresidue liquid chromatographic method for determining resideues of mono and dibasic penicillins in bovine muscle tissues”, Journal of AOAC International,81(6), 1113-1120 34 J.O.Boison, and Keng, L.J.Y (1998), “ Improvement in the Multiresidue liquid chromatographic analysis of residues of mono and dibasic penicillins in bovine muscle tissues”, Journal of AOAC International,81(6), 1267-1272 35 Kazuoiwaki, Norio Okumuru and Mitsuru Yamazaki and noriyuki Nimura and Toshio Kinoshita (1990), “Precolumn derivatization technique for highperformance liquid chromatographic determination of penicillins with fluorescence detection”, Journal of Chromatography, 504(1), 359-367 36 Kimai and Y Watanabe (1981), “Fluorimetric determination of secondary amino acids by 7-Chloro-4-nitrobenzyl-2-oxa-1,3-diazole”, Analytica chimica Acta, 130, 377-383 37 L.Nozal,L.Arce1,A.R´ıos2,M.Valcárcel(2004),"Development of ascreening method for analytical control of antibiotic residues by micellar electrokinetic capillary chromatography", Journal of AnalyticaChimicaActa, 523(2004), 21–28 38 M.I Bailon-Perez, A.M.Garcia-Campana, C Cruces-Blanco, M del Olmo Iruela (2008), "Trace determination of β-lactam antibiotics in environmental aqueous samples using off-line and on-line preconcentration in capillary Chun ngành Hố Phân tích 82 Luận văn Thạc sĩ Trần Thị Dung electrophoresis", Journal of Chromatography A, 185(2), pp 273-280 39 Michael R Jacobs (2003), “The Alexander Project 1998-2000: susceptibility of pathogens isolated from community-acquired respitatory tract infection to commonly used antimicrobial agenta”, Journal of antimicrobial Chemotherap, 52, 229-246 40 Masaaki Kai, Hiromi Kinoshita, Mikio Morizono(2003), “Chromatographic determinations of a β-lactam antibiotic, cefaclor by means of fluorescence, chemiluminescence and massspectrometry”, Journal of Mass Spectrometry, 39(3), 329 – 340 41 Merk (1996), The Merck Index, 12th edition 42 Nigel J.K Simpson (2000), Solid-phase extraction, Marcel Dekker, New York 43 Osama Al-Dirbasi, Naotaka Kuroda, Kenichiro Nakashimab (1998), “ Characterzation of the Fluorescence properties of - fluoro-7-nitro benzo-2oxa-1,3-diazole”, Analytica Chimica Acta, 365, 169-176 44 Pradyot Patnaik (1989), Dean’s Analytical Chemistry Handbook, McGrawHill Companies, New york 45 R Gonzales (2001), "linical infectious diseases", University of Chicago Press, 23, 757-762 46 Richard P Wenzel, M.D Michael B Edmond, M.D, M.P.H (2000), " Managing Antibiotic Resistance", New England Journal of Medicine, 343, 1961-1963 47 Rolando Gonzalez-Henandez, Nuevas-Pez Lauro, Soto-Mulet Laritza, LopezLopez Miguel, Hoogmartens Joseph (2001), “ Reversed phase high performance liquid chromatographic determination of cefixime in bulk drugs”, Journal of liquid Chromatography and related technologies, 24(15), 2315-2324 Chuyên ngành Hoá Phân tích 83 Luận văn Thạc sĩ 48 Trần Thị Dung Toshimasa Toyoka, Yoshihico Watanabe and Kzuhiro Imai (1983), “Reaction of biological important with 7-Chloro-4-nitrobenzo-2-oxa-1,3diazole”, Analytica Chimica Acta, 149, 305-312 49 Wei Liu, Zhujun Zhang, Zuoqin Liu(2007), "Determination of -lactam antibiotics in milk using micro-flow chemiluminescence system with on-line solid phase extraction", Analytica Chimica Acta, 592(2), 187–192 50 WJ Blanchflower, Hewitt SA, Kennedy DG (1994), "Confirmatory assay for the simultaneous detection of five penicillins in muscle, kidney and milk using liquid chromatography - electrospray mass spectrometry", Analyst, 119(12), 2595-2601 Chuyên ngành Hố Phân tích 84 Luận văn Thạc sĩ Trần Thị Dung PHỤ LỤC Sắc đồ sắc ký chất chuẩn kháng sinh β – Lactam với NBD-F mV Detector A:Ex:470nm,Em:530nm mV Detector A:Ex:470nm,Em:530nm % 600 % 200 A.Press.(Status) A.Press.(Status) 90 90 550 175 80 80 500 150 450 70 70 400 125 60 60 350 100 50 40 75 40 30 50 20 25 50 300 250 200 30 150 20 100 10 50 10 0 0.0 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 (b) CEF (a) CEP mV 550 Detector A:Ex:470nm,Em:530nm % A.Press.(Status) 500 90 450 80 400 70 350 60 300 50 250 200 40 150 30 100 20 50 10 0 0.0 2.5 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 (c) AMP Chun ngành Hố Phân tích 85 5.0 7.5 10.0 12.5 Luận văn Thạc sĩ Trần Thị Dung Sắc đồ sắc ký β- lactam với NBD-F mẫu thuốc mV Detector A:Ex:470nm,Em:530nm % A.Press.(Status) 30 mV Detector A:Ex:470nm,Em:530nm 90 % A.Press.(Status) 120 90 80 25 110 80 100 70 20 90 70 60 80 60 15 70 50 50 60 10 40 50 40 40 30 30 30 20 20 20 10 10 10 -5 0.0 2.5 5.0 7.5 0.0 (a) CEP (b) CEF mV 550 Detector A:Ex:470nm,Em:530nm % A.Press.(Status) 500 90 450 80 400 70 350 60 300 50 250 200 40 150 30 100 20 50 10 0 0.0 2.5 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 (c) AMP Chun ngành Hố Phân tích 86 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 Luận văn Thạc sĩ Trần Thị Dung Sắc đồ sắc ký chất với NBD-F mẫu nước tiểu mV Detector A:Ex:470nm,Em:530nm % 90 mV 17.5 Detector A:Ex:470nm,Em:530nm A.Press.(Status) % A.Press.(Status) 90 90 80 15.0 80 80 70 12.5 70 70 60 60 10.0 60 50 50 50 7.5 40 40 40 30 5.0 30 30 20 2.5 20 20 10 10 0.0 10 0 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 (b) Mẫu nước tiể u sau uố ng thuố c (a) Mẫu nước tiểu Blank CEP mV Detector A:Ex:470nm,Em:530nm % A.Press.(Status) mV Detector A:Ex:470nm,Em:530nm % 400 A.Press.(Status) 20.0 90 17.5 80 15.0 70 90 350 80 300 70 60 12.5 250 60 50 10.0 200 50 150 40 7.5 30 5.0 40 30 100 20 20 2.5 50 10 10 0.0 0 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 0.0 (c) Mẫu nước tiể u sau uố ng CEF Chun ngành Hố Phân tích 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 (d) Mẫu nước tiể u sau uố ng AMP 87 Luận văn Thạc sĩ Trần Thị Dung Sắc đồ sắc ký AMP với NBD-F mẫu máu mV Detector A:Ex:470nm,Em:530nm % mV Detector A:Ex:470nm,Em:530nm % A.Press.(Status) A.Press.(Status) 40 15.0 90 35 90 80 80 12.5 30 70 25 60 70 10.0 50 20 60 50 7.5 40 40 15 5.0 30 30 10 20 20 2.5 10 10 0.0 0 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0min 0.0 (a) Mẫu máu Blank 2.5 5.0 7.5 10.0 (b) Mẫu máu sau uố ng thuố c AMP Độ lặp lại 50000 45000 40000 35000 30000 25000 20000 15000 10000 5000 0.0 2.5 5.0 Chun ngành Hố Phân tích 7.5 10.0 88 12.5 15.0 Luận văn Thạc sĩ Trần Thị Dung Đồ thị chất chuẩn kháng sinh với NBD-F qua điểm 800000 800000 700000 700000 600000 600000 500000 S (mAu.s) S(mAu.s) 500000 400000 Y= B*X Thongso gia tri sai so -B 362925,16737 1432,61607 -R SD N 0,99998 3298,90765 300000 200000 100000 0,0 0,5 1,0 1,5 400000 Y= B*X Thongso gia tri sai so -B 388856,33192 2199,89118 -R SD N 0,99999 5065,72415 300000 200000 100000 0,0 2,0 C(ppm) (b) CEF 1000000 S(mAu.s) 800000 600000 Y= B*X Thongso gia tri sai so -B 467966,86469 2784,45768 -R SD N 0,99999 6411,81466 200000 0,0 0,5 1,0 1,0 C(ppm) (a) CEP 400000 0,5 1,5 2,0 C(ppm) (c) AMP Chuyên ngành Hoá Phân tích 89 1,5 2,0 ... khả ? ?p dụng phương ph? ?p - Phân tích mẫu dược phẩm (mẫu thuốc) - Phân tích mẫu sinh học (mẫu nước tiểu mẫu máu) - So sánh với số phương ph? ?p khác 2.2 Phƣơng ph? ?p nghiên cứu – Phƣơng ph? ?p RP-HPLC... nhiều sinh mạng 1.2 Các phƣơng ph? ?p phân tích định lƣợng β -lactam 1.2.1 Phương ph? ?p quang học Phương ph? ?p đo quang phương ph? ?p phân tích dựa tính chất quang học chất cần phân tích tính h? ?p thụ... điểm ngày ? ?p dụng nhiều phịng thí nghiệm phân tích mẫu dịch vụ Trên sở đó, chúng tơi chọn đề tài là: ? ?Nghiên cứu điều kiện phân tích thuốc kháng sinh họ β - Lactam mẫu sinh học dƣợc phẩm ” Chun