Mục tiêu nghiên cứu là khảo sát khả năng sinh tổng hợp enzyme protease cũng như các yếu tố cơ bản ảnh hưởng đến chúng từ các chủng Bacillus phân lập trên ba loại nước thải giàu đạm khác nhau được lấy từ các nhà máy chế biến thịt và thủy hải sản.
Tạp chí Khoa học ĐHQGHN, Khoa học Tự nhiên Cơng nghệ 28 (2012) 116-124 Hoạt tính protease số chủng Bacillus phân lập từ nước thải chế biến thịt thủy hải sản Võ Hồng Thi1,*, Nguyễn Hoàng Mỹ2, Nguyễn Phạm Huyền1 Khoa Môi trường Công nghệ sinh học, Đại học Kỹ thuật Công nghệ TpHCM (HUTECH) Viện Khoa học Công nghệ Quản lý Môi trường, Đại học Công nghiệp TpHCM Nhận ngày 23 tháng năm 2012 Tóm tắt Sự phát triển công nghiệp chế biến thịt thủy hải sản Việt Nam thời gian qua phát sinh nhiều vấn đề ô nhiễm nước hợp chất hữu giàu Nitơ việc xử lý hợp chất dạng phương pháp sinh học phù hợp Mục tiêu nghiên cứu khảo sát khả sinh tổng hợp enzyme protease yếu tố ảnh hưởng đến chúng từ chủng Bacillus phân lập ba loại nước thải giàu đạm khác lấy từ nhà máy chế biến thịt thủy hải sản Từ 30 chủng phân lập, với kết đặc điểm hình thái, sinh lý sinh hóa chuyên biệt thu nhận kết hợp với khóa phân loại Bergey, lựa chọn 10 chủng Bacillus có khả phân giải protein tốt Kết khảo sát cho thấy sau thời gian 72 nuôi cấy điều kiện pH 50oC, hoạt tính protease 10 chủng đạt cực đại dao động khoảng từ đến 1,15 U/ml Đó sở để tiếp tục triển khai nghiên cứu ứng dụng khả xử lý nước thải chế biến thịt thủy hải sản thực tế với tổ hợp Bacillus tuyển chọn Từ khóa: Bacillus, hoạt tính protease, khóa phân loại Bergey Mở đầu∗ lượng nước thải phát sinh không xử lý xử lý phần với hiệu thấp trước đổ sông ngòi, ao hồ, gây nhiễm bẩn nghiêm trọng lâu dài nguồn nước môi trường xung quanh [4, 5] Một điểm đặc trưng nước thải chế biến thịt thủy hải sản diện với hàm lượng lớn chất hữu cao phân tử protein, amino acid, lipid số chất khác [6] Các chất hữu cao phân tử chậm phân hủy nên tác nhân khiến nguồn nước bị ô nhiễm nặng nề [7, 8] Trong nước thải nhà máy chế biến khác nhau, tải lượng nồng độ chúng khác biệt, phụ Trong số loại hình cơng nghiệp chế biến thực phẩm Việt Nam, ngành chế biến thịt gia súc gia cầm thủy hải sản phát triển đa dạng phong phú, song quy mơ sản xuất phân tán theo hình thức hộ gia đình hay liên hộ gia đình với cơng nghệ chế biến thủ công thiết bị tự tạo chiếm tỉ lệ tới 70-74% [1-3] Do đó, việc thu gom xử lý nước thải sở chế biến chưa quan tâm phần lớn _ ∗ Tác giả liên hệ ĐT: 84-8-35120788 E-mail: vohongthi@yahoo.com 116 V.H Thi nnk / Tạp chí Khoahọc ĐHQGHN, Khoahọc Tự nhiên Công nghệ 28 (2012) 116-124 117 thuộc vào loại nguyên liệu chế biến, chất phụ gia sử dụng, loại sản phẩm sản xuất… phần chất hữu chủ yếu protein [9], có lẽ protein thường chiếm từ 15-25% trọng lượng tươi loại cá thịt gia súc [8, 10] Do vậy, để giảm thiểu ô nhiễm, bên cạnh phương pháp xử lý hóa học, hóa lý, học xử lý sinh học đặc biệt quan tâm đem lại hiệu cao đặc trưng ô nhiễm nồng độ lớn protein phân hủy sinh học nước thải chế biến thịt thủy hải sản nước thải, làm sở cho ứng dụng vào việc xử lý loại nước thải giàu đạm Với mục tiêu đó, nghiên cứu trước hết tập trung vào khả sinh tổng hợp enzyme protease yếu tố ảnh hưởng đến chúng chủng Bacillus phân lập từ ba loại nước thải giàu đạm khác Trong trình xử lý nước thải phương pháp sinh học, phân giải protein mở đầu giai đoạn thủy phân nhiều nghiên cứu chứng minh giai đoạn quan trọng, định tốc độ hiệu xử lý [11, 12] Ở giai đoạn này, số nhóm vi khuẩn có khả sinh tổng hợp enzyme ngoại bào phân giải hợp chất protein không tan thành đơn phân tử (các monomer oligomer) dễ tan dễ hấp thụ đóng vai trị then chốt Trong số vi sinh vật có khả sinh enzyme ngoại bào cao, vi khuẩn thuộc chi Bacillus biết đến nhiều chúng sử dụng đa dạng nguồn chất để tăng sinh khối phát triển, Bacillus ứng dụng nhiều lĩnh vực khác đời sống nói chung cơng tác xử lý nước thải nói riêng Việt Nam nước ni thủy sản [13], nước sông, hồ bị ô nhiễm chất thải sinh hoạt [14-16] Nhờ có hoạt tính enzyme ngoại bào cao, lồi thơng dụng khác Bacillus B subtilis, B licheniformis, B megaterium…, bổ sung vào loại nước thải nói trên, chứng tỏ hiệu lực phân hủy chất hữu cao hẳn so với chủng tự nhiên sẵn có nước thải [13-16] 2.1 Đối tượng nghiên cứu Từ sở đây, nghiên cứu thực với mục tiêu tuyển chọn số chủng Bacillus có hoạt lực phân giải protein cao Đối tượng, nguyên liệu phương pháp nghiên cứu 2.1.1 Nước thải - Nước thải chế biến thủy sản nhà máy thủy sản số 4, đường Hưng Phú, quận 8, Tp HCM - Nước thải sản xuất công ty cổ phần hải sản Sài Gòn Fisco, KCN Vĩnh Lộc, quận Bình Tân, Tp HCM - Nước thải chế biến thịt công ty cổ phần kỹ nghệ Vissan, đường Nơ Trang Long, quận Bình Thạnh, Tp HCM Cả ba loại nước thải lấy bể tiếp nhận nước thải sản xuất ba nhà máy Nước thải lưu giữ khoảng ngày trước đưa vào trạm xử lý thải môi trường 2.1.2 Vi khuẩn Bacillus Các chủng Bacillus sau phân lập từ nước thải thử nghiệm hoạt tính protease đối tượng thử nghiệm 2.2 Nguyên liệu nghiên cứu - Môi trường phân lập vi khuẩn (môi trường NA): peptone 1g/100ml, cao thịt 0,3g/100ml, NaCl 0,5g/100ml agar 20g/1000ml 118 V.H Thi nnk / Tạp chí Khoahọc ĐHQGHN, Khoahọc Tự nhiên Cơng nghệ 28 (2012) 116-124 - Mơi trường định tính khả sinh NH3 trình phân giải protein (môi trường NB): peptone 1g/100ml, cao thịt 0,3g/100ml, NaCl 0,5g/100ml - Môi trường thử nghiệm khả phân giải gelatine (môi trường NG): gelatine 5g/100ml, peptone 0,5g/100ml - Các môi trường khác phục vụ thử nghiệm sinh hóa - Các hóa chất xác định hoạt tính protease 2.3 Phương pháp nghiên cứu 2.3.1 Phương pháp phân lập chủng Bacillus có khả phân hủy protein xác định đặc điểm hình thái, sinh hóa Mẫu nước thải sở chế biến thủy sản nêu gia nhiệt 80oC khoảng 20 phút, pha lỗng cấy trang mơi trường NA, ủ 37±1oC 24 giờ, cấy ria khuẩn lạc thu đến Các chủng vi khuẩn phân lập xác định hình thái phương pháp nhuộm Gram nhuộm bào tử Đặc điểm sinh hóa chủng xác định thông qua thử nghiệm khả di động, catalase, nitrate, Indol, Methyl red, VP, citrate, nitrate Từ kết thu nhận trên, so sánh với mơ tả khóa phân loại Bergey [17] để bước đầu dự đoán chủng vi khuẩn thuộc chi Bacillus 2.3.2 Phương pháp xác định khả phân giải protein chủng Bacillus phân lập - Trên môi trường NB với thuốc thử Nessler: màu sắc dung dịch thu biến thiên màu từ vàng rơm đến vàng nâu sậm, phụ thuộc hàm lượng NH3 sinh - Xác định hoạt tính protease phương pháp đục lỗ thạch môi trường NA Các chủng có khả phân giải protein mạnh cho đường kính vịng phân giải lớn xung quanh giếng thạch - Thử nghiệm gelatin: chủng có khả phân giải gelatine làm tan chảy môi trường NG ống thạch phần gelatine phân hủy không đông dù nhiệt độ thấp (4oC) 2.3.3 Phương pháp xác định hoạt tính enzyme protease ảnh hưởng yếu tố - Phương pháp Anson cải tiến xác định hoạt tính protease: hoạt lực phân giải casein dịch nuôi cấy chủng Bacillus phân lập chọn lọc 37±1oC 60 phút đánh giá thông qua độ hấp thụ quang 660nm sản phẩm phân giải với thuốc thử Folin Đơn vị hoạt tính enzyme xác định lượng enzyme cần để chuyển hóa lượng casein tương đương 1µmol tyrosine điều kiện thí nghiệm - Khảo sát ảnh hưởng thời gian ni cấy đến hoạt tính protease: lấy 1ml dịch chiết enzyme thô (sau ly tâm) từ dịch nuôi cấy sau khoảng thời gian khác (24 giờ, 48 giờ, 72 giờ, 96 giờ) 37±1oC để xác định hoạt tính phương pháp Anson cải tiến - Khảo sát ảnh hưởng pH ban đầu đến hoạt tính protease: lấy 1ml dịch chiết enzyme thô sau khoảng thời gian nuôi cấy phù hợp xác định 37±1oC mơi trường NB trước điều chỉnh pH giá trị 3, 5, 7, NaOH 1M HCl 1M để xác định hoạt tính phương pháp Anson cải tiến - Khảo sát ảnh hưởng nhiệt độ đến hoạt tính protease: tiến hành nuôi cấy chủng vi sinh vật với khoảng thời gian pH tối ưu xác định điều kiện nhiệt độ 30±1oC, 37±1oC, 40±1oC, 50±1oC, 119 V.H Thi nnk / Tạp chí Khoahọc ĐHQGHN, Khoahọc Tự nhiên Cơng nghệ 28 (2012) 116-124 60±1oC thiết bị điều nhiệt Sau đó, ly trích thu enzyme xác định hoạt tính phương pháp Anson cải tiến Tiếp theo, việc lựa chọn chủng Bacillus phạm vi đề tài dựa hai yếu tố: Ở tất khảo sát triên, thí nghiệm lặp lại lần để tính kết trung bình, sau loại bỏ sai số thô tử Kết thảo luận Từ đó, số 30 chủng phân lập, lựa chọn 10 chủng, có chủng có nguồn gốc từ nước thải chế biến thủy sản, ký hiệu M1, M2, M3, M4, M5, M6, M7 chủng có nguồn gốc từ nước thải chế biến thịt, ký hiệu V1, V2 V3 Hình thái khả phân giải protein số chủng phân lập số 10 chủng lựa chọn thể hình 3.1 Kết phân lập lựa chọn chủng Bacillus có khả phân hủy protein tốt Từ mẫu nước thải nhà máy thủy sản, phân lập 30 chủng vi khuẩn có khả phát triển môi trường NA chứa protein nguồn carbon - trực khuẩn Gram dương, sinh bào - khả phân giải protein tốt, nhằm đảm bảo hiệu ứng dụng chủng vào xử lý nước thải giàu đạm thực tế Hình Kết nhuộm Gram chủng M1, M2, M3, V1, V2 (từ trái qua phải) M1 M2 M4 M5 Hình Khả sinh NH3 (ảnh trái) 10 chủng Bacillus hoạt tính phân giải protein (ảnh phải) số 10 chủng Bacillus M3 M6 120 V.H Thi nnk / Tạp chí Khoahọc ĐHQGHN, Khoahọc Tự nhiên Công nghệ 28 (2012) 116-124 Kết thử nghiệm sinh hóa 10 chủng trình bày bảng Bảng Kết thử nghiệm sinh hóa 10 chủng vi khuẩn lựa chọn Thử nghiệm Các chủng vi khuẩn M1 M2 M3 M4 M5 M6 M7 V1 V2 V3 Di động + + + + + + + + + + Catalase + + + + + + + + + + VP - - - - + + + + + + Indol - - - - - - - - - - Urease - - - - - - - - - - S citrate + - - + + - + + - + Nitrate + + + + - - + + + + Tinh bột - - + + - - + + + + Manitol - - - + - - - + + + NaCl 7% - - - - - + + - - + Như vậy, từ kết thu hình thái, khả phân giải protein đặc điểm sinh hóa 10 chủng trên, so với khóa phân loại vi sinh vật Bergey [17], khẳng định lần chủng lựa chọn thuộc chi Bacillus So sánh với cơng trình Hà Thanh Toàn đồng tác giả [18] phân lập 17 Chủng M2 Chủng M3 Chủng M4 Chủng M5 0.9 Hoạt tính protease (U/ml) Chủng M1 0.9 0.9 0.85 0.82 0.84 0.8 0.8 0.82 0.79 0.76 0.7 0.82 0.78 0.7 0.67 0.6 0.76 0.7 0.73 0.69 0.77 0.67 0.65 0.62 0.5 24 Hoạt tính protease (U/ml) chủng vi khuẩn phân giải protein từ nước rỉ rác Cần Thơ; cơng trình Trần Liên Hà Đặng Ngọc Sâm [14] chọn lọc chủng Bacillus có hoạt tính protease tốt từ 50 chủng ban đầu để ứng dụng xử lý nước hồ ô nhiễm số lượng chủng Bacillus phân lập nghiên cứu đa dạng Chủng M6 Chủng M7 Chủng V1 Chủng V2 0.87 0.85 Chủng V3 0.8 0.8 0.77 0.75 0.7 0.67 0.6 0.76 0.79 0.83 0.79 0.69 0.78 0.75 0.67 0.75 0.74 0.73 0.7 0.65 0.62 0.5 48 72 96 Thời gian nuôi cấy (giờ) Hình Hoạt tính phân giải protein theo thời gian chủng M1, M2, M3, M4, M5 24 48 72 96 Thời gian ni cấy (giờ) Hình Hoạt tính phân giải protein theo thời gian chủng M6, M7, V1, V2, V3 V.H Thi nnk / Tạp chí Khoahọc ĐHQGHN, Khoahọc Tự nhiên Công nghệ 28 (2012) 116-124 3.2 Kết khảo sát hoạt tính phân giải protein 10 chủng Bacillus lựa chọn theo thời gian nuôi cấy Sau 72 giờ, hoạt tính phân giải protein tất 10 chủng giảm dần Hiện tượng quan sát thấy khảo sát tương tự Bacillus nhóm vi khuẩn khác [19, 21, 22] Theo tác giả trên, cuối pha sinh tổng hợp, tế bào bắt đầu tự phân tốc độ tích lũy enzyme bị chậm lại 3.3 Kết khảo sát ảnh hưởng pH ban đầu đến hoạt độ protease 10 chủng Các vi sinh vật nói chung nhạy cảm với thay đổi nồng độ ion H+ môi trường Theo Nguyễn Đức Lượng Nguyễn Thị Thùy Dương [6], nồng độ H+ (hay pH) làm thay đổi trạng thái ion hóa nhóm chức trung tâm hoạt động enzyme, làm thay đổi khả phản ứng nhóm phản ứng xúc tác phân giải chất Ngoài ra, pH yếu tố ảnh hưởng đến mức độ ion hóa chất, cụ thể pH tối thích, phân tử chất ion hóa tới trạng thái thích hợp cho kết hợp với enzyme Kết khảo sát hoạt tính protease 10 chủng mức pH 3, 5, 7, thể hình Hoạt tính protease (U/ml) 0.9 Chủng M1 Chủng M2 Chủng M4 Chủng M5 Chủng M3 0.8 0.7 0.6 0.5 pH pH pH pH Hình Sự thay đổi hoạt tính protease theo pH môi trường chủng M1, M2, M3, M4, M5 0.9 Hoạt tính protease (U/ml) Các hình cho thấy 10 chủng Bacillus lựa chọn có hoạt tính phân giải protein rõ ràng đạt cao thời gian nuôi cấy 72 Trong chủng M5 có hoạt độ phân giải mạnh (0,9 U/ml) cịn chủng M3 chủng có hoạt độ yếu (0,7 U/ml) Đây khoảng thời gian ni cấy thường tìm thấy số nghiên cứu tương tự cho hoạt tính protease sinh thành từ Bacillus đạt cực đại [19, 20] 121 Chủng M6 Chủng M7 Chủng V2 Chủng V3 Chủng V1 0.8 0.7 0.6 0.5 pH pH pH pH Hình Sự thay đổi hoạt tính protease theo pH môi trường chủng M6, M7, V1, V2, V3 Cả 10 chủng Bacillus lựa chọn biểu hoạt tính phân giải protein mạnh pH Ở giá trị pH này, hoạt độ protease mạnh chủng M5 (0,87 U/ml) yếu chủng M1 (0,68 U/ml) Đây ưu điểm ứng dụng chủng làm chế phẩm thúc đẩy trình phân hủy nhanh protein công tác xử lý nước thải chế biến thủy sản, thịt gia súc gia cầm pH loại nước thải thực tế thường dao động xung quanh khoảng 6,5 – 7,5 122 V.H Thi nnk / Tạp chí Khoahọc ĐHQGHN, Khoahọc Tự nhiên Công nghệ 28 (2012) 116-124 3.4 Kết khảo sát ảnh hưởng nhiệt độ đến hoạt độ protease 10 chủng cho thấy nhiệt độ tối thích với hoạt tính enzyme 10 chủng đạt mức cao 50oC Kết vừa đồng lại vừa khác biệt với thử nghiệm tương tự trước loài khác chủng Bacillus [20, 24-26] Đó nhiệt độ tối thích enzyme khơng phải số mà phụ thuộc vào nhiều yếu tố loại nồng độ chất, pH mơi trường, có mặt ion vô …[6] Nhiệt độ yếu tố quan trọng ảnh hưởng đến hoạt động enzyme Nhiệt độ tăng, hoạt lực enzyme tăng theo song đến mức nhiệt độ giới hạn hoạt lực enzyme lại giảm xuống [23] Điều minh chứng rõ ràng đồ thị hình 7, 1.2 Hoạt tính protease (U/ml) 1.1 Chủng M1 Chủng M2 Chủng M3 Chủng M4 Chủng M5 Chủng M6 Chủng M7 Chủng V1 Chủng V2 Chủng V3 0.9 0.8 0.7 0.6 0.5 30 37 40 50 60 Nhiệt độ (độ C) Hình Sự thay đổi hoạt tính protease theo nhiệt độ 10 chủng chọn lọc Kết luận Từ nước thải sản xuất giàu đạm vài nhà máy chế biến thịt thủy hải sản, lựa chọn 10 chủng Bacillus có khả phân giải protein tốt từ 30 chủng phân lập, bao gồm chủng có nguồn gốc từ nước thải chế biến thủy sản chủng có nguồn gốc từ nước thải chế biến thịt Kết khảo sát hoạt tính phân giải protein 10 chủng cho thấy hoạt tính protease đạt cực đại sau 72 ni cấy pH 50oC Những kết ban đầu coi sở để triển khai nghiên cứu ứng dụng khả xử lý nước thải chế biến thịt thủy hải sản thực tế với mức độ nước thải ô nhiễm khác tổ hợp Bacillus tuyển chọn Tài liệu tham khảo [1] [2] J Hambrey, C Carleton, Seafood potential markets and research strategy, Vietnam Institute of Fishery Economic and Planning (2005) N T Phuong, Overview about aquaculture in Vietnam, Working paper, Ministry of Fisheries, 2005 V.H Thi nnk / Tạp chí Khoahọc ĐHQGHN, Khoahọc Tự nhiên Cơng nghệ 28 (2012) 116-124 [3] [4] [5] [6] [7] [8] [9] [10] [11] [12] [13] [14] [15] Pham Hong Nhat, Environmental performance improvement for small and medium-sized slaughterhouses in Vietnam, Environment, Development and Sustainability (2006) 251 N Mai, Export of Vietnamese agricultural and seafood products to the European Union: identify barriers in terms of environmental standards, Political Publisher, Hanoi, 2004 Nguyễn Thế Chinh, Vấn đề ô nhiễm môi trường với phát triển cụm công nghiệp làng nghề, Tạp chí quản lý kinh tế (2006) 52 Nguyễn Đức Lượng, Nguyễn Thị Thùy Dương, Công nghệ sinh học môi trường – tập 1: công nghệ xử lý nước thải, NXB Đại học quốc gia Tp Hồ Chí Minh, 2003 P Chowdhury, T Viraraghavan, A Srinivasan, Biological treatment processes for fish processing wastewater – A review, Bioresource Technology 101 (2010) 439 M R Johns, Developments in wastewater treatment in the meat processing industry: A review, Bioresource Technology 54 (1995) 203 J F Gonzalez, Wastewater treatment in the Fishery Industry, FAO Fisheries Technical Paper, No 355/FAO, Rome, Fisheries Dept., 1996 Z Sikorski, Seafood Resource: Nutrient Composition and Preservation CRC Press Inc., Boca Raton, 1990 B Frolund, T Griebet, P H Nielsen, Enzymatic activity in the activated sludge flox matrix, Appl Miocrobiol Biotechnol 43(1995) 755 J E Burgess, B I Pletschke, Hydrolytic enzymes in sewage sludge treatment: A minireview, Water SA 34 (2008) 343 Võ Thị Thứ, Trương Ba Hùng, Nguyễn Minh Dương, La Thị Nga, Lê Thị Thu Hiền, Phạm Thị Minh Hà, Lê Doanh Toại, Nguyễn Trường Sơn, Đào Thị Thanh Xuân, Nghiên cứu sử dụng Bacillus subtilus, Bacillus megaterium, Bacillus licheniformis Lactobacillus acidophilus để sản xuất chế phẩm sinh học Biochie xử lý nước nuôi thuỷ sản Tuyển tập hội thảo toàn quốc nghiên cứu ứng dụng khoa học công nghệ nuôi trồng thuỷ sản, 2005, trang 815 Trần Liên Hà, Đặng Ngọc Sâm, Phân lập tuyển chọn Bacillus để xử lí nước hồ bị ô nhiễm, Hội nghị Khoa học lần thứ 20 - Kỷ niệm 50 năm thành lập trường Đại học Bách khoa Hà Nội, 2006, trang 55 Trần Liên Hà, Nagano Hiroko, Khả sử dụng Bacillus subtilis CN2 xử lý nước hồ bị ô nhiễm, Hội nghị Khoa học lần thứ 20 - Kỷ [16] [17] [18] [19] [20] [21] [22] [23] [24] [25] [26] 123 niệm 50 năm thành lập trường Đại học Bách khoa Hà Nội, 2006, trang 34 Ngô Tự Thành, Bùi Thị Việt Hà, Vũ Minh Đức, Chu Văn Mẫn, Nghiên cứu hoạt tính enzyme ngoại bào số chủng Bacillus phân lập khả ứng dụng chúng xử lý nước thải, Tạp chí Khoa học Đại học quốc gia Hà Nội, Khoa học Tự nhiên Công nghệ 25 (2009) 101 R E Buchanon, N E Gibbons, Bergey’s Manual of Determinative Bacteriology, 8th Ed, The Williams and Wilkins company, Baltimore, 1989 Hà Thanh Toàn, Mai Thu Thảo, Nguyễn Thu Phướng, Trần Lê Kim Ngân, Bùi Thế Vinh Cao Ngọc Diệp, Phân lập vi khuẩn phân giải cellulose, tinh bột protein nước rỉ từ bãi rác thành phố Cần Thơ, Tạp chí Khoa học Đại học Cần Thơ 10 (2008) 195 S Sharmin, M T Hossain, M N Anwar, Isolation and characterization of a protease producing bacteria Bacillus amovivorus and optimization of some factors of culture conditions for protease production, Journal of Biological Sciences (2005) 358 W Shumi , M T Hossain, M N Anwar, Proteolytic activity of a bacterial isolate Bacillus fastidiosus den Dooren de Jong, Journal of Biological Sciences (2004) 370 Nguyễn Xuân Tấn Thắng, Nguyễn Trọng Lạng, Nghiên cứu yếu tố ảnh hưởng tới khả phân giải cellulose số chủng vi sinh vật phân lập tỉnh Thái Ngun, Tạp chí Nơng nghiệp phát triển nơng thôn 22 (2006) 92 Nguyễn Lân Dũng, Xử lý phế thải nhà máy chế biến hoa làm thức ăn chăn ni, Báo cáo Khoa học chương trình KC 04.02, Đại học Quốc gia Hà Nội, 2004 Nguyễn Thành Đạt, Cơ sở sinh học vi sinh vật – tập 1, NXB Đại học Sư phạm, Hà Nội, 2005 N Sinha, T Satyanarayana, Optimization of alkaline protease production by thermophilic Bacillus licheniformis S-40, Ind J Microbiol 33 (1991) 43 U Boominadhan, R Rajakumar, P K V Sivakumaar, M M Joe, Optimization of protease enzyme production using Bacillus sp isolated from different wastes, Botany Research International (2009) 83 B H Joshi, Purification and characterization of a novel protease from Bacillus firmus Tap isolated from tannery industry, J Appl Sci Res (2010) 1068 124 V.H Thi nnk / Tạp chí Khoahọc ĐHQGHN, Khoahọc Tự nhiên Cơng nghệ 28 (2012) 116-124 Study of protease activity of several Bacillus strains isolated from slaughterhouse and seafood processing wastewater Vo Hong Thi1, Nguyen Hoang My2, Nguyen Pham Huyen1 Department of Environment and Biotechnology, HCMC University of Technology (HUTECH) Institute for Environmental Science, Engineering and Management, HCMC University of Industry The development of meat and seafood processing Industries in Vietnam in recent years has arisen water pollution problems from nitrogen-rich organic matters, and then it is appropriate to treat/remove them with the addition of bioaugmentors Studying protease production capability and optimizing the key conditions for maximum activity of extracellular protease of Bacillus strains isolated from three different kinds of protein-rich wastewater discharged from slaughterhouse and seafood processing plants are objectives of this research From 30 strains isolated, base on charateristic of the morphology, physiology and the Bergey’s manual, the 10 most efficient proteolytic Bacillus strains were selected Besides, studying results showed that after 72-hour cultivation at pH and 50oC condition, protease activities of all 10 Bacillus strains gained maximum, which were in the range of and 1,15 U/ml Results of this study have set up further application of selected Bacillus strains for removal of Nitrogen-pollutants in meat and seafood processing wastewaters Keywords: Bacillus, protease activity, Bergey’s manual ... 30 chủng phân lập, bao gồm chủng có nguồn gốc từ nước thải chế biến thủy sản chủng có nguồn gốc từ nước thải chế biến thịt Kết khảo sát hoạt tính phân giải protein 10 chủng cho thấy hoạt tính protease. .. sai số thô tử Kết thảo luận Từ đó, số 30 chủng phân lập, lựa chọn 10 chủng, có chủng có nguồn gốc từ nước thải chế biến thủy sản, ký hiệu M1, M2, M3, M4, M5, M6, M7 chủng có nguồn gốc từ nước thải. .. đổi hoạt tính protease theo nhiệt độ 10 chủng chọn lọc Kết luận Từ nước thải sản xuất giàu đạm vài nhà máy chế biến thịt thủy hải sản, lựa chọn 10 chủng Bacillus có khả phân giải protein tốt từ