Nghiên cứu quy trình nhân giống in vitro cây chuối Xiêm Lùn (Musa sp.)

Nghiên cứu xây dựng quy trình nhân giống cây chuối Xiêm Lùn bằngphương pháp nuôi cấy mô.1.1. Giới Thiệu Chung Về Cây Chuối:1.1.1. Giới Thiệu Cây Chuối:Cây chuối có tên khoa học là (Musa sp.), thuộc họ Musaceae. Thân chínhnằm dưới đất là loại cây thân ngầm hay còn gọi là củ, t thân ngầm đẻ ra nhánhgọi là chồi (con chuối). Các bẹ lá được cấu tạo thành hình trôn ốc quyện chặt vớinhau, tạo thành thân giả. Hoa chuối xuất hiện trên thân giả giữa bẹ và cuống lá,mỗi thân giả chỉ mang một hoa (buồng), vòng đời cây chuối kết thúc khi ta thuhoạch buồng 4.1.1.2. Giá trị của cây chuối: Giá trị y họcTheo Đông Y, chuối có vị ngọt, tính bình, thuận phế, lợi tràng. Củ chuốicó vị ngọt, tính hàn, có tác dụng thanh nhiệt giải độc. Theo phân tích của khoahọc, chuối chính bao gồm nhiều chất bột, chất đạm, chất xơ và khoáng chất. Đặcbiệt chuối có thể điều hòa hoạt động của hệ thần kinh và làm giảm nguy cơnhững bệnh về tim mạch do có hàm lượng potassium rất cao và cả 10 loại acidamin thiết yếu của cơ thể. Theo Viện Nghiên cứu và Phát triển Nông NghiệpMalaysia (MARDI), chuối là loại trái cây duy nhất hội tụ đủ thành phần chấtdinh dưỡng cần thiết cho cơ thể. Nên ăn hai trái chuối mỗi ngày sẽ giúp cho cơthể ngăn ng a các bệnh như: bệnh lo t dạ dày và tá tràng, chữa bệnh táo bón vàngăn ng a ung thu ruột già, bệnh thiếu máu, giúp hạ huyết áp, giảm nguy cơ độtqu ,…9. Giá trị kinh tếCây chuối cho trái quanh năm, năng suất trung bình có thể đạt được t 2030 tấnhecta. Hiện nay, các nhà vườn đã mạnh dạn chuyển đổi những mảnh vườntạp không hiệu quả sang trồng các loại cây ngắn ngày mang lại hiệu quả kinh tếcao, trong đó chuối Xiêm được xem là một loại cây cho thu nhập khá ổn định.Theo ước tính, mỗi năm 1 hecta đất trồng chuối Xiêm có thể cho thu nhập trêndưới 70 triệu đồng. Chuối Xiêm có giá ổn định, mỗi tháng bán 2 lần, t 3.500đến 5.000 đồngkg 14.Báo cáo khóa luận tốt nghiệp DA15KCTGVHD: ThS. NGUYỄN HOÀNG XUÂN THẢO 2 SVTH: CAO THỊ NHƯ Giá trị tinh thần:Một măm ngũ quả thường có hai nải chuối nằm phía dưới với những quảchuối mập tròn bao quanh và vươn lên hình tượng như hai bàn tay phù trợ chở che.Những trái chuối trong nải mọc sát bên nhau cũng là biểu tượng tình đoàn kết của conngười. Những nảy chuối lớn dần trên buồng, biểu lộ cho sức mạnh của conngười,…Chuối cúng tết, thần tài thổ địa cầu may mắn bình an.1.1.3. Nguồn gốc, phân bố và phân loại:1.1.3.1. Nguồn gốc và phân bố:Chuối là cây ăn quả ngắn ngày, dễ trồng và có thời gian thu hoạch khá ngắn.Cây chuối có nguồn gốc t Đông Nam Á, sau đó được thuần hóa và di thực sangChâu Úc rồi tới các nước Trung và Nam Mỹ.Ngày nay, cây chuối đã được phát hiện ở khắp các vùng nhiệt đới ẩm trên thếgiới. Người ta đã tìm thấy sự đa dạng về nguồn gen không chỉ ở nơi phát sinh nguồngốc mà còn ở khu vực Nam Mỹ, Đông và Tây Phi. Ở nước ta, chuối là cây trồng rấtphổ biến, được trồng ở mọi vùng miền dọc theo chiều dài của đất nước tập trung ở haiđồng bằng lớn là đồng bằng Sông Cửu Long và đồng bằng Sông Hồng. Chuối XiêmLùn được trồng nhiều ở Trà Vinh, Vĩnh Long, Đồng Tháp, Tiền Giang,..vì đây lànhững vùng đất ven sông, nên lượng phù sa được bồi đắp hằng năm nhiều, rất phùhợp cho cây chuối Xiêm Lùn phát triển 8.1.1.3.2. Phân loại:Giới: PlantaeNgành: MagnoliophytaBộ: ZingiberalesHọ: MusaceaeChi: Musa L.Loài: Musa sp.1.1.4. Đ c iểm hình thái chuối Xiêm Lùn: Rễ:Có bộ rễ chùm phát triển mạnh và lan rộng. Chuối phát triển rất tốt trên đấtphù sa ven sông, đất không được dẻ chặt. Rể có thể ăn sâu khoảng 1 1,5 m; lan rộngra bán kính khoảng 2 3 m.Báo cáo khóa luận tốt nghiệp DA15KCTGVHD: ThS. NGUYỄN HOÀNG XUÂN THẢO 3 SVTH: CAO THỊ NHƯ Thân:Thân thật (thân ngầm, căn hành hay củ hủ): Thân ngầm là phần thân câychuối phát triển dưới mặt đất với vô số mô phân sinh và các mô phân sinh này tạo racác thân giả, hoa chuối, cuống chuối và các sợi rễ. Thân thật cao khoảng 20 – 25 cm.Thân giả: được tạo ra t các bẹ lá. Các bẹ lá này cuốn sát vào nhau tạo thànhmột khối hình trụ dẻo dai, gồm những khối sợi và những ô rỗng mọng nước. Thân giảcao khoảng 1,7 – 2,2 m. Lá:Gồm 3 phần:Bẹ lá: Mọc t thân thật, các bẹ lá cuốn chặt vào nhau tạo nên thân giả. Bẹ lácó nhiều chất xơ và các lổ rỗng, xốp, chứa nhiều nước. Chiều dài của bẹ lá quyết địnhđến chiều cao của cây khi đã phát triển.Cuống lá: T phần cuốn của bẹ lá cho đến phiến lá, dài khoảng 20 40cm.Phiến lá: Phiến lá đơn, dài 1 – 2 m, rộng 30 – 50 cm. phiến lá dễ bị rách do gió, phiếnlá được dùng lót, gói thực phẩm, làm chất đốt,…4. Hoa chuối:Phát hoa mọc t đỉnh của thân chính (lỏi chuối) ở ngọn gọi là “bắp chuối”,khi phát hoa nở và tạo thành “Buồng chuối”). Hoa chuối gồm hoa đực (thường khôngnở ra) và hoa lưỡng tính (sau này đậu trái tạo thành “nảy chuối”). Quả chuối:Được hình thành t các hoa lưỡng tính. Nải chuối được xếp thành hai hàng,mỗi nải chuối t 2030 quả. Thường buồng chuối có t 1015 nải chuối. Chuối XiêmLùn trái to, ruột vàng, vỏ không quá dày, vị ngọt đậm. Chuối khi còn sống màu xanhthẫm, khi chín ngã t vàng xanh cho đến vàng hẳn 13.1.1.5. Điều kiện môi trường sinh trưởng và phát triển của cây chuối: Điều kiện đất:Chuối là cây có bộ rễ giòn, mềm, khả năng chịu úng và chịu hạn kém. Vì thếchuối thích nghi tốt trên đất phù sa ven sông, có khả năng thoát nước và giữ ẩm tốt,có nhiều N, K; pH 6 7,5.Báo cáo khóa luận tốt nghiệp DA15KCTGVHD: ThS. NGUYỄN HOÀNG XUÂN THẢO 4 SVTH: CAO THỊ NHƯ Điều kiện nhiệt độ và ánh sáng:Nhiệt độ: Chuối là loại cây ăn quả nhiệt đới ở nhiệt độ t 17 đến 30oC, thíchhợp nhất ở 25oC. Cây chuối rất nhạy cảm với nhiệt độ thấp, dưới 16oC cây chuối biểuhiện như sau: lá mất màu xanh, héo lá dẫn đến chết cây.Ánh sáng: Chuối là cây ưa nắng nhưng không thích ánh sáng mạnh. Trongkhoảng thời gian sinh trưởng, nếu có tới 60% số ngày nắng ấm cây sẽ phát triển tốt. Lượng nước:Chuối có nhu cầu lượng nước thường xuyên do có diện tích lá lớn, tốc độthoát hơi nước nhanh, đặc biệt vào thời kỳ phân hóa mầm hoa, kết trái. Lượng mưađảm bảo cho cây phát triển tốt t 120 150 mmtháng tương đương với 15002000mmnăm. Trường hợp trời khô hạn cần cung cấp nước kịp thời cho cây 13.1.2. Giới thiệu về nuôi cấy mô:1.2.1. Khái niệm nuôi cấy mô, nhân giống in vitro thực vật: Khái niệmNuôi cấy mô thực vật là phương pháp tách rời một bộ phận sạch của cây(mô, tế bào) đem nuôi cấy trong môi trường thích hợp và cung cấp đầy đủ chất dinhdưỡng trong điều kiện vô trùng tuyệt đối để chúng tiếp tục phân bào rồi biệt hóathành mô, cơ quan (cụm chồi, chồi) và phát triển thành cây mới 10.Nhân giống vô tính cây trồng in vitro là một lĩnh vực ứng dụng hiệu quả nhấttrong nuôi cấy mô tế bào thực vật bao gồm: Nuôi cấy cây con và cây trưởng thành Nuôi cấy cơ quan: rễ, thân, lá, hoa, bao phấn, noãn chưa thụ tinh. Nuôi cấy phôi: phôi non và phôi trưởng thành Nuôi cấy mô sẹo Nuôi cấy tế bào đơn Nuôi cấy protoplast: nuôi cấy phần bên trong tế bào thực vật sau khi đã táchvỏ còn gọi là nuôi cấy tế bào trần. Ưu điểm: Nhân nhanh giống cây trồng do hệ số nhân cao. Các giống sau khi nuôi cấy mô có sự đồng nhất về mặt di truyền

TRƯỜNG ĐẠI HỌC TRÀ VINH KHOA NÔNG NGHIỆP – THỦY SẢN   KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH NHÂN GIỐNG IN VITRO CÂY CHUỐI XIÊM LÙN (Musa sp.) Giảng viên hướng dẫn : ThS NGUYỄN HOÀNG XUÂN THẢO Sinh viên thực : CAO THỊ NHƯ Mã số sinh viên : 114715091 Lớp : DA15KCT Khoá : 2015 - 2019 Trà Vinh, tháng 07 năm 2019 ỜI CẢ N Trước tiên xin gửi lời cảm ơn đến khoa Nông nghiệp – Thủy sản, Trường đại học Trà Vinh tạo điều kiện thuận lợi cho thực đề tài Tôi muốn gửi lời cảm ơn sâu sắc tới thầy Nguyễn Ngọc Trai, Nguyễn Hồng Xuân Thảo tận tình giúp đỡ hướng dẫn tơi suốt q trình thực khóa luận Chân thành cảm ơn thầy Nguyễn Bá Duẩn cung cấp mẫu chuối suốt trình thực đề tài Tôi xin bày tỏ lời cảm ơn chân thành đến thầy cô môn Trồng trọt Phát triển nơng thơn nhiệt tình giảng dạy, kiến thức kinh nghiệm mà học giảng đường đại học hành trang giúp vững bước tương lai Cuối cùng, xin cảm ơn gia đình bạn bè ln bên, cổ vũ động viên tơi lúc khó khăn để hồn thành khóa luận Tơi xin chân thành cảm ơn với lịng sâu sắc nhất! GVHD: ThS NGUYỄN HỒNG XUÂN THẢO i SVTH: CAO THỊ NHƯ NHẬN XÉT CỦA GIẢNG VIÊN HƯỚNG DẪN ĐỒ ÁN, KHÓA LUẬN CỦA SINH VIÊN ………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………… Trà Vinh, Ngày…… tháng……năm 2019 Giáo viên phản biện (ký ghi rõ họ tên) GVHD: ThS NGUYỄN HOÀNG XUÂN THẢO ii SVTH: CAO THỊ NHƯ MỤC LỤC ỜI CẢ N …………………………………………………………………… i NHẬN XÉT CỦA GIẢNG VIÊN HƯỚNG DẪN ĐỒ ÁN, KHÓA LUẬN CỦA SINH VIÊN …………………………………………………………………………ii MỤC LỤC ……………………………………………………………………… iii DANH SÁCH BẢNG …………………………………………………………… v DANH SÁCH HÌNH …………………………………………………………….vii DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT ………………………………………………… viii ĐẶT VẤN ĐỀ …………………………………………………………………… ix Đ t vấn ề …………………………………………………………………… ix Mục tiêu nghiên cứu: …………………………………………………………x CHƯ NG C SỞ LÝ LUẬN ……………………………………………… 1.1 Giới Thiệu Chung Về Cây Chuối: …………………………………………1 1.1.1 Giới Thiệu Cây Chuối:…………………………………………………… 1.1.2 Giá trị chuối:……………………………………………………….1 1.1.3 Nguồn gốc, phân bố phân loại:…………………………………………….2 1.1.3.1 Nguồn gốc phân bố: …………………………………………………… 1.1.3.2 Phân loại:…………………………………………………………………….2 1.1.4 Đặc điểm hình thái chuối Xiêm Lùn: …………………………………………2 1.1.5 Điều kiện môi trường sinh trưởng phát triển chuối: ……………….3 1.2 Giới thiệu nuôi cấy mô: ……………………………………………….……4 1.2.1 Khái niệm nuôi cấy mô, nhân giống in vitro thực vật: ……………………… 1.2.2 Điều kiện nuôi cấy mô: ……………………………………………………… 1.2.2.1 Điều kiện vô trùng: ………………………………………………………….5 1.2.2.2 Điều kiện ánh sáng nhiệt độ: …………………………………………… 1.2.3 Môi trường nuôi cấy mơ: …………………………………………………… GVHD: ThS NGUYỄN HỒNG XN THẢO iii SVTH: CAO THỊ NHƯ 1.2.3.1 Thành phần môi trường MS: ……………………………………… 1.2.3.2 Thành phần môi trường nuôi cấy mô:……………………………………….8 1.2.4 Các bước nhân giống invitro:………………………………………… 11 1.3 Tình hình nghiên cứu kỹ thuật nhân giống chuối phương pháp nuôi cấy mô giới Việt Nam …………………………………………… 13 1.3.1 Tình hình nghiên cứu giới:………………………………………… 13 1.3.2 Tình hình nghiên cứu Việt Nam: ………………………………………… 14 CHƯ NG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯ NG PHÁP NGHIÊN CỨU ………… 16 2.1 Thời gian ịa iểm nghiên cứu: ………………………………………… 16 2.2 Phương tiện nghiên cứu: …………………………………………………… 16 2.2.1 Thiết bị: …………………………………………………………………… 16 2.2.2 Nguyên vật liệu hóa chất: …………………………………………………18 2.2.2.1 Mẫu nghiên cứu: ………………………………………………………… 18 2.2.2.2 Hóa chất: ………………………………………………………………… 18 2.3 Nôi dung nghiên cứu: ……………………………………………………… 18 2.4 Phương pháp nghiên cứu: ……………………………………………………19 2.4.1 Giai oạn vô mẫu chuối Xiêm lùn ……………………………………… 19 2.4.2 Khảo sát ảnh hưởng số chất kích thích sinh trưởng đến khả nhân nhanh chồi chuối Xiêm Lùn ………………………………………………… 20 2.4.3 Khảo sát ảnh hưởng số chất kích thích sinh trưởng đến khả rễ chồi chuối Xiêm Lùn ……………………………………………………………… 23 `2.4.4 Khảo sát ảnh hưởng thành phần giá thể đến sinh trưởng, phát triển chuối Xiêm Lùn giai đoạn sau nuôi cấy ngồi vườn ươm ……………………… 25 2.5 Điều kiện thí nghiệm: ……………………………………………………… 26 2.6 Phương pháp phân tích số liệu: ……………………………………………27 CHƯ NG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN ………………………………… 28 3.1 Giai oạn vô mẫu chuối Xiêm Lùn: …………………………………… 28 GVHD: ThS NGUYỄN HOÀNG XUÂN THẢO iv SVTH: CAO THỊ NHƯ 3.2 Kết khảo sát ảnh hưởng số chất kích thích sinh trưởng ến khả nhân nhanh chồi chuối Xiêm Lùn …………………………… 29 3.2.1 Thí nghiệm 1: Khảo sát ảnh hưởng nồng độ BAP đến khả nhân nhanh chồi chuối Xiêm Lùn …………………………………………………… 30 3.2.2 Thí nghiệm 2: Khảo sát ảnh hưởng nồng độ Kinetin đến khả nhân nhanh chồi chuối Xiêm Lùn sau tuần nuôi cấy ………………………………… 32 3.2.3 Thí nghiệm 3: Khảo sát ảnh hưởng kết hợp BAP NAA đến khả nhân chồi chuối Xiêm Lùn sau tuần nuôi cấy ………………………… 34 3.2.4 Thí nghiệm 4: Khảo sát ảnh hưởng kết hợp BAP IAA đến khả nhân chồi chuối Xiêm Lùn sau tuần nuôi cấy ………………………….37 3.3 Kết khảo sát ảnh hưởng số chất kích thích sinh trưởng ến khả rễ chồi chuối Xiêm Lùn sau tuần ni cấy: ………………………… 40 3.3.1 Thí nghiệm 5: Khảo sát ảnh hưởng IAA ến khả rễ chồi chuối Xiêm Lùn sau tuần nuôi cấy …………………………………………… 41 3.3.2 Thí nghiệm 6: Khảo sát ảnh hưởng NAA đến khả rễ chồi chuối Xiêm Lùn sau tuần nuôi cấy …………………………………………………… 44 3.4 Kết khảo sát ảnh hưởng số giá thể ến sinh trưởng, phát triển chuối Xiêm ùn giai oạn sau ni cấy mơ ngồi vườn ươm ……… 47 3.5 Tóm tắt quy trình nhân giống in vitro chuối Xiêm Lùn (Musa sp.) …… 51 CHƯ NG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ ………………………………… 52 4.1 Kết luận: …………………………………………………………………… 52 4.2 Kiến nghị: ………………………………………………………………… 52 Phụ lục ………………………………………………………………………… 56 GVHD: ThS NGUYỄN HOÀNG XUÂN THẢO v SVTH: CAO THỊ NHƯ DANH SÁCH BẢNG Bảng 1.1 Tên Trang Thành phần môi trường MS sử dụng nuôi cấy mô 3.1 Khảo sát ảnh hưởng nồng độ BAP đến khả 30 nhân nhanh chồi chuối Xiêm Lùn sau tuần nuôi cấy 3.2 Khảo sát ảnh hưởng nồng độ Kinetin đến khả 32 nhân nhanh chồi chuối Xiêm Lùn sau tuần nuôi cấy 3.3 Khảo sát ảnh hưởng kết hợp BAP NAA 34 đến khả nhân chồi chuối Xiêm Lùn sau tuần nuôi cấy 3.4 Khảo sát ảnh hưởng kết hợp BAP IAA 37 đến khả nhân chồi chuối Xiêm Lùn sau tuần nuôi cấy 3.5 Khảo sát ảnh hưởng IAA đến khả rễ chồi 41 chuối Xiêm Lùn sau tuần nuôi cấy 3.6 Khảo sát ảnh hưởng NAA đến khả rễ 44 chồi chuối Xiêm Lùn sau tuần nuôi cấy 3.7 Ảnh hưởng số giá thể đến sinh trưởng, phát triển 48 chuối Xiêm Lùn giai đoạn sau nuôi cấy mô ngồi vườn ươm GVHD: ThS NGUYỄN HỒNG XN THẢO vi SVTH: CAO THỊ NHƯ DANH SÁCH HÌNH Hình Tên Trang 2.1 Các thiết bị phịng thí nghiệm 17 2.2 Hình chuối Xiêm Lùn trại thực nghiệm 18 2.3 Sơ đồ nghiên cứu 19 3.1 Mẫu chuối sau tuần vô mẫu 28 3.2 Ảnh hưởng nồng độ BAP đến khả nhân nhanh 31 chồi chuối Xiêm Lùn sau tuần nuôi cấy 3.3 Ảnh hưởng nồng độ Kinetin đến khả nhân 33 nhanh chồi chuối Xiêm Lùn sau tuần nuôi cấy 3.4 Ảnh hưởng kết hợp BAP NAA đến khả 36 nhanh chuối Xiêm Lùn sau tuần nuôi cấy 3.5 Ảnh hưởng nồng độ BAP kết hợp với IAA đến khả 39 nhân nhanh chồi chuối Xiêm Lùn sau tuần nuôi cấy 3.6 Ảnh hưởng IAA đến khả rễ chồi chuối 42 Xiêm Lùn sau tuần nuôi cấy 3.7 Ảnh hưởng IAA đến phát triển chiều cao 43 3.8 Ảnh hưởng NAA đến khả rễ chồi chuối 45 Xiêm Lùn sau tuần nuôi cấy 3.9 Ảnh hưởng NAA đến phát triển chiều cao 46 3.10 Ảnh hưởng số giá thể đến sinh trưởng, phát 49 triển chuối Xiêm Lùn sau tuần ngơi 3.11 Quy trình nhân giống in vitro chuối Xiêm Lùn GVHD: ThS NGUYỄN HOÀNG XUÂN THẢO vii 51 SVTH: CAO THỊ NHƯ DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT MS Murashine & Skoog ANOVA A nalysis Of Variance BAP Adenosin triphospat cm Centimet CV Coefficient Of Variance g/l gram/lit IAA Indol-3-acetic acid NAA 1-Naphtalene acetic acid IBA Indolbutaric acid LSD Least Significant Difference mg/l miligram/lit GVHD: ThS NGUYỄN HOÀNG XUÂN THẢO viii SVTH: CAO THỊ NHƯ ĐẶT VẤN ĐỀ Đ t vấn ề Cây chuối (tên khoa học Musa sp.) loại trồng nhiệt đới, ăn quan trọng Việt Nam giới Ngoài việc cho giá trị dinh dưỡng, chuối cho giá trị kinh tế cao với mục đích sử dụng rộng rãi (ăn tươi, sấy khơ, làm bánh,…) Cây chuối có khả thích nghi rộng, suốt t Bắc vào Nam vùng trồng chuối Cây chuối trồng phổ biến 120 nước có diện tích trồng hàng năm khoảng 10 triệu ha, sản lượng 97,5 triệu Cây chuối xếp vào 130 loại ăn đặc biệt quan tâm Bên cạnh đó, chuối loại thực phẩm, loại trái giàu chất dinh dưỡng chứa hàm lượng kali chất xơ cao, nguồn cung cấp vitamin C chống oxy hóa, đồng thời dược liệu thiên nhiên để hổ trợ cho nhiều bệnh bệnh lo t dày tá tràng, chữa bệnh táo bón, ngăn ng a ung thư ruột già, bệnh thiếu máu, giúp hạ huyết áp, giảm nguy đột qu … Theo Quy hoạch vùng ăn chủ lực trồng tập trung Nam Bộ đến năm 2020 v a Bộ Nông nghiệp Phát triển nông thôn phê duyệt “Quy hoạch 12 loại ăn chủ lực Nam Bộ”, chuối xác định 12 loại ăn trồng tập trung khu vực này, tổng diện tích ăn trồng tập trung đến năm 2020 257.000 hecta, diện tích chuối chiếm 28.900 hecta Ngồi chuối xác định loại ăn xuất chủ lực nước ta Tổng sản phẩm chuối xuất tương đương Dứa đạt 100 nghìn kim ngạch xuất đứng sau Dứa Thanh long đạt 35 triệu USD [1] Tại Trà Vinh bên cạnh giống chuối có sẵn địa phương như: chuối Già, chuối Cao, chuối Tá Quạ, chuối Xiêm,….thì chuối Xiêm Lùn trồng thử nghiệm khu thực nghiệm trồng trọt, Trường Đại học Trà Vinh Đây giống chuối có hình thái, màu sắc giống chuối Xiêm thường khác so với chuối Xiêm thường thân thấp, số lượng trái số nảy chuối quài nhiều GVHD: ThS NGUYỄN HOÀNG XUÂN THẢO ix SVTH: CAO THỊ NHƯ Báo cáo khóa luận tốt nghiệp DA15KCT Bảng 3.7 Ảnh hưởng số giá thể ến sinh trưởng, phát triển chuối Xiêm Lùn sau tuần 100 15,81a 0,76 Đường kính thân (cm) 1,15a 0,14 100 12,18b 1.00 0,96b 0,01 3,6b 0,4 3,54b 0,35 80 11,32b 0,93 0,73b 0,04 3,2b 0,5 2,29c 0,19 100 11,56b 0,55 0,79b 0,03 3,6b 0,4 3,12bc 0,10 F ** ** ** ** CV(%) 15,78 19,79 19,10 15,30 Nghiệm thức Tỷ lệ sống (%) Chiều cao (cm) Số Đường kính (cm) 4,6a 0,3 4,11a 0,29 Ghi chú: cột, số có chữ theo sau giống khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê qua phép kiểm định LSD, (**) khác biệt mức ý nghĩa 1% Kết thí nghiệm cho thấy giá thể lựa chọn đưa vào thí nghiệm thích hợp cho thích nghi in vitro giai đoạn Khi trồng loại giá thể khác tỷ lệ sống dao động t 80 – 100% cụ thể là: Nghiệm thức (Đất thịt + phân chuồng + mụn d a(1:1:1)) đạt tỷ lệ sống 100%, nghiệm thức (Đất thịt + mụn d a (1:1)) đạt tỷ lệ sống 100% Nghiệm thức (Đất thịt + phân chuồng(1:1)) đạt tỷ lệ sống 80%, nghiệm thức (Đất thịt + mụn d a(1:1) đạt tỷ lệ sống 100% Qua kết Bảng 3.7 cho thấy nghiệm thức với tỷ lệ gía thể khác sinh trưởng phát triển tốt tiêu theo dõi nghiệm thức có khác biệt mức ý nghĩa 1% Chiều cao đường kính thân đạt nghiệm thức: nghiệm thức là: 11,81 cm 1,15 cm; nghiệm thức là: 12,18 cm 0,96 cm; nghiệm thức 11,32 cm 0,73 cm; nghiệm thức 11,56 cm 0,79 cm GVHD: ThS NGUYỄN HOÀNG XUÂN THẢO 48 SVTH: CAO THỊ NHƯ Báo cáo khóa luận tốt nghiệp DA15KCT a b c d Hình 3.10 Ảnh hưởng số giá thể ến sinh trưởng, phát triển chuối Xiêm lùn sau tuần a) Nghiệm thức b) Nghiệm thức c) Nghiệm thức d) Nghiệm thức Cùng với phát triển chiều cao đường kính thân cây, số đường kính tăng tỷ lệ thuận với chiều cao đường kính hút chất dinh dưỡng t giá thể Số đường kính đạt nghiệm thức là: 4,6 lá/cây 4,11 cm; nghiệm thức là: 3,6 lá/cây 3,54 cm; nghiệm thức là: 3,2 lá/cây 2,29 cm; nghiệm thức là: 3,6 lá/cây 3,12 cm GVHD: ThS NGUYỄN HOÀNG XUÂN THẢO 49 SVTH: CAO THỊ NHƯ Báo cáo khóa luận tốt nghiệp DA15KCT Như giá thể thích hợp đất thịt + mụn d a + phân chuồng (1:1:1) với tỷ lệ sống 100%, chiều cao đạt 15,81 cm, đường kính thân 1,15 cm, có 4,6 đường kính 4,11 cm GVHD: ThS NGUYỄN HOÀNG XUÂN THẢO 50 SVTH: CAO THỊ NHƯ Báo cáo khóa luận tốt nghiệp DA15KCT 3.5 Tóm tắt quy trình nhân giống in vitro chuối Xiêm ùn (Musa sp.) Mẫu chuối Sơ chế Vô mẫu (MS, 5mg/l BAP, tối hoàn toàn) Cấy nhân chồi (MS, 5mg/l BAP , 0,5 mg/l IAA) Cấy tạo rễ (MS, 3mg/l NAA, Adenine 100mg/l) Trồng vườn ươm (Đất thịt + Mụn d a + Phân chuồng (1:1:1)) Hình 3.11 Quy trình nhân giống in vitro chuối Xiêm ùn GVHD: ThS NGUYỄN HOÀNG XUÂN THẢO 51 SVTH: CAO THỊ NHƯ Báo cáo khóa luận tốt nghiệp DA15KCT CHƯ NG KẾT UẬN VÀ KIẾN NGHỊ 4.1 Kết luận  Cây chuối Xiêm Lùn tái sinh chồi tốt nên sử dụng môi trường MS bổ sung 5mg/l BAP + NAA 0,2 mg/l + Adenine sulfate 100mg/l + Axit ascorbic 150 mg/l + Axit xitric 150 mg/l + Nước d a 100 ml/l + đường Saccharose 30 g/l + Agar 6,5 g/l pH 5,8 cho chồi/mẫu sau tuần nuôi cấy  Giai đoạn nhân nhanh chồi chuối Xiêm Lùn nên sử dụng nồng độ mg/l BAP + 0,5 mg/l IAA + môi trường + Adenin sulfate 100 mg/l + Nước d a 100 ml/l + Đường saccharose 30 g/l + Agar 6,5 g/l pH 5,8 đạt 18,25 chồi/mẫu sau tuần nuôi cấy  Giai đoạn tạo rễ chuối Xiêm Lùn nên sử dụng nồng độ mg/l NAA + Adenin sulfate 100 mg/l + Nước d a 100 ml/l + Đường saccharose 30 g/l + Agar 6,5 g/l pH 5,8 đạt 4,57 rễ/cây sau tuần nuôi cấy  Giá thể: Đất thịt + mụn d a + phân chuồng (1:1:1) giá thể thích hợp cho chuối Xiêm lùn ni mơ sinh trưởng phát triển tốt ngồi vườn ươm cho tỷ lệ sống đạt 100% , chiều cao đạt 15,81 cm, đường kính thân 1,15 cm, có 4,6 lá/cây đường kính đạt 4,11 cm sau tuần 4.2 Kiến nghị  Nghiên cứu tương tác chất điều hòa sinh trưởng IBA lên khả tạo rễ hình thành hồn chỉnh chuối Xiêm Lùn  Trồng tiến hành thí nghiệm khảo sát thời vụ trồng, sinh trưởng, phát triển suất chuối để kiểm tra chất lượng chuối Xiêm Lùn nuôi cấy mô, tính suất chuối Xiêm Lùn ni cấy mơ GVHD: ThS NGUYỄN HOÀNG XUÂN THẢO 52 SVTH: CAO THỊ NHƯ Báo cáo khóa luận tốt nghiệp DA15KCT Tài Liệu Tham Khảo Tiếng việt Bộ Nông nghiệp Phát triển nông thôn (2007) Quyết định phê duyệt quy hoạch phát triển rau hoa cảnh đến năm 2010, tầm nhìn 2020, Hà Nội Champion jean (1963) Cây chuối (Đỗ Ngọc An, Nguyễn Định, Trần Văn Phú, Nguyễn Văn Trung, Trần Thanh Vân dịch) NXB Khoa học kỷ thuật, Hà Nội, tr 25-42 Chu Thị Thơm cộng sự, 2005 Ứng dụng công nghệ sản xuất ăn NXB Lao Động Đinh Thị Thanh Tâm, 2016 Xây dựng quy trình nhân giống in vitro dưỡng hai giống chuối Tá Quạ chuối Cau (musa sp.) Trà Vinh Báo Trà Vinh Đỗ Đăng Giáp, Phạm Ngọc Vinh, Trần Trọng Tuấn, Nguyễn Thị Huyền Trang, Phạm Ngô Ánh Thư, Thái Xuân Du, 2012 Tăng hệ số nhân chồi chuối Laba (Musa sp.) nuôi cấy in-vitro cách sử dụng ánh sán, myo-inositol adenine sulphate Tạp chí sinh học 2012, tr 180-187 Dương Tấn Hợi, 2002 33 câu hỏi đáp Trồng Chăm sóc ăn (cây chuối) Công ty cổ phần In Bến Tre Lê Văn Hịa , Nguyễn Bảo Tồn, Đặng Phương Trâm 2001 Bài giảng Sinh lý thực vật Trường Đại học Cần Thơ Ngơ Đình Phúc, 2012 Nhânn giống chuối phương pháp nuôi cấy mô, giải pháp cho nghề trồng chuối xuất Trung tâm Giống Nông – Lâm – Ngư nghiệp tỉnh Kiên Giang Ngô Thị Đượm, 2011 Luận văn: Nghiên cứu hồn thiện quy trình nhân giống in vitro giống chuối Tây Đại học Nông Lâm Bắc Giang 10 Nguyễn Bảo Tồn, 2010 Giáo trình nuôi cấy mô tế bào thực vật NXB Đại học Cần Thơ GVHD: ThS NGUYỄN HOÀNG XUÂN THẢO 53 SVTH: CAO THỊ NHƯ Báo cáo khóa luận tốt nghiệp DA15KCT 11 Nguyễn Hữu Hồ, 2012 Nuôi nhân giống phôi vơ tính, rễ bất định rễ tơ sâm Ngọc Linh hệ thống bioreactor Viện Hàn Lâm khoa học công nghệ Việt Nam 12 Quách Ngô Diễm Hương, 2010 Nuôi mô sẹo dịch huyền phù tế bào Bèo đất Drosera Burmanni Vahl cho mục tiêu thu nhận Quinone Tạp chí phát triển khoa học Công nghệ 13 Quỳnh Xuân Thủy, 2005 Kinh nghiệm trồng cơng nghiệp ăn NXB Thanh Hóa 14 Thảo Vy, 2015 Thu nhập ổn định từ chuối cau Báo Đồng Tháp 15 Trần Thị Thanh Huệ 2011 Nghiên cứu kỹ thuật nhân nhanh giống chuối VN1 – 064 phương pháp nuôi cấy mô tế bào kỹ thuật chăm sóc ngồi vườn ươm, Bộ môn Công nghệ Sinh học Nhân giống – Viên KHCN Nơng lâm nghiệp miền núi phía Bắc 16 Triệu Tiến Dũng năm 2010, Nghiên cứu tuyển chọn áp dụng số biện pháp kỹ thuật sản xuất chuối tiêu xuất Phú Hộ - Phú Thọ Luận án thạc sĩ Khoa học nông nghiệp, Đại học Thái Nguyên, Trường Đại học Nông Lâm 17 Vũ Ngọc Phượng, Hồng Thị Phịng, Thái Xn Du, Trịnh Mạnh Dũng, 2009 Phịng tế bào cơng nghệ thực vật, viện Sinh học Nhiệt đới, Viện Cộng nghệ Sinh học Việt Nam, nhân giống in-vitro chuối Canvendish.sp quy mô công nghiệp, báo cáo khoa học – hội nghị cộng nghệ sinh học toàn quốc tr 319-32 Tiếng Anh 18 Aish Muhammad, IqBAPl Hussain, S.M saqlan Naqvi an Hamid Rashid (2004) BAPnana plantlet production through tissue culture Agricultural Biotechnology Program (ABP) IABGR, National Agricultural Research Centre (NARC), Park road, ISlamaBAPd, Pakistan 19 Al-Amin Md, Karim M.r, Amin M.r, Rahman S and Maun A N M, 2009 In Vitro micropropagation of banana (Musa spp.) Bangladesh J.Agril.Res.34 (4): 645-659 GVHD: ThS NGUYỄN HOÀNG XUÂN THẢO 54 SVTH: CAO THỊ NHƯ Báo cáo khóa luận tốt nghiệp DA15KCT 20 Bhosale U P, Dubhshi S V, Mali N.S and Rathod H P (2011) In vitro shoot multiplication in different species of BAPnana, Asian Journal of Plant Science and Research, 2011, (3): 23-27 21 M.Z Rahman, M.H Rahman, M.U Mullah, N Nahar, R.S Sultana, M.A Bari and M Hossain, 2005 In Vitro Shoot Multiplipcation and Rooting of a Dessert Banana (Musa sp cv Anupom) Pakistan Journal of Biological Science (9): 1298-1302,2005 22 R.V.Valmayor., R.R.C Espino and O.C Pascua (2002 The wild cultivated banana of Philipines Philippin Agricultural and Resources Research Foundation incorporated and Bureau of Agricultural Research, Los Bados, Laguna, Philippin 242 pp 23 Sin-Wan Lee, 2003 Thidiazuron in the Improvement of Banana Micropropagation Taiwan Banana Research Institure, P.O Box 18, Chiuju, Pingtung Taiwan 904, R.O.C 24 T Murashige and F Skoog, 1962 A revised medium for rapid growth and bioassay with tobacco cultures Physiologia Plantarum 15:473-497 GVHD: ThS NGUYỄN HOÀNG XUÂN THẢO 55 SVTH: CAO THỊ NHƯ Báo cáo khóa luận tốt nghiệp DA15KCT Phụ lục Bảng phân tích phương sai ảnh hưởng số chất kích thích sinh trưởng ến khả nhân nhanh chồi chuối Xiêm ùn sau tuần ni cấy 1.1 Bảng phân tích phương sai ảnh hưởng nồng ộ BAP ến khả nhân nhanh chồi chuối Xiêm ùn sau tuần nuôi cấy ANOVA table for so choi moi by nghiem thuc Source Sum of Squares Df Mean Square Between groups 61.875 20.625 Within groups 3.625 12 0.302083 Total (Corr.) 65.5 15 F-Ratio P-Value 68.28 0.0000 CV(%): 46,44 ANOVA table for chieu cao by nghiem thuc Source Sum of Squares Df Mean Square Between groups 0.883569 0.294523 Within groups 3.27617 12 0.273015 Total (Corr.) 4.15974 15 F-Ratio P-Value 1.08 0.0000 F-Ratio P-Value 1.96 0.0034 CV%: 34,80 ANOVA table for trọng luong tb by nghiem thuc Source Sum of Squares Df Mean Square Between groups 0.0559188 0.0186396 Within groups 0.113925 12 0.00949375 Total (Corr.) 0.169844 15 CV(%): 18,93 GVHD: ThS NGUYỄN HOÀNG XUÂN THẢO 56 SVTH: CAO THỊ NHƯ Báo cáo khóa luận tốt nghiệp DA15KCT 1.2 Bảng phân tích phương sai ảnh hưởng nồng ộ Kinetin ến khả nhân nhanh chồi chuối Xiêm ùn sau tuần nuôi cấy ANOVA table for so choi moi by nghiem thuc Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio Between groups 20.6719 6.89063 Within groups 4.3125 12 0.359375 Total (Corr.) CV(%):46,40 24.9844 15 19.17 P-Value 0.0001 ANOVA table for chieu cao by nghiem thuc Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio Between groups 2.40913 0.803042 Within groups 1.25665 12 0.104721 Total (Corr.) CV(%): 28,72 3.66578 15 7.67 P-Value 0.0040 ANOVA table for trọng luong by nghiem thuc Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio Between groups 0.0123187 0.00410625 Within groups 0.047075 12 0.00392292 Total (Corr.) 0.0593937 15 1.05 P-Value 0.0074 CV(%): 15,57 1.3 Bảng phân tích phương sai ảnh hưởng kết hợp BAP NAA ến khả nhân chồi chuối Xiêm ùn sau tuần nuôi cấy ANOVA table for so choi moi by nghiem thuc Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio Between groups 71.2083 14.2417 Within groups 48.75 18 2.70833 Total (Corr.) 119.958 23 5.26 P-Value 0.0038 CV(%): 25,97 GVHD: ThS NGUYỄN HOÀNG XUÂN THẢO 57 SVTH: CAO THỊ NHƯ Báo cáo khóa luận tốt nghiệp DA15KCT ANOVA table for chieu cao by nghiem thuc Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio Between groups 0.410288 0.0820575 Within groups 0.450075 18 0.0250042 Total (Corr.) CV(%): 17,17 0.860363 23 3.28 P-Value 0.0079 ANOVA table for luong by nghiem thuc Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio Between groups 0.0425 0.0085 0.75 Within groups 0.20455 18 0.0113639 Total (Corr.) CV(%): 20,23 0.24705 23 P-Value 0.0001 1.4 Bảng phân tích phương sai ảnh hưởng kết hợp BAP IAA ến khả nhân chồi chuối Xiêm ùn sau tuần nuôi cấy ANOVA table for so choi moi by nghiem thuc Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio Between groups 375.458 75.0917 Within groups 60.875 18 3.38194 Total (Corr.) CV(%): 39,89 436.333 23 22.20 P-Value 0.0000 ANOVA table for chieu cao by nghiem thuc Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio Between groups 0.5164 0.10328 Within groups 0.12445 18 0.00691389 Total (Corr.) CV(%): 15,42 0.64085 23 GVHD: ThS NGUYỄN HOÀNG XUÂN THẢO 58 14.94 P-Value 0.0000 SVTH: CAO THỊ NHƯ Báo cáo khóa luận tốt nghiệp DA15KCT ANOVA table for luong by nghiem thuc Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio Between groups 0.105183 0.0210367 Within groups 0.12755 18 0.00708611 Total (Corr.) CV(%): 20,18 0.232733 23 2.97 P-Value 0.0098 Bảng phân tích phương sai ảnh hưởng số chất kích thích sinh trưởng ến khả rễ chồi chuối Xiêm Lùn sau tuần ni cấy 2.1 Bảng phân tích phương sai ảnh hưởng IAA ến khả rễ chồi chuối Xiêm ùn sau tuần nuôi cấy ANOVA Table for chieu cao than cay by NT Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 13.5852 7.22 0.0050 Within groups 12 0.627429 7.52915 4.52841 Total (Corr.) 21.1144 15 CV(%): 31,46 ANOVA Table for sô rê by NT Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 3.79688 0.0064 Within groups 12 0.380208 4.5625 1.26563 3.33 Total (Corr.) 8.35938 15 CV(%): 21,12 ANOVA Table for chieu dai re by NT Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 36.9317 0.0019 Within groups 15.8644 12 1.32203 Total (Corr.) CV(%):26,57 52.7961 15 12.3106 GVHD: ThS NGUYỄN HOÀNG XUÂN THẢO 59 9.31 SVTH: CAO THỊ NHƯ Báo cáo khóa luận tốt nghiệp DA15KCT ANOVA Table for so la by NT Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 7.67188 3.69 0.0001 Within groups 8.3125 12 0.692708 Total (Corr.) CV(%): 35,13 15.9844 15 2.55729 2.2 Bảng phân tích phương sai ảnh hưởng NAA ến khả rễ chồi chuối Xiêm ùn sau tuần nuôi cấy ANOVA Table for so la by NT Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 8.64772 2.88257 0.0015 Within groups 12 0.293621 3.52345 9.82 Total (Corr.) 12.1712 15 CV(%): 26,23 ANOVA Table for chieu dai by NT Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 62.0592 0.0000 Within groups 9.81353 12 0.817794 Total (Corr.) CV(%): 40,93 71.8727 15 20.6864 25.30 ANOVA Table for so re by NT Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 12.8866 0.0006 Within groups 6.96095 12 0.580079 Total (Corr.) 19.8475 15 4.29552 7.41 CV(%): 32,19 GVHD: ThS NGUYỄN HOÀNG XUÂN THẢO 60 SVTH: CAO THỊ NHƯ Báo cáo khóa luận tốt nghiệp DA15KCT ANOVA Table for chieu cao by NT Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 26.7569 8.91898 0.0029 Within groups 12.8513 12 1.07094 Total (Corr.) CV(%): 27,38 39.6082 15 8.33 Bảng phân tích phương sai ảnh hưởng số giá thể ến sinh trưởng, phát triển chuối Xiêm Lùn giai oạn sau nuôi cấy mơ ngồi vườn ươm ANOVA Table for chieu dai by NT Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 65.4175 21.8058 0.0000 Within groups 11.068 16 0.69175 Total (Corr.) 76.4855 19 31.52 CV%: 15,78 ANOVA Table for dk than by NT Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 0.5023 0.167433 0.0000 Within groups 0.09372 16 0.0058575 Total (Corr.) 0.59602 19 28.58 CV%: 19,97 ANOVA Table for so la by NT Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 5.35 1.78333 0.0004 Within groups 4.4 16 0.275 Total (Corr.) 9.75 19 6.48 CV%: 19,10 GVHD: ThS NGUYỄN HOÀNG XUÂN THẢO 61 SVTH: CAO THỊ NHƯ Báo cáo khóa luận tốt nghiệp DA15KCT ANOVA Table for dk la by NT Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 4.16453 1.38818 0.0000 Within groups 1.04712 16 0.065445 Total (Corr.) 5.21165 19 21.21 CV%: 15,30 GVHD: ThS NGUYỄN HOÀNG XUÂN THẢO 62 SVTH: CAO THỊ NHƯ ... tài: ? ?Nghiên cứu quy trình nhân giống in vitro chuối Xiêm Lùn (Musa sp.)? ?? thực Mục tiêu nghiên cứu: Nghiên cứu xây dựng quy trình nhân giống chuối Xiêm Lùn phương pháp nuôi cấy mơ GVHD: ThS NGUYỄN... hay nhân giống in vitro phương pháp nhân giống mới, đại tạo số lượng giống lớn đồng đều, bệnh, chống suy thoái giống đem lại hiệu kinh tế cao, Chính lý đó, đề tài: ? ?Nghiên cứu quy trình nhân giống. .. 2.4 Phương pháp nghiên cứu: Hình 2.3 Sơ nghiên cứu 2.4.1 Giai oạn vô mẫu chuối Xiêm lùn Mục đích nghiên cứu: Nhằm tạo chồi cho thí nghiệm nhân nhanh chồi chuối Xiêm Lùn (Musa sp.) GVHD: ThS NGUYỄN